肝病的病理形态特点及免疫组化染色体会课件.ppt

1、常见肝病的病理形态特点及免常见肝病的病理形态特点及免疫组化染色的几点体会疫组化染色的几点体会 复旦大学病理学系张锦生肝病的病理形态特点及免疫组化染色体会1肝穿刺标本检查和处理原则肝穿刺标本检查和处理原则1.1.肉眼观察肉眼观察 肝穿刺标本呈完整园柱状，长度肝穿刺标本呈完整园柱状，长度1 13 cm3 cm典型的慢性肝炎肝纤维化标本呈竹节状外观典型的慢性肝炎肝纤维化标本呈竹节状外观肝硬化的穿刺标本，呈不规则碎块肝硬化的穿刺标本，呈不规则碎块肝病的病理形态特点及免疫组化染色体会22.2.石蜡切片石蜡切片 每张玻片上应放置超过每张玻片上应放置超过6 6个连续组织切片，有助于肝纤维个连续组织切片，有助

2、于肝纤维化的病理诊断。化的病理诊断。肝病的病理形态特点及免疫组化染色体会33.3.染色染色 除常规染色供病理诊断用之外，根据条件除常规染色供病理诊断用之外，根据条件和需要作以下特殊染色：和需要作以下特殊染色：网状纤维染色，网状纤维染色，MassonMasson三色染色，三色染色，胶原纤维染色胶原纤维染色(Sirius red(Sirius red或免疫组化或免疫组化 )肝病的病理形态特点及免疫组化染色体会4 Dm-HSC Dm-HSC-SMA-MFb-SMA-MFb Dm-SMA肝病的病理形态特点及免疫组化染色体会5S1S2S3S4各种病因引起肝纤维的病理学特点及分期各种病因引起肝纤维的病理学

3、特点及分期1.1.慢性肝炎肝纤维化慢性肝炎肝纤维化 (Dr.Scheuer(Dr.Scheuer 方案）方案）肝病的病理形态特点及免疫组化染色体会6活动性纤维间隔静止性纤维间隔活动性纤维间隔静止性纤维间隔肝病的病理形态特点及免疫组化染色体会72.2.脂肪性肝病肝纤维化脂肪性肝病肝纤维化 3.3.穿刺肝组织呈淡黄色，标本悬浮于固定液穿刺肝组织呈淡黄色，标本悬浮于固定液小叶中央区纤维化窦周纤维化小叶中央区纤维化窦周纤维化肝病的病理形态特点及免疫组化染色体会83.3.肝糖原累积病肝纤维肝糖原累积病肝纤维 肝病的病理形态特点及免疫组化染色体会94.Wilson病病 红氨酸(Rubeanic acid)

4、染色,铜被染成深绿色肝病的病理形态特点及免疫组化染色体会105.血色病血色病 穿刺肝组织因含有大量含铁血穿刺肝组织因含有大量含铁血黄素沉着呈火焰红色黄素沉着呈火焰红色肝细胞普鲁氏蓝染色阳性肝病的病理形态特点及免疫组化染色体会116.6.自身免疫性肝炎肝纤维化（自身免疫性肝炎肝纤维化（AIHAIH）门管区肝细胞呈花环状排列门管区肝细胞呈花环状排列Hepatic Rosette Hepatic Rosette，表现为数个水样变，表现为数个水样变性的肝细胞被炎症细胞和塌陷的网状支架包绕成花环状结构。性的肝细胞被炎症细胞和塌陷的网状支架包绕成花环状结构。肝病的病理形态特点及免疫组化染色体会127.7.

5、原发性胆汁性肝硬化（原发性胆汁性肝硬化（PBCPBC）3 3期（间隔期）期（间隔期）90%90%出现自身抗体出现自身抗体(A-Mit)(A-Mit)，Florid duct lesion+Biliary PNFlorid duct lesion+Biliary PN，纤维间隔形成，肝细胞羽毛状变性纤维间隔形成，肝细胞羽毛状变性4 4期（肝硬化）期（肝硬化）静止静止-纤维间隔内无炎症或轻度炎症纤维间隔内无炎症或轻度炎症 活动活动 Fibrous PN.Fibrous PN.肝病的病理形态特点及免疫组化染色体会138.8.血吸虫性肝纤维化血吸虫性肝纤维化 肝病的病理形态特点及免疫组化染色体会14肝

6、癌(LIVER CANCER)HCC ICC Combined hepatocellular and cholangiocarcinoma肝病的病理形态特点及免疫组化染色体会15肝癌病理诊断常用免疫组化和特染肝癌病理诊断常用免疫组化和特染 Hep Par1 线粒体相关抗原，与AFP无关对胎儿和成人肝细胞高度特异 (HCC:阳性率82-97%）肝病的病理形态特点及免疫组化染色体会16 AFPHCC阳性率：15-82%肝病的病理形态特点及免疫组化染色体会17 CD34:HCC型染色长条分枝，管壁纤细，管腔狭窄，分布均匀弥漫.而非癌肝组织内极少见.肝病的病理形态特点及免疫组化染色体会18 CK 18

7、:HCC,ICC,Metastatic carcinoma:100%+上皮性肿瘤标志物肝病的病理形态特点及免疫组化染色体会19 CK 19:胆管型CK:CK19,CK7 肝细胞 胆管上皮，ICC：77-100%ICC最好的标志物肝病的病理形态特点及免疫组化染色体会20 CEA：monoclonal CEA:毛细胆管ICC，转移性肝癌：60-75%+HCC:0-11%+polyclonal CEA:毛细胆管HCC特异标志物之一肝病的病理形态特点及免疫组化染色体会21 CK 20:胃肠道腺癌的主要标志物转移性腺癌：74-100%+ICC:10%+HCC:0%+肝病的病理形态特点及免疫组化染色体会2

8、2 MOC31:抗人上皮相关抗原转移性腺癌：100%+ICC:92.9%+HCC:0%+胃癌肝转移肝病的病理形态特点及免疫组化染色体会23 HBsAg:HCC:70-80%+胞质型，胞核型阳性胞质型，核周型阳性肝病的病理形态特点及免疫组化染色体会24 黏液染色：AB/PAS 酸性黏多糖：兰色（胆管腺瘤,ICC腔内黏液）中性黏多糖,糖原：红色（假腺管型HCC)肝病的病理形态特点及免疫组化染色体会25免疫组织化学染色的几点体会免疫组织化学染色的几点体会一、组织和细胞标本制备一、组织和细胞标本制备 目的：目的：(1)最大限度地保存组织结构。最大限度地保存组织结构。(2)最大限度地保存抗原性。最大限度

9、地保存抗原性。注意事项：在选择组织处理方法前，先根据实验目的，参考抗体注意事项：在选择组织处理方法前，先根据实验目的，参考抗体说明，确定组织处理方式说明，确定组织处理方式(冰冻冰冻?石蜡石蜡?)?)。肝病的病理形态特点及免疫组化染色体会261.取材（1 1）原则：尽可能新鲜，动物标本可选）原则：尽可能新鲜，动物标本可选 用动脉灌注固定。用动脉灌注固定。（2 2）取材部位：尽量包括病灶和正常组）取材部位：尽量包括病灶和正常组 织交界处，避免选择坏死组织。织交界处，避免选择坏死组织。（3 3）避免挤压：受挤压组织不但影响）避免挤压：受挤压组织不但影响 HEHE切片的观察，还造成非特异性切片的观察，

10、还造成非特异性 免疫组化组织着色。免疫组化组织着色。肝病的病理形态特点及免疫组化染色体会272.固定 根据不同的染色目的，选择不同的固定液，固定时组织越新鲜越根据不同的染色目的，选择不同的固定液，固定时组织越新鲜越好。组织块厚薄大小要合适。好。组织块厚薄大小要合适。容器要大容器要大,固定液要宽余固定液要宽余.固定时间既要考虑充分固定固定时间既要考虑充分固定,又不能太长又不能太长(依组织块厚薄大小从依组织块厚薄大小从24hr24hr至至3 35 5天天,太长可溶性抗原会渗漏太长可溶性抗原会渗漏,阳性会减弱甚至转阴阳性会减弱甚至转阴.选择最合适的固定剂选择最合适的固定剂,如用福尔马林如用福尔马林,

11、必须用缓冲福尔马林必须用缓冲福尔马林肝病的病理形态特点及免疫组化染色体会283.制备蜡块 冲水、脱水、透明、包埋。尽可能采用低温石蜡冲水、脱水、透明、包埋。尽可能采用低温石蜡包埋包埋,如无低温石蜡如无低温石蜡,可将组织块尽可能修薄可将组织块尽可能修薄,以缩以缩短脱水、透明、包埋时间短脱水、透明、包埋时间,尽可能保存组织内抗原尽可能保存组织内抗原稳定。稳定。肝病的病理形态特点及免疫组化染色体会294.制备冰冻切片 冷冻包埋能较好保存抗原,新鲜及已固定材料均适合于冷冻包埋、切片。防止冰结晶防止冰结晶!预处理预处理:目的是减少组织中的水分以减少冰结晶的产生,方法是将已固定、冲洗的组织块放入2030%

12、蔗糖缓冲液内,4冰箱过夜,再将组织块埋于OCT包埋剂 速冻速冻:目的是使温度很快下降迅速通过冰点,防止冰结晶产生。肝病的病理形态特点及免疫组化染色体会30速冻方法液氮法液氮法:将OCT包埋的组织块投入液氮数秒,等组织块冻结后,立即移入低温冰箱(装入封口塑料袋内密封)或放入恒冷切片机恒冷箱内以备切片;干冰干冰-丙酮法丙酮法:将200ml丙酮注入小型广口保温瓶或保温杯内,逐渐加入干冰至饱和不再冒泡为止,温度可达-70;将装有50ml异戊烷的小烧杯缓慢置入干冰干冰-丙酮丙酮饱和液中;然后将OCT包埋的组织块投入异戊烷内速冻半分至一分钟。肝病的病理形态特点及免疫组化染色体会31免疫组化染色后的衬染 常

13、用苏木精或甲基绿衬染细胞核。但如果阳性信常用苏木精或甲基绿衬染细胞核。但如果阳性信号在细胞核号在细胞核,切勿衬染细胞核切勿衬染细胞核!细胞质衬染细胞质衬染:1%:1%亮绿亮绿,但退色较快但退色较快,可改用坚固绿可改用坚固绿(FAST BLUE)(FAST BLUE)染染,则保存时间较长则保存时间较长肝病的病理形态特点及免疫组化染色体会32封固和保存封固和保存绝大多数免疫酶染色后都可用树胶封固，但如用绝大多数免疫酶染色后都可用树胶封固，但如用DABDAB以外的底物应注意有色沉淀物如为脂溶性，应以外的底物应注意有色沉淀物如为脂溶性，应改用水溶性封固物如明胶、甘油缓冲液等。改用水溶性封固物如明胶、甘

14、油缓冲液等。酶免疫染色切片可保存数周甚至数月。酶免疫染色切片可保存数周甚至数月。免疫荧光染色后应尽快观察、拍照。免疫荧光染色后应尽快观察、拍照。肝病的病理形态特点及免疫组化染色体会33一一.常用免疫组织化学方法常用免疫组织化学方法1.免疫荧光免疫荧光:2.用于培养细胞效果较好用于培养细胞效果较好,石蜡切片因常有自发荧光石蜡切片因常有自发荧光,背景荧光较强背景荧光较强,用时用时要注意要注意3.FITC(异硫氰酸荧光素)用450490 nm光激发,515nm 滤片观察,呈翠绿色4.RB200(四乙基罗达明B200)用570nm光激发,596 600nm滤片观察,呈橘红色5.TRITC(四甲基异硫氰

15、酸罗达明)用530 560nm光激发,580nm滤片观察,呈红色6.Texas red 用595nm光激发,615nm滤片观察,呈红色7.直接免疫荧光法直接免疫荧光法:8.间接免疫荧光法间接免疫荧光法9.双重荧光染色双重荧光染色肝病的病理形态特点及免疫组化染色体会342.2.免疫组织化学免疫组织化学 常用方法:PAP ABC或LSAB ELPS(二步法)肝病的病理形态特点及免疫组化染色体会3520世纪70年（1970）Sternberg Peroxidase-anti-Peroxidase (PAP)肝病的病理形态特点及免疫组化染色体会3620世纪80年代（1981）许世民 ABC（亲和免疫组

16、化）Avidin-Biotin-Peroxidase Complex肝病的病理形态特点及免疫组化染色体会3790年代中期：Enhanced Polymer One Step(EPOS)EnVision(Enhanced Labelled Polymer System,ELPS)简称二步法 1 mol 含 70 mol HRP+10 mol AB肝病的病理形态特点及免疫组化染色体会38如何做好免疫组化染色?什么才是高质量的免疫组化染色什么才是高质量的免疫组化染色?阳性信号突出阳性信号突出无背景染色无背景染色切片平整切片平整无破裂无破裂/碎碎,无污秽无污秽肝病的病理形态特点及免疫组化染色体会39做

17、好免疫组化染色几点体会1.组织细胞处理:固定剂 固定时间 速冻防冰结晶 白片质量好:平整,无破裂/碎,无污秽 防脱片:玻片绝对干净 涂粘合剂:白胶 多聚赖氨酸 铬明矾明胶液 甲醛明胶液 贴片后冷风吹干或37 /60烘干 肝病的病理形态特点及免疫组化染色体会402.抗体:特异性,高效价,亲合力,适度稀释度3.石蜡切片-抗原修复 (1)蛋白酶消化:胰蛋白酶 胰糜蛋白酶 链霉蛋白酶 蛋白酶K 胃蛋白酶 消化不足-修复失败,假阴性或信号弱 消化过度-结构破环,脱片 (2)热修复:微波照射 高压加热 水浴加热 (3)微波+蛋白酶消化 注意点:固定时间长,消化时间或热修复时间适当延长 酶生产厂家不一,或批

18、号不一,消化时间可能也不一 热修复的介质要选合适,必须要加钙螯合剂 预实验摸最佳方案 肝病的病理形态特点及免疫组化染色体会41阳性结果的判断阳性结果的判断“边界效应”引起假阳性 均匀一致的着色,假阳性可能极大 根据阳性信号的分布:核抗原应该在核内,有时胞质也可阳性;膜抗原应在细胞膜,有时胞质也可阳性;胞质抗原应在细胞质.转录因子或核内受体应在核内或胞质内.如出现异常分布,则假阳性可能很大.肝病的病理形态特点及免疫组化染色体会42 谢谢谢谢!请提宝贵请提宝贵意见意见!肝病的病理形态特点及免疫组化染色体会43此课件下载可自行编辑修改，供参考！感谢您的支持，我们努力做得更好！肝病的病理形态特点及免疫组化染色体会44