第十四章超敏反应性疾病的免疫学检验课件.ppt

1、超敏反应性疾病的免疫学检验超敏反应性疾病的免疫学检验李波副教授李波副教授返回总目录返回总目录目录目录 激发试验激发试验 1IgE的检测的检测2免疫复合物检测免疫复合物检测3抗球蛋白试验抗球蛋白试验4药物过敏筛选实验药物过敏筛选实验 5l 超敏反应（超敏反应（hypersensitivityhypersensitivity）又称变态反应，是又称变态反应，是指机体再次接受相同抗原刺激后，发生的以组织细胞指机体再次接受相同抗原刺激后，发生的以组织细胞损伤或生理功能紊乱为主的特异性免疫应答。损伤或生理功能紊乱为主的特异性免疫应答。l 变应原（变应原（allergenallergen）：）：引起超敏反应

2、的抗原称引起超敏反应的抗原称之为变应原。之为变应原。超敏反应超敏反应 第一节第一节 激发试验激发试验激发试验（激发试验（provocation testprovocation test）是模拟自然发是模拟自然发病条件，用少量超敏原引起一次较轻的超敏反应病条件，用少量超敏原引起一次较轻的超敏反应发作，达到确定超敏原的一种体内试验。发作，达到确定超敏原的一种体内试验。l 非特异性激发：非特异性激发：是用组胺等刺激物做雾化吸入，是用组胺等刺激物做雾化吸入，以观察患者对以观察患者对型超敏反应的敏感性，进而分型超敏反应的敏感性，进而分 析病因或判定疗效。析病因或判定疗效。l 特异性激发：特异性激发：是用

3、抗原如尘螨等做试验，对明确是用抗原如尘螨等做试验，对明确 超敏原有一定价值。超敏原有一定价值。用于用于型和型和型超敏反应性疾病的检查。型超敏反应性疾病的检查。一、皮肤试验一、皮肤试验是在皮肤进行的体内免疫学试验，简称皮试。是在皮肤进行的体内免疫学试验，简称皮试。机制：机制：型超敏反应型超敏反应型超敏反应型超敏反应l皮内试验皮内试验l点刺试验（挑刺或刺痕试验）点刺试验（挑刺或刺痕试验）l斑贴试验斑贴试验（一）试验类型及方法（一）试验类型及方法（二）结果判定及分级标准（二）结果判定及分级标准l速发型皮肤试验结果判定速发型皮肤试验结果判定 阳性反应以风团为主；阳性反应以风团为主；点刺试验的阳性反应以

4、红晕为主。点刺试验的阳性反应以红晕为主。l迟发型皮肤试验结果判定迟发型皮肤试验结果判定 阳性结果以红肿和硬结为主。阳性结果以红肿和硬结为主。相同超敏原不同稀释度相同超敏原不同稀释度 速发型速发型151530min30min内观察内观察 迟发型迟发型484872h72h内观察内观察0.010.03ml/针4mm/针针方法方法结果结果皮内试验皮内试验l 比皮内试验敏感性稍低，但假阳性较少；比皮内试验敏感性稍低，但假阳性较少；l 皮试液浓度要比皮内试验高皮试液浓度要比皮内试验高1010100100倍。倍。将试验抗原与对照液分别将试验抗原与对照液分别滴于试验部位的皮肤上滴于试验部位的皮肤上用针尖透过液

5、滴轻挑一下用针尖透过液滴轻挑一下以刺破皮肤而不出血为度以刺破皮肤而不出血为度1min后拭（吸）去试验抗原液后拭（吸）去试验抗原液点刺试验点刺试验速发型皮肤试验的结果判定标准速发型皮肤试验的结果判定标准分级 皮 内 试 验 点 刺 试 验-无风团或小于阴性对照无风团或小于阴性对照无风团反应或小于阴性对照无风团反应或小于阴性对照+风团风团3 35mm5mm、红晕、红晕20mm20mm无风团无风团,阴性对照红晕阴性对照红晕20mm20mm+风团风团6 69mm9mm伴红晕伴红晕无风团，红晕无风团，红晕20mm20mm+风团风团101015mm15mm伴红晕伴红晕风团伴红晕风团伴红晕+风团风团15mm

6、15mm伴红晕和伪足伴红晕和伪足风团伴红晕和伪足风团伴红晕和伪足迟发型皮试结果判定标准迟发型皮试结果判定标准反应程度 结果判定 -无反应或小于阴性对照无反应或小于阴性对照 +仅有红肿仅有红肿 +红肿伴硬结红肿伴硬结 +红肿、硬结、小疱红肿、硬结、小疱 +大疱或大疱或/和溃疡和溃疡l第一次读：第一次读：4848小时打开斑试器小时打开斑试器,间隔间隔3030min待斑试器待斑试器 压痕消失后判定结果。压痕消失后判定结果。l第二次读：第第二次读：第3 3天或第天或第4 4天。天。l如怀疑光过敏，在斑贴试验的基础上给予紫外线照如怀疑光过敏，在斑贴试验的基础上给予紫外线照 射，操作过程相似。射，操作过程

7、相似。斑贴试验斑贴试验斑贴试验结果判定标准斑贴试验结果判定标准反应程度反应程度结果判定结果判定 无反应或小于阴性对无反应或小于阴性对照照 +轻度红肿、搔痒轻度红肿、搔痒 +明显红肿、时有红斑明显红肿、时有红斑 +红肿伴皮疹、水疱红肿伴皮疹、水疱 +红肿、水疱伴溃疡红肿、水疱伴溃疡（三）结果分析及注意事项（三）结果分析及注意事项 l假阴性出现的常见原因：假阴性出现的常见原因：皮试液的浓度过低或失效；皮试液的浓度过低或失效；老年患者或过敏性休克或哮喘大发作之后；老年患者或过敏性休克或哮喘大发作之后；皮试前用过抗组胺药或免疫抑制剂；皮试前用过抗组胺药或免疫抑制剂；操作不当将皮试液注入皮下或注入量过少

8、等。操作不当将皮试液注入皮下或注入量过少等。（三）结果分析及注意事项（三）结果分析及注意事项 l假阳性出现的常见原因：假阳性出现的常见原因：皮试液含有非特异性刺激物；皮试液含有非特异性刺激物；患者患有皮肤划痕征；患者患有皮肤划痕征；操作手法较重；操作手法较重；注入量较大或浓度过高；注入量较大或浓度过高；注入少量空气等。注入少量空气等。l询问病史询问病史阳性对照阳性对照l必备抢救药品和设施必备抢救药品和设施如何避免假性结果的出现：如何避免假性结果的出现：适应证适应证阴性对照阴性对照皮试液浓度皮试液浓度（四）应用与评价（四）应用与评价 l预防药物或疫苗等过敏预防药物或疫苗等过敏 l防治防治型超敏反

9、应性疾病型超敏反应性疾病 l结核菌素试验结核菌素试验l评估机体细胞免疫功能评估机体细胞免疫功能 l预防皮肤接触过敏预防皮肤接触过敏 结核菌素试验结核菌素试验 l是用结核菌素进行皮肤试验，通过观察局部是否出是用结核菌素进行皮肤试验，通过观察局部是否出现迟发型超敏反应，判断机体有无结核分枝杆菌感现迟发型超敏反应，判断机体有无结核分枝杆菌感染和对该菌的免疫力。染和对该菌的免疫力。l阳性：阳性：机体已感染过结核杆菌或机体已感染过结核杆菌或BCG接种成功；接种成功；l强阳性：强阳性：可能有活动性结核病；可能有活动性结核病；l阴性：阴性：机体未感染过结核分枝杆菌，机体未感染过结核分枝杆菌，但应考虑：但应考

10、虑：感染初期；感染初期；老年人；老年人；重度结核病患者，机体处于免疫反应低下状态；重度结核病患者，机体处于免疫反应低下状态；患有其他疾病。患有其他疾病。二、二、支气管激发试验支气管激发试验手捏式雾化器手捏式雾化器 bronchial provocative test,BPTl 测定支气管吸入某种刺激性物质后产生收缩反应程测定支气管吸入某种刺激性物质后产生收缩反应程 度的方法，亦称气道反应性测定；度的方法，亦称气道反应性测定；l 吸入一定量的激发物；吸入一定量的激发物；l 比较吸入前后肺通气功能指标；比较吸入前后肺通气功能指标；l 判断气道高反应性程度。判断气道高反应性程度。雾化抗原颗粒雾化抗原

11、颗粒55微米微米测定肺功能指标：测定肺功能指标：用力肺活量用力肺活量(FVC)1 1秒用力呼气容积秒用力呼气容积(FEV1)最大呼气流速最大呼气流速(PEF)比气道传导率比气道传导率(sGaw)射流雾化器射流雾化器l 特异性特异性BPTBPT 将一定浓度的抗原刺激物装入雾化器中将一定浓度的抗原刺激物装入雾化器中 使受试者经口或鼻吸入雾化颗粒，其携带激发物在使受试者经口或鼻吸入雾化颗粒，其携带激发物在 支气管树及肺泡沉积而起作用。支气管树及肺泡沉积而起作用。l 非特异性非特异性BPTBPT 将一定浓度的激发物装入雾化器中，将一定浓度的激发物装入雾化器中，进行同特异性进行同特异性BPTBPT的操作

12、。的操作。l 吸气流速、雾化颗粒直径的大小以及气道通畅与否吸气流速、雾化颗粒直径的大小以及气道通畅与否 均可影响雾化颗粒在气道的沉积，从而影响气道的均可影响雾化颗粒在气道的沉积，从而影响气道的 反应性。反应性。（一）试验类型及方法（一）试验类型及方法测基础肺功能测基础肺功能 激发物稀释液：激发物稀释液：低浓度低浓度/小剂量小剂量双倍浓度双倍浓度/剂量递增剂量递增阳性伴明显气促、喘息阳性伴明显气促、喘息口吸入口吸入1 11 1分半钟分半钟测定肺功能测定肺功能阳性标准阳性标准/明显不适明显不适/临床症状临床症状直至直至激发物达到最高浓度激发物达到最高浓度阴性反应阴性反应支气管支气管舒张剂舒张剂吸入

13、吸入技术要点技术要点（二）测定指标及结果判断（二）测定指标及结果判断支气管反应有三种类型：速发、迟发和双重反应。支气管反应有三种类型：速发、迟发和双重反应。每次观察不能小于每次观察不能小于2424小时。小时。FEV1：重复性好，结果稳定；重复性好，结果稳定；PEF：峰流速仪价格低廉、方便、不受场地限制，峰流速仪价格低廉、方便、不受场地限制，与与FEV1FEV1有较好的相关性，适合流行病学调查；有较好的相关性，适合流行病学调查；sGaw：敏感性好，但重复性稍差。敏感性好，但重复性稍差。测定指标测定指标1 变应原的确定常以定性试验判断结果。变应原的确定常以定性试验判断结果。阳性：阳性：气道反应性增

14、高气道反应性增高 FEV1、PEF较基础下降较基础下降2020或或sGaw下降下降35%35%，有时伴有明显自觉症状或肺部闻及哮鸣音。有时伴有明显自觉症状或肺部闻及哮鸣音。定性判断定性判断2（二）测定指标及结果判断（二）测定指标及结果判断 阴性：阴性：气道反应性正常气道反应性正常 FEV1、PEF或或sGaw上述标准，正常值为阴性。上述标准，正常值为阴性。无论激发试验阳性或阴性，均应排除气道反应性的影无论激发试验阳性或阴性，均应排除气道反应性的影响因素。可疑者，间隔响因素。可疑者，间隔2 23 3周后复检或周后复检或2 2个月后再测。个月后再测。定性判断定性判断2（二）测定指标及结果判断（二）

15、测定指标及结果判断（三）注意事项及禁忌证（三）注意事项及禁忌证 受试者在心肺功能不全、高血压、甲亢、妊娠、严受试者在心肺功能不全、高血压、甲亢、妊娠、严重咽喉炎、呼吸道感染或肺炎等情况下一般不适宜重咽喉炎、呼吸道感染或肺炎等情况下一般不适宜作激发试验；作激发试验；有过敏性休克，严重的血管性水肿及严重的喉头水有过敏性休克，严重的血管性水肿及严重的喉头水肿病史者；肿病史者；一周之内预防接种、职业性过敏因素的接触等。一周之内预防接种、职业性过敏因素的接触等。禁忌证禁忌证1l受试者在检查前：受试者在检查前：4848小时：停小时：停！抗组胺药、色甘酸钠及皮质激素类药抗组胺药、色甘酸钠及皮质激素类药;12

16、12小时：停小时：停！支气管扩张剂支气管扩张剂;1515分钟：实验室休息分钟：实验室休息,病史、体检排除病史、体检排除BPTBPT的禁忌证。的禁忌证。注意事项注意事项2（三）注意事项及禁忌证（三）注意事项及禁忌证l基础基础FEV1占预计值占预计值70%70%以上才能进行试验。以上才能进行试验。l受试者应为哮喘患者病情稳定时或缓解期。受试者应为哮喘患者病情稳定时或缓解期。l吸入激发物的浓度应从小到大，逐渐递增。吸入激发物的浓度应从小到大，逐渐递增。l应备有急救器械、药品和有经验的临床医生在场。应备有急救器械、药品和有经验的临床医生在场。注意事项注意事项2（三）注意事项及禁忌证（三）注意事项及禁忌

17、证（四）应用与评价（四）应用与评价有一定的危险性，但较皮肤试验的特异性高有一定的危险性，但较皮肤试验的特异性高与受试者的病史、症状和体征相关性较强与受试者的病史、症状和体征相关性较强确定支气管哮喘的过敏原，尤其皮试结果不肯定时确定支气管哮喘的过敏原，尤其皮试结果不肯定时排除皮试时的假阳性反应和假阴性反应排除皮试时的假阳性反应和假阴性反应检测新制剂的抗原性、平喘药疗效及观察脱敏效果检测新制剂的抗原性、平喘药疗效及观察脱敏效果缺点是每次仅能用一种抗原，要专门设备和技术，缺点是每次仅能用一种抗原，要专门设备和技术，并需对病人进行训练并与之配合并需对病人进行训练并与之配合观察症状观察症状症状好转症状好

18、转或减轻或减轻导致导致三、食物激发试验三、食物激发试验基础基础饮食饮食吃可疑的吃可疑的过敏食物过敏食物症状症状加重加重1 1周后周后疑似疑似过敏原，重复过敏原，重复3 3次次确定确定某食物为过敏原某食物为过敏原症状未减轻症状未减轻1 1周后周后排除排除 食物所致过敏食物所致过敏四、其他方法四、其他方法口腔激发试验口腔激发试验将超敏原直接与口腔黏膜接触，当口腔将超敏原直接与口腔黏膜接触，当口腔黏膜出现肿胀和充血时，可判断为阳性黏膜出现肿胀和充血时，可判断为阳性反应。反应。结膜激发试验结膜激发试验将超敏原滴于一眼，阳性反应为结膜充将超敏原滴于一眼，阳性反应为结膜充血、水肿、分泌增加、搔痒，甚至眼睑

19、血、水肿、分泌增加、搔痒，甚至眼睑红肿。注意假阳性对结果的干扰。红肿。注意假阳性对结果的干扰。鼻黏膜激发试验鼻黏膜激发试验将抗原吸入将抗原吸入/滴入受试者鼻腔，出现鼻滴入受试者鼻腔，出现鼻黏膜水肿、苍白、鼻痒、流涕、喷嚏为黏膜水肿、苍白、鼻痒、流涕、喷嚏为阳性。阳性。返回章目录返回章目录第二节第二节 IgE的检测的检测 一、一、IgE的测定的测定 CLIA敏感度更高，特异性高，定量敏感度更高，特异性高，定量 固相固相RIA是较传统的是较传统的IgE检测方法检测方法ELISA 双抗体夹心法，操作简便，敏感性很双抗体夹心法，操作简便，敏感性很高，是测定血清高，是测定血清IgE最常用的方法最常用的方

20、法 临床意义临床意义 正常人群血清正常人群血清IgE水平受地域环境、种水平受地域环境、种 族、遗传、年龄、性别、寄生虫感染、测定法及取族、遗传、年龄、性别、寄生虫感染、测定法及取 样等影响，结果有一定差异。样等影响，结果有一定差异。参考值参考值0.10.10.9mg/L0.9mg/L某些过敏体质者高于正常某些过敏体质者高于正常100010001000010000倍倍 血清血清IgE高高特应症、支气管肺曲菌病、特应症、支气管肺曲菌病、药物性间质性肺炎、麻风、药物性间质性肺炎、麻风、寄生虫病及寄生虫病及IgE型骨髓瘤等型骨髓瘤等二、特异性二、特异性IgE的测定的测定l 用纯化的过敏原去检测相应的用

21、纯化的过敏原去检测相应的IgE抗体的一类试验。抗体的一类试验。酶联免疫吸附试验：酶联免疫吸附试验：常用间接法测特异性常用间接法测特异性IgE。免疫印迹技术：免疫印迹技术：操作简单，能一次性测定多种变。操作简单，能一次性测定多种变。应原的特异性应原的特异性IgE，故临床已普遍采用，故临床已普遍采用IBT法。法。（+）E EE EE EE EE EE E洗涤洗涤洗涤洗涤洗涤洗涤结果结果ELISA间接法检测特异性间接法检测特异性IgE特异性变应原加入待检血清特异性变应原加入待检血清+-转印至转印至NC膜膜NC膜膜多种特异性变应原+-+分离特异性变应原条带待检血清待检血清特异性特异性IgE抗抗-IgE

22、HRP底物底物特异性抗原特异性抗原条带显色条带显色NC膜膜变应原变应原特异性特异性IgE抗抗-IgEHRPIBT检测特异性检测特异性IgE返回章目录返回章目录第三节第三节 免疫复合物检测免疫复合物检测l免疫复合物免疫复合物（immune complex,IC）:指由抗原与相应指由抗原与相应的抗体结合而成的复合物。的抗体结合而成的复合物。l局部免疫复合物：局部免疫复合物：沉积在机体的某一局部。沉积在机体的某一局部。l循环循环IC（circulating IC,CIC）：）：血液中存在的血液中存在的IC。l型超敏反应：型超敏反应：在传染病或性病时，在传染病或性病时，IC沉淀于局部后沉淀于局部后激活

23、补体，最终导致组织损伤，形成激活补体，最终导致组织损伤，形成IC病。病。抗原特异性抗原特异性IC抗抗原非特异性原非特异性IC不考虑形成不考虑形成IC抗原的性质，抗原的性质，检测未知抗原检测未知抗原与相应抗体形与相应抗体形成的成的IC总量总量一、抗原非特异性一、抗原非特异性CIC检测技术检测技术CIC：分子量分子量600kDa以上，沉降系数以上，沉降系数19S；热聚合人热聚合人IgG(heat agglutination human IgG,HAHG)：作为参考标准品，绘制标准曲线进行作为参考标准品，绘制标准曲线进行CIC定量或测定定量或测定 A值代表值代表CIC相当于相当于HAHG的含量。的含

24、量。CIC的检测方法：的检测方法：按抗体分子在结合抗原后发生的按抗体分子在结合抗原后发生的物理学和生物学特性的改变而设计。物理学和生物学特性的改变而设计。PEG比浊法比浊法;ELISA法法;胞法胞法Raji细胞法细胞法;抗球蛋白技术抗球蛋白技术mRF凝胶扩散试验。凝胶扩散试验。（一）（一）PEG比浊法比浊法1.1.基本原理基本原理 聚乙二醇聚乙二醇（polyethylene glycol,PEG）为）为 不带电荷、直链大分子结构的多糖，有强脱水作用，不带电荷、直链大分子结构的多糖，有强脱水作用，利用利用2%2%4%4%浓度的浓度的PEG可选择性沉淀大分子可选择性沉淀大分子CIC。2.2.技术要

25、点技术要点 生物化学检验。生物化学检验。2%PEG沉淀大分子沉淀大分子CIC；4%PEG沉淀较小分子沉淀较小分子CIC；超过超过5%PEG选择性沉淀选择性沉淀CIC的特性消失；的特性消失；温度影响极大，需进行温差校正；温度影响极大，需进行温差校正；低密度脂蛋白使浊度增加，空腹采血；低密度脂蛋白使浊度增加，空腹采血；高高球蛋白血症和标本反复冻融浊度增加。球蛋白血症和标本反复冻融浊度增加。3.3.注意事项注意事项（二）（二）ELISA法法1.1.基本原理基本原理 ELISA法测定的法测定的CIC，是能够结合，是能够结合C1q的的 IgG类抗体与其特异性抗原形成的类抗体与其特异性抗原形成的CIC。2

26、.2.技术要点技术要点 将聚苯乙烯包被上将聚苯乙烯包被上C1q，加入受检血清，加入受检血清，CIC中中IgG的的Fc段与段与C1q结合，再加抗人结合，再加抗人IgGHRP，形成形成C1q-CIC-抗人抗人IgGHRP复合物，加底物显色。复合物，加底物显色。灵敏度高于灵敏度高于PEG比浊法，检测到比浊法，检测到0.1mg/L，重重复性好等优点；复性好等优点；C1q制品不易精制制品不易精制,纯品不稳定，只能检出与补纯品不稳定，只能检出与补体结合的体结合的CIC。3.3.方法评价方法评价（三）细胞法（三）细胞法Raji细胞法细胞法 Raji细胞是从细胞是从Burkitt淋巴瘤分离建株似淋巴瘤分离建株

27、似 B细胞系，在体外繁殖传代，细胞表面有高密度的细胞系，在体外繁殖传代，细胞表面有高密度的 C1q、C3b、C3d等补体受体，而且不易脱落。等补体受体，而且不易脱落。1.1.基本原理基本原理 将定量待检血清、将定量待检血清、HAHG和和Raji细胞混合，使补细胞混合，使补体、体、CIC或或HAHG与与Raji细胞形成复合物，加入细胞形成复合物，加入抗人抗人IgGFIC，形成形成Raji细胞细胞补体补体CIC(或或 HAHG)抗人抗人IgG FIC复合物，检测荧光强度。复合物，检测荧光强度。2.2.技术要点技术要点培养条件能改变培养条件能改变Raji细胞细胞其其表面受体的数表面受体的数量及亲和性

28、，影响检测敏感性量及亲和性，影响检测敏感性;待检血清中如有抗淋巴细胞的抗体，能和待检血清中如有抗淋巴细胞的抗体，能和Raji细胞反应细胞反应;SLE血清中的抗血清中的抗DNA也能和也能和Raji细胞反应，细胞反应，使测定结果偏高。使测定结果偏高。3.3.影响因素影响因素敏感性高敏感性高(6mg/L HAHG)，实用性强；实用性强；缺点需培养缺点需培养Raji细胞和同位素标记抗人细胞和同位素标记抗人IgG，操作繁琐操作繁琐;Raii细胞培养较困难，不易长期稳定保持细胞培养较困难，不易长期稳定保持其特性，培养条件受限。其特性，培养条件受限。4.4.方法评价方法评价（四）抗球蛋白技术（四）抗球蛋白技

29、术mRF凝胶扩散试验凝胶扩散试验1.1.基本原理基本原理 IgG或或IgM类自身抗体与类自身抗体与IC中中IgG的的Fc段结合而不与游离段结合而不与游离IgG结合的特性，结合的特性，mRF与与CIC亲和亲和力较强。力较强。2.2.技术要点技术要点 将将mRF和待检血清中的和待检血清中的CIC在琼脂凝在琼脂凝胶中扩散，胶中扩散，mRFCIC结合形成沉淀现象，进行结合形成沉淀现象，进行CIC定性或定量定性或定量。3.3.方法评价方法评价 敏感度较低敏感度较低100mg/L（HAHG），），mRF来源受限，操作费时，难于常规应用。来源受限，操作费时，难于常规应用。CIC检测方法的基本原理及敏感性比较

30、检测方法的基本原理及敏感性比较方法方法原理原理 敏感性敏感性(mg/L HAHG)PEG比浊法比浊法溶解度溶解度2020超速离心超速离心分子大小分子大小-分子超滤分子超滤分子大小分子大小-凝胶过滤凝胶过滤分子大小分子大小3030ELISA法法结合结合C1q0.10.1C1q液相法液相法结合结合C1q1010C1q偏离试验偏离试验结合结合C1q1 15 5抗补体实验抗补体实验固定补体固定补体0.10.1mRF凝胶扩散法凝胶扩散法结合结合RF100100mRF固相抑制法固相抑制法结合结合RF1 12020抗抗体法抗抗体法结合结合Ig2 23 3Raji细胞法细胞法补体受体补体受体6 6花环抑制试验

31、花环抑制试验补体受体补体受体1010二、二、CIC检测方法评价及应用检测方法评价及应用自身免疫性疾病病程中连续动态观察或辅助诊断：自身免疫性疾病病程中连续动态观察或辅助诊断：试验方法本身不完善；试验方法本身不完善；IC形成的复杂性，如在生理状态下形成的复杂性，如在生理状态下IC是由各种抗原是由各种抗原 与相应抗体所构成的，维持动态平衡。在病理状态与相应抗体所构成的，维持动态平衡。在病理状态 下往往是单一种类下往往是单一种类IC增高，而此种单一成分增高发增高，而此种单一成分增高发 展到足以影响展到足以影响IC总体水平情况下，才能被试验检出。总体水平情况下，才能被试验检出。（一）检测方法评价（一）

32、检测方法评价肾脏疾病：急性肾小球肾炎、移植肾、肾脏疾病：急性肾小球肾炎、移植肾、IgA肾病；肾病；消化系统疾病：慢活肝炎、原发性胆淤性肝硬化；消化系统疾病：慢活肝炎、原发性胆淤性肝硬化；皮肤病：荨麻疹、天疱疮、皮疹性皮炎；皮肤病：荨麻疹、天疱疮、皮疹性皮炎；型超敏反应性疾病型超敏反应性疾病：SLE、RA、硬皮症、自身硬皮症、自身 免疫性溶血性贫血等。免疫性溶血性贫血等。此外，此外，CIC的检测对于肿瘤、肝癌、白血病、霍奇金的检测对于肿瘤、肝癌、白血病、霍奇金病、神经肌肉萎缩性侧索硬化症等疾病的诊断。病、神经肌肉萎缩性侧索硬化症等疾病的诊断。(二二)临床应用临床应用 固定或沉积于病变局部组织中的

33、固定或沉积于病变局部组织中的IC测定常用免测定常用免疫组化技术，如荧光免疫组化技术检测到组织标本疫组化技术，如荧光免疫组化技术检测到组织标本有有Ig和补体。受累组织的成分、构型和特定的部位和补体。受累组织的成分、构型和特定的部位可为疾病的严重程度和预后提供依据。可为疾病的严重程度和预后提供依据。三、沉积于组织中三、沉积于组织中IC 的测定的测定返回章目录返回章目录类型类型第四节第四节 抗人球蛋白试验抗人球蛋白试验(Coombs试验试验)l不完全抗体：不完全抗体：抗体分子较短小，只能与颗粒抗原抗体分子较短小，只能与颗粒抗原一方相结合，不出现可见的凝集现象，但能封闭一方相结合，不出现可见的凝集现象

34、，但能封闭抗原决定簇，使其不能再与完全抗体结合。抗原决定簇，使其不能再与完全抗体结合。l抗人球蛋白试验抗人球蛋白试验（antiglobulin test,AGT）：）：将人将人 球蛋白注入异种动物，诱导动物产生抗人球蛋白球蛋白注入异种动物，诱导动物产生抗人球蛋白血清血清 （antiglobulin serum，AGS)，AGS加入表加入表面结合有不完全抗体的红细胞复合物中，就能出面结合有不完全抗体的红细胞复合物中，就能出现可见的凝集现象。现可见的凝集现象。作用：作用：检测红细胞表面结检测红细胞表面结合的不完全抗体。合的不完全抗体。临床意义：临床意义：新生儿溶血症新生儿溶血症和自身免疫性溶血性贫

35、血和自身免疫性溶血性贫血的诊断。的诊断。RBC为为Rh+7S7S的的IgG体内发生体内发生+抗抗IgG体外测试体外测试抽血抽血一、直接抗球蛋白试验一、直接抗球蛋白试验检测游离在血检测游离在血清中的不完全清中的不完全抗体或红细胞抗体或红细胞表面的抗原表面的抗原RBC为为Rh+不完全抗体试剂不完全抗体试剂+抗抗IgG体外测试体外测试二、间接抗球蛋白试验二、间接抗球蛋白试验间接间接Coombs试验各反应物加入量试验各反应物加入量反应物反应物受检管受检管阳性对照阳性对照阴性对照阴性对照血清（受检或已知）血清（受检或已知）2 2滴滴5%5%红细胞悬液红细胞悬液(已知或受检已知或受检)1 1滴滴不完全抗不

36、完全抗D血清血清2 2滴滴AB型血清型血清2 2滴滴5%5%Rh阳性红细胞悬液阳性红细胞悬液1 1滴滴1 1滴滴1技术要点技术要点 凝集为阳性，表明受检血清有不完全抗体或红细凝集为阳性，表明受检血清有不完全抗体或红细胞上有相应抗原；同时具备阳性对照管凝集阴性对照胞上有相应抗原；同时具备阳性对照管凝集阴性对照管不凝集，如有不完全抗体，可将血清以作倍比稀释管不凝集，如有不完全抗体，可将血清以作倍比稀释进行效价测定。进行效价测定。2结果判断结果判断 在在37水浴中，抗体吸附相应红细胞上的结合程水浴中，抗体吸附相应红细胞上的结合程 度，与致敏的时间、离子强度有关；度，与致敏的时间、离子强度有关；离心速

37、度和时间十分重要，原则应以最小的离心离心速度和时间十分重要，原则应以最小的离心 力和最短的离心时间使阳性对照管出现反应为宜。力和最短的离心时间使阳性对照管出现反应为宜。34 是一种极为敏感的检查不完全抗体的方法，也是是一种极为敏感的检查不完全抗体的方法，也是RhD 检出的确证试验。操作繁杂，受试验条件影响较大。检出的确证试验。操作繁杂，受试验条件影响较大。注意事项注意事项方法评价方法评价l血液病的检测；血液病的检测；l鉴定血型和检查血清中不完全抗体；鉴定血型和检查血清中不完全抗体；l有助于有助于RhD的检出，多用于检测母体的检出，多用于检测母体RhD抗体；抗体；l输血前交叉配血试验及其他特殊研

38、究；输血前交叉配血试验及其他特殊研究；l及早发现和避免新生儿溶血症的发生；及早发现和避免新生儿溶血症的发生；l红细胞不相容的输血所产生的血型抗体进行检测。红细胞不相容的输血所产生的血型抗体进行检测。5返回章目录返回章目录临床意义临床意义l 方法：荧光分光光度法、放射免疫分析法及酶免疫方法：荧光分光光度法、放射免疫分析法及酶免疫 分析法测定。分析法测定。l 变应原刺激剂致嗜碱粒细胞释放组胺，可以检测出嗜变应原刺激剂致嗜碱粒细胞释放组胺，可以检测出嗜 碱粒细胞的释放能力，变应原刺激剂可以特异性确定碱粒细胞的释放能力，变应原刺激剂可以特异性确定 变应原的类型。变应原的类型。类型类型第五节第五节 药物

39、过敏筛选实验药物过敏筛选实验一、组胺含量测定一、组胺含量测定l BHRT是变应原刺激剂刺激纯化、洗涤后的嗜碱粒细是变应原刺激剂刺激纯化、洗涤后的嗜碱粒细 胞悬液而后释放化学介质组胺，通过测定组胺的量来胞悬液而后释放化学介质组胺，通过测定组胺的量来 反映嗜碱粒细胞的释放能力。反映嗜碱粒细胞的释放能力。l BHRT的结果可以从细胞释放一定量的组胺所需要的的结果可以从细胞释放一定量的组胺所需要的 变应原浓度或在一定浓度的变应原作用下细胞所释放变应原浓度或在一定浓度的变应原作用下细胞所释放 定量的组胺量来表达。定量的组胺量来表达。l 实验的灵敏度高，结果可靠，但价格较高。实验的灵敏度高，结果可靠，但价

40、格较高。嗜碱粒细胞组胺释放嗜碱粒细胞组胺释放(basophil histamine release test，BHRT)(human basophil degranulation test，HBDT)人嗜碱粒细胞脱颗粒试验人嗜碱粒细胞脱颗粒试验嗜碱粒细胞胞质中硫酸肝素颗粒可以被碱性染料嗜碱粒细胞胞质中硫酸肝素颗粒可以被碱性染料(甲苯胺蓝、阿利新蓝等甲苯胺蓝、阿利新蓝等)染色。当嗜碱粒细胞表染色。当嗜碱粒细胞表面结合的面结合的IgE与过敏原结合后，嗜碱粒细胞脱颗粒，与过敏原结合后，嗜碱粒细胞脱颗粒，则不再被染色，染色完整的细胞减少，从减少的则不再被染色，染色完整的细胞减少，从减少的完整细胞判断变

41、应原引起的过敏状况。完整细胞判断变应原引起的过敏状况。类胰蛋白酶类胰蛋白酶类胰蛋白酶：类胰蛋白酶：是是MC更具有选择性的标志，更具有选择性的标志，类胰类胰蛋白酶储存于分泌颗粒中，蛋白酶储存于分泌颗粒中，MC激活时，被释放至激活时，被释放至细胞外；细胞外；类胰蛋白酶原以酶原的形式存在，它的类胰蛋白酶原以酶原的形式存在，它的释放不需要释放不需要MC的激活，所以它的血清水平可以反的激活，所以它的血清水平可以反映体内映体内MC数目。嗜碱粒细胞几乎不含类胰蛋白酶。数目。嗜碱粒细胞几乎不含类胰蛋白酶。返回章目录返回章目录小小 结结 超敏反应性疾病通过体内和体外实验，可进行变超敏反应性疾病通过体内和体外实验

42、，可进行变应原的相关检测，包括应原的相关检测，包括激发试验激发试验（根据刺激物不同（根据刺激物不同分为非特异性和特异性激发试验，按检测部位又分分为非特异性和特异性激发试验，按检测部位又分为皮肤试验、为皮肤试验、支气管激发试验、食物激发试验等）；支气管激发试验、食物激发试验等）；IgEIgE检测检测（总（总IgE和特异性和特异性IgE检测）检测）；免疫复合物检免疫复合物检测测主要针对抗原非特异性主要针对抗原非特异性CICCIC；抗球蛋白试验抗球蛋白试验（直接（直接法和间接法）；法和间接法）；药物过敏筛选实验药物过敏筛选实验（组胺含量测定（组胺含量测定和特异性抗体测定和特异性抗体测定 ）。）。返回章目录返回章目录THANK YOU FOR YOUR ATTENTION!返回总目录返回总目录