结核病实验室诊断课件1.ppt

1、结核病实验室诊断（优选）结核病实验室诊断背景背景结核病流行现状结核病流行现状 全球有三分之一人口（20亿）亿）感染了结核杆菌 我国现患肺结核病人达500万，占全球病人总数的1/4背景背景结核病感染、传播、发病过程结核病感染、传播、发病过程潜伏感染染肺病或其他疾病 潜伏感染复发 细菌在人体复制播散Disseminates发作Onset康复Recovery时间表Time诊断Diagnosis治疗Treatment痊愈 2 个月（months）背景背景当前结核病的研究当前结核病的研究新型抗结核药物新型抗结核药物(50%)(50%)新型快速诊断技术新型快速诊断技术(40%)(40%)新型结核疫苗新型结

2、核疫苗(10%)(10%)JID 2012:205(Suppl 2),S147.背景背景结核分枝杆菌基础结核分枝杆菌基础 结核分枝杆菌（结核分枝杆菌（M.tuberculosisM.tuberculosis）简称为结核杆菌（简称为结核杆菌（tubercle tubercle bacillibacilli）。早在）。早在18821882年，德国细菌年，德国细菌学家柯赫（学家柯赫（Robert KochRobert Koch）就已证明）就已证明结核分枝杆菌是结核病的病原菌。结核分枝杆菌是结核病的病原菌。本菌可侵犯全身各组织器官，但以本菌可侵犯全身各组织器官，但以肺部感染最多见。肺部感染最多见。在微

3、生物分类中，结核分枝杆菌属在微生物分类中，结核分枝杆菌属于放线菌门、放线菌纲、放线菌目、于放线菌门、放线菌纲、放线菌目、分枝杆菌科、分枝杆菌属分枝杆菌科、分枝杆菌属 分枝杆菌复合群共包括人型、牛型、分枝杆菌复合群共包括人型、牛型、非洲型和田鼠型，而人型结核分枝非洲型和田鼠型，而人型结核分枝杆菌是人类主要的致病菌杆菌是人类主要的致病菌背景背景结核分枝杆菌基础结核分枝杆菌基础（1 1）结核杆菌可经多途径感染，由呼吸道、消化道和破损皮肤侵入）结核杆菌可经多途径感染，由呼吸道、消化道和破损皮肤侵入机体，最常见为经呼吸道感染引起肺结核。机体，最常见为经呼吸道感染引起肺结核。（2 2）结核杆菌无内毒素和外

4、毒素，也不产生侵袭性酶，其致病性主）结核杆菌无内毒素和外毒素，也不产生侵袭性酶，其致病性主要与其细胞壁内含大量脂质有关。主要包括要与其细胞壁内含大量脂质有关。主要包括 磷脂可刺激单核细胞增生，与结核结节和干酪样坏死形成有关磷脂可刺激单核细胞增生，与结核结节和干酪样坏死形成有关 分枝菌酸与抗酸染色性有关分枝菌酸与抗酸染色性有关 索状因子可破坏细胞线粒体膜，与慢性肉芽肿形成有关索状因子可破坏细胞线粒体膜，与慢性肉芽肿形成有关 硫酸脑苷酯抑制吞噬溶酶体形成，具有抗吞噬作用硫酸脑苷酯抑制吞噬溶酶体形成，具有抗吞噬作用 蜡质蜡质D D，可刺激机体的迟发型超敏反应。，可刺激机体的迟发型超敏反应。（3 3）

5、结核杆菌主要引起细胞免疫反应，属于传染性免疫）结核杆菌主要引起细胞免疫反应，属于传染性免疫结核病患者的常规检验结核病患者的常规检验 三大常规（血常规、尿常规、大便常规）三大常规（血常规、尿常规、大便常规）血沉血沉 血流变检测血流变检测 肺结核患者血液粘滞性、凝固性、聚集性肺结核患者血液粘滞性、凝固性、聚集性均增高，血流缓慢，易于促成肺内微血栓均增高，血流缓慢，易于促成肺内微血栓形成形成 微循环学杂志微循环学杂志 常规检测，无特异性。常规检测，无特异性。结核病患者的常规检验结核病患者的常规检验 腺苷脱氨酶（腺苷脱氨酶（ADA）:其血清其血清/浆膜腔积液比值更有意义。浆膜腔积液比值更有意义。C反应

6、蛋白反应蛋白（CRP）:X线提示有空洞的结核病人比没有线提示有空洞的结核病人比没有空洞的结核病人以及健康人显著升高。但是空洞的结核病人以及健康人显著升高。但是CRP正常不能正常不能排除结核病。排除结核病。Infection.17(1):134,1989 JanFeb 辅助治疗检测肝功能、肾功能、血脂、血糖。辅助治疗检测肝功能、肾功能、血脂、血糖。NSE、AFU等指标用于鉴别诊断。等指标用于鉴别诊断。CA 125标志的使用，可以作为结核病疗效判断指标。结标志的使用，可以作为结核病疗效判断指标。结核病与肺部肿瘤患者均升高。核病与肺部肿瘤患者均升高。中国实中国实用内科杂志用内科杂志2003年年 第第

7、2期期结核病患者的常规检验结核病患者的常规检验超敏超敏C反应蛋白肺结核是结核分枝杆菌感染导致机体细胞免疫功能下降的慢反应蛋白肺结核是结核分枝杆菌感染导致机体细胞免疫功能下降的慢性呼吸道传染病，患者血清中性呼吸道传染病，患者血清中HSCRP、免疫球蛋白、补体可发生改变。、免疫球蛋白、补体可发生改变。中中国实验诊断学国实验诊断学 2009年年01期期降钙素原（降钙素原（PCT）肺结核患者血清肺结核患者血清PCT水平明显低于社区获得性肺炎（水平明显低于社区获得性肺炎（CAP）患者，）患者，HIV阴性阴性的肺结核患者血清的肺结核患者血清PCT水平并不会明显增高，故可用于水平并不会明显增高，故可用于PT

8、B和和CAP的鉴别诊的鉴别诊断，但当断，但当PCT水平大于正常值时，其预后价值较差。可作为肺结核和肺结核水平大于正常值时，其预后价值较差。可作为肺结核和肺结核伴感染诊断的辅助指标。伴感染诊断的辅助指标。Eur Respir J 2011;37(2):37161，总符合率95.新型抗结核药物(50%)3%(624/655)J Infect Dis,2011,204:S11201129.2015年7月至2015年11月，对本院257例痰液和纤维支气管镜灌洗液进行直接涂片法和离心制片法比对验证试验，结果如下：涂片阳性肺结核:Xpert 检出率=99.（2）结核杆菌无内毒素和外毒素，也不产生侵袭性酶，

9、其致病性主要与其细胞壁内含大量脂质有关。marinum（海）、M.TB相对于临床资料、胸片以及TST的综合判断价值而言，并没有增加额外的诊断价值。%resistant 34.C反应蛋白（CRP）:X线提示有空洞的结核病人比没有空洞的结核病人以及健康人显著升高。Am J Respir Crit Care Med,2006,174:736742.但是否是活动性结核病，需结合临床症状和其它检测指标综合判断。（优选）结核病实验室诊断分枝杆菌复合群共包括人型、牛型、非洲型和田鼠型，而人型结核分枝杆菌是人类主要的致病菌Xpert MTB/RIF与BD960液体培养比较实验结核病实验室诊断技术简介结核病实验

10、室诊断技术简介1.结核抗体结核抗体2.结核蛋白结核蛋白芯片芯片3.体外体外r-干干扰素试验扰素试验4.结核杆菌结核杆菌分泌抗原分泌抗原1.涂片涂片2.培养培养3.药敏药敏4.菌型鉴定菌型鉴定细菌学细菌学免疫学免疫学分子生物学分子生物学其其 他他1.HPLC2.质谱技术质谱技术3.流式技术流式技术1.实时荧光实时荧光定量定量PCR2.DNA3.RNA4.耐药基因耐药基因突变突变5.菌型鉴定菌型鉴定6.测序测序结核分枝杆菌形态学检测结核分枝杆菌形态学检测涂片涂片染色染色镜检镜检结核杆菌离心制片技术结核杆菌离心制片技术直直接接涂涂片片法法离心制片法离心制片法合合 计计阳阳 性性阴阴 性性阳阳性性41

11、041(15.9%)阴阴性性17199216(84.1%)合合计计58（22.6%）199(77.4%)25720152015年年7 7月至月至20152015年年1111月，对本院月，对本院257257例痰液和纤维支气管镜灌洗液进行例痰液和纤维支气管镜灌洗液进行直接涂片法和离心制片法比对验证试验，结果如下：直接涂片法和离心制片法比对验证试验，结果如下：结论：离心制片法的确能提高结核杆菌涂片检测的阳性率。结论：离心制片法的确能提高结核杆菌涂片检测的阳性率。结核杆菌自动阅片技术结核杆菌自动阅片技术 20162016年年2 2月至月至20162016年年3 3月，本院对月，本院对308308例涂片

12、进行人工阅片例涂片进行人工阅片和计算机自动阅片比对试验；结果符合的为和计算机自动阅片比对试验；结果符合的为286286例，总符例，总符合率为合率为92.58%92.58%。结核分枝杆菌体外药敏试验结核分枝杆菌体外药敏试验结核杆菌体外结核杆菌体外药敏试验药敏试验MIC测定法测定法固固 体体培养法培养法液体液体仪器法仪器法液体液体微量法微量法结核分枝杆菌体外药敏试验结核分枝杆菌体外药敏试验 Drug free Isoniazid Ethambutol Inoculum media 0.2 mcg/ml 2.0 mcg/ml 10-3 +3 10-5 26 9 0%resistant 34.6 0.

13、1Interpretation Resistant Susceptible结论：离心制片法的确能提高结核杆菌涂片检测的阳性率。容易使用，不需要进行分子生物学培训TB相对于临床资料、胸片以及TST的综合判断价值而言，并没有增加额外的诊断价值。腺苷脱氨酶（ADA）:其血清/浆膜腔积液比值更有意义。3、对于糖尿病人、酒精依赖者、吸烟成瘾者、低体重者，如果他们不属于以上1和2的情况，并不建议常规开展LTBI的系统检测。An updata on the diagnosis of tuberculsosis infection.涂片阴性肺结核:Xpert 检出率=35.美国FDA数据灵敏度95.3%(62

14、4/655)JID 2012:205(Suppl 2),S147.1%(297/306)国内临床数据灵敏度95.生命力旺盛的病原体RNA转录活跃常规检测，无特异性。基本不受免疫力低下/受抑制影响，在肺外结核患者中有很高的检出率分枝杆菌复合群共包括人型、牛型、非洲型和田鼠型，而人型结核分枝杆菌是人类主要的致病菌4种环境分枝杆菌感染时M.结核分枝杆菌液体微量显色法药敏试验只针对结核分枝杆菌复合群敏感，与绝大多数环境分枝杆菌和卡介苗（BCG）无交叉反应结核分枝杆菌体外药敏试验结核分枝杆菌体外药敏试验1234 挑取菌落挑取菌落磨菌、稀释磨菌、稀释接种菌液接种菌液孵育孵育7-107-10天天显色，显色，

15、读取结果读取结果结核分枝杆菌液体微量药敏结核分枝杆菌液体微量药敏结核分枝杆菌体外药敏试验结核分枝杆菌体外药敏试验结核分枝杆菌液体微量显色法药敏试验结核分枝杆菌液体微量显色法药敏试验 收集我院收集我院2015年年8月至月至11月的临床分离菌株月的临床分离菌株511例，例，使用液体微量显色法进行了使用液体微量显色法进行了利福平、异烟肼、链霉素、利福平、异烟肼、链霉素、乙胺丁醇、卷曲霉素、氧氟沙星、乙硫异烟胺对氨基水乙胺丁醇、卷曲霉素、氧氟沙星、乙硫异烟胺对氨基水杨酸、左氧氟沙星、莫西沙星、利福布丁、阿米卡星、杨酸、左氧氟沙星、莫西沙星、利福布丁、阿米卡星、卡那霉素、氯苯吩嗪等卡那霉素、氯苯吩嗪等十

16、四种抗结核药物的体外药敏试十四种抗结核药物的体外药敏试验验。其中。其中MDR-TBMDR-TB菌株菌株7575例（例（14.7%14.7%）。）。药物药物RFPINHSMEMBCPMOFXETHPASLVFMOFRFBAMIKANCLO耐药耐药例数例数80146945850614149536260111387耐药率耐药率%15.728.618.411.49.811.98.09.610.412.111.72.22.517.0结核分枝杆菌体外药敏试验结核分枝杆菌体外药敏试验结核分枝杆菌液体微量显色法药敏试验比对实验结核分枝杆菌液体微量显色法药敏试验比对实验 收集临床分离菌株和国家参比室的质控菌株收

17、集临床分离菌株和国家参比室的质控菌株117117例，使例，使用液体微量显色法和罗氏比例法进行了利福平、异烟肼、用液体微量显色法和罗氏比例法进行了利福平、异烟肼、链霉素、乙胺丁醇、卷曲霉素、氧氟沙星、乙硫异烟胺、链霉素、乙胺丁醇、卷曲霉素、氧氟沙星、乙硫异烟胺、对氨基水杨酸、左氧氟沙星、莫西沙星、对氨基水杨酸、左氧氟沙星、莫西沙星、利福布丁、阿米卡星、卡那霉素、利福布丁、阿米卡星、卡那霉素、氯苯吩嗪等十四种抗结核药物的比对实验。氯苯吩嗪等十四种抗结核药物的比对实验。总符合率超过总符合率超过90%90%。结核病分子生物学诊断结核病分子生物学诊断一、结核分枝杆菌探针溶解曲线技术一、结核分枝杆菌探针溶

18、解曲线技术结核病分子生物学诊断结核病分子生物学诊断结结 果果 判判 断断结核病分子生物学诊断结核病分子生物学诊断溶解曲线法溶解曲线法比例法药敏比例法药敏敏感度敏感度特异度特异度阳阳 性性预测值预测值%阴阴 性性预测值预测值%总符总符合率合率%敏敏 感感耐耐 药药%INH敏敏 感感110490.598.295.596.696.1耐耐 药药238RFP敏敏 感感103295.897.294.198.196.8耐耐 药药346收集我院样本库的临床分离菌株收集我院样本库的临床分离菌株154154例，进行了溶解曲线法例，进行了溶解曲线法耐药基因突变分析以及罗氏比例法药敏试验，总符合率在耐药基因突变分析以

19、及罗氏比例法药敏试验，总符合率在96%96%以上。并对耐药结果不相符的以上。并对耐药结果不相符的1111株菌进行了基因测序分株菌进行了基因测序分析，均证实有耐药基因突变。析，均证实有耐药基因突变。结核病分子生物学诊断结核病分子生物学诊断二、结核分枝杆菌二、结核分枝杆菌RNARNA检测检测(TBRNA)(TBRNA)RNARNA作为临床分子诊断靶标的优点作为临床分子诊断靶标的优点RNA RNA 拷贝数拷贝数 DNA DNA拷贝数拷贝数更具临床意义更具临床意义:生命力旺盛的病原体生命力旺盛的病原体RNARNA转录活跃转录活跃RNARNA远不如远不如DNADNA稳定，病原体死亡，稳定，病原体死亡，R

20、NARNA很快降解很快降解 1.1.交叉污染少交叉污染少 2.2.较好的愈后指标较好的愈后指标结核病分子生物学诊断结核病分子生物学诊断 统计今年我院住院患者179例，分析涂片、培养和TBRNA检测报告，结果如下患者类型患者类型例数例数TB-RNA 阳性例数阳性例数阳性率阳性率涂片阳性涂片阳性272385.2%涂片阴性涂片阴性1424128.9%培养阳性培养阳性686291.1%培养阴性培养阴性11121.8%我院涂片、培养阳性率分别为：我院涂片、培养阳性率分别为：15.1%15.1%和和37.9%37.9%；TB-RNATB-RNA的总阳性率为的总阳性率为35.8%35.8%。痰标本可以直接放

21、入模块中，而无需与任何试剂进行混合处理Metaanalysis:new tests for the diagnosis of latent tuberculosis infection:areas of uncertainty and recommendations for research.结论：离心制片法的确能提高结核杆菌涂片检测的阳性率。61，总符合率95.Interpretation Resistant Susceptible辅助治疗检测肝功能、肾功能、血脂、血糖。潜伏性结核（LTBI）C反应蛋白（CRP）:X线提示有空洞的结核病人比没有空洞的结核病人以及健康人显著升高。收集临床分离菌

22、株和国家参比室的质控菌株117例，使用液体微量显色法和罗氏比例法进行了利福平、异烟肼、链霉素、乙胺丁醇、卷曲霉素、氧氟沙星、乙硫异烟胺、对氨基水杨酸、左氧氟沙星、莫西沙星、QuantiFERON-TB Gold in-tube(QFT-GI)有利于临床对结核病的早发现、早治疗，避免了疾病的传播与扩散肺结核患者血液粘滞性、凝固性、聚集性均增高，血流缓慢，易于促成肺内微血栓形成结核分枝杆菌液体微量药敏Geneva:World Health Organization,2010.Xpert MTB/RIF与BD960液体培养比较实验结核菌素试验（TST）诊断Diagnosis中国实验诊断学 2009年

23、01期3%(624/655)一次性完成TB DNA的扩增及杂交TB-RNA 阳性例数结核病分子生物学诊断结核病分子生物学诊断三、三、EasyNAT TBDNAEasyNAT TBDNA检测（恒温扩增法）检测（恒温扩增法）原理将病原体原理将病原体DNADNA扩增、核酸杂交和核酸试纸扩增、核酸杂交和核酸试纸条检测三种技术有机地融为一体，在恒温条检测三种技术有机地融为一体，在恒温扩增反应中加入两对扩增反应中加入两对TBTB特异性引物、一对特异性引物、一对特异性探针，同时特异性探针，同时 一次性完成一次性完成TB DNATB DNA的扩增及杂交的扩增及杂交 过程，然后用一次性核酸检测装过程，然后用一次

24、性核酸检测装 置进行定性诊断。置进行定性诊断。检测目标片段检测目标片段:目标为结核分枝杆菌目标为结核分枝杆菌 特异性特异性IS6110IS6110片段。片段。结核病分子生物学诊断结核病分子生物学诊断操作步骤操作步骤结核病分子生物学诊断结核病分子生物学诊断 2015 2015年年6 6月，我科参加月，我科参加CTCTC“EasyNATCTCTC“EasyNAT结核分枝杆菌核酸检测试剂结核分枝杆菌核酸检测试剂盒现场应用评估盒现场应用评估”项目项目,结果如下结果如下 患者类型患者类型例数例数EasyNAT TB-DNA检检测测阳性率阳性率%阳性阳性阴性阴性涂片阳性涂片阳性770100.0涂片阴性涂片

25、阴性432414.7培养阳性培养阳性1091*90.0培养阴性培养阴性400400.0注注*：1 1例培养阳性最终鉴定为非结核分枝杆菌例培养阳性最终鉴定为非结核分枝杆菌结核病分子生物学诊断结核病分子生物学诊断四、四、GenXpert MTB/RIFGenXpert MTB/RIF进行标本处理、实时进行标本处理、实时PCRPCR和利福平耐药性检测的完整和利福平耐药性检测的完整平台平台痰标本可以直接放入模块中，而无需与任何试剂进痰标本可以直接放入模块中，而无需与任何试剂进行混合处理行混合处理GeneXpert GeneXpert 设备可进行标本液化、去污染、富集、设备可进行标本液化、去污染、富集、

26、DNADNA提取、提取、rpoB rpoB实时扩增、应用分子灯塔检测耐实时扩增、应用分子灯塔检测耐药相关的突变药相关的突变容易使用，不需要进行分子生物学培训容易使用，不需要进行分子生物学培训操作完全自动化，操作完全自动化，使用起来既容易又安全。使用起来既容易又安全。结核病分子生物学诊断结核病分子生物学诊断Xpert MTB/RIFXpert MTB/RIF与与PCR TBDNAPCR TBDNA检测的比较检测的比较阳性符合率阳性符合率99.0399.03，阴性符合率，阴性符合率92.6192.61，总符合率，总符合率95.3195.31Gen-XpertPCR TB-DNA合计合计阳性阳性阴性

27、阴性阳阳 性性20421225阴阴 性性2263265合合 计计206284490结核病分子生物学诊断结核病分子生物学诊断 涂片阳性肺结核涂片阳性肺结核:Xpert:Xpert 检出率检出率=99.35=99.35 涂片阴性肺结核涂片阴性肺结核:Xpert:Xpert 检出率检出率=35.32=35.32Gen-Xpert涂片结果涂片结果合计合计阳性阳性阴性阴性阳阳 性性15271223阴阴 性性1130131合合 计计153201354结核病分子生物学诊断结核病分子生物学诊断Xpert MTB/RIFXpert MTB/RIF与与BD960BD960液体培养比较实验液体培养比较实验阳性符合率

28、阳性符合率95.5295.52，阴性符合率，阴性符合率95.5195.51，总符合率，总符合率=95.5195.51Gen-Xpert培养培养+鉴定结果鉴定结果合计合计阳性阳性阴性阴性阳性阳性2132131212225225阴性阴性1010255255265265合计合计223223267267490490结核病分子生物学诊断结核病分子生物学诊断Xpert MTB/RIFXpert MTB/RIF与比例法药敏比较实验与比例法药敏比较实验阳性符合率阳性符合率 96.8896.88，阴性符合率，阴性符合率 95.5395.53，总符合率，总符合率 95.7395.73，Gen-Xpert利福平药敏

29、试验利福平药敏试验合计合计耐药（阳性）耐药（阳性）敏感（阴性）敏感（阴性）耐药（阳性）耐药（阳性）31318 83939不确定不确定0 02 22 2敏感（阴性）敏感（阴性）1 1171171172172合计合计3232179179211211结核病分子生物学诊断结核病分子生物学诊断WHOWHO关于关于Xpert MTB/RIFXpert MTB/RIF的建议的建议Xpert MTB/RIF Xpert MTB/RIF 应该用于应该用于MDRTBMDRTB的高危人群、以的高危人群、以便尽早发现便尽早发现MDRTBMDRTB患者，有效控制疫情。患者，有效控制疫情。Xpert MTB/RIF Xp

30、ert MTB/RIF 在在MDRMDR或或HIVHIV问题不十分严重的问题不十分严重的地区，可以考虑作为显微镜检查基础之上的地区，可以考虑作为显微镜检查基础之上的后续检测，特别是用于涂阴标本的进一步检后续检测，特别是用于涂阴标本的进一步检测。测。体外体外r r干扰素释放试验干扰素释放试验 蛋白质水平 结核菌素试验（结核菌素试验（TST）T-SPOT.TBQuantiFERON-TB Gold in-tube(QFT-GI)潜伏性结核潜伏性结核（LTBILTBI）体外体外r r干扰素释放试验干扰素释放试验 干扰素干扰素检测阴性检测阴性干扰素干扰素检测阳性检测阳性TB抗原多肽T细胞活化T细胞 干

31、扰素体外体外r r干扰素释放试验干扰素释放试验 特异性 只针对结核分枝杆菌复合群敏感，与绝大多数环境分枝杆菌和卡介苗（BCG）无交叉反应 美国FDA数据特异性97.1%(297/306)国内临床数据特异性94.1%(478/508)灵敏度 基本不受免疫力低下/受抑制影响，在肺外结核患者中有很高的检出率 美国FDA数据灵敏度95.6%(175/183)国内临床数据灵敏度95.3%(624/655)体外体外r r干扰素释放试验干扰素释放试验阴性阴性结结果果阳性阳性结结果果空白空白对对照照抗原抗原AESAT-6抗原抗原BCFP10阳性阳性对对照照（PHA）实验效果图实验效果图体外体外r r干扰素释放

32、试验干扰素释放试验 检测特异性的提高检测特异性的提高 帮助临床区分卡介苗接种和环境分枝杆菌感染帮助临床区分卡介苗接种和环境分枝杆菌感染引起的引起的“假阳性假阳性”，避免了临床的无效用药，避免了临床的无效用药 检测灵敏度的提高检测灵敏度的提高 有利于临床对结核病的早发现、早治疗，避免有利于临床对结核病的早发现、早治疗，避免了疾病的传播与扩散了疾病的传播与扩散 快速快速 48小时出结果小时出结果体外体外r r干扰素释放试验干扰素释放试验 阴性结果提示患者体内不存在针对结核杆菌特异的效应T细胞。假阴性结果感染阶段不同；少数免疫系统功能不全/疾病；实验非正常操作。阳性结果提示患者体内存在针对结核杆菌特

33、异的效应T细胞，患者存在结核感染。但是否是活动性结核病，需结合临床症状和其它检测指标综合判断。假阳性结果4种环境分枝杆菌感染时M.kansasii（堪萨斯）、M.szulgai（苏氏）、M.marinum（海）、M.gordonae（戈登）体外体外r r干扰素释放试验干扰素释放试验WHO 2014 WHO 2014 潜伏结核感染管理指南建议潜伏结核感染管理指南建议1 1、在、在HIVHIV感染人群、与肺结核患者密切接触的成人和儿童、感染人群、与肺结核患者密切接触的成人和儿童、开始接受抗肿瘤坏死因子（开始接受抗肿瘤坏死因子（TNFTNF）治疗的患者、接受透析）治疗的患者、接受透析治疗的患者、准备

34、接受器官或血液移植的患者、以及硅治疗的患者、准备接受器官或血液移植的患者、以及硅肺患者中开展肺患者中开展LTBILTBI系统检测和治疗。检测系统检测和治疗。检测LTBILTBI建议使用建议使用干扰素释放试验（干扰素释放试验（IGRAIGRA）或结核菌素皮试（）或结核菌素皮试（TSTTST）。）。2 2、对于羁押人员、医务人员、来自结核病高负担国家的移、对于羁押人员、医务人员、来自结核病高负担国家的移民、无家可归者、以及吸毒人员，可以有条件地开展民、无家可归者、以及吸毒人员，可以有条件地开展LTBILTBI系统检测和治疗。系统检测和治疗。3 3、对于糖尿病人、酒精依赖者、吸烟成瘾者、低体重者，、

35、对于糖尿病人、酒精依赖者、吸烟成瘾者、低体重者，如果他们不属于以上如果他们不属于以上1 1和和2 2的情况，并不建议常规开展的情况，并不建议常规开展LTBILTBI的系统检测。的系统检测。体外体外r r干扰素释放试验干扰素释放试验 LTBILTBI筛查和诊断的建议流程筛查和诊断的建议流程 体外体外r r干扰素释放试验干扰素释放试验 关于IGRA用于诊断LTBI的研究文献比较多，在这方面的结论也比较成熟。Richeldi的综述认为TSPOT.TB诊断LTBI的敏感度高于TST，而QFTGIT诊断LTBI的敏感度与TST相似；无论人群是否接种后卡介苗，TSPOT.TB和QFTGIT在诊断LTBI的

36、特异度方面均优于TST。Richeldi.L.An updata on the diagnosis of tuberculsosis infection.Am J Respir Crit Care Med,2006,174:736742.Menzies等在2007年发表的一篇纳入8项研究的meta分析论文中指出，IGRA对于普通人群，尤其是曾经接种过卡介苗的人群诊断LTBI具有较高的特异度；但和TST一样，IGRA的敏感度差强人意，两者均不能区别LTBI和活动性结核病 Menzies D,Pai M,Comstock G.Metaanalysis:new tests for the diagn

37、osis of latent tuberculosis infection:areas of uncertainty and recommendations for research.Ann Intern Med,2007,146:340354.IGRA诊断诊断LTBI的价值的价值体外体外r r干扰素释放试验干扰素释放试验 IGRAIGRA诊断活动性结核病的价值诊断活动性结核病的价值 在南非进行的在南非进行的1 1项募集到项募集到491491例痰涂阴疑为肺结核例痰涂阴疑为肺结核患儿的研究中，结合临床资料、胸片以及患儿的研究中，结合临床资料、胸片以及TSTTST结果结果诊断肺结核的曲线下面积为诊

38、断肺结核的曲线下面积为85%85%（95%CI 80%95%CI 80%90%90%）。该研究最重要的价值在于发现，）。该研究最重要的价值在于发现，TSPOT.TBTSPOT.TB相对于临床资料、胸片以及相对于临床资料、胸片以及TSTTST的综合判断价值而的综合判断价值而言，并没有增加额外的诊断价值。言，并没有增加额外的诊断价值。Ling DI,Nicol MP,Pai M,et al.Ling DI,Nicol MP,Pai M,et al.Incremental value of TSPOT.TB for Incremental value of TSPOT.TB for diagnosi

39、s of active pulmonary tuberculosis diagnosis of active pulmonary tuberculosis in children in a highburden setting:a in children in a highburden setting:a multivariable analysis.Thorax,2013,68:multivariable analysis.Thorax,2013,68:860866.860866.17(1):134,1989 JanFebInterpretation Resistant Susceptibl

40、eCA 125标志的使用，可以作为结核病疗效判断指标。背景结核病感染、传播、发病过程Xpert MTB/RIF 应该用于MDRTB的高危人群、以便尽早发现MDRTB患者，有效控制疫情。容易使用，不需要进行分子生物学培训Chest,2007,132:959965.新型抗结核药物(50%)NSE、AFU等指标用于鉴别诊断。结核分枝杆菌液体微量药敏3%(624/655)我国现患肺结核病人达500万，占全球病人总数的1/4索状因子可破坏细胞线粒体膜，与慢性肉芽肿形成有关Strategic and Technical Advisory Group for Tuberculosis(STAGTB):rep

41、ort of the tenth meeting.常规检测，无特异性。2015年7月至2015年11月，对本院257例痰液和纤维支气管镜灌洗液进行直接涂片法和离心制片法比对验证试验，结果如下：Xpert MTB/RIF 应该用于MDRTB的高危人群、以便尽早发现MDRTB患者，有效控制疫情。2016年2月至2016年3月，本院对308例涂片进行人工阅片和计算机自动阅片比对试验；全球有三分之一人口（20亿）感染了结核杆菌二、结核分枝杆菌RNA检测(TBRNA)3%(624/655)Xpert MTB/RIF与BD960液体培养比较实验中国实用内科杂志2003年 第2期1%(478/508)Che

42、st,2007,132:959965.索状因子可破坏细胞线粒体膜，与慢性肉芽肿形成有关二、结核分枝杆菌RNA检测(TBRNA)JID 2012:205(Suppl 2),S147.61，总符合率95.无论人群是否接种后卡介苗，TSPOT.2015年7月至2015年11月，对本院257例痰液和纤维支气管镜灌洗液进行直接涂片法和离心制片法比对验证试验，结果如下：涂片阳性肺结核:Xpert 检出率=99.kansasii（堪萨斯）、M.An updata on the diagnosis of tuberculsosis infection.结核分枝杆菌体外药敏试验涂片阳性肺结核:Xpert 检出率

43、=99.本菌可侵犯全身各组织器官，但以肺部感染最多见。一、结核分枝杆菌探针溶解曲线技术2016年2月至2016年3月，本院对308例涂片进行人工阅片和计算机自动阅片比对试验；一次性完成TB DNA的扩增及杂交Xpert MTB/RIF与比例法药敏比较实验本菌可侵犯全身各组织器官，但以肺部感染最多见。TB-RNA的总阳性率为35.（3）结核杆菌主要引起细胞免疫反应，属于传染性免疫Richeldi的综述认为TSPOT.结核病与肺部肿瘤患者均升高。新型快速诊断技术(40%)早在1882年，德国细菌学家柯赫（Robert Koch）就已证明结核分枝杆菌是结核病的病原菌。Richeldi.提示患者体内不

44、存在针对结核杆菌特异的效应T细胞。中国实用内科杂志2003年 第2期这些资料清楚地表明，在中低收入国家，IGRA和TST一样对于诊断成人活动性结核病没有任何价值1。Xpert MTB/RIF与BD960液体培养比较实验RNA作为临床分子诊断靶标的优点结核分枝杆菌液体微量药敏Geneva:World Health Organization,2010.TB相对于临床资料、胸片以及TST的综合判断价值而言，并没有增加额外的诊断价值。结核病与肺部肿瘤患者均升高。容易使用，不需要进行分子生物学培训Chest,2007,132:959965.体外体外r r干扰素释放试验干扰素释放试验 无论是HIV感染者还

45、是非HIV感染者，IGRA的诊断效率与TST相比较均无优势。这些资料清楚地表明，在中低收入国家，IGRA和TST一样对于诊断成人活动性结核病没有任何价值1。另有研究指出，IGRA较低的阳性预测值限制其在中低收入国家成为临床常规检测活动性结核的手段2。实际上，世界卫生组织专家组基于现有的证据明确指出，在中低收入国家不能以IGAR代替常规的微生物诊断方法用于肺结核和肺外结核的诊断3。1.Metcalfe JZ,Everett CK,Steingart KR,et al.Interferongamma release assays for active pulmonary tuberculosis

46、diagnosis in adults in low and middleincome countries:systematic review and metaanalysis.J Infect Dis,2011,204:S11201129.2.Kang YA,Lee HW,Hwang SS et al.Usefulness of wholeblood interferongamma assay and interferongamma enzymelinked immunospot assay in the diagnosis of active pulmonary tuberculosis.Chest,2007,132:959965.3.WHO.Strategic and Technical Advisory Group for Tuberculosis(STAGTB):report of the tenth meeting.Geneva:World Health Organization,2010.Accessed 1 December 2013.