抗体技术医学宣教课件.ppt

1、资料仅供参考,不当之处，请联系改正。抗体分子抗体分子资料仅供参考,不当之处，请联系改正。Antibody IgG structure资料仅供参考,不当之处，请联系改正。Antibody IgG structure资料仅供参考,不当之处，请联系改正。CLVLVHCH1VLCLVHCH1CH2CH2CH3CH3Antibody IgG structure资料仅供参考,不当之处，请联系改正。VHVLCLCH1CH2CH3Hinge(Fab)2FabFcMembraneExtensionAntibody IgG structure抗原结合片段抗原结合片段恒定区片段恒定区片段资料仅供参考,不当之处，请联

2、系改正。VHVLCLCH1CH2CH3Antibody IgG structure抗体可变区片段抗体可变区片段资料仅供参考,不当之处，请联系改正。VHVLCLCH1CH2CH3Fv资料仅供参考,不当之处，请联系改正。FvVHVLscFvVHVLSingle Chain Fragment variable资料仅供参考,不当之处，请联系改正。抗体抗体生物体最奇妙的分子生物体最奇妙的分子无限的多样性（无限的多样性（diversity)功能与结构的双重性功能与结构的双重性 可变区可变区抗原结合抗原结合 恒定区恒定区生物学效应功能生物学效应功能分泌型和膜型表达分泌型和膜型表达资料仅供参考,不当之处，请联

3、系改正。与抗体有关的诺贝尔奖获得者与抗体有关的诺贝尔奖获得者1901von Bering血清治疗1908Ehrlich&Metchnikoff抗体生成、吞噬1972Edelman&Poter抗体分子结构1977Yalow放射免疫测定1984Koler,Milstein&Jerne单克隆抗体1987TonegawaIg基因结构资料仅供参考,不当之处，请联系改正。本节课主要内容本节课主要内容一、细胞工程抗体和基因工程抗体一、细胞工程抗体和基因工程抗体二、治疗性单抗研制进展二、治疗性单抗研制进展资料仅供参考,不当之处，请联系改正。一、细胞工程抗体和基因工程抗体一、细胞工程抗体和基因工程抗体 抗体研究

4、领域的进展大致可分为三阶段：抗体研究领域的进展大致可分为三阶段：以以1890年年Behring发现白喉毒素免疫血发现白喉毒素免疫血清（白喉抗毒素）为代表，其特点是用清（白喉抗毒素）为代表，其特点是用抗原免疫动物来获得抗原免疫动物来获得多克隆抗体多克隆抗体;以以1975年年Kohler创建杂交瘤技术制备创建杂交瘤技术制备单单克隆抗体克隆抗体为代表为代表;以以1994年年Winter用用基因工程基因工程方法制备抗方法制备抗体为代表体为代表;资料仅供参考,不当之处，请联系改正。（一）多克隆抗体(Polyclonal antibody)1.概念 给动物接种抗原所获得的免疫血清或抗血清是多种抗体的混合物

5、,它是由多种抗原决定簇刺激多株B细胞增殖分化所产生的,称为多克隆抗体.资料仅供参考,不当之处，请联系改正。2.多克隆抗体的应用 免疫学检测 被动免疫治疗和紧急预防3.存在问题 特异性差,用于免疫学检测容易出现交叉反应 资料仅供参考,不当之处，请联系改正。（二）单克隆抗体(Monoclonal antibody,McAb)通过B细胞杂交瘤技术,获得特异性针对某一种抗原决定簇的细胞克隆，产生均一性的抗体.资料仅供参考,不当之处，请联系改正。单克隆抗体的特性单克隆抗体的特性 高度均一性：高度均一性：纯度很高的均一性抗体纯度很高的均一性抗体 高度专一性：高度专一性：只对抗原分子上某一抗原决定只对抗原分

6、子上某一抗原决定 簇起反应簇起反应 大量产生及稳定性：大量产生及稳定性：杂交瘤细胞能在体内外无限繁殖杂交瘤细胞能在体内外无限繁殖 之传代之传代 资料仅供参考,不当之处，请联系改正。、细胞工程抗体、细胞工程抗体杂交瘤杂交瘤-单克隆单克隆抗体抗体资料仅供参考,不当之处，请联系改正。资料仅供参考,不当之处，请联系改正。资料仅供参考,不当之处，请联系改正。资料仅供参考,不当之处，请联系改正。杂交瘤技术制备单克隆抗体的主要杂交瘤技术制备单克隆抗体的主要步骤包括步骤包括（1）抗原制备；）抗原制备；（2）免疫动物；）免疫动物；（3）免疫脾细胞和骨髓瘤细胞的制备；）免疫脾细胞和骨髓瘤细胞的制备；（4）细胞融合

7、；）细胞融合；（5）杂交瘤细胞的选择培养；）杂交瘤细胞的选择培养；（6）杂交瘤细胞的筛选；）杂交瘤细胞的筛选；（7）杂交瘤细胞的克隆化；）杂交瘤细胞的克隆化；（8）单克隆抗体的检定；）单克隆抗体的检定；（9）分泌单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立；）分泌单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立；（10）单克隆抗体的大量制备。）单克隆抗体的大量制备。资料仅供参考,不当之处，请联系改正。免疫动物免疫动物 免疫动物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠免疫动物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠产生致敏产生致敏B淋巴细胞的过程。淋巴细胞的过程。一般选用一般选用6-8周龄雌性周龄雌性Balb/c小鼠，抗原通过血液循环小鼠，抗原通过血液循

8、环或淋巴循环进入外周免疫器官，刺激相应或淋巴循环进入外周免疫器官，刺激相应B淋巴细胞克隆，使其活化、增殖，并分化淋巴细胞克隆，使其活化、增殖，并分化成为致敏成为致敏B淋巴细胞淋巴细胞资料仅供参考,不当之处，请联系改正。细胞融合与杂交瘤细胞的选择性培养细胞融合与杂交瘤细胞的选择性培养 细胞融合的基本方法：取适量脾细胞与骨细胞融合的基本方法：取适量脾细胞与骨髓瘤细胞混合，在髓瘤细胞混合，在PEG作用下融合，然后作用下融合，然后用培养液将用培养液将PEG融合液缓慢稀释融合液缓慢稀释,将混合体将混合体系移入选择性培养基系移入选择性培养基HAT中培养。中培养。资料仅供参考,不当之处，请联系改正。HAT选

9、择性培养的原理选择性培养的原理 融合后产生脾脾、脾瘤、瘤瘤融合细胞和融合后产生脾脾、脾瘤、瘤瘤融合细胞和未融合的骨髓瘤细胞。未融合的骨髓瘤细胞。次黄嘌呤（次黄嘌呤（H）、氨基碟呤（）、氨基碟呤（A）和胸腺）和胸腺嘧啶（嘧啶（T）氨基碟呤（氨基碟呤（A）阻断嘌呤和嘧啶的合成）阻断嘌呤和嘧啶的合成资料仅供参考,不当之处，请联系改正。HAT选择性培养的原理选择性培养的原理 骨髓瘤细胞选用次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖骨髓瘤细胞选用次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶（转移酶（HGPRT）缺陷型）缺陷型,不能利用外源性不能利用外源性次黄嘌呤来合成自身核酸中所需要的嘌呤，次黄嘌呤来合成自身核酸中所需要的嘌呤，而内源性嘌

10、呤和嘧啶的合成又被氨基碟呤而内源性嘌呤和嘧啶的合成又被氨基碟呤所阻断，不能在所阻断，不能在HAT培养基上生长。培养基上生长。B淋巴细胞无法在体外繁殖传代。淋巴细胞无法在体外繁殖传代。脾细胞内有这种转移酶，故脾瘤杂交细胞脾细胞内有这种转移酶，故脾瘤杂交细胞能用能用H和和T合成合成DNA而得以生长。而得以生长。资料仅供参考,不当之处，请联系改正。在最适培养条件下，大约在最适培养条件下，大约105个脾细胞才能个脾细胞才能形成一个杂交瘤细胞，单个或少数的杂交形成一个杂交瘤细胞，单个或少数的杂交瘤细胞多半不易存活，通常加入饲养细胞瘤细胞多半不易存活，通常加入饲养细胞（小鼠腹腔巨噬细胞、脾细胞和胸腺细胞）

11、（小鼠腹腔巨噬细胞、脾细胞和胸腺细胞）饲养细胞释放某些生长刺激因子，并能满饲养细胞释放某些生长刺激因子，并能满足杂交瘤细胞对细胞密度的依赖性。足杂交瘤细胞对细胞密度的依赖性。小鼠腹腔巨噬细胞还能清除死亡细胞，应小鼠腹腔巨噬细胞还能清除死亡细胞，应用较多。用较多。资料仅供参考,不当之处，请联系改正。筛选阳性克隆与克隆化筛选阳性克隆与克隆化 抗体产生细胞只占所有脾细胞的抗体产生细胞只占所有脾细胞的5%左右，左右，所以融合后所以融合后8-9天对每孔的培养上清液进行天对每孔的培养上清液进行抗体活性的筛选工作，筛选出产生抗体的抗体活性的筛选工作，筛选出产生抗体的阳性克隆。阳性克隆。常用方法：常用方法：酶

12、联免疫吸附法酶联免疫吸附法，免疫荧光技，免疫荧光技术（适用于细胞抗原的抗体检测）和放射术（适用于细胞抗原的抗体检测）和放射免疫技术。免疫技术。尽早克隆化。尽早克隆化。资料仅供参考,不当之处，请联系改正。杂交瘤细胞与抗体性状的鉴定杂交瘤细胞与抗体性状的鉴定 对杂交瘤细胞进行染色体分析对杂交瘤细胞进行染色体分析 对杂交瘤细胞产生的单克隆抗体进行对杂交瘤细胞产生的单克隆抗体进行Ig类和类和亚类的鉴定亚类的鉴定 对单克隆抗体特异性、纯度和识别抗原的对单克隆抗体特异性、纯度和识别抗原的相对分子质量进行测定。相对分子质量进行测定。资料仅供参考,不当之处，请联系改正。单克隆抗体的大量制备单克隆抗体的大量制备

13、 体外培养法体外培养法 在培养液中添加10%-20%小牛血清，由于培养液中含有血清成分，总蛋白量可达100mg/ml,纯化困难。小牛血清又是支原体污染的原因。无血清培养法：利用白蛋白、转铁蛋白、乙醇胺等混合物代替小牛血清。但产量不高。用悬浮培养方式代替静止培养法，微载体悬浮培养资料仅供参考,不当之处，请联系改正。多采用多采用动物体内诱生法动物体内诱生法 杂交瘤细胞的两种亲本细胞都来自BALB/c小鼠，故选用BALB/c小鼠制备单克隆抗体。先给小鼠注射刺激性的有机溶剂降植烷（破坏腹腔内膜，建立杂交瘤细胞易于增殖的环境），然后注射杂交瘤细胞，待生成腹水后再抽取，离心去细胞沉淀，取上清液冻存。操作简

14、便，经济，所得单克隆抗体量多且效价高，可有效保存杂交瘤细胞株。缺点是小鼠腹水中混有来自小鼠的多种杂蛋白，给纯化带来难度。资料仅供参考,不当之处，请联系改正。单克隆抗体的纯化单克隆抗体的纯化 在纯化之前必须明确其在纯化之前必须明确其Ig类和亚类，类和亚类，Ig类和亚类类和亚类不同，纯化方法也不同；不同，纯化方法也不同；根据用途不同选择不同的纯化方法；根据用途不同选择不同的纯化方法；如用于体外诊断试剂的如用于体外诊断试剂的IgG类抗体应采用沉淀处类抗体应采用沉淀处理结合亲和层析亲和层析的方法。理结合亲和层析亲和层析的方法。IgM类抗体应类抗体应采用沉淀处理结合凝胶过滤的方法；采用沉淀处理结合凝胶过

15、滤的方法；体内诊断试剂或治疗用药物应去除内毒素、病毒、体内诊断试剂或治疗用药物应去除内毒素、病毒、核酸等微量污染物，必须采用亲和层析和阴离子核酸等微量污染物，必须采用亲和层析和阴离子交换层析。交换层析。资料仅供参考,不当之处，请联系改正。动物体内诱生法制备的单克隆抗体的纯化动物体内诱生法制备的单克隆抗体的纯化方法：方法：1 澄清和沉淀处理澄清和沉淀处理2 分离分离 凝胶过滤凝胶过滤 阴离子交换层析阴离子交换层析 亲和层析亲和层析资料仅供参考,不当之处，请联系改正。、单克隆抗体在医学上的应用A、用作诊断试剂、用作诊断试剂 1.检测淋巴细胞表面分子，区分不同分化 阶段的淋巴细胞，鉴别淋巴细胞。2.

16、鉴定病原体，准确诊断传染病。3.用于肿瘤的诊断和分型 4.激素类单抗用于测定体内激素含量，判 断内分泌的功能状态 资料仅供参考,不当之处，请联系改正。B、用作研究工具、用作研究工具1.纯化抗原纯化抗原2.分析和探查抗原结构分析和探查抗原结构3.分析抗原决定簇分子的功能分析抗原决定簇分子的功能C、用于疾病的治疗、用于疾病的治疗1.抗细胞表面分子单抗，用于移植排斥反抗细胞表面分子单抗，用于移植排斥反应的防治应的防治2.抗细胞因子单抗用于自身免疫性疾病的抗细胞因子单抗用于自身免疫性疾病的治疗治疗3.抗肿瘤单抗用于肿瘤的导向治疗抗肿瘤单抗用于肿瘤的导向治疗资料仅供参考,不当之处，请联系改正。单克隆抗体

17、用于免疫治疗存在的问题单克隆抗体用于免疫治疗存在的问题1)单克隆抗体的特异性单克隆抗体的特异性 由于肿瘤特异性抗原较少，缺乏对由于肿瘤特异性抗原较少，缺乏对肿瘤有严格特异性的单抗，对正常肿瘤有严格特异性的单抗，对正常组织有交叉反应组织有交叉反应2）异种抗体反应）异种抗体反应 鼠源性单抗用于人体，导致异源鼠源性单抗用于人体，导致异源性超敏反应性超敏反应资料仅供参考,不当之处，请联系改正。（三）基因工程抗体（三）基因工程抗体(Genetic engineering antibody)根据研究者的意图，采用基因工程方根据研究者的意图，采用基因工程方法，在基因水平，对免疫球蛋白基因进行法，在基因水平，

18、对免疫球蛋白基因进行切割、拼接或修饰后导入受体细胞进行表切割、拼接或修饰后导入受体细胞进行表达，产生新型抗体。主要包括达，产生新型抗体。主要包括 嵌合抗体嵌合抗体、小分子抗体小分子抗体、人源化抗体人源化抗体、双价抗体双价抗体和和双双特异性抗体特异性抗体。资料仅供参考,不当之处，请联系改正。小分子抗体小分子抗体鼠单抗人源化鼠单抗人源化基因工程改造的抗体基因工程改造的抗体资料仅供参考,不当之处，请联系改正。资料仅供参考,不当之处，请联系改正。小分子抗体小分子抗体 基因工程小分子抗体仅表达鼠源性基因工程小分子抗体仅表达鼠源性McAb的的V区（区（CDR）片段，其相对分子质量仅为）片段，其相对分子质量

19、仅为原抗体的原抗体的1/80-1/3。Fab片段抗体，由完整的轻链和重链片段抗体，由完整的轻链和重链(VH+CH1）组成组成 Fv抗体（抗体（VH+VL，非共价结合）非共价结合）单链抗体单链抗体:由由VH和和VL通过一段连接肽（通过一段连接肽（Linker）连接而成的重组蛋白连接而成的重组蛋白 单域抗体：由单域抗体：由VH或或VL单个可变区单个可变区资料仅供参考,不当之处，请联系改正。资料仅供参考,不当之处，请联系改正。抗体融合蛋白抗体融合蛋白 酶酶-抗体型偶合蛋白（抗体酶）在药物治疗中应用抗体型偶合蛋白（抗体酶）在药物治疗中应用前景广阔，它前景广阔，它可在靶向位置上将前体药物转化成可在靶向位

20、置上将前体药物转化成有效的药物有效的药物。当抗体和酶的融合蛋白定位在肿瘤。当抗体和酶的融合蛋白定位在肿瘤部位后再给予前体药物，药物经酶催化显示活性，部位后再给予前体药物，药物经酶催化显示活性，提高肿瘤区域的药物浓度，降低对正常细胞的毒提高肿瘤区域的药物浓度，降低对正常细胞的毒性。性。构建抗体融合蛋白的基本原则：将第一个蛋白的构建抗体融合蛋白的基本原则：将第一个蛋白的终止密码子删除，再接上带有终止密码子的第二终止密码子删除，再接上带有终止密码子的第二个蛋白基因，即可实现两个基因共表达。个蛋白基因，即可实现两个基因共表达。资料仅供参考,不当之处，请联系改正。在构建过程中关键的问题是两个蛋白间的在构

21、建过程中关键的问题是两个蛋白间的Linker 序列，一般序列，一般3-5个氨基酸可满足大部分融合蛋白的个氨基酸可满足大部分融合蛋白的正确折叠要求。如加入一段有疏水性和一定伸展正确折叠要求。如加入一段有疏水性和一定伸展性的肽链，可缓解两种蛋白的相互干扰。性的肽链，可缓解两种蛋白的相互干扰。在真核细胞中表达一般不涉及复性问题，其优点在真核细胞中表达一般不涉及复性问题，其优点是能够将抗体多肽正确折叠和糖基化，省去了繁是能够将抗体多肽正确折叠和糖基化，省去了繁杂的体外复性，缺点是产量低。杂的体外复性，缺点是产量低。在原核细胞中表达有两种形式：一种分泌至菌体在原核细胞中表达有两种形式：一种分泌至菌体外，

22、成为有活性的可溶性融合蛋白；另一种以胞外，成为有活性的可溶性融合蛋白；另一种以胞内包涵体形式存在，需溶解包涵体重新折叠，成内包涵体形式存在，需溶解包涵体重新折叠，成为有活性的蛋白质。为有活性的蛋白质。资料仅供参考,不当之处，请联系改正。嵌合抗体嵌合抗体 从杂交瘤细胞分离出从杂交瘤细胞分离出功能性可变区基因功能性可变区基因，与与人人Ig恒定区基因恒定区基因连接，插入适当表达载体，连接，插入适当表达载体，转染宿主细胞，表达人转染宿主细胞，表达人-鼠嵌合抗体。鼠嵌合抗体。特点：减少了鼠源性抗体的免疫原性，特点：减少了鼠源性抗体的免疫原性，同时保留了亲本抗体特异性结合抗原的能同时保留了亲本抗体特异性结

23、合抗原的能力。力。保留鼠源性保留鼠源性McAb的的CDR区的结构，抗体活性区的结构，抗体活性不会消失（不会消失（CDR区以外的其它部分不影响抗体区以外的其它部分不影响抗体活性），将活性），将C区用人的区用人的Ig分子的分子的C区置换，则对区置换，则对人的免疫原性消失。人的免疫原性消失。资料仅供参考,不当之处，请联系改正。嵌合抗体嵌合抗体 嵌合抗体是构建的第一个基因工程抗体，构建时可对抗体亚类进行变换，增强抗体的免疫治疗效果。其半衰期约为鼠源的6倍，介导细胞毒性所需的抗体浓度也低于原McAb。20世纪末期构建了为数众多的抗各种恶性肿瘤的嵌合抗体，但真正应用于临床的较少，主要是因为该技术已被日益成

24、熟的人源化抗体技术所取代。资料仅供参考,不当之处，请联系改正。人源化抗体（人源化抗体（humanized antibody)运用基因工程的方法将鼠运用基因工程的方法将鼠McAb除重链、轻除重链、轻链的互补决定区（链的互补决定区（CDR）以外的基因）以外的基因全部全部置换成人抗体的基因。又称置换成人抗体的基因。又称CDR移植抗体移植抗体 最大限度地降低了鼠最大限度地降低了鼠McAb的免疫原性的免疫原性,在在人体内的生物半衰期基本上与人抗体类似。人体内的生物半衰期基本上与人抗体类似。至今已有近百种人源化抗体申请临床试验，至今已有近百种人源化抗体申请临床试验，正在进行临床试验的有正在进行临床试验的有

25、30多种，有些已完多种，有些已完成成期临床试验并获政府批准上市销售。期临床试验并获政府批准上市销售。资料仅供参考,不当之处，请联系改正。资料仅供参考,不当之处，请联系改正。鼠单抗人源化鼠单抗人源化资料仅供参考,不当之处，请联系改正。双价抗体与双特异性抗体双价抗体与双特异性抗体(bispecific antibody)许多抗原抗体反应要求双价的抗原结合位许多抗原抗体反应要求双价的抗原结合位点，使抗原分子上的两个表位交联或使两点，使抗原分子上的两个表位交联或使两个抗原分子连接。个抗原分子连接。将识别肿瘤抗原的抗体和将识别肿瘤抗原的抗体和 识别细胞毒识别细胞毒性免疫效应细胞表面分子的抗体连结在一性免

26、疫效应细胞表面分子的抗体连结在一起，可使效应细胞更容易与肿瘤细胞结合起，可使效应细胞更容易与肿瘤细胞结合识别，取得杀伤肿瘤细胞的作用。识别，取得杀伤肿瘤细胞的作用。资料仅供参考,不当之处，请联系改正。构建方法构建方法 化学交联法化学交联法 用化学试剂随机交联两个用化学试剂随机交联两个Ig分分子表面上的巯基，构建双功能抗体。化学子表面上的巯基，构建双功能抗体。化学交联可能破坏抗体的功能，不易到达靶向交联可能破坏抗体的功能，不易到达靶向部位，体内稳定性差，每次应用都须重新部位，体内稳定性差，每次应用都须重新构建构建资料仅供参考,不当之处，请联系改正。生物学方法生物学方法 将分泌目的单克隆抗体的杂交

27、将分泌目的单克隆抗体的杂交瘤细胞与分泌另一种抗体的脾细胞融合，瘤细胞与分泌另一种抗体的脾细胞融合，形成可分泌亲代抗体和杂种抗体的杂种形成可分泌亲代抗体和杂种抗体的杂种-杂杂交瘤细胞。构建过程复杂，周期长，产量交瘤细胞。构建过程复杂，周期长，产量低，纯化技术复杂，基因组过大不稳定。低，纯化技术复杂，基因组过大不稳定。资料仅供参考,不当之处，请联系改正。基因工程方法基因工程方法 1993年年Holligen等构建出小分子等构建出小分子双功能抗体（双功能抗体（SCFV）2，是双功能抗体研究领域，是双功能抗体研究领域的里程碑。的里程碑。用接头连接不同抗体的用接头连接不同抗体的VH和和VL区区，使它们不

28、能形，使它们不能形成链内的分子配对，让其形成原抗体的分子内配成链内的分子配对，让其形成原抗体的分子内配对构建成双特异性（对构建成双特异性（SCFV）2。双功能抗体一臂识别肿瘤细胞抗原（癌基因产双功能抗体一臂识别肿瘤细胞抗原（癌基因产物），另一臂识别免疫效应细胞及分子，介导物），另一臂识别免疫效应细胞及分子，介导T淋淋巴细胞或毒素与药物发挥细胞毒作用巴细胞或毒素与药物发挥细胞毒作用资料仅供参考,不当之处，请联系改正。单链抗体单链抗体 单链抗体较好地保持了抗体亲和力，相对分子质单链抗体较好地保持了抗体亲和力，相对分子质量小、穿透力强、免疫原性小，且量小、穿透力强、免疫原性小，且易与效应效应易与效应

29、效应分子相连接分子相连接，构建出多种新功能的抗体分子，是，构建出多种新功能的抗体分子，是构建免疫毒素和双特异抗体的理想元件。因此成构建免疫毒素和双特异抗体的理想元件。因此成为基因工程抗体研究领域的热点。为基因工程抗体研究领域的热点。单链抗体基因构建的一般方法：单链抗体基因构建的一般方法：采用从杂交瘤细胞提取mRNA,反转录成cDNA，通过PCR扩增抗体VH和VL基因，人工合成一条寡核苷酸序列（Linker 序列），将VL与VH连接构建单链抗体基因资料仅供参考,不当之处，请联系改正。修饰抗体（修饰抗体（modified antibody)将放射性核素、生物毒素（白喉毒素、绿将放射性核素、生物毒素

30、（白喉毒素、绿脓杆菌外毒素、蓖麻毒蛋白、蛇毒蛋白、脓杆菌外毒素、蓖麻毒蛋白、蛇毒蛋白、相思子蛋白）或毒性极强的合成药物及抗相思子蛋白）或毒性极强的合成药物及抗生素等共价结合到抗体分子上生素等共价结合到抗体分子上.通过通过McAb可特异地将毒素导向肿瘤细胞等可特异地将毒素导向肿瘤细胞等的靶部位，以达到毒杀肿瘤细胞而少损伤的靶部位，以达到毒杀肿瘤细胞而少损伤正常细胞的功效，形象地称之为生物导弹正常细胞的功效，形象地称之为生物导弹（药物导弹、免疫毒素）。（药物导弹、免疫毒素）。资料仅供参考,不当之处，请联系改正。治疗性单抗的研究进展治疗性单抗的研究进展资料仅供参考,不当之处，请联系改正。757677

31、7879808182838485868788899091929394959697989920001 12 23 34 45 56 67 71.杂交瘤杂交瘤-单克隆抗体技术诞生单克隆抗体技术诞生2.抗独特型治疗淋巴瘤成功抗独特型治疗淋巴瘤成功3.OKT3被批准上市被批准上市4.单抗用于肿瘤治疗效果不佳单抗用于肿瘤治疗效果不佳5.抗内毒素单抗试用于败血性休克失败抗内毒素单抗试用于败血性休克失败6.抗抗17-1A和和ReoPro上市上市7.FDA批准批准6个单抗上市个单抗上市治疗性抗体发展历程和事件治疗性抗体发展历程和事件资料仅供参考,不当之处，请联系改正。OKT3 OKT3是美国是美国Ortho公

32、司生产的公司生产的OKT(Ortho Kung T cell OKT)系列中的一种抗人系列中的一种抗人T淋巴细胞分化抗淋巴细胞分化抗原原CD3的单克隆抗体，的单克隆抗体，CD3抗原是成熟抗原是成熟T细胞的共细胞的共同分化抗原，在全部外周血同分化抗原，在全部外周血T细胞和胸腺、淋巴结细胞和胸腺、淋巴结内接近成熟的内接近成熟的T细胞上表达。细胞上表达。OKT3作为一种免疫抑制剂，主要用于预防和治作为一种免疫抑制剂，主要用于预防和治疗同种异体肾移植等器官移植后的急性排斥反应。疗同种异体肾移植等器官移植后的急性排斥反应。OKT3主要通过细胞清除、不育性激活、功能性主要通过细胞清除、不育性激活、功能性受

33、体封阻、免疫调变、刺激抑制细胞增殖以及直受体封阻、免疫调变、刺激抑制细胞增殖以及直接作用于效应细胞等途径杀伤成熟接作用于效应细胞等途径杀伤成熟T细胞或阻断机细胞或阻断机体细胞免疫反应达到抗排斥目的。体细胞免疫反应达到抗排斥目的。资料仅供参考,不当之处，请联系改正。抗抗17-1A：主要作用于结肠癌、直肠癌病人主要作用于结肠癌、直肠癌病人原发的和转移的肿瘤；原发的和转移的肿瘤；Reopro是一类抗体类药物，是一类抗体类药物，1994年首度获年首度获得批准，用于冠状动脉手术及心脏搭桥患得批准，用于冠状动脉手术及心脏搭桥患者的治疗，以防止其血液拴塞。者的治疗，以防止其血液拴塞。资料仅供参考,不当之处，

34、请联系改正。抗体名称抗体名称 抗体种类抗体种类 靶向抗原靶向抗原 适应症适应症 批准日期批准日期OKT3 鼠单抗鼠单抗 CD3 移植排斥移植排斥 1986Panorex 鼠单抗鼠单抗 17-1A 大肠癌大肠癌 1995（德国）（德国）ReoPro 人人-鼠嵌合鼠嵌合Fab 血小板受体血小板受体 冠心病冠心病 1994 ba Rituxan 人人-鼠嵌合抗体鼠嵌合抗体 CD20 淋巴瘤淋巴瘤 1997Simulect 人人-鼠嵌合抗体鼠嵌合抗体 CD25 移植排斥移植排斥 1998Remicade 人人-鼠嵌合抗体鼠嵌合抗体 TNF-炎症性肠病、炎症性肠病、1998、类风湿关节炎类风湿关节炎 1

35、999Zanapax 人源化抗体人源化抗体 CD25 移植排斥移植排斥 1997Herceptin 人源化抗体人源化抗体 HER-2 乳腺癌乳腺癌 1998Synagis 人源化抗体人源化抗体 RSV F蛋白蛋白 RSV感染感染 1998Mylotarg 人源化抗体人源化抗体-CD33 淋巴瘤淋巴瘤 2000 化疗药物交连物化疗药物交连物Campath 人源化抗体人源化抗体 CD52 淋巴瘤淋巴瘤 2001已批准上市的治疗性单抗已批准上市的治疗性单抗资料仅供参考,不当之处，请联系改正。0 05 51010151520202525303035351997199719981998199919992

36、000200020012001销售额(亿美圆）治疗性单抗销售概况治疗性单抗销售概况资料仅供参考,不当之处，请联系改正。国外有关抗体开发的评述国外有关抗体开发的评述 正在临床试用的治疗性单抗超过上百种正在临床试用的治疗性单抗超过上百种 1998-2000 1998-2000年年20%20%研制的生物药品为单抗研制的生物药品为单抗 10 10年后市场上的单抗将从现在的年后市场上的单抗将从现在的 1111个个 100100个以上，预计销售额为个以上，预计销售额为$500$500亿亿 预计到预计到20082008年年7 7个主要市场用于肿瘤个主要市场用于肿瘤的治疗性单抗的销售额达的治疗性单抗的销售额达

37、4444亿美元亿美元资料仅供参考,不当之处，请联系改正。进入临床治疗性单抗情况分析进入临床治疗性单抗情况分析治疗肿瘤：治疗肿瘤：32%治疗免疫系统相关疾病：治疗免疫系统相关疾病：37%器官移植：器官移植：11%感染：感染：8%心血管：心血管：4%其它：其它：6%资料仅供参考,不当之处，请联系改正。/抗原数抗原数 /应用数应用数细胞膜分子细胞膜分子：CD系列：系列：35%42%膜受体及粘附分子：膜受体及粘附分子：17%15%肿瘤相关抗原：肿瘤相关抗原：10%5%细胞因子类细胞因子类：21%26%独特型独特型：6%5%病毒病毒：10%7%资料仅供参考,不当之处，请联系改正。在目前进入临床的单抗中：

38、在目前进入临床的单抗中：60%为人源化鼠单抗为人源化鼠单抗 20%为人源单抗为人源单抗 20%为鼠单抗（其中为鼠单抗（其中70%用用于肿瘤）于肿瘤）资料仅供参考,不当之处，请联系改正。人源抗体研制的基本路线人源抗体研制的基本路线 人血清来源人血清来源 人杂交瘤人杂交瘤单克隆抗体单克隆抗体 鼠单抗人源化鼠单抗人源化 噬菌体抗体库噬菌体抗体库 转基因小鼠转基因小鼠资料仅供参考,不当之处，请联系改正。转基因小鼠制备人源抗体转基因小鼠制备人源抗体灭活小鼠胚系灭活小鼠胚系IgIg基因基因 基因敲除基因敲除J JH H、J JK K和和C CK K基因段基因段将人胚系将人胚系IgIg基因转移到小鼠染色体基

39、因转移到小鼠染色体人工染色体技术人工染色体技术 微胞介导的染色体转移微胞介导的染色体转移微基因位点胚胎细胞注射微基因位点胚胎细胞注射资料仅供参考,不当之处，请联系改正。资料仅供参考,不当之处，请联系改正。微胞介导的染色体转移微胞介导的染色体转移资料仅供参考,不当之处，请联系改正。治疗性抗体的发展趋势治疗性抗体的发展趋势人源抗体制备技术已经成熟，今后人源抗体制备技术已经成熟，今后将进入以人源抗体为主的时代将进入以人源抗体为主的时代基因工程抗体逐渐从研究走向临床基因工程抗体逐渐从研究走向临床靶向抗原的研究和选择已逐渐成为靶向抗原的研究和选择已逐渐成为研制治疗性单抗的关键研制治疗性单抗的关键资料仅供

40、参考,不当之处，请联系改正。泰欣生泰欣生 泰欣生泰欣生（h-R3，Nimotuzumab）重组人源化）重组人源化抗人表皮生长因子受体单克隆抗体，是全球第三抗人表皮生长因子受体单克隆抗体，是全球第三个治疗实体瘤的单抗药物，是我国批准的第一个个治疗实体瘤的单抗药物，是我国批准的第一个人源化抗体药物，属国家人源化抗体药物，属国家类新药。类新药。在国家重大科技专项在国家重大科技专项“创新药物和中药现代化创新药物和中药现代化”的支持下，我国与古巴合资企业百泰生物药业有的支持下，我国与古巴合资企业百泰生物药业有限公司开发的一类癌症治疗新药限公司开发的一类癌症治疗新药“重组人源化抗重组人源化抗人表皮生长因子受体单克隆抗体人表皮生长因子受体单克隆抗体”（商品名：泰（商品名：泰欣生）欣生）,于于4月月11日获得国家食品药品监督管理局日获得国家食品药品监督管理局颁发的新药证书。颁发的新药证书。