药物制剂质量研究(课堂)课件.pptx

1、药物制剂质量研究药物制剂质量研究方法选择与验证方法选择与验证12020年3月25日4时3分安全有效质量可控22022年10月15日23时06分、方法学验证方法学验证产品考察产品考察确定质量限度确定质量限度检测方法选择检测方法选择质量目标质量目标是是/否否订入标准订入标准QbD终产品工艺研究工艺研究放行标准放行标准关键中间体质控关键中间体质控药物质量研究32022年10月15日23时06分药物研发的要求研究对象是什么？研究对象是什么？研究目的是什么？研究目的是什么？如何达到目的？如何达到目的？达到何种程度？达到何种程度？安全有效质量可控什么样的药物是安全的？什么样的药物是安全的？如何证明药物是安

2、全的？如何证明药物是安全的？什么样的药物是有效的？什么样的药物是有效的？如何保证药物的有效性？如何保证药物的有效性？好药好药42022年10月15日23时06分【鉴别鉴别】【检查检查】【含量测定（效价）含量测定（效价）】【性状性状】外观外观色、臭、溶解度色、臭、溶解度化学化学色谱色谱光谱光谱杂质的定量或限度检查（有关物质、杂质的定量或限度检查（有关物质、无机元素、残留溶剂）无机元素、残留溶剂）制剂中其他成分（降解产物、防腐剂）制剂中其他成分（降解产物、防腐剂）溶出度、释放度等功能检查的检测方法溶出度、释放度等功能检查的检测方法有效成分的含量测定有效成分的含量测定 目视目视资料留存资料留存是否专

3、属是否专属是否存在干扰是否存在干扰内毒素、无菌、微生物限度内毒素、无菌、微生物限度其他方法（起码证实方法的专属性）其他方法（起码证实方法的专属性）方法准确性方法准确性精密性精密性质量标准中的项目及方法要求52022年10月15日23时06分【鉴别鉴别】【检查检查】【含量测定（效价）含量测定（效价）】【性状性状】UV、旋光、密度、熔点化学、UV、IR、NMR、旋光HPLC、GC、容量法、酶法、生物测定法质量标准中常见检测方法化学、比色、pH、HPLC、GC、TLC、IC、CE、溶出（释放）度、原子吸收、水分62022年10月15日23时06分检测方法选择和设置 任何分析测试的目的都是为了获得稳定

4、、可靠和准确的数据 今天你“QbD”了么？本品“仿质量”还是“仿标准”？质量标准是控制产品质量的基本手段和范围 检测方法是质量标准的手段 仿药典品种如何验证方法？三类药如何仿？进口注册标准 国外药典 我该用什么方法。？创新药的检测方法如何选择？72022年10月15日23时06分仪器有确定的技术指标，经过检测证实其适用于需要验证的方法证明方法能够实现预期目的，证明方法能够实现预期目的，按预期要求运行按预期要求运行证实系统运行能够达到预期目标，证实系统运行能够达到预期目标，得到准确实验结果得到准确实验结果证明样品分析结果的准确性证明样品分析结果的准确性系统适用性系统适用性试验试验质量控制质量控制

5、检查检查分析仪器分析仪器确认确认分析方法分析方法验证验证影响数据质量的因素82022年10月15日23时06分检测方法的选择适用性适用性先进性经济性经济性通用性通用性方法与技术的方法与技术的“更新换代更新换代”方法能够满足实验室方法能够满足实验室间方法传递的要求间方法传递的要求方法能够充分反映质控目标方法能够充分反映质控目标方法准确、灵敏、简便、易行方法准确、灵敏、简便、易行92022年10月15日23时06分含量和杂质分析方法的选择 含量与杂质分析是否采用同一个条件 HPLC or UHPLC or 2DLC or GC 正相 or 反相 or HILIC IC or CE or 离子对 含

6、量与杂质采用何种检测器 UV检测器是否ok 折光、ELSD、CAD、NQAD CD、ED MS？前处理方法是否有效？102022年10月15日23时06分药物有效性的基石-对照品 理化检测用理化检测用国家药品标准物质国家药品标准物质系指用于药品质量标准中物理和化学测试用，具有确定特性，用以鉴别、检查、含量测定、校准设备的对照品。国家药品标准物质管理办法2011.10.1 国家药品标准物质研制技术要求 一级国家标准物质具有很好的质量特性，其特性量值采用定义法或其他精准、可靠的方法进行计量 二级国家标准物质具有良好的质量特性，其特性量值采用准确、可靠的方法或直接与一级标准物质相比较的方法进行计量。

7、112022年10月15日23时06分国家药品标准物质分类化学对照品生物标准品生物参考品对照药材/对照提取物体外诊断试剂标准品药用辅料对照品药包材对照物质122022年10月15日23时06分国家药品标准物质1.含量测定用化学对照品：含量测定用化学对照品：系指具有确定的量值，用于测定药品中特定成分含量的标准物质。2.鉴别或杂质检查用化学对照品：鉴别或杂质检查用化学对照品：系指具有特定化学性质，用于鉴别或确定药品某些特定成分的标准物质。3.对照药材对照药材/对照提取物：对照提取物：系指用于鉴别中药材或中成药中某一类成分或组分的对照物质。4.校正仪器校正仪器/系统适用性试验用对照系统适用性试验用对

8、照品：品：系指具有特定化学性质用于校正检测仪器或供系统适用性实验用的标准物质。供鉴供鉴别用别用供检供检查用查用供含供含量测量测定用定用供系统供系统适用性适用性用用132022年10月15日23时06分对照品的特点均匀均匀量值准确量值准确稳定稳定142022年10月15日23时06分药品标准物质研制管理机构药典药典管理机构管理机构品种品种中国药典中国食品药品检定研究院（NIFDC）2780国际药典（Ph.Int）WHO委托欧洲药事管理局（EDQM、NIBSC）542美国药典（USP）美国药典会（USP）3048欧洲药典（Ph.Eur）欧洲药事管理局（EDQM）2548英国药典（BP）英国药典会（

9、BPCL）英国政府化学分析实验室（LGC）3109日本药典（JP）日本公定书协会（PMRJ）246152022年10月15日23时06分对照品（标准品）、工作对照品、杂质对照品 对照品用于鉴别、检查、含量测定和校正检定仪器性能的标准物质。标准品用于生物检定、抗生素或生物药品生物检定、抗生素或生物药品中含量或效价测定的标准物质，以效价单位(U)表示。一级对照品在特定的背景下具有适宜的质量、其量值不需要再与另外的标准物质进行对比的对照品 二级对照品经与一级对照品对照而得来的对照品。确证的范围及检测的程度小于一级对照品。（亦称：工作对照品）杂质对照品162022年10月15日23时06分标准物质建立

10、的要求 制备 标定 保存和分发 质量标准中收载的标准物质需要具有可行性和适用性 可大量制备高纯物质 方法专属性强 稳定性良好 质量标准合理、可靠172022年10月15日23时06分对照品标定程序及项目制定标化方案标化实验分装标化报告发放/储存/稳定性182022年10月15日23时06分标化方案起草 查阅各国质量标准 原料的检验报告 原料的稳定性数据及引湿性 确定对照品用途，了解原料性质 制定标化项目及要求 形成初稿，负责人审核192022年10月15日23时06分标化项目无国家对照品的品种 性状（比旋度）鉴别（MS、IR、NMR、UV）检查 有关物质（国内外药典方法）水分/干燥失重残留溶剂

11、炽灼残渣 含量测定（对标、容量法）202022年10月15日23时06分标化项目有国家对照品的品种 性状&鉴别 检查 有关物质水分/干燥失重 含量测定（对标法）u当国家对照品换批时，必须重新标定u三个实验室的数据212022年10月15日23时06分对照品标定项目 首批 UV IR NMR MS 元素分析 X-ray衍射 官能团分析 常用 HPLC（DAD）GC TLC CE DSC 相容度法 UV、IR、NMR 容量法 旋光度 水分、残留溶剂、干燥失重222022年10月15日23时06分标化实验 如实记录实验过程中的现象 溶解过程，溶液状态 有关物质计算方式 归一化法 自身对照法 外标法2

12、32022年10月15日23时06分 HPLC有关物质：平行2份 干燥失重：精密称定2份，每份称样量约1.0g 水分：分装前平行3份；分装后取X支 炽灼残渣：1份 引湿性：DVS/药典附录引湿性 含量测定：对照品和原料各平行2份，每份不低于20mg 242022年10月15日23时06分分装 分装条件的确定 引湿性 用途 使用方式 分装记录 温湿度 数量 分装后均匀性的考察 水分 有关物质252022年10月15日23时06分 包装容器必须能够保证内容物的稳定性玻璃（塑料）安瓿主要用于易氧化及液体原料常规品种可采用西林瓶包装对于易于氧化或潮解的品种，必须控制分装间的湿度并在氮（氩）气氛围下分装

13、 最小包装单元的实际装量与标示的装量应符合规定的允差要求，固体原料的装量一般为标示量的10%262022年10月15日23时06分标化报告（一）概述（一）概述（二）原料的来源与检验（二）原料的来源与检验（三）结论（三）结论272022年10月15日23时06分标化报告（一）概述（一）概述 类别类别 各国药典收载情况：各国药典收载情况：EP、USP、JP 国内药品标准国内药品标准 结构式、分子式、分子量结构式、分子式、分子量282022年10月15日23时06分（二）原料检验：（二）原料检验：1.性状性状 根据质量标准项下的描述判定质量的优劣；根据质量标准项下的描述判定质量的优劣；若没有质量标准

14、，也要将样品实际性状记录下来若没有质量标准，也要将样品实际性状记录下来 理化性质：比旋度、折光系数、引湿性等理化性质：比旋度、折光系数、引湿性等 2.鉴别鉴别 结构确证：结构确证：UV、IR、NMR、MS、元素分、元素分析、析、X衍射、衍射、HPLC/TLC/GC鉴别、关键官能团的专属鉴别、关键官能团的专属性鉴别性鉴别标化报告292022年10月15日23时06分3.检查检查纯度纯度 TLC、HPLC、GC、DSC干燥失重或者水分干燥失重或者水分残留溶剂残留溶剂炽灼残渣炽灼残渣4.含量测定含量测定容量法容量法UV法法 HPLC法法标化报告302022年10月15日23时06分定值方法31202

15、2年10月15日23时06分影响对照品准确定值的因素 HPLC纯度 水分 炽灼残渣 残留溶剂 引湿性 稳定性322022年10月15日23时06分稳定性考察 先密后疏原则 考察项目 有关物质 水分/干燥失重 含量测定 可接受的变化限度332022年10月15日23时06分对照品的使用的注意事项使用方式 本品使用前不需处理，可直接使用 X干燥3小时后使用 使用时自测水分注意事项：开瓶后一次使用完毕 仅供国家药品标准规定项下使用 说明书网上下载，按说明书操作 更换新批次后，根据品种监测情况，一般对上一批次设置3-6个月仍可使用的缓冲期342022年10月15日23时06分对照品局限性 尽管同一批对

16、照品不同标定方法的含量有很好的相关性，但并不完全相同，有时差别会很大。如：头孢呋肟酯对照品，HPLC标定为96.9%，供含量测定用；UV为98.8%，供溶出度测定。中国药典凡例明确规定Chp对照品仅用于正文中所规定的分析方法。常将含量测定用的标准品或对照品用于溶出度检查，而含量测定方法与溶出度分析方法又不同，故极易引起问题！352022年10月15日23时06分效期和说明书 中国药品生物制品检定所提供的标准品大部分均无使用说明书和使用期限。大都沿用新的批号出现、旧的批号自动停止的管理方式。362022年10月15日23时06分二级对照品（工作对照品）的标定一级对照品的规格小、价格高、购买周期长

17、的缺点，对于实验室对照品用量大的企业来说，使用二级对照品成了实验室的首选。选定样品优质，高纯标定样品选择“合理”的方法标定13人、3样、3机。RSD应小于0.5%（HPLC法）标定2建议按照“新”对照品标定一次，与“对标”结果应相符。分装西林瓶，单次使用量，一次用完。效期1或2年（据稳定性数据），不超过样品效期储存28期间核查半效期372022年10月15日23时06分杂质对照品 是否需要设置杂质对照品 外标法定量？自身对照行不行？加校正因子行不行？系统适用性（定位）？相对保留时间行不行？降解能否获得？是否有相似替代品？技术门槛？！杂质对照品的研制 获得方式：定向合成、富集纯化、分离纯化 结构

18、确证 纯度检查 是否稳定，能否满足长期供应？382022年10月15日23时06分“量体裁衣”方法学验证392022年10月15日23时06分方法验证的步骤USP规定实验室应采用试验方式进行方法验证：“应通过实验室的研究制定成一定的分析方法验证程序，证明方法的性能参数符合预期的分析应用要求。”验证过程应满足以下条件：易于使用；能够用计算机系统自动控制；每次分析的成本；样品能量；运行时间；以及环境、健康和安全要求402022年10月15日23时06分分析方法验证的法规要求方法验证的目的证明所采用方法适合于相应检测项目的要求，能够真实反映产品质量，做到质量可控！新分析方法用于常规检测前必须验证方法

19、转移到新的实验室后需要进行重现验证（或方法确认）新药申报，质量标准中的分析方法必须验证！生产工艺变更、制剂组分变更、分析方法修订时，质量标准中的分析方法必须验证！方法验证的指导原则中国药典2010年版二部附录XIX A（只有项目没有标准）ICH Q2（A/B）FDA cGMPs 211.165，211.194USP 通则,412022年10月15日23时06分验证项目及内容不同项目验证内容不同！以证明方法适用为根本目的！项目内容项目内容鉴别鉴别杂质定量测定杂质定量测定杂质限度检查杂质限度检查含量测定及溶出度测定含量测定及溶出度测定准确度+精密度+重复性+中间精密度+专属性检测限定量限线性范围耐

20、用性 已有重现性验证，不需验证中间精密度。如一种方法不够专属，可用其他分析方法予以补充。视具体情况予以验证。422022年10月15日23时06分含量测定方法验证接受标准 容量分析法：原料药精制品（99.5%）或对照品考察精密度RSD0.2%；回收率99.7100.3%UV法：精制品考察精密度RSD1%；制剂回收率98102%；线性吸光度在0.20.7，r0.9999(n 5)，截距近于零。HPLC法：精制品考察精密度RSD2%；制剂回收率98102%；线性r0.999(n 5)，截距趋于零432022年10月15日23时06分方法验证的步骤 初步确定分析方法 制定验证方案 验证目的、验证项目

21、、接受标准 准备仪器设备、原料、对照品 人员准备、文献材料调研 开展验证 收集实验记录和图谱 提交验证报告 评价方法是否通过验证442022年10月15日23时06分方法验证的筹备防止不必要的失误 用于测定关键验证参数的化学品，应具备足够的数量，足够稳定，并且按照技术指标核查其具有确切的成分和纯度。其他材料和消耗品也应符合要求。应选用新的并且符合色谱柱性能指标要求的色谱柱（防止材料导致的失败）分析设备应有明确的规定和良好的性能，并经过确认或校准，以确保其满足分析方法要求的功能和性能指标。应选择中等性能的设备，而不要选择性能最好的设备。否则，用不同设备进行中间精密度和重现性研究时可能会有问题，不

22、容易满足标准限度的要求。操作人员应对技术和设备足够熟悉。这样，他们可以更容易地识别和诊断不可预见的问题，并且更加高效地完成整个过程。452022年10月15日23时06分分析方法验证顺序没有标准程序！耗时最长的实验放在最后！1.专属性2.重复性（RT、Area）3.线性、定量限、检测限、范围4.准确度5.中间精密度（重现性）6.耐用性部分数据可以套用！说法不一！斟酌考虑！462022年10月15日23时06分方法验证项目的要求保证分析方法能够用于在研药品的质量控制 专属性有其他成分（杂质、辅料等）存在时，拟定的方法能否准确（分离）测定出被测物；反映方法在有共存物时对供试物准确而专属的测定能力；

23、指用于复杂样品分析时是否受到相互干扰。分别分析加有杂质、降解产物等控制成分的样品和实际样品，比较两组测试结果空白无干扰主成分与有关物质完全分离（分离度r 1.5）峰纯度符合规定（980）考虑基质(辅料、水、食品等)对专属性的干扰，关注样品制备减少干扰的发生。472022年10月15日23时06分方法验证项目的要求专属性 鉴别 与可能的共存物或结构相似物质相区别 空白辅料、结构相似物以及其他组分均呈负反应 含量测定、杂质检测 提供代表性色谱图 表明各组分（成分）位置 分离度符合规定 含量测定供试品中加入杂质，考察对测试结果的影响(杂质定位)杂质测定供试品加入杂质，考察杂质间的分离情况482022

24、年10月15日23时06分降解试验以及降解途径的研究 降解条件选择 酸、碱、氧化 浓度、温度、时间 高温、光照 时间、光强 分离条件的优化 峰纯度 分离度 主要降解杂质鉴定 降解程度控制 降解1020%至少有一个条件降解 与非降解品比较；体现考察摸索和研究的过程492022年10月15日23时06分方法验证项目的要求专属性尝试选择合适的色谱柱或色谱条件获得方法的专属性评价目标色谱峰纯度（二极管阵列检测器、MS）当共洗脱化合物的光谱图非常接近时，紫外-可见二极管阵列检测器就有其局限性，这在代谢物及其母体化合物时极有可能发生502022年10月15日23时06分方法验证项目的要求专属性 当共洗脱化

25、合物的光谱图非常接近时，采用MS检测器 质谱通常比紫外光谱专属性更强，因此常用于色谱的选择性评价512022年10月15日23时06分方法验证项目的要求专属性猪去氧胆酸+胆酸胆酸 RT:0.00-40.0002468101214161820222426283032343638Time(min)05101520253035404550556065707580859095100Relative Abundance15.5715.4615.7314.3415.8914.2016.1513.3116.4417.4918.757.0425.8512.7821.499.838.7224.2826.93 2

26、8.9832.465.964.943.222.0036.7238.5935.86NL:1.19E7Base Peak F:ITMS-c ESI Full ms 50.00-1000.00 MS dansuan+zhu2m/z=391.44猪去氧胆酸m/z=407.43胆酸m/z=407.38胆酸异构体？胆酸猪去氧胆酸522022年10月15日23时06分方法验证项目的要求系统适用性 系统适用性 6份供试品溶液 响应因子RSD 2.0%主峰保留时间RSD 1.0%主峰拖尾因子2.0（0.951.05）主峰与杂质峰基线分离（2.0）理论板数符合规定532022年10月15日23时06分方法验证项目

27、准确度542022年10月15日23时06分方法验证项目准确度原料药原料药 利用已知纯度的对照品或样品进行测定 与已建立准确度的另一方法测定结果进行比较（容量法！）制剂制剂 空白辅料+对照品 制剂+对照品（无法获得空白辅料）552022年10月15日23时06分方法验证项目的要求精密度 精密度同一样品多次测定结果的接近程度 重复性 6份供试液（100%浓度），含量RSD 2.0%（n=6）检测范围内，3水平，9样品测定（回收率结果）中间精密度 （与重现性“二选一”）6份供试液，双人双机分别测定，含量RSD 2.0%（n=12）人员、仪器、操作条件、试剂、色谱柱等因素影响 重现性 不同实验室，不

28、同人员测定结果的精密度（方法通用性，方法转移）准，不精不准，精准，精562022年10月15日23时06分方法验证项目的要求灵敏度（检测限）检测限被测物能够被检测出的最低浓度或含量。限度指标，无需定量。目视法：能够可靠检出的被测物的最低浓度或含量(结果记录！)信噪比法：仪器分析法(计算基线噪音)，s/n 3 标准差法(I)：A3(n6)A:平均峰面积；：偏差 标准差法(II)：空白=0：测背景噪音(n10)，计算标准差；计算标曲上3对应的浓度，即为检出限 空白0：测背景噪音(n10)，计算标准差；计算标曲上(Y截距+3)对应的浓度，该浓度即为检出限 空白0：测背景噪音(n10)，计算标准差；计

29、算标曲上3对应的浓度，X截距+该浓度即为检出限572022年10月15日23时06分方法验证项目的要求灵敏度（定量限）检测限被测物能够被定量测定的最低浓度或含量，结果应准确和精密。信噪比法：仪器分析法(计算基线噪音)，s/n 10 标准差法：A10(n6)A:平均峰面积；：偏差 六份定量限溶液，主峰保留时间RSD 2.0%；主峰峰面积RSD 2.0%工作站计算信噪比，注意选取参比时间 色谱图显示s/n582022年10月15日23时06分方法验证项目的要求线性 线性被测物浓度与结果之间呈正比关系的程度 回归方程（最小二乘法；一次、二次、双对数）80%120%；定量限120%n6（至少五个点，均

30、匀分布）r 0.998 Y截距在100%响应值的2%内 响应因子RSD 2.0%592022年10月15日23时06分方法验证项目的要求范围 范围 达到一定精密度、准确度和线性下，测试方法使用的高、低浓度或量的区间 根据分析方法具体应用和线性、准确性、精密度验证的结果和要求确定 一般用与检测结果相同的单位表述（百分比、百万分之几）。含量测定：80%120%含量均匀度：70%130%杂质：报告值（定量限）限度120%溶出度：范围20%（下限-20%上限+20%）10012080线性回收精密度范围602022年10月15日23时06分方法验证项目的要求耐用性 耐用性实验条件略有变动，是否影响检测结

31、果；衡量城规情况下实验结果的重现性；如方法易受影响，应着重注明！关注溶液稳定性影响（不同储存时间的样品和对照品溶液与新制备对照品溶液的比对结果分析）关注提取条件影响！常规考察：流动相比例变化(5%)、pH变化(0.2)、柱温变化(5)、流速变化(20%)、检测波长（2nm）色谱柱：同品牌不同批号每条件测试2次拖尾因子2.0主峰与杂质峰基线分离各条件含量数据 RSD2.0%612022年10月15日23时06分方法确认和转移 方法验证主要在产品开发阶段完成 生产后的验证包括方法确认和方法转移 方法确认本单位生产的产品是否符合变更后的国家标准或药典标准关注新旧方法的区别确认新方法的接受标准对实际样

32、品和稳定性样品进行考察 方法转移研发单位转移方法至接受单位（生产单位）622022年10月15日23时06分恰当的方案恰当的方案适用的方法适用的方法精密的验证精密的验证优质的产品优质的产品632022年10月15日23时06分杂质谱分析 根据主成分及杂质的理化性质、化学结构、杂质的控制要求，采用适当手段将杂质的信号放大，易于辨认和定量。化合物结构特征、理化性质、剂型特征、工艺过程、标准要素 综合设计、严谨研究、规范验证。专属、灵敏、准确、简捷。分析方法各有局限，注意不同原理分析方法间的相互补充和验证。杂质谱研究遵循原则：642022年10月15日23时06分杂质谱分析方法建立 方法的选择 不同

33、原理方法比较 方法的最优化 色谱系统选择 杂交色谱（柱串联）二维色谱 新技术应用（HILIC）检测器的选择 UV、DAD/ELSD、CAD、NQAD IR/MS652022年10月15日23时06分杂质谱分析杂质比较与谱峰归属 比较方法 图谱叠加 平行列表 逐峰比较 结果报告 新杂质（个数、单个最大、总量）单一新杂质量（0.1%？、0.2%？）新杂质总量所占比例峰序号峰序号溶剂峰溶剂峰对照药对照药自制品自制品峰性质峰性质新增杂质总量新增杂质总量10.20.20.2溶剂峰24.2/0.2%新增杂质新增杂质38.2/0.5%8.2/0.3%原有杂质411.8/0.5%苯乙胺518.2/0.5%新增

34、杂质（苯乙醇）杂质总量1.2%1.0%0.7%662022年10月15日23时06分杂质谱分析阿奇霉素中可能的杂质：37种原料：红霉素 A、红霉素 B、红霉素 C、红霉素D、红霉素 E、红霉素 F、阿奇霉素B、阿奇霉素C、阿奇霉素E、阿奇霉素F中间体：红霉素A肟（Z）、6，9-亚胺醚、氮红霉素A、红霉素A肟（E）、红霉素 C肟（E）、9，11-亚胺醚、红霉素C 6，9-亚胺醚、红霉素A内酰胺 副产物：红霉素-N-氧化物、N-去甲基红霉素A、N-去甲基阿奇霉素A、氨基阿奇霉素A、N-甲酰基-N去甲基阿奇霉素A、N-去甲基-N-苯磺酰基阿奇霉素、阿奇霉素N-氧化物、3-去（二甲氨基）-3,4-去氢

35、阿奇霉素、O-甲苯磺酰基红霉素肟、红霉素Z肟重排物、氮红霉素11，12-硼酸酯、N，N-去二甲基N-甲酰基阿奇霉素A、丙基阿奇霉素、3-N，N-去二甲基氨基-酮基阿奇霉素A、阿奇霉素11，12-硼酸酯降解产物：去克拉克定糖阿奇霉素A、去克拉克定糖氮红霉素、红霉素8，9-脱水-6，9-半缩酮、红霉素6，9：9，12-螺缩酮系统图实际图672022年10月15日23时06分杂质研究关键点方法合理性色谱方法色谱方法（HPLC、TLC、GC）HPLC：杂质是否有UV吸收(检测器的选择)、溶液是否稳定、方法本身是否引起药物降解TLC：固定相的选择显色方式（UV吸收的差异、显色剂灵敏度的差异）溶液是否稳定

36、薄层固定相是否会引起药物的降解检测手段检测手段检测器DAD/UVELSD/CAD/NQADIR/MS 首选DAD 检测器，考虑”通用”检测器检出杂质的数与量干扰因素操作的便捷性 除非GC，不建议衍生化682022年10月15日23时06分杂质研究关键点建立的方法能否有效检出所有杂质？HPLC洗脱方法的选择-等度洗脱等度洗脱 or 梯度梯度洗脱洗脱 等度洗脱极性大的化合物可能被掩盖；极性小的化合物难以被洗脱，甚至保留在柱上 梯度洗脱杂质研究中值得借鉴的手段；有效检出极性相差悬殊的系列杂质验证等度洗脱法对各类杂质的检出能力原方法原方法新方法新方法692022年10月15日23时06分杂质研究关键点

37、测定值是否真实反映杂质的含量？申报资料中“HPLC检测波长的选择”问题 (a)直接将主药的最大吸收波长选作检测波长;(b)简单地套用含量测定的色谱条件。实际仍是以主药的最大吸收波长作为有关物质检测波长;(c)以样品进行破坏性试验（酸、碱、热、光照、氧化等）后的溶液做紫外扫描。由于未破坏主药所占比例较大，故破坏性试验后溶液的最大吸收波长一般仍为主药的最大吸收波长。若盲目地将主药的最大吸收波长确定为检测波长，则杂质在此波长下的吸收可能偏低；某些杂质甚至无吸收，这样会造成对杂质含量的低估甚至漏检，从而不能反映产品的真实质量。无紫外吸收或检测波长处吸收相差较大的多种化合物，有时在单一检测波长处不能检出

38、702022年10月15日23时06分杂质研究关键点测定值是否真实反映杂质的含量？HPLC波长选择解决方案对产品中可能存在的杂质（合成原料、中间体、副产物以及降解产物）的紫外吸收特性进行研究。已知杂质的紫外吸收特性可采用对其流动相溶液直接进行扫描的方法考察;未知杂质（如未知降解产物等）可通过二极管阵列检测器考察其紫外吸收情况。根据各主要杂质及主成分的紫外吸收特性，选取响应值基本一致的波长作为有关物质的检测波长。若对不同杂质难于找到均适宜的检测波长：选择在不同波长下分别测定，采用加校正因子的主成分自身对照法。改用通用检测器（ELSD、CAD、NQAD）杂质研究首选HPLC-DAD；建议HPLC-

39、DAD-CAD联用！712022年10月15日23时06分杂质研究关键点多种方法联用 由杂质多样性复杂性和方法局限性所决定。单一方法不能满足多个杂质的检测时，可采用两种或两种以上的方法互为补充。化学法、色谱法、光谱法、生物检定法 同一方法采用不同的测试条件，如正相HPLC、反相HPLC、不同流动相的反相HPLC等 分离技术与检测手段联用，较为有效，如HPLC、GC、LC-MS、GC-MS、HPLC-DAD、CE等 多维色谱（HPLC-IC）多检测器联用（LC-DAD-CAD-MS）722022年10月15日23时06分杂质研究关键点检测方法的规范性验证 专属性：原料药合成中间体、粗品等的分离度

40、考察 原料药及制剂的强制破坏实验 制剂辅料干扰实验 杂质加入实验 与药典或经过论证的其他方法比较 峰纯度检测（DAD/MS）732022年10月15日23时06分杂质研究关键点检测方法的规范性验证 灵敏度：通常用检测限及定量限表征 直观评价、信噪比、响应值的标准差和斜率获得。关注杂质紫外吸收特性，确定适宜波长；判断是否需要采用杂质对照品 精密度：重复性(在相同条件下由同一分析人员测定所得结果的精密度)中间精密度(在同一实验室，不同时间由不同分析人员用不同设备测定结果的精密度)重现性(在不同实验室由不同分析人员测定结果的精密度)742022年10月15日23时06分杂质研究关键点检测方法的规范性

41、验证 准确度：已知杂质：回收率（根据精密度、专属性、线性）推断 未知杂质：与另一成熟方法比对、根据质量平衡原理结合含量等结果进行粗略判定，必要时研究几种不同色谱条件甚至不同测定原理的方法进行比较选用 线性：在设计范围内，响应值与待测物质量之间成正比例关系的程度。范围：检测方法能达到一定精密度、准确度和线性的高、低浓度或量的区间 范围应在规定限度的20%间或定量限至限度的+20%间，若含量测定和杂质检查同用一套色谱系统，则线性范围应为杂质限度的-20%至含量限度（上限）的+20%间 耐用性：指测定条件有小的变动时，测定结果不受影响的承受程度752022年10月15日23时06分杂质研究关键点定量

42、方法的选择杂质杂质对照品法对照品法加校正因子的加校正因子的主成分自身对照法主成分自身对照法不加校正因子的不加校正因子的主成分自身对照法主成分自身对照法峰面积峰面积归一化法归一化法优点定量准确定量准确，无需长期提供对照品可用于未知杂质简便特点需用杂质对照品杂质与主成分的响应值超出0.91.1范围，宜采用杂质对照品法计算含量假定杂质与主成分的响应因子基本相同，响应因子在0.91.1之间可用；有一定误差；响应因子不同、线性范围不同、仪器积分精度及准确度不同等影响，有局限性对象已知杂质已知杂质已/未知杂质已/未知杂质762022年10月15日23时06分杂质研究关键点限度的确定 杂质限度:药品质量控制

43、的重要指标之一，临床用药的安全性的重要保障；反映药品生产工艺水平、产品的稳定性、有效期的重要指标。基本原则：在可行的范围内尽可能低。限度确定的核心：杂质是否安全！指导原则（决策树）杂质安全性研究相关文献资料杂质安全性研究资料被仿品质量标准中杂质“数”和“量”的情况上市品杂质不得超过安全性研究样品中杂质水平772022年10月15日23时06分残留溶剂分析残留溶剂分析 原料药、辅料或制剂生产过程中使用或产生的在工艺过程中未能完全去除的有机溶剂 根据毒性分为四类 一类溶剂致癌物、意思致癌物或环境危害物 必检 二类溶剂非遗传致癌毒性或其他不可逆毒性或严重的可逆毒性 必检 三类溶剂低毒 研究终产品精制

44、步骤的残留 四类溶剂无足够资料782022年10月15日23时06分残留溶剂的特点残留溶剂的特点 有机挥发性化合物 药品生产过程中使用过 生产中应除去而未除尽 种类相对固定 不同样品、不同产地、不同工艺具有不确定性 残留量相对较低 同一样品中不同溶剂残留量相差较大792022年10月15日23时06分残留溶剂的研究过程残留溶剂的研究过程 确定研究溶剂种类 确定溶剂类别 确定限度 选择测定方法 干燥失重/GC/HPLC(吡啶)/IC(N-甲基吡咯烷酮)/GC-MS 选择色谱柱和检测器 方法建立及条件优化 方法学验证 建立质量标准802022年10月15日23时06分残留溶剂分析方法残留溶剂分析方

45、法 首选方法GC 顶空进样 VS 直接进样 毛细管柱 VS 填充柱 FID检测器 极性柱 VS 非极性柱（DB624）等温 VS 梯度升温812022年10月15日23时06分残留溶剂分析方法残留溶剂分析方法直接进样直接进样 高沸点溶剂 水或其他挥发溶剂顶空进样顶空进样 低沸点溶剂，样品干扰测定 水、不挥发性酸碱 DMF、DMSO82残留溶剂方法验证残留溶剂方法验证 专属性 系统适用性 线性 （定量限限度+20%）精密度 LOD&LOQ 准确性（回收率）耐用性83残留溶剂方法验证 强烈建议：做一次GC-MS；不要尽信溶剂供应商的纯度信息！不要尽信工艺信息 不放过任何一个信号峰 辅料的溶剂残留必须考虑 方法不能照搬药典！内标干扰 溶剂差异8485