艾滋病常用实验室检测及临床意义分析(版)课件.ppt

1、艾滋病常用实验室检测及临床意义分析主要内容主要内容nHIVHIV抗体检测抗体检测nCD4CD4检测检测n病毒载量检测病毒载量检测n实验室安全防护实验室安全防护HIVHIV抗体抗体-感感染染成成功功抗抗体体转转阳阳诊诊断断艾艾滋滋病病死死亡亡-4-8周周-出出现现症症状状 2-10 年年 1年年 0.5-2年年 HIV抗体抗体+无症状无症状有症状有症状HIV抗体抗体+艾滋病艾滋病感染艾滋病毒后的自然发展过程感染艾滋病毒后的自然发展过程急性感急性感染期染期潜伏期潜伏期发病期发病期艾滋病感染者艾滋病感染者艾滋病患者艾滋病患者窗口期窗口期1234急性感染期急性感染期KINETICS OF VIRAL

2、MARKERS DURING PRIMARY HIV-1 INFECTIONHIV RNAHIV p24 antigenHIV antibodiesHIV感染后血液中核酸、抗原和抗体动态变化感染后血液中核酸、抗原和抗体动态变化窗口期暴露天数检测域艾滋病实验室分类艾滋病实验室分类n筛查实验室（筛查实验室（CD4CD4检测实验室）检测实验室）n确证实验室（确证实验室（CD4CD4、病毒载量实验室、病毒载量实验室)中国中国HIVHIV实验室网络实验室网络 国家艾滋病参比实验室国家艾滋病参比实验室 中国中国CDCCDC性艾中心性艾中心 艾滋病确认中心实验室艾滋病确认中心实验室 省、市省、市 艾滋病确认

3、实验室艾滋病确认实验室 省、市省、市 艾滋病筛查中心实验室艾滋病筛查中心实验室 省、市、州、县省、市、州、县 艾滋病筛查实验室艾滋病筛查实验室 省、市、州、县省、市、州、县 艾滋病检测点艾滋病检测点 乡、镇乡、镇HIVHIV实验室条件实验室条件n人员人员:经过专门技术培训经过专门技术培训,取得培训合格证取得培训合格证/上岗证上岗证;n环境环境:功能分区功能分区,符合生物安全二级要求符合生物安全二级要求;n仪器设备仪器设备:按要求配备，满足检测要求。按要求配备，满足检测要求。实验室必须经过资质认证实验室必须经过资质认证/验收！验收！HIVHIV病原体诊断病原体诊断 HIV HIV抗体检测抗体检测

4、 艾滋病病毒抗原检测（艾滋病病毒抗原检测（P24P24）HIV HIV核酸检测核酸检测 病毒分离病毒分离检测样品检测样品n血清、血浆血清、血浆n尿液尿液n抗凝全血（抗凝全血（CBCCBC、CD4CD4、VL)VL)nPBMCPBMC（外周血淋巴细胞）（外周血淋巴细胞）样品的采集和处理样品的采集和处理 一、样品的采集一、样品的采集 最常用的样品是血液，包括血清、血浆和全血最常用的样品是血液，包括血清、血浆和全血(抗凝抗凝血血)。唾液或尿液有时也可作为测试样品。常用样品的采唾液或尿液有时也可作为测试样品。常用样品的采集方法如下：集方法如下：（一）采集样品应按临床采血技术规范及检测试剂盒要（一）采集

5、样品应按临床采血技术规范及检测试剂盒要求进行。求进行。（二）采集标本时应注意安全，操作应戴双层手套。建（二）采集标本时应注意安全，操作应戴双层手套。建议采用真空采血管及蝶形针具，以免直接接触血液。议采用真空采血管及蝶形针具，以免直接接触血液。（三）血清样品采集：用注射器抽静脉血（三）血清样品采集：用注射器抽静脉血3 35ml5ml，室温放置，室温放置1-21-2小时，待血液凝固或用小时，待血液凝固或用3000rpm3000rpm离心离心1515分钟，吸出血清备分钟，吸出血清备用。用。（四）抗凝血样品采集（四）抗凝血样品采集(免疫功能免疫功能CD4/CD8CD4/CD8测定、血液常规测定、血液常

6、规CBCCBC测定、病毒载量）：用加有抗凝剂（测定、病毒载量）：用加有抗凝剂（K K3 3EDTAEDTA）的真空采血）的真空采血管或试管抽取静脉血，反复轻摇，常温管或试管抽取静脉血，反复轻摇，常温6 6小时以内送达实验小时以内送达实验室检测室检测CD4/CD8CD4/CD8或或CBCCBC后，再分离血浆和血细胞备用。后，再分离血浆和血细胞备用。（五）血清或血浆样品应存放于（五）血清或血浆样品应存放于-20-20，短期内短期内（1 1周）进行检测的样品可存放于周）进行检测的样品可存放于2-82-8。（六）用于抗原和核酸检测的血浆和血细胞样品应（六）用于抗原和核酸检测的血浆和血细胞样品应冻存于冻

7、存于-20-20以下，进行病毒以下，进行病毒 RNA RNA检测的样品如长期检测的样品如长期（3 3个月以上）保存应置于个月以上）保存应置于-80-80。二、样品的运送二、样品的运送（一）抗体检测实验室间传递的样品应为血清或血浆，血（一）抗体检测实验室间传递的样品应为血清或血浆，血液常规、液常规、CD4CD4和病毒载量等要求送抗凝血。样品应置于带和病毒载量等要求送抗凝血。样品应置于带盖的试管内，试管上应有明显的标记，标明样品的编号盖的试管内，试管上应有明显的标记，标明样品的编号或受检者姓名、种类和采集时间。或受检者姓名、种类和采集时间。通常在病毒载量达到一定水平后（如35000-50000拷贝

8、/毫升）才具有良好的效果。艾滋病抗体检测试剂使用条件筛查实验呈阳性反应，可出具“HIV抗体待复查”报告，不能出阳性报告。实验室：福尔马林和水加热沸腾，其体积根据实验室的大小而定。样品检测要求、报告及结果录入HIV感染后血液中核酸、抗原和抗体动态变化通常在感染后无症状期内发生的临床症状很难与AIDS发病时的症状区别，病毒载量测定可以帮助医生判断一个刚发生的症状是否与HIV感染有关。4、认真做好实验记录。CD4+T cell count1、不同检测方法的结果不能直接比较，必须转化为国际单位艾滋病确认实验室 省、市免疫印迹法（WB）为目前最常用的HIV抗体确认方法，被公认为判断HIV感染的黄金方法。

9、自治区CDC确证中心实验室某些非典型的抗体反应，特别是不确定反应时，RNA的测定可提供非常有用的证据。5、桂林市CDC 15、贺州市人民医院HIV抗体筛查结果阴性反应可做HIV抗体阴性报告，筛查试验呈阳性反应，可出具“HIV抗体待复查”报告，不能出HIV抗体阳性报告。3、溢出物：10%次氯酸钠。感染艾滋病毒后的自然发展过程51copies/ml最常用的样品是血液，包括血清、血浆和全血(抗凝血)。（二）将试管放入专用带盖的容器内，容器的材料要易于（二）将试管放入专用带盖的容器内，容器的材料要易于消毒处理。在试管的周围应垫有缓冲吸水材料，以免碰碎。消毒处理。在试管的周围应垫有缓冲吸水材料，以免碰碎

10、。如果路程较远或气候炎热，应在如果路程较远或气候炎热，应在2-82-8条件下运送。抗凝条件下运送。抗凝血和抗体检测样品路程短可常温送检。包装内需附有送检血和抗体检测样品路程短可常温送检。包装内需附有送检单。单。（三）特殊情况下如需对个别样品进行复测，可以用特快（三）特殊情况下如需对个别样品进行复测，可以用特快专递形式投寄，但必须将盛样品的试管包扎好，保证不会专递形式投寄，但必须将盛样品的试管包扎好，保证不会破碎和溢漏。破碎和溢漏。三、样品的接收三、样品的接收 （一）含有感染性样品的包裹必须在具有处理感染源设备（一）含有感染性样品的包裹必须在具有处理感染源设备的实验室内由经过培训的工作人员打开，

11、用后的包裹应进的实验室内由经过培训的工作人员打开，用后的包裹应进行消毒。行消毒。（二）核对标本与送检单，检查样品管有无破损和溢漏。（二）核对标本与送检单，检查样品管有无破损和溢漏。（三）检查样品的状况，记录有无严重溶血、微生物污染、（三）检查样品的状况，记录有无严重溶血、微生物污染、血脂过多以及黄疸等情况。血脂过多以及黄疸等情况。（四）因特殊临床治疗导致自发荧光的样品不可用于荧光（四）因特殊临床治疗导致自发荧光的样品不可用于荧光方法测试。方法测试。HIVHIV抗体检测的目的抗体检测的目的n诊断诊断n 确定个体确定个体HIV感染状况，包括临床检测、自愿咨询检测、根据特殊需要感染状况，包括临床检测

12、、自愿咨询检测、根据特殊需要进行的体检等。进行的体检等。n血液筛查血液筛查n防止输血传播防止输血传播HIV，包括献血员筛查和原料血浆筛查。，包括献血员筛查和原料血浆筛查。n监测监测 n了解不同人群了解不同人群HIV感染率及其变化趋势，包括各类高危人群、重点人群感染率及其变化趋势，包括各类高危人群、重点人群和一般人群。和一般人群。HIVHIV抗体检测的方法抗体检测的方法n筛查试验（包括初筛和复检）：酶联免疫吸附试验筛查试验（包括初筛和复检）：酶联免疫吸附试验（ELISA)ELISA)、化学发光试验、明胶颗粒凝聚试验（、化学发光试验、明胶颗粒凝聚试验（PAPA）、免）、免疫渗滤试验、免疫层析试验等

13、疫渗滤试验、免疫层析试验等n确证试验：免疫印迹试验（确证试验：免疫印迹试验（WB)WB)、条带免疫试验、放射免、条带免疫试验、放射免疫沉淀试验、免疫荧光试验等。疫沉淀试验、免疫荧光试验等。艾滋病抗体确证试验艾滋病抗体确证试验 免疫印迹法（免疫印迹法（WBWB）为目前最常用的）为目前最常用的HIVHIV抗体确认方法，抗体确认方法，被公认为判断被公认为判断HIVHIV感染的黄金方法。感染的黄金方法。艾滋病抗体检测试剂使用条件艾滋病抗体检测试剂使用条件 HIVHIV筛查或确认试剂必须是筛查或确认试剂必须是HIV/1+2HIV/1+2混合型，国家卫生混合型，国家卫生部批准或注册，经过国家医药监督管理局

14、批批检合格，临部批准或注册，经过国家医药监督管理局批批检合格，临床试剂评估优良，并且在有效期内。床试剂评估优良，并且在有效期内。检测要点检测要点1 1、严格按照试剂说明书操作，不得擅自更改。、严格按照试剂说明书操作，不得擅自更改。2 2、注意防止交叉污染。、注意防止交叉污染。3 3、严格遵守实验室操作规程。、严格遵守实验室操作规程。4 4、认真做好实验记录。、认真做好实验记录。HIVHIV抗体检测结果及结论抗体检测结果及结论 HIVHIV抗体筛查结果阴性反应可做抗体筛查结果阴性反应可做HIVHIV抗体阴性报告，抗体阴性报告，筛查试验呈阳性反应，可出具筛查试验呈阳性反应，可出具“HIV“HIV抗

15、体待复查抗体待复查”报告，报告，不能出不能出HIVHIV抗体阳性报告抗体阳性报告。筛查阳性反应或可疑阳性反应。筛查阳性反应或可疑阳性反应不能作最终报告通知被检测者，对个体诊断来说不能作最终报告通知被检测者，对个体诊断来说,只有经只有经过确证试验，结果阳性才可做过确证试验，结果阳性才可做HIVHIV抗体阳性报告。抗体阳性报告。检测程序及流程图检测程序及流程图1 1、筛查检测、筛查检测 验收标本，用筛查试剂进行检测，如呈阴性反应，报告验收标本，用筛查试剂进行检测，如呈阴性反应，报告HIVHIV抗体阴性；对呈阳性反应的标本，须进行重复检测。抗体阴性；对呈阳性反应的标本，须进行重复检测。2 2、重复检

16、测、重复检测 对筛查呈阳性反应的标本用原有试剂和另外一种不同原理对筛查呈阳性反应的标本用原有试剂和另外一种不同原理或不同厂家的试剂重复检测。或不同厂家的试剂重复检测。HIVHIV抗体筛查检测流程抗体筛查检测流程 某些非典型的抗体反应，特别是不确定反应时，RNA的测定可提供非常有用的证据。0106拷贝/毫升）是艾滋病疾病分期、确定诊断、制定抗病毒治疗和预防机会性感染方案的标准实验室指标，也是与病毒载量相配合预测疾病进程的可靠指标。艾滋病抗体检测试剂使用条件（2）尽可能重新采集受检者的血样。2、新调入人员、外来合作、进修和学习的人员在进入实验室之前必须经过实验室主任的批准。只有通过治疗后病毒水平的

17、检测才能确定治疗是否有效，通常治疗后病毒水平降低50%才被认为临床有效。而巨细胞病毒感染和鸟分支杆菌感染常发生于CD4+T淋巴细胞50/mm3的病人，极少见于CD4+T淋巴细胞100/mm3的病人。对筛查呈阳性反应的标本用原有试剂和另外一种不同原理或不同厂家的试剂重复检测。婴儿满12个月进行第一次HIV抗体检测。生物安全柜：25ml福尔马林（40%w/v甲醛）和等量水混合后放在一个蒸发皿中使其在密封的生物安全柜中蒸发，保持至少6小时，最好过夜。（一）抗体检测实验室间传递的样品应为血清或血浆，血液常规、CD4和病毒载量等要求送抗凝血。护送样品的人应明确接收地点和接收人，实验室负责人或其指定的人员

18、应及时确认样本已送达指定的实验室，被转入安全位置并得到妥善处理。如随访期间带型有进展，但不满足阳性标准，应继续随访到8周。CD4+T cell count全国艾滋病检测技术规范（二）建立安全标准操作程序，该程序应适用于现有的实验条件，并与实验室其他规章制度一致。如随访期间出现阳性反应，则报告阳性；做好检测后咨询。免疫印迹法（WB，HIV-1/2混合型）HIVHIV抗体确证抗体确证 1 1、常用的确证实验方法是免疫印迹法（、常用的确证实验方法是免疫印迹法（WBWB）。）。2 2、免疫印迹试剂有、免疫印迹试剂有HIV-1/2HIV-1/2混合型和单一型。一般先用混合型和单一型。一般先用HIV-1/

19、2HIV-1/2混合型试剂进行检测，如果呈阴性反应，则报告混合型试剂进行检测，如果呈阴性反应，则报告HIVHIV抗体阴性，如果呈阳性反应，则报告抗体阴性，如果呈阳性反应，则报告HIV-1HIV-1抗体阳性，抗体阳性，如果不满足阳性标准，则判为如果不满足阳性标准，则判为HIVHIV抗体不确定。如果出现抗体不确定。如果出现HIV-2HIV-2型的特异性指示条带，还需要用型的特异性指示条带，还需要用HIV-2HIV-2型免疫印迹型免疫印迹试剂再做单一的试剂再做单一的HIV-2HIV-2型抗体确认试验，呈阴性反应，报型抗体确认试验，呈阴性反应，报告告HIV-2HIV-2抗体阴性；呈阳性反应的则报告抗体

20、阴性；呈阳性反应的则报告HIV-2HIV-2抗体血清抗体血清学阳性。学阳性。HIVHIV抗体确证检测流程抗体确证检测流程检测结果的报告和处理检测结果的报告和处理 HIV HIV抗体筛查：抗体筛查：筛查实验呈阴性反应出具筛查实验呈阴性反应出具HIVHIV抗体阴性报告，如果近抗体阴性报告，如果近期有高危行为，如性乱、注射毒品等，或有急性流感样期有高危行为，如性乱、注射毒品等，或有急性流感样症状等情况，为排除症状等情况，为排除“窗口期窗口期”的可能，建议的可能，建议2323个月个月以后再做抗体检测。以后再做抗体检测。筛查实验呈阳性反应，可出具筛查实验呈阳性反应，可出具“HIV“HIV抗体待复查抗体待

21、复查”报告，报告，不能出阳性报告。不能出阳性报告。HIVHIV抗体筛查呈阳性的处理抗体筛查呈阳性的处理 （1 1）填写）填写HIVHIV抗体筛查阳性送检单抗体筛查阳性送检单 （2 2）尽可能重新采集受检者的血样。）尽可能重新采集受检者的血样。（3 3）将二份血样（或仅原血样）连同）将二份血样（或仅原血样）连同HIVHIV抗体筛查阳性送抗体筛查阳性送检单一并送当地艾滋病筛查中心实验室，再转送艾滋病确检单一并送当地艾滋病筛查中心实验室，再转送艾滋病确认实验室，或直接送确认实验室确认。认实验室，或直接送确认实验室确认。（4 4）筛查中心实验室应尽快进行复测。）筛查中心实验室应尽快进行复测。（5 5）

22、做好检测后咨询。）做好检测后咨询。HIVHIV抗体确证结果报告抗体确证结果报告 1 1、HIV HIV抗体阳性应出具抗体阳性应出具HIVHIV抗体阳性确认报告，并按相关抗体阳性确认报告，并按相关规定做好咨询、保密和报告工作规定做好咨询、保密和报告工作;2 2、HIVHIV抗体阴性应出具抗体阴性应出具HIVHIV抗体阴性确认报告，如果近期抗体阴性确认报告，如果近期有高危行为，如性乱、注射毒品等，或有急性流感样症状有高危行为，如性乱、注射毒品等，或有急性流感样症状等情况，为排除等情况，为排除“窗口期窗口期”的可能，建议的可能，建议1 1个月以后再做个月以后再做抗体检测抗体检测;抗体确证不确定结果抗

23、体确证不确定结果 HIV HIV抗体不确定出具抗体不确定出具HIVHIV抗体不确定确认报告，在抗体不确定确认报告，在备注中应注明备注中应注明“1“1个月后复查个月后复查”。1 1、随访：每、随访：每1 1个月一次，连续个月一次，连续2 2次，共次，共2 2个月。个月。2 2、做好检测后咨询。、做好检测后咨询。全国艾滋病检测技术规范全国艾滋病检测技术规范2009版全国艾滋病检测技术规范2009版生物安全柜：25ml福尔马林（40%w/v甲醛）和等量水混合后放在一个蒸发皿中使其在密封的生物安全柜中蒸发，保持至少6小时，最好过夜。污染物种类（培养液、血液或其他体液）以及其中含有HIV的情况。筛查实验

24、呈阴性反应出具HIV抗体阴性报告，如果近期有高危行为，如性乱、注射毒品等，或有急性流感样症状等情况，为排除“窗口期”的可能，建议23个月以后再做抗体检测。HIV感染产妇所生婴幼儿；全区目前共有25个CD4检测实验室，分布14个市级CDC，3家医院和9个县级CDC，去年自治区卫生厅新招标采购多台流式细胞仪，将陆续配备到疫情较为严重的县级CDC和抗病毒治疗点。（四）因特殊临床治疗导致自发荧光的样品不可用于荧光方法测试。0106拷贝/毫升）PBMC（外周血淋巴细胞）4、指导治疗方案及疗效测定受伤部位、伤口深浅、暴露程度；是艾滋病疾病分期、确定诊断、制定抗病毒治疗和预防机会性感染方案的标准实验室指标，

25、也是与病毒载量相配合预测疾病进程的可靠指标。新鲜、不溶血、无脂肪血3、帮助确定抗HIV药物治疗及机会性感染预防性治疗的适应症，例如，当CD4+T淋巴细胞200/mm3时，应给予抗卡氏肺囊虫肺炎的预防性治疗；皮肤的伤口和擦伤都应以防水敷料覆盖。检测程序及结果报告对筛查呈阳性反应的标本用原有试剂和另外一种不同原理或不同厂家的试剂重复检测。3、病毒载量结果低于1000copies/ml不进行耐药检测，只有大于1000copies/ml的病人才做耐药检测。HIV感染产妇所生儿童HIV抗体检测策略及流程两种筛查试剂的检测结果均为阴性反应，报告“HIV抗体阴性（）”，可排除感染。3、崇左市CDC 13、防

26、城港市CDC实验室记录要求实验室记录要求1 1、标本的登记、标本的登记 收到标本后，及时登记有关参数，包括受检者姓名或收到标本后，及时登记有关参数，包括受检者姓名或代号、试管编号、性别、年龄、职业、送检单位、人群类代号、试管编号、性别、年龄、职业、送检单位、人群类别、检验结果、送检日期、报告日期、备注别、检验结果、送检日期、报告日期、备注(必要时记录必要时记录通信地址通信地址)等。等。2 2、实验原始记录表、实验原始记录表 应按实验要求，设计操作的原始记录表，标明空白对应按实验要求，设计操作的原始记录表，标明空白对照、阳性对照、阴性对照、外部对照以及待检样品的位置，照、阳性对照、阴性对照、外部

27、对照以及待检样品的位置，便于指导实验人员加样。要注明试剂盒来源、测定方法、便于指导实验人员加样。要注明试剂盒来源、测定方法、批号、有效期、操作人员和复核人员姓名及检测日期。批号、有效期、操作人员和复核人员姓名及检测日期。3 3、HIV HIV 阳性标本的保存记录阳性标本的保存记录 记录记录HIVHIV阳性标本的储存量、储存温度、储存起始时阳性标本的储存量、储存温度、储存起始时间以及标本保管人姓名。间以及标本保管人姓名。4 4、文件存档、文件存档 实验原始记录表、打印数据、检测记录表、标本登实验原始记录表、打印数据、检测记录表、标本登记、标本保存记录以及仪器设备维修和校准记录等都记、标本保存记录

28、以及仪器设备维修和校准记录等都应该妥善存档保存应该妥善存档保存1515年以上。最好同时使用计算机保年以上。最好同时使用计算机保存各种文件和记录。存各种文件和记录。HIVHIV感染产妇所生儿童感染产妇所生儿童HIVHIV抗体抗体检测策略及流程检测策略及流程 适用范围适用范围 HIV感染产妇所生婴幼儿；已满18个月的婴幼儿，其母亲HIV感染状态不详，儿童出现HIV相关临床表现，临床怀疑HIV感染的儿童。HIVHIV感染产妇所生儿童感染产妇所生儿童HIVHIV抗体抗体检测策略及流程检测策略及流程 检测程序及结果报告检测程序及结果报告 婴儿满婴儿满1212个月进行第一次个月进行第一次HIVHIV抗体检

29、测。使用两种不同原理或不抗体检测。使用两种不同原理或不同厂家筛查试剂进行抗体检测，两种筛查试剂检测结果均为阴性反应，同厂家筛查试剂进行抗体检测，两种筛查试剂检测结果均为阴性反应，报告报告“HIV“HIV抗体阴性（）抗体阴性（）”，可排除感染。检测结果出现阳性反应，可排除感染。检测结果出现阳性反应（一种为阴性反应一种为阳性反应或两种均呈阳性反应），不能排除（一种为阴性反应一种为阳性反应或两种均呈阳性反应），不能排除感染，应继续追踪随访，至儿童满感染，应继续追踪随访，至儿童满1818个月时再次进行个月时再次进行HIVHIV抗体检测。抗体检测。HIVHIV感染产妇所生儿童感染产妇所生儿童HIVHIV

30、抗体抗体检测策略及流程检测策略及流程 检测程序及结果报告检测程序及结果报告 婴儿满婴儿满1818个月时应再次进行个月时应再次进行HIVHIV抗体检测。使用两种抗体检测。使用两种不同原理或不同厂家筛查试剂进行抗体检测。两种筛查试不同原理或不同厂家筛查试剂进行抗体检测。两种筛查试剂的检测结果均为阴性反应，报告剂的检测结果均为阴性反应，报告“HIV“HIV抗体阴性抗体阴性（）（）”，可排除感染。检测出现阳性反应（一种为阴性，可排除感染。检测出现阳性反应（一种为阴性反应一种为阳性反应或两种均呈阳性反应），进一步进行反应一种为阳性反应或两种均呈阳性反应），进一步进行确证试验，根据确证试验的结果判断是否感

31、染确证试验，根据确证试验的结果判断是否感染HIV HIV。HIVHIV感染产妇所生儿童感染产妇所生儿童HIVHIV抗体抗体检测策略及流程检测策略及流程 检测程序及结果报告检测程序及结果报告 在发放检测报告的同时上报疫情；在发放检测报告的同时上报疫情；做好检测后咨询。做好检测后咨询。全国艾滋病检测技术规范全国艾滋病检测技术规范2009版免疫功能（免疫功能（CD4/CD8CD4/CD8）的检测）的检测T T淋巴细胞分类淋巴细胞分类 在在T T淋巴细胞分类中，淋巴细胞分类中，CD4CD4代表代表T T辅助细胞而辅助细胞而CD8CD8代代表表T T抑制细胞和抑制细胞和T T杀伤细胞。杀伤细胞。CD4+

32、TCD4+T淋巴细胞是淋巴细胞是HIVHIV感染感染的主要靶细胞，也是免疫反应的中心细胞；的主要靶细胞，也是免疫反应的中心细胞；CD8+TCD8+T淋巴淋巴细胞是免疫反应的效应细胞。细胞是免疫反应的效应细胞。T T淋巴细胞分类淋巴细胞分类 正常人的正常人的CDCD4 4+T T淋巴细胞约占总的淋巴细胞约占总的T T淋巴细胞的淋巴细胞的65%65%，CDCD8 8+T T淋巴细胞约占淋巴细胞约占35%35%。人体感染了。人体感染了HIVHIV后，涉及的主要后，涉及的主要病理过程就是免疫系统的损害，主要表现为：病理过程就是免疫系统的损害，主要表现为：CDCD4 4+T T淋巴细淋巴细胞的丢失，绝对

33、数量的减少，同时胞的丢失，绝对数量的减少，同时CDCD8 8+T T淋巴细胞数量增加，淋巴细胞数量增加，CDCD4 4和和CDCD8 8的比例失调。因此的比例失调。因此CDCD4 4+T T淋巴细胞计数作为直接测淋巴细胞计数作为直接测定免疫功能的方法，是提供定免疫功能的方法，是提供HIVHIV感染病人免疫系统损害状感染病人免疫系统损害状况最明确的指标。况最明确的指标。3、崇左市CDC 13、防城港市CDCCD4+T淋巴细胞正常值2、进实验室前要摘除首饰，修剪长的带刺的指甲，以免刺破手套。生物安全柜：25ml福尔马林（40%w/v甲醛）和等量水混合后放在一个蒸发皿中使其在密封的生物安全柜中蒸发，

34、保持至少6小时，最好过夜。4、指导治疗方案及疗效测定5、污染的台面和器具：37%甲醛水溶液，也可以用过氧化氢或过氧乙酸。1、HIV抗体阳性应出具HIV抗体阳性确认报告，并按相关规定做好咨询、保密和报告工作;如表中A3，B3，C1-3期。对筛查呈阳性反应的标本用原有试剂和另外一种不同原理或不同厂家的试剂重复检测。（二）建立安全标准操作程序，该程序应适用于现有的实验条件，并与实验室其他规章制度一致。3、样品采集后6小时送达实验室检测效果最好。HIV-1 plasma RNACD4+T cell count高于最高检测限（7.生物安全柜：25ml福尔马林（40%w/v甲醛）和等量水混合后放在一个蒸发

35、皿中使其在密封的生物安全柜中蒸发，保持至少6小时，最好过夜。（一）实验室的设备、建筑和设施的安全性应通过专家的评审。正常人的CD4+T淋巴细胞约占总的T淋巴细胞的65%，CD8+T淋巴细胞约占35%。3、严格执行实验室工作人员年度采血检测HIV抗体和备案制度，工作人员血清应长期保留。0106拷贝/毫升）艾滋病抗体检测试剂使用条件CD4+TCD4+T淋巴细胞正常值淋巴细胞正常值 CD4 CD4：410-1590/mm410-1590/mm3 3 CD8 CD8：190-1140/mm190-1140/mm3 3 CD4/CD8 CD4/CD8：1 1CDCD4 4+T T淋巴细胞计数意义淋巴细胞

36、计数意义 是艾滋病疾病分期、确定诊断、制定抗病毒治疗和预是艾滋病疾病分期、确定诊断、制定抗病毒治疗和预防机会性感染方案的标准实验室指标，也是与病毒载量相防机会性感染方案的标准实验室指标，也是与病毒载量相配合预测疾病进程的可靠指标。配合预测疾病进程的可靠指标。CD4+TCD4+T淋巴细胞检测意义淋巴细胞检测意义1 1、用于、用于HIVHIV感染者的疾病分期：凡感染者的疾病分期：凡CD4+TCD4+T淋巴细胞淋巴细胞200/mm200/mm3 3或或CD4+TCD4+T淋巴细胞的百分比淋巴细胞的百分比14%14%的的HIVHIV感染者可归入艾滋病。感染者可归入艾滋病。CD4+TCD4+T淋巴细胞检

37、测意义淋巴细胞检测意义 2 2、判断、判断HIVHIV感染者的临床合并症（各种机会性感染与感染者的临床合并症（各种机会性感染与CD4+TCD4+T淋巴细胞的相关性），如淋巴细胞的相关性），如CD4+TCD4+T淋巴细胞淋巴细胞200/mm200/mm3 3时，时，很容易发生卡氏肺囊虫肺炎；而巨细胞病毒感染和鸟分支杆很容易发生卡氏肺囊虫肺炎；而巨细胞病毒感染和鸟分支杆菌感染常发生于菌感染常发生于CD4+TCD4+T淋巴细胞淋巴细胞50/mm50/mm3 3的病人，极少见于的病人，极少见于CD4+TCD4+T淋巴细胞淋巴细胞100/mm100/mm3 3的病人。的病人。CD4+TCD4+T淋巴细胞

38、检测意义淋巴细胞检测意义3 3、帮助确定抗帮助确定抗HIVHIV药物治疗及机会性感染预防性治疗的适应药物治疗及机会性感染预防性治疗的适应症，例如，当症，例如，当CD4+TCD4+T淋巴细胞淋巴细胞200/mm200/mm3 3时，应给予抗卡氏时，应给予抗卡氏肺囊虫肺炎的预防性治疗；肺囊虫肺炎的预防性治疗；4 4、抗、抗HIVHIV药物疗效的重要判断指标。药物疗效的重要判断指标。成人及青少年艾滋病分期标准成人及青少年艾滋病分期标准（美国（美国CDC.1993CDC.1993）CD4200/ulCD410001000）提示感染发生的可能性非常大。）提示感染发生的可能性非常大。2 2、窗口期辅助诊断

39、、窗口期辅助诊断n在窗口期抗原峰出现前后通常出现一个病毒载量的高峰，在窗口期抗原峰出现前后通常出现一个病毒载量的高峰，通常此高峰高于发病时的血浆病毒水平，早期病毒通常此高峰高于发病时的血浆病毒水平，早期病毒RNARNA测测定具有特殊的意义。定具有特殊的意义。n目前国际上正在尝试使用这种检测对采供血样品进行多个目前国际上正在尝试使用这种检测对采供血样品进行多个样品混合后的样品混合后的RNARNA检测以降低窗口期传播的残余危险度。检测以降低窗口期传播的残余危险度。3 3、病程监控、病程监控n由于由于HIVHIV感染发生后病毒载量的变化具有一定规律，并且感染发生后病毒载量的变化具有一定规律，并且这种

40、变化与疾病的进程有着密切的相关性。这种变化与疾病的进程有着密切的相关性。n通常在感染后无症状期内发生的临床症状很难与通常在感染后无症状期内发生的临床症状很难与AIDSAIDS发病发病时的症状区别，病毒载量测定可以帮助医生判断一个刚发时的症状区别，病毒载量测定可以帮助医生判断一个刚发生的症状是否与生的症状是否与HIVHIV感染有关。感染有关。4 4、指导治疗方案及疗效测定、指导治疗方案及疗效测定n并非在任何情况下感染者都应并非在任何情况下感染者都应该进行抗病毒治疗，这不但是该进行抗病毒治疗，这不但是经济上的原因，更重要的是在经济上的原因，更重要的是在于抗病毒药物的副作用和疗效。于抗病毒药物的副作

41、用和疗效。通常在病毒载量达到一定水平通常在病毒载量达到一定水平后（如后（如35000-5000035000-50000拷贝拷贝/毫升）毫升）才具有良好的效果。才具有良好的效果。n只有通过治疗后病毒水平的检只有通过治疗后病毒水平的检测才能确定治疗是否有效，通测才能确定治疗是否有效，通常治疗后病毒水平降低常治疗后病毒水平降低50%50%才被才被认为临床有效。认为临床有效。5 5、预测疾病进程、预测疾病进程nHIVHIV疾病进程与病毒载量的关系疾病进程与病毒载量的关系十分密切，观察感染者病毒十分密切，观察感染者病毒RNARNA水平可大致预测其发病的可能。水平可大致预测其发病的可能。如右图所示，病毒载

42、量与如右图所示，病毒载量与6 6年发年发病率的关系为：病率的关系为：500 3000030000时则为时则为80%80%。两种方法检测病毒载量两种方法检测病毒载量（一）（一）RT-PCRRT-PCR（二）（二）NASBA EasyQNASBA EasyQ病毒载量检测样品要求病毒载量检测样品要求n血浆血浆n样品量约样品量约1 1毫升毫升n样品要求保存低温保存（样品要求保存低温保存（-20-20以下）以下）n冷冻运输冷冻运输实验室网络实验室网络n自治区自治区CDC确证中心实验室确证中心实验室n柳州市柳州市CDC确证实验室确证实验室n梧州市梧州市CDC确证实验室确证实验室n贺州市贺州市CDC确证实验

43、室确证实验室n龙潭医院确证实验室龙潭医院确证实验室n桂林市桂林市CDC确证实验室确证实验室3.12105低于最低检测限（400拷贝/毫升）高于最高检测限（7.5105拷贝/毫升）检测程序及结果报告检测程序及结果报告0106拷贝/毫升）PBMC（外周血淋巴细胞）对筛查呈阳性反应的标本用原有试剂和另外一种不同原理或不同厂家的试剂重复检测。非实验室人员和物品不得进入实验室。（二）核对标本与送检单，检查样品管有无破损和溢漏。检测结果出现阳性反应（一种为阴性反应一种为阳性反应或两种均呈阳性反应），不能排除感染，应继续追踪随访，至儿童满18个月时再次进行HIV抗体检测。3、HIV 阳性标本的保存记录艾滋病

44、确认实验室 省、市包括白细胞计数、白细胞中的淋巴细胞百分比及淋巴细胞中的CD4+T/CD8+T细胞百分比等三项实验室检测技术，操作及计算较复杂，结果准确性不如单平台法。婴儿满18个月时应再次进行HIV抗体检测。5、污染物泼溅：发生小范围污染物泼溅事故时，应立即进行消毒处理。只有通过治疗后病毒水平的检测才能确定治疗是否有效，通常治疗后病毒水平降低50%才被认为临床有效。1、皮肤针刺伤或切割伤：立即用肥皂和大量流水冲洗，尽可能挤出损伤处的血液，用70%乙醇或其他消毒剂消毒伤口。2、将HIV测试样品转送其他实验室时，应防止对人员和环境的污染。出现HIV-2指示条带检测出现阳性反应（一种为阴性反应一种

45、为阳性反应或两种均呈阳性反应），进一步进行确证试验，根据确证试验的结果判断是否感染HIV。2、将HIV测试样品转送其他实验室时，应防止对人员和环境的污染。2、皮肤污染：用水和肥皂冲洗污染部位，并用适当的消毒剂浸泡，如70%乙醇或其他皮肤消毒剂。RT-PCRRT-PCR病毒载量结果的报告三种情况病毒载量结果的报告三种情况n具体的一个数值（该值在具体的一个数值（该值在400-7.5400-7.510105 5拷贝拷贝/毫升）毫升）n低于最低检测限（低于最低检测限（400400拷贝拷贝/毫升）毫升）n高于最高检测限（高于最高检测限（7.57.510105 5拷贝拷贝/毫升）毫升）1.6105低于最低

46、检测限（50拷贝/毫升）高于最高检测限（3.0106拷贝/毫升）NASBANASBAEASYQEASYQ病毒载量结果报告的三种情况病毒载量结果报告的三种情况n具体的一个数值（该值在具体的一个数值（该值在50 3.050 3.010106 6拷贝拷贝/毫升）毫升）n低于最低检测限（低于最低检测限（5050拷贝拷贝/毫升）毫升）n高于最高检测限（高于最高检测限（3.03.010106 6拷贝拷贝/毫升）毫升）注意事项注意事项1 1、不同检测方法的结果不能直接比较，必须转、不同检测方法的结果不能直接比较，必须转化为国际单位化为国际单位注意事项注意事项2 2、检测结果低于最低检测限不能排除、检测结果低

47、于最低检测限不能排除HIVHIV感染感染3 3、病毒载量结果低于、病毒载量结果低于1000copies/ml1000copies/ml不进行耐药检测，只有大不进行耐药检测，只有大于于1000copies/ml1000copies/ml的病人才做耐药检测。的病人才做耐药检测。艾滋病检测实验室安全防护艾滋病检测实验室安全防护一、建立安全制度一、建立安全制度（一）实验室的设备、建筑和设施的安全性应通过专家（一）实验室的设备、建筑和设施的安全性应通过专家的评审。的评审。（二）建立安全标准操作程序，该程序应适用于现有的（二）建立安全标准操作程序，该程序应适用于现有的实验条件，并与实验室其他规章制度一致。

48、实验条件，并与实验室其他规章制度一致。（三）无论是否发生意外事故，每年都要对安全标准操（三）无论是否发生意外事故，每年都要对安全标准操作程序及其实施情况进行检查。作程序及其实施情况进行检查。（四）制定意外事故处理预案。建立意外事故的登记和（四）制定意外事故处理预案。建立意外事故的登记和报告制度。报告制度。二、人员管理和培训二、人员管理和培训（一）人员管理（一）人员管理 1 1、实验室主任应了解所有工作人员。在安排工作区域时，、实验室主任应了解所有工作人员。在安排工作区域时，要根据人员的工作种类和所涉及的生物材料，对实验室要根据人员的工作种类和所涉及的生物材料，对实验室环境做安全检查。环境做安全

49、检查。2 2、新调入人员、外来合作、进修和学习的人员在进入实、新调入人员、外来合作、进修和学习的人员在进入实验室之前必须经过实验室主任的批准。非实验室人员和验室之前必须经过实验室主任的批准。非实验室人员和物品不得进入实验室。物品不得进入实验室。3 3、严格执行实验室工作人员年度采血检测、严格执行实验室工作人员年度采血检测HIVHIV抗体和备抗体和备案制度，工作人员血清应长期保留。案制度，工作人员血清应长期保留。（二）培训（二）培训 1 1、所有工作人员必须经过、所有工作人员必须经过HIVHIV检测技术和实验室安全培检测技术和实验室安全培训，包括上岗培训和复训，并接受实验室管理人员的监训，包括上

50、岗培训和复训，并接受实验室管理人员的监督。实验室的安全责任人要对工作和环境的安全负责，督。实验室的安全责任人要对工作和环境的安全负责，所有工作人员都有责任保护自己和他人的安全。所有工作人员都有责任保护自己和他人的安全。2 2、必须告知新上岗人员实验室工作的潜在危险，进行安、必须告知新上岗人员实验室工作的潜在危险，进行安全教育，直至有能力后方可单独工作。全教育，直至有能力后方可单独工作。三、安全保障措施三、安全保障措施（一）个人保健（一）个人保健 1 1、高标准的个人保健对于减少感染的危险性很重要。、高标准的个人保健对于减少感染的危险性很重要。皮肤受损、患病都会增加感染的危险。皮肤的伤口和擦皮肤