艾滋病检测技术课件.ppt

1、艾滋病实验室检测技术 2005艾滋病实验室检测主要工作n健全艾滋病检测实验室网络n完善艾滋病检测实验室网络管理体制，把国家CDC全国艾滋病检测技术规范（2004年版）的学习、理解、落实作为我省检测工作的重中之重。全国艾滋病检测技术规范（2004年版）宣 贯 样品的采集和处理样品的采集和处理样品的采集和处理样品的采集和处理n艾滋病检测最常用的样品是血液，艾滋病检测最常用的样品是血液，包括血清、血浆和全血。唾液或尿包括血清、血浆和全血。唾液或尿液有时也可作为测试样品。液有时也可作为测试样品。n血清样品采集血清样品采集和处理和处理n用一次性注射器（或真空采血管）抽取一定用一次性注射器（或真空采血管）

2、抽取一定量静脉血，室温下自然放置量静脉血，室温下自然放置1 1 2h2h，待血液凝待血液凝固、血块收缩后再用固、血块收缩后再用3000r/min3000r/min离心离心15min15min，吸出血清备用。吸出血清备用。滤纸片采样滤纸片采样n手指或耳垂局部严格按常规进行消毒，手指或耳垂局部严格按常规进行消毒，在刺破皮肤后，迅速把滤纸片沾上，在刺破皮肤后，迅速把滤纸片沾上，切勿让血液滴落在其它物体表面造成切勿让血液滴落在其它物体表面造成污染。采血后要待血样干燥后再包装污染。采血后要待血样干燥后再包装送检。送检。抗凝血样品采集抗凝血样品采集和处理和处理n用加有抗凝剂的真空采血管（或一次性注用加有抗

3、凝剂的真空采血管（或一次性注射器抽取静脉血，转移至加有抗凝剂的试射器抽取静脉血，转移至加有抗凝剂的试管），反复轻摇，分离血浆和血细胞备用。管），反复轻摇，分离血浆和血细胞备用。n应根据实验要求选用适当的抗凝剂，如应根据实验要求选用适当的抗凝剂，如CDCD4 4+/CD/CD8 8+T T淋巴细胞测定可选用淋巴细胞测定可选用K K3 3EDTAEDTA或枸或枸橼酸钠橼酸钠或肝素，或肝素，HIVHIV病毒分离、核酸定性病毒分离、核酸定性/定量检测可选用定量检测可选用K K3 3EDTAEDTA或枸橼酸钠。或枸橼酸钠。n用于核酸定性检测时，采集的抗凝全血应用于核酸定性检测时，采集的抗凝全血应在在4

4、4 8h8h内分离内分离PBMCPBMC和血浆，否则应在和血浆，否则应在2424 48h48h内分离血浆和血细胞。内分离血浆和血细胞。n病毒载量测定不同方法对样品的要求。病毒载量测定不同方法对样品的要求。nCDCD4 4+/CD/CD8 8+T T淋巴细胞测定样品采集要。淋巴细胞测定样品采集要。采集样品注意事项采集样品注意事项n1 1 采集样品原则上应按临床采血技术规范采集样品原则上应按临床采血技术规范操作（试剂盒说明书有特殊要求除外）。操作（试剂盒说明书有特殊要求除外）。n2 2 采集样品时应注意安全，建议采用真空采集样品时应注意安全，建议采用真空采血管及蝶形针具，以避免直接接触血液；采血管

5、及蝶形针具，以避免直接接触血液；n直接接触直接接触HIVHIV感染者感染者/艾滋病（艾滋病（AIDSAIDS）病人病人血液血液/体液的操作体液的操作,应戴双层手套。应戴双层手套。样品的保存样品的保存n1 1 用于抗体检测的血清或血浆样品，应存用于抗体检测的血清或血浆样品，应存放于放于-20-20以下，短期（以下，短期（1 1周）内进行检测周）内进行检测的样品的样品)可存放于可存放于2-82-8。n2 2 用于抗原和核酸检测的血浆和血细胞样品应用于抗原和核酸检测的血浆和血细胞样品应冻存于冻存于-20-20以下，进行病毒以下，进行病毒RNARNA检测的样品如需检测的样品如需保存保存3 3个月以上应

6、置于个月以上应置于-80-80。n3 3 用于用于CDCD4 4+/CD/CD8 8+T T淋巴细胞测定的样品不能长期淋巴细胞测定的样品不能长期保存，样品采集时间超过保存，样品采集时间超过48h48h则不可检测。则不可检测。样品的运送样品的运送n1 1 实验室间传递的样品应为血清或血浆，实验室间传递的样品应为血清或血浆，除特殊情况外一般不运送全血除特殊情况外一般不运送全血。n2 2 应采用三级包装系统（应采用三级包装系统（WHOWHO提出）提出）n第一层容器：装样品，要求防渗漏。样品第一层容器：装样品，要求防渗漏。样品应置于带盖的试管内，试管上应有明显的应置于带盖的试管内，试管上应有明显的标记

7、，标明样品的编号或受检者姓名、种标记，标明样品的编号或受检者姓名、种类和采集时间。在试管的周围应垫有缓冲类和采集时间。在试管的周围应垫有缓冲吸水材料，以免碰碎。随样品应附有送检吸水材料，以免碰碎。随样品应附有送检单，送检单应与样品分开放置。单，送检单应与样品分开放置。n第二层容器：要求耐受性好、防渗漏、容纳第二层容器：要求耐受性好、防渗漏、容纳并保护第一层容器，可以装若干个第一层容并保护第一层容器，可以装若干个第一层容器。将试管装入专用带盖的容器内，容器的器。将试管装入专用带盖的容器内，容器的材料要易于消毒处理。材料要易于消毒处理。n第三层容器：放在一个运输用外层包装内，第三层容器：放在一个运

8、输用外层包装内，应易于消毒。在第三层容器外面要贴标签应易于消毒。在第三层容器外面要贴标签（标本的数量，收、发件人）。（标本的数量，收、发件人）。n3 3 血清和血浆样品应在血清和血浆样品应在2 2 88条件下由专人条件下由专人运送。运送。用于用于CDCD4 4+/CD/CD8 8+T T淋巴细胞测定的样品应淋巴细胞测定的样品应在室温下在室温下1818 2323运送。运送。每一包装的体积以每一包装的体积以不超过不超过50ml50ml为宜。为宜。n4 4 运送感染性材料必须有记录。运送感染性材料必须有记录。n5 5 如分离血浆仍有困难，可直接将抗凝血如分离血浆仍有困难，可直接将抗凝血-20-20以

9、下冻存，采用冰壶冷藏运输，避免以下冻存，采用冰壶冷藏运输，避免冻融。冻融。n6 6 特殊情况下如需对个别样品进行复测，特殊情况下如需对个别样品进行复测，可以用特快专递形式投寄，但必须按三级可以用特快专递形式投寄，但必须按三级包装系统将盛样品的试管包扎好，避免使包装系统将盛样品的试管包扎好，避免使用玻璃容器，以保证不会破碎和溢漏。用玻璃容器，以保证不会破碎和溢漏。样品的接收样品的接收n1 1 含有感染性样品的包裹必须在具有处理含有感染性样品的包裹必须在具有处理感染源设备的实验室内由经过培训的、穿感染源设备的实验室内由经过培训的、穿戴防护衣的工作人员打开，用后的包裹应戴防护衣的工作人员打开，用后的

10、包裹应进行消毒。进行消毒。n2 2 核对样品与送检单，检查样品管有无破核对样品与送检单，检查样品管有无破损和溢漏。如发现溢漏应立即将尚存留的损和溢漏。如发现溢漏应立即将尚存留的样品移出，对样品管和盛器消毒，同时报样品移出，对样品管和盛器消毒，同时报告有关领导和专家。告有关领导和专家。n3 3 检查样品的状况，记录有无严重溶血、微生检查样品的状况，记录有无严重溶血、微生物污染、血脂过多以及黄疸等情况。如果污染过物污染、血脂过多以及黄疸等情况。如果污染过重或者认为样品不能被接受，则应将样品安全废重或者认为样品不能被接受，则应将样品安全废弃。并要将样品情况立即通知送样人。弃。并要将样品情况立即通知送

11、样人。n4 4 打开标本容器时要小心，以防内容物泼溅。打开标本容器时要小心，以防内容物泼溅。样品处理时若内容物有可能溅出，则应在生物安样品处理时若内容物有可能溅出，则应在生物安全柜中戴手套进行。同时应戴口罩、防护眼镜，全柜中戴手套进行。同时应戴口罩、防护眼镜，以防皮肤或粘膜污染。以防皮肤或粘膜污染。n5 5 因特殊临床治疗导致自发荧光的样品不因特殊临床治疗导致自发荧光的样品不可用于荧光方法测试。可用于荧光方法测试。n6 6 接收样品时应填写样品接收单。接收样品时应填写样品接收单。HIVHIV抗体检测抗体检测HIV抗体检测实验室n应符合应符合全国艾滋病检测工作规范（全国艾滋病检测工作规范（199

12、71997年版）年版）中对检测实验室人员、建筑设施中对检测实验室人员、建筑设施和设备等条件的要求。和设备等条件的要求。n应符合应符合实验室实验室 生物安全通用要求生物安全通用要求（GB 19489-2004GB 19489-2004）对）对IIII级生物安全实验室级生物安全实验室（BSL-2BSL-2）的各项要求。的各项要求。HIV抗体检测的目的nHIV抗体检测的目的抗体检测的目的n1 HIV抗体检测可用于监测、诊断、血液筛查。抗体检测可用于监测、诊断、血液筛查。n2 以以监测为目的监测为目的的检测是为了解不同人群的检测是为了解不同人群HIV感染率及感染率及其变化趋势而进行的检测，检测的人群包

13、括各类高危其变化趋势而进行的检测，检测的人群包括各类高危人群和一般人群。人群和一般人群。n3 以以诊断为目的诊断为目的的检测是为了确定个体的检测是为了确定个体HIV感染状况而感染状况而进行的检测，包括临床检测和自愿咨询检测、术前检进行的检测，包括临床检测和自愿咨询检测、术前检测、根据特殊需要进行的体检等。测、根据特殊需要进行的体检等。n4 以血液以血液筛查为目的筛查为目的的检测是为了防止输血传播的检测是为了防止输血传播HIV而而进行的检测，包括献血员筛查和原料血浆筛查。进行的检测，包括献血员筛查和原料血浆筛查。HIV抗体检测的要点n筛查试验阳性不能出阳性报告n严格遵守实验室标准操作程序（SOP

14、）n严格按照试剂盒说明书操作n注意防止样品间交叉污染常规HIV抗体检测的方法nHIV抗体检测分为筛查试验（包括初筛和复检）和确认试验。n HIV抗体检测筛查试验n筛查试剂n必须是经国家食品药品监督管理局注册批准、批批检合格、在有效期内的试剂。推荐使用经临床质量评估敏感性和特异性高的试剂。酶联免疫试验（ELISA）n目前国内外主要使用第三代（双抗原夹心法）试剂，少数使用第二代试剂。血源筛查仍以第三代ELISA为主；n国际上有些国家和地区已将线性免疫酶测定（第四代ELISA试剂）用于血源筛查。第四代ELISA试剂是最近发展起来的HIV抗原抗体联合测定试剂，可同时检测P24抗原和抗HIV-1/2抗体

15、。与第三代抗HIV-1/2试剂相比，检出时间提前了49.1d。其优点在于能同时检测抗原、抗体，降低血源筛查的残余危险度。快速检测（RT）n随着对HIV感染者和AIDS病人抗逆转录病毒治疗的进展，及对无症状HIV感染者提供自愿咨询检测（VCT）的迫切需求，简便、快速的HIV检测方法被广泛应用n常用的主要有以下几种：明胶颗粒凝集试验（PA）nPA是是HIV血清抗体检测的一种简便方法，是将血清抗体检测的一种简便方法，是将HIV抗原致敏明胶颗粒作为载体，与待检样品作用，混抗原致敏明胶颗粒作为载体，与待检样品作用，混匀后保温（一般为室温）。当待检样品含有匀后保温（一般为室温）。当待检样品含有HIV抗抗体

16、时，经抗原致敏的明胶颗粒与抗体发生抗原体时，经抗原致敏的明胶颗粒与抗体发生抗原-抗体抗体反应，根据明胶颗粒在孔中的凝集情况判读结果。反应，根据明胶颗粒在孔中的凝集情况判读结果。nPA试剂有两种，试剂有两种，HIV-1和和HIV-2抗原共同致敏的抗原共同致敏的PA试剂（试剂（AFD HIV-1/2 PA），），已经我国食品药品监督已经我国食品药品监督管理局（管理局（SFDA）注册批准；注册批准；nHIV-1、HIV-2抗原分别致敏抗原分别致敏的的PA试剂（试剂（SERODIA-HIV-1/2）可初步区分可初步区分HIV-1型和型和HIV-2型，目前我国型，目前我国尚未引进。尚未引进。斑点EIA或

17、称斑点ELISA（dot-EIA）n以硝酸纤维膜为载体，将以硝酸纤维膜为载体，将HIV抗原滴在膜上抗原滴在膜上成点状，即为固相抗原。加血清样品作用，成点状，即为固相抗原。加血清样品作用，以后步骤同以后步骤同ELISA。阳性结果在膜上抗原阳性结果在膜上抗原部位显示出有色斑点。反应时间在部位显示出有色斑点。反应时间在10 min以内，使用抗原量少。以内，使用抗原量少。斑点免疫胶体金（或胶体硒）快速试验斑点免疫胶体金（或胶体硒）快速试验n与斑点与斑点EIA相似，也是以硝酸纤维膜为载体。区相似，也是以硝酸纤维膜为载体。区别在于不用酶标记抗体，而代之以红色的胶体金别在于不用酶标记抗体，而代之以红色的胶体

18、金（或胶体硒）（或胶体硒）A蛋白，用渗滤法作为洗涤方法。蛋白，用渗滤法作为洗涤方法。试剂稳定，可室温长期保存。试验时不需任何设试剂稳定，可室温长期保存。试验时不需任何设备，迅速、简便、特异性较好，敏感性约相当于备，迅速、简便、特异性较好，敏感性约相当于中度敏感的中度敏感的ELISA，适用于应急检测、门诊急诊适用于应急检测、门诊急诊个体检测。目前已有在国内被个体检测。目前已有在国内被SFDA批准注册的批准注册的国外进口试剂和国内产品。一般可在国外进口试剂和国内产品。一般可在10(30min内内判读结果。判读结果。艾滋病唾液检测卡n在硝酸纤维膜上包被人工合成的HIVgp41/gp36蛋白抗原，可同

19、时检测含在唾液中的HIV-1/HIV-2抗体，原理为酶免疫间接法。主要检测唾液中的HIV IgA与IgG抗体，敏感性特异性与ELISA相近，可避免静脉穿刺。但样品预处理时间长且售价较高。以唾液为样品测定HIV抗体的ELISA、免疫印迹法（WB）试剂已经美国FDA批准。其它快速筛查试验方法n家庭HIV检测（Home Access System）等。尿液HIV抗体检测n1996年美国年美国FDA首次批准首次批准HIV-1尿液尿液ELISA试试剂，我国也正在研制尿液剂，我国也正在研制尿液HIV抗体检测试剂。抗体检测试剂。主要适用于静脉注射毒品（主要适用于静脉注射毒品（IDUs）人群和其它人群和其它高

20、危人群的大面积流行病学调查、监测。筛查高危人群的大面积流行病学调查、监测。筛查阳性者仍需采血做确认试验才能确定。阳性者仍需采血做确认试验才能确定。筛查试验n根据检测目的选用符合要求的筛查试剂对根据检测目的选用符合要求的筛查试剂对样品进行初筛和重复检测（复检）。样品进行初筛和重复检测（复检）。n1 初筛试验：以第三代初筛试验：以第三代ELISA（双抗原夹心法）双抗原夹心法）为例。为例。实验准备n试验开始前将试剂和样品放置在室温试验开始前将试剂和样品放置在室温(1823),按实验室按实验室SOP做好试剂准备。做好试剂准备。n磷酸盐缓冲液：若液体内有结晶磷酸盐缓冲液：若液体内有结晶,应放置在应放置在

21、37直直至溶解，用蒸馏水至溶解，用蒸馏水1：25稀释浓缩液，稀释浓缩液，4保存保存2周。周。nTMB底物液：使用前配制，底物液：使用前配制，TMB液和过氧化脲液液和过氧化脲液等量混匀。等量混匀。n1M硫酸终止液：硫酸终止液：85 ml蒸馏水中加入蒸馏水中加入5 ml浓硫酸浓硫酸。n备好试剂盒、待检样品和外部对照质控血清后，按试备好试剂盒、待检样品和外部对照质控血清后，按试剂盒说明书以及质控和安全防护要求进行筛查检测。剂盒说明书以及质控和安全防护要求进行筛查检测。实验操作n装好所需使用数目的孔条装好所需使用数目的孔条,每孔均加入每孔均加入100l样品稀释液。设样品稀释液。设3个阴性对照孔，个阴性

22、对照孔，1个个HIV-1阳性对照孔，若需要可再设阳性对照孔，若需要可再设1个个HIV-2阳性对照孔。阳性对照孔。n每孔加入每孔加入50l待检样品及对照（对照要后加），未用孔用样品待检样品及对照（对照要后加），未用孔用样品稀释液加满以溶解结合物球，以免堵塞洗板机孔。可震摇稀释液加满以溶解结合物球，以免堵塞洗板机孔。可震摇15S，372孵育孵育605min。n置洗板机上洗涤置洗板机上洗涤6遍（用洗液将反应孔完全加满遍（用洗液将反应孔完全加满,静置静置30 60S,共洗涤共洗涤6遍，洗完后孔上方及底部不应残存液体遍，洗完后孔上方及底部不应残存液体,禁止在滤纸上拍禁止在滤纸上拍干）。干）。n每孔加入每

23、孔加入100l底物液，勿搅动，室温避光孵育底物液，勿搅动，室温避光孵育302min。n每孔加入每孔加入100l 1M硫酸终止反应，充分混匀。硫酸终止反应，充分混匀。在在2h内置于酶标仪读数，单波长内置于酶标仪读数，单波长450nm，或双波长或双波长450/630nm测测OD值。值。实验结果n阴性对照（阴性对照（NC），），HIV-1阳性对照（阳性对照（PC1），），HIV-2阳性对照阳性对照（PC2）nNC 必须必须0.25方可用，排除方可用，排除NC0.25的值，计的值，计算算NC平均值。平均值。nNC界限范围：界限范围：0.6倍倍NC均值均值NC1.4倍倍NC均均值。值。n符合以下条件的实

24、验成立：符合以下条件的实验成立：n两个以上的两个以上的NC可用。可用。nPC1-NC均值均值 0.4，PC2-NC均值均值 0.4nCut off值值=阴性对照均值阴性对照均值+0.100n小于小于Cut off为阴性，大于或等于为阴性，大于或等于Cut off为阳性为阳性报告n对呈阴性反应的样品，可由实施检测的实对呈阴性反应的样品，可由实施检测的实验室出具验室出具HIV抗体阴性报告；对呈阳性反应抗体阴性报告；对呈阳性反应的样品，须进行复检，不能出阳性报告。的样品，须进行复检，不能出阳性报告。复检试验n对初筛呈阳性反应的样品用原有试剂和另对初筛呈阳性反应的样品用原有试剂和另外一种不同原理或不同

25、厂家的筛查试剂重外一种不同原理或不同厂家的筛查试剂重复检测。如两种试剂复测均呈阴性反应，复检测。如两种试剂复测均呈阴性反应，则报告则报告HIV抗体阴性；如均呈阳性反应，或抗体阴性；如均呈阳性反应，或一阴一阳，需送艾滋病确认实验室进行确一阴一阳，需送艾滋病确认实验室进行确认（见图认（见图1）。）。图图 1 HIV1 HIV 抗体筛查检测流程抗体筛查检测流程 样 品 初筛检测初筛检测 筛查试剂 阳性反应 阴性反应 重复检测重复检测 原有试剂加另外一种筛查试剂 一阴一阳 均阴性反应 均阳性反应 送确认实验室确认 报告阴性 初筛试验结果的报告n对HIV抗体筛查试验，呈阴性反应者可出具“HIV抗体阴性”

26、报告（可用附表1）；对初筛试验呈阳性反应者不能出阳性报告，可出具“HIV抗体待复查”报告（附表1）。初筛试验呈阳性反应样品的转送n如需送上级实验室进行复测或确认，需要填写如需送上级实验室进行复测或确认，需要填写“HIV抗体复测送检单抗体复测送检单”，经，经1名检验人员和名检验人员和1名具有中级以上技术职称的人员审核签字。送名具有中级以上技术职称的人员审核签字。送当地艾滋病筛查中心实验室，再转送艾滋病确当地艾滋病筛查中心实验室，再转送艾滋病确认实验室，或在本实验室复检后直接送确认实认实验室，或在本实验室复检后直接送确认实验室。验室。n对筛查阴性和阳性者，均需做好检测后咨对筛查阴性和阳性者，均需做

27、好检测后咨询。询。HIV抗体确认试验n1 确认试验的试剂确认试验的试剂n必须是经国家食品药品监督管理局注册批准、必须是经国家食品药品监督管理局注册批准、在有效期内的试剂。在有效期内的试剂。n2 确认试验方法确认试验方法n包括免疫印迹试验（包括免疫印迹试验（WB）、）、条带免疫试验条带免疫试验（LIATEK HIV）、）、放射免疫沉淀试验放射免疫沉淀试验（RIPA）及免疫荧光试验（及免疫荧光试验（IFA）。）。国内常用国内常用的确认试验方法是的确认试验方法是WB。确认检测流程 有有HIV-1/2混合型和单一的混合型和单一的HIV-1或或HIV-2型。先用型。先用HIV-1/2混合型试剂进行检测，

28、如果呈阴性反应，混合型试剂进行检测，如果呈阴性反应，则报告则报告HIV抗体阴性；如果呈阳性反应，则报告抗体阴性；如果呈阳性反应，则报告HIV-1抗体阳性；如果不满足阳性标准，则判为抗体阳性；如果不满足阳性标准，则判为HIV抗体检测结果不确定。如果出现抗体检测结果不确定。如果出现HIV-2型的特型的特异性指示条带，需用异性指示条带，需用HIV-2型免疫印迹试剂再做型免疫印迹试剂再做HIV-2的抗体确认试验，呈阴性反应，报告的抗体确认试验，呈阴性反应，报告HIV-2抗体阴性；呈阳性反应则报告抗体阴性；呈阳性反应则报告HIV-2抗体血清学抗体血清学阳性阳性,并将样品送国家参比实验室进行核酸序列分并将

29、样品送国家参比实验室进行核酸序列分析，见图析，见图2。n图图2 HIV抗体确认检测流程抗体确认检测流程 图图 2 HIV2 HIV 抗体确认检测流程抗体确认检测流程 免疫印迹法（WB，HIV-1/2 混合型）HIV-1 阳性反应 不确定反应 应 出现 HIV-2 指示条带 报告 HIV-1 阳性 不确定反应 阳性反应 阴性反应 报告阴性 每 3 个月随访 1 次，共 2 次，仍属可疑，则报告阴性；如随访期间 HIV 抗体出现阳性反应则报告阳性。随访期间可根据需要，检测病毒核酸和或 P24 抗原，作为辅助诊断。阴性反应 报告阴性 筛查试验阳性反应样品 报告 HIV-2 血清学阳性 免疫印迹法（W

30、B，HIV-2）检测程序及结果报告检测程序及结果报告n先用一种筛查试剂检测，出现阴性反应则报告先用一种筛查试剂检测，出现阴性反应则报告“HIV抗体阴性（抗体阴性（-）”。出现阳性反应则用两种不同原理。出现阳性反应则用两种不同原理或不同厂家的试剂复测（其中包括进口第三代或不同厂家的试剂复测（其中包括进口第三代ELISA试剂）。试剂）。n两种试剂复测均为阳性，且其中第三代两种试剂复测均为阳性，且其中第三代ELISA试剂复试剂复测样品测样品OD值与临界值（值与临界值（Cutoff）的比值（的比值（S/CO）6.0者可作阳性考虑，上报疫情（附表者可作阳性考虑，上报疫情（附表4）。两种试）。两种试剂复测

31、结果均为阳性，但第三代剂复测结果均为阳性，但第三代ELISA试剂复测试剂复测S/CO比值在比值在1.05.9之间，或两种试剂复测结果呈一之间，或两种试剂复测结果呈一阴一阳，应进一步作确认试验。阴一阳，应进一步作确认试验。艾滋病实验室安全防护艾滋病实验室安全防护和职业暴露预防和职业暴露预防 规范性引用文件规范性引用文件n医务人员艾滋病病毒职业暴露防护工作指导原医务人员艾滋病病毒职业暴露防护工作指导原则（试行）则（试行）中华人民共和国卫生部，中华人民共和国卫生部，2004年年5月月31日颁布，日颁布，2004年年6月月1日起实施。日起实施。n实验室生物安全通用要求实验室生物安全通用要求GB 194

32、89-2004，2004年年10月月1日起实施。日起实施。n微生物和生物医学实验室生物安全通用准则微生物和生物医学实验室生物安全通用准则（WS 233-2002）中华人民共和国卫生行业标中华人民共和国卫生行业标准，准，2002-12-03发布，发布，2003-08-01实施。实施。实验室生物安全级别实验室生物安全级别n艾滋病血清学检测艾滋病血清学检测n艾滋病血清学检测（包括筛查和确认实验室）、艾滋病血清学检测（包括筛查和确认实验室）、免疫学和核酸检测应在符合免疫学和核酸检测应在符合级生物安全实验级生物安全实验室（室（BSL-2）要求的艾滋病检测实验室中进行。要求的艾滋病检测实验室中进行。n艾滋

33、病血清学检测（包括筛查和确认实验室）、艾滋病血清学检测（包括筛查和确认实验室）、免疫学和核酸检测应在符合免疫学和核酸检测应在符合级生物安全实验级生物安全实验室（室（BSL-2）要求的艾滋病检测实验室中进行。要求的艾滋病检测实验室中进行。n HIV分离、研究分离、研究nHIV分离、细胞培养及研究工作应在分离、细胞培养及研究工作应在级生物级生物安全实验室（安全实验室（BSL-3）中进行。中进行。实验室安全防护实验室安全防护n 个人防护及保健个人防护及保健 n艾滋病实验室所用的个人防护装备均应符合国艾滋病实验室所用的个人防护装备均应符合国家有关标准的要求。家有关标准的要求。防护服防护服n艾滋病实验室

34、应为每个工作人员配备足够的防护服，艾滋病实验室应为每个工作人员配备足够的防护服，包括白大衣、隔离衣或一次性工作服。平时应将清包括白大衣、隔离衣或一次性工作服。平时应将清洁的防护服置于实验室清洁区内专用存放处。洁的防护服置于实验室清洁区内专用存放处。n离开实验室时，应脱去防护服。每次穿过的污染的离开实验室时，应脱去防护服。每次穿过的污染的防护服应及时放入污衣袋中，待消毒后方可洗涤或防护服应及时放入污衣袋中，待消毒后方可洗涤或废弃。废弃。n当含有当含有HIV的液体（样品或病毒培养液）及有可能的液体（样品或病毒培养液）及有可能溅到工作人员时，应使用防渗透性的（如塑料）围溅到工作人员时，应使用防渗透性

35、的（如塑料）围裙。裙。n当发现防护服已被污染时，应立即更换。当发现防护服已被污染时，应立即更换。n艾滋病实验室应配备一次性手套、一次性口罩、艾滋病实验室应配备一次性手套、一次性口罩、安全防护眼镜及冲洗眼睛的装置。安全防护眼镜及冲洗眼睛的装置。n艾滋病实验室应配备实验室专用的工作鞋，鞋艾滋病实验室应配备实验室专用的工作鞋，鞋面覆盖足背，鞋底防滑。面覆盖足背，鞋底防滑。个人保健个人保健 高标准的个人保健对于减少感染的危险性很重高标准的个人保健对于减少感染的危险性很重要。皮肤受损、患病都会增加感染的危险。皮要。皮肤受损、患病都会增加感染的危险。皮肤的任何伤口和擦伤都应以防水敷料覆盖。肤的任何伤口和擦

36、伤都应以防水敷料覆盖。n进实验室前要摘除首饰，修剪长的带刺的指甲，以进实验室前要摘除首饰，修剪长的带刺的指甲，以免刺破手套。免刺破手套。n进入实验室应穿隔离衣，戴手套。如果接触物传染进入实验室应穿隔离衣，戴手套。如果接触物传染危险性大，则应戴双层手套和防护眼镜。危险性大，则应戴双层手套和防护眼镜。n离开实验室前必须脱去隔离衣，并洗手。离开实验室前必须脱去隔离衣，并洗手。n严禁在艾滋病实验室内进食、饮水、吸烟和化妆。严禁在艾滋病实验室内进食、饮水、吸烟和化妆。建立安全制度建立安全制度n实验室的仪器设备、建筑和设施的安全性应符合实验室的仪器设备、建筑和设施的安全性应符合实验室生物安全通用要求实验室

37、生物安全通用要求GB 19489-2004和本和本规范规范要求。要求。n根据本根据本规范规范制订本实验室的安全工作制度或安制订本实验室的安全工作制度或安全标准操作程序（全标准操作程序（S-SOP），），该制度或程序应适用该制度或程序应适用于现有的实验条件，并与实验室其它规定相一致。于现有的实验条件，并与实验室其它规定相一致。n无论是否发生意外事故，每年都要对安全工作制度无论是否发生意外事故，每年都要对安全工作制度或安全标准操作程序及其实施情况进行检查和修订，或安全标准操作程序及其实施情况进行检查和修订，并有记录。并有记录。n制定意外事故处理预案。建立意外事故的登记和报制定意外事故处理预案。建立

38、意外事故的登记和报告制度。告制度。n实验室主任负责组织对突发事件和职业暴露事故进实验室主任负责组织对突发事件和职业暴露事故进行调查、登记、处理和报告。行调查、登记、处理和报告。人员培训和管理人员培训和管理n向管理人员和所有检测人员提供并完成与工作向管理人员和所有检测人员提供并完成与工作相关的充足有效的技术培训。强化全员安全培相关的充足有效的技术培训。强化全员安全培训和训和“普遍性防护原则普遍性防护原则”安全意识。所有工作安全意识。所有工作人员必须经过人员必须经过HIV检测技术和省级以上艾滋病检测技术和省级以上艾滋病实验室安全培训，包括上岗培训和复训，并接实验室安全培训，包括上岗培训和复训，并接

39、受实验室管理人员的监督。实验室的安全责任受实验室管理人员的监督。实验室的安全责任人要对工作和环境的安全负责，所有工作人员人要对工作和环境的安全负责，所有工作人员都有责任保护自己和他人的安全。都有责任保护自己和他人的安全。n必须告知新上岗人员实验室工作的潜在危险，进行必须告知新上岗人员实验室工作的潜在危险，进行安全教育，直至有能力后方可单独工作。安全教育，直至有能力后方可单独工作。n实验室主任应了解所有工作人员。在安排工作区域实验室主任应了解所有工作人员。在安排工作区域时，要根据人员的工作种类和所涉及的生物材料，时，要根据人员的工作种类和所涉及的生物材料，对实验室环境做好安全检查。对实验室环境做

40、好安全检查。n新调入人员、外来合作、进修和学习的人员在进入新调入人员、外来合作、进修和学习的人员在进入实验室之前必须经过实验室主任的批准。非实验室实验室之前必须经过实验室主任的批准。非实验室人员和非实验室物品不得进入实验室。人员和非实验室物品不得进入实验室。n严格执行实验室工作人员年度采血检测严格执行实验室工作人员年度采血检测HIV抗体和备抗体和备案制度，工作人员血清应长期保留。实验室工作人案制度，工作人员血清应长期保留。实验室工作人员从事工作前必须进行员从事工作前必须进行HIV抗体和乙肝、丙肝等肝炎抗体和乙肝、丙肝等肝炎病毒标记物的检测；注射乙肝疫苗；每半年至病毒标记物的检测；注射乙肝疫苗；

41、每半年至1年进年进行行1次次HIV抗体检测，并保留血清样品。抗体检测，并保留血清样品。建立严格的保密制度并定期检查建立严格的保密制度并定期检查n与与HIV/AIDS相关检测项目的所有资料均应严格相关检测项目的所有资料均应严格保密，包括送检单与检测记录的保管、报告单保密，包括送检单与检测记录的保管、报告单的发放和工作人员年度采血检测等。的发放和工作人员年度采血检测等。n艾滋病检测实验室所有人员应具有高度的保密意识。艾滋病检测实验室所有人员应具有高度的保密意识。不可对无关人员透露检测结果。不可对无关人员透露检测结果。n保密制度纳入年度考核，发现问题及时处理并根据保密制度纳入年度考核，发现问题及时处

42、理并根据情况修订保密制度。情况修订保密制度。严格质量管理严格质量管理n按要求做好安全操作的管理以及检测试剂的选按要求做好安全操作的管理以及检测试剂的选择、检测工作的室内质控和室间质评。择、检测工作的室内质控和室间质评。n对所有检测报告严格把关，杜绝漏报、误报现象的对所有检测报告严格把关，杜绝漏报、误报现象的发生。发生。对存放试剂和有毒物区域的监控对存放试剂和有毒物区域的监控n冷藏柜、冰箱、培养箱和存放生物试剂、化学冷藏柜、冰箱、培养箱和存放生物试剂、化学危险品、放射性物质的容器置于工作人员视线危险品、放射性物质的容器置于工作人员视线之外的地点时应上锁。之外的地点时应上锁。n应设有专门储存阳性血

43、清、质控品的低温冰柜和应设有专门储存阳性血清、质控品的低温冰柜和/或或血清库毒种库，并应上锁，专人管理。血清库毒种库，并应上锁，专人管理。n各级实验室血清库各级实验室血清库/毒种库的设置按有关规定执行。毒种库的设置按有关规定执行。建立应付突发事件的措施建立应付突发事件的措施n在紧急预案中要包括在紧急事件发生时通知实在紧急预案中要包括在紧急事件发生时通知实验室主任、设备管理员、实验室工作人员和设验室主任、设备管理员、实验室工作人员和设备安全员。备安全员。n实验室主任和设备安全员要遵循有关规定，报告、实验室主任和设备安全员要遵循有关规定，报告、调查和处理突发事件以及可能发生的意外职业暴露。调查和处

44、理突发事件以及可能发生的意外职业暴露。实验室的安全操作实验室的安全操作n在安排工作人员的实验室区域时，要根据其工作在安排工作人员的实验室区域时，要根据其工作的种类和所涉及的生物试剂，对实验室环境做好的种类和所涉及的生物试剂，对实验室环境做好安全检查。安全检查。n进入实验室应穿隔离衣、戴手套，必要时（如对初筛进入实验室应穿隔离衣、戴手套，必要时（如对初筛阳性标本进行复测或确认时，或直接对阳性标本进行复测或确认时，或直接对HIV毒种进行操毒种进行操作时）戴防护眼镜，以防污染暴露的皮肤和衣物。不作时）戴防护眼镜，以防污染暴露的皮肤和衣物。不用戴手套的手触摸暴露的皮肤、口唇、眼睛、耳朵和用戴手套的手触

45、摸暴露的皮肤、口唇、眼睛、耳朵和头发等。头发等。n如接触物传染性危险大，可戴双层（两付）手套以增如接触物传染性危险大，可戴双层（两付）手套以增加保护。操作时手套破损，应立即丢弃、洗手并戴上加保护。操作时手套破损，应立即丢弃、洗手并戴上新手套。新手套。n禁止采用口腔吸液管，必须使用移液器来操作实验室禁止采用口腔吸液管，必须使用移液器来操作实验室的所有液体。的所有液体。n操作中有标本、检测试剂外溅时应及时消毒。对大量操作中有标本、检测试剂外溅时应及时消毒。对大量溅出的浓度高的传染物在清洁之前应先用溅出的浓度高的传染物在清洁之前应先用1%次氯酸钠次氯酸钠溶液浸泡，然后戴上手套擦净。溶液浸泡，然后戴上

46、手套擦净。n工作完毕，要对工作台面消毒。工作台面应当用工作完毕，要对工作台面消毒。工作台面应当用0.1%(0.2%次氯酸溶液消毒；用消毒液清洗后要干燥次氯酸溶液消毒；用消毒液清洗后要干燥20min以上；以上；n工作完毕，脱去手套后洗手，再脱去工作衣，用肥皂工作完毕，脱去手套后洗手，再脱去工作衣，用肥皂和流动水洗手。和流动水洗手。n血清及其它体液样品均应严格按要求妥善保存，血清及其它体液样品均应严格按要求妥善保存，HIV抗抗体阳性样品应做好标记单独保存。体阳性样品应做好标记单独保存。避免利器的使用避免利器的使用n尽量避免在实验室使用针头、刀片、玻璃器皿等利器，尽量避免在实验室使用针头、刀片、玻璃

47、器皿等利器，以防刺伤。如果必须使用，在处理或清洗时应采取措以防刺伤。如果必须使用，在处理或清洗时应采取措施防止刺伤或划伤，并应对用过的物品进行消毒处理。施防止刺伤或划伤，并应对用过的物品进行消毒处理。n尽量使用安全针具采血，如蝶形真空针，自毁性针具尽量使用安全针具采血，如蝶形真空针，自毁性针具等，以降低直接接触血液和刺伤的危险性。等，以降低直接接触血液和刺伤的危险性。n应将用过的锐器直接放入耐刺、防渗漏的利器盒，针应将用过的锐器直接放入耐刺、防渗漏的利器盒，针头直接放入坚固的容器内，消毒后废弃。禁止将使用头直接放入坚固的容器内，消毒后废弃。禁止将使用后的一次性针头重新套上针头套。禁止用手直接接

48、触后的一次性针头重新套上针头套。禁止用手直接接触使用后的针头、刀片等锐器。使用后的针头、刀片等锐器。样品的采集样品的采集n所有的血液、血清、未固定的组织和组织液样品，均应所有的血液、血清、未固定的组织和组织液样品，均应视为有潜在传染性，都应以安全的方式进行操作。视为有潜在传染性，都应以安全的方式进行操作。n1 应象操作未知传染风险样品一样，小心存放、拿取和应象操作未知传染风险样品一样，小心存放、拿取和使用所有可能有传染性的质量控制和参考物质。用后的使用所有可能有传染性的质量控制和参考物质。用后的包裹应进行消毒。包裹应进行消毒。n2 采血时一定要注意安全，采血用一次性注射器，谨慎采血时一定要注意

49、安全，采血用一次性注射器，谨慎操作，防止发生刺伤皮肤和造成外界污染。操作，防止发生刺伤皮肤和造成外界污染。n3 如用滤纸采样，则手指或耳垂局部消毒严格按常规进如用滤纸采样，则手指或耳垂局部消毒严格按常规进行。在刺破皮肤后，迅速把滤纸沾上，切勿让血液滴落行。在刺破皮肤后，迅速把滤纸沾上，切勿让血液滴落在其它物体表面造成污染。采血后要待血样干燥后再包在其它物体表面造成污染。采血后要待血样干燥后再包装送检。装送检。n4 离心机要使用密闭的罐和密封头，以防液体溢出或在离心机要使用密闭的罐和密封头，以防液体溢出或在超超/高速离心时形成气溶胶。高速离心时形成气溶胶。带入和带出实验室的物品带入和带出实验室的

50、物品n1 对所有带入实验室的物品都应进行检查。含有测试对所有带入实验室的物品都应进行检查。含有测试样品的包裹应在安全柜或送到合适的实验室方可打开，样品的包裹应在安全柜或送到合适的实验室方可打开，不能在收发地点和仓库等地点打开，应有合适的包装不能在收发地点和仓库等地点打开，应有合适的包装（见第一章）并有醒目的标记。包裹必须在下列情况（见第一章）并有醒目的标记。包裹必须在下列情况下才能打开：人员在处理感染源方面受过训练；具有下才能打开：人员在处理感染源方面受过训练；具有处理感染源设备的实验室；穿戴防护衣的工作人员；处理感染源设备的实验室；穿戴防护衣的工作人员；用后置可消毒的容器中。用后置可消毒的容