第一节沙门氏菌检验课件.ppt

1、第一节第一节 沙门氏菌检验沙门氏菌检验 沙门氏菌是引起食物中毒的重要病原菌。在世界各国的各类沙门氏菌是引起食物中毒的重要病原菌。在世界各国的各类细菌性食物中毒中细菌性食物中毒中,沙门氏菌引起的食物中毒常列榜首。沙门氏菌引起的食物中毒常列榜首。在在英国英国,以沙门氏菌占首位。以沙门氏菌占首位。美国美国则为第则为第2 2位位,仅次于金色葡萄球菌。仅次于金色葡萄球菌。日本日本则以副溶血弧菌和金色葡萄球菌为最多则以副溶血弧菌和金色葡萄球菌为最多,沙门氏菌占第沙门氏菌占第3 3位。位。我国内陆地区我国内陆地区也是以沙门氏菌为首位。也是以沙门氏菌为首位。世界上最大的一起沙门氏菌食物中毒是世界上最大的一起沙

2、门氏菌食物中毒是19531953年于瑞典由吃猪年于瑞典由吃猪肉而引起的鼠伤寒沙门氏菌中毒肉而引起的鼠伤寒沙门氏菌中毒,7717,7717人中毒人中毒,90,90人死亡。人死亡。沙门氏菌属于沙门氏菌属于肠杆菌科肠杆菌科,至今已有至今已有22302230种以上的血清型种以上的血清型。概概 况况u沙门氏菌引起人的沙门氏菌引起人的伤寒伤寒、副伤寒副伤寒、感染性腹泻感染性腹泻、食食物中毒物中毒和和医院内感染医院内感染，并，并引起动物的沙门氏菌病，引起动物的沙门氏菌病，是重要的肠道致病菌。是重要的肠道致病菌。u该菌属在医学、兽医和公该菌属在医学、兽医和公共卫生上均十分重要：共卫生上均十分重要：沙门氏菌的分

3、类沙门氏菌的分类根据新近的沙门氏菌的分类方案，本属菌现可分为两个种：根据新近的沙门氏菌的分类方案，本属菌现可分为两个种：1.肠道沙门氏菌（肠道沙门氏菌（S.enterica）2.邦戈尔沙门氏菌（邦戈尔沙门氏菌（S.bongori）肠道沙门氏菌又分为肠道沙门氏菌又分为6 6个亚种：个亚种：1)肠道亚种肠道亚种（enterica）2)萨拉姆亚种萨拉姆亚种（salamae）3)亚利桑那亚种亚利桑那亚种（arizonae）4)双相亚利桑那沙门氏菌双相亚利桑那沙门氏菌（diarizonae）5)豪顿沙门氏菌豪顿沙门氏菌（houtenae）6)因迪卡沙门氏菌因迪卡沙门氏菌（indica）抗原结构抗原结构菌

4、体菌体(O)抗原抗原分群鞭毛鞭毛(H)抗原抗原分型毒力毒力(Vi)抗原抗原微荚膜成分1)O抗原抗原是细胞壁表面的是细胞壁表面的耐热多糖抗原耐热多糖抗原；2)根据根据O抗原（群因子）将沙门氏菌分为抗原（群因子）将沙门氏菌分为A、B、C1-C4、D1-D3、E1-E4、F、G1-G2、HZ和和O51-O63以及以及O65-O67计计51个个O群，包括群，包括58种种O抗原。抗原。1、O抗原抗原A 群群2；B 群群4；C1 群群6，7；C2 群群6，8；C3 群群8，20；C4 群群6，7，14；D 群群9；E1 群群3，10；E2 群群3，15；E3 群群3，15，34；E4 群群1，3，19；F

5、 群群11 1)H抗原抗原是本属菌的蛋白质性是本属菌的蛋白质性鞭毛抗原鞭毛抗原，计有计有63种；种；i.第一相（特异相）：小写英文字母，特异性高第一相（特异相）：小写英文字母，特异性高ii.第二相（非特异相）：阿拉伯数字，少数用英文字母，特异性第二相（非特异相）：阿拉伯数字，少数用英文字母，特异性低低2)同一同一O群的沙门氏菌又根据它们的群的沙门氏菌又根据它们的H抗原抗原的不同再细分成许多不同的血清型。的不同再细分成许多不同的血清型。2、H抗原抗原1)Vi抗原抗原是是微荚膜微荚膜成分；成分；2)相当于相当于K抗原，抗原，与毒力（与毒力（virulence）有关）有关，故称为，故称为Vi抗原抗原

6、。3)新分离的菌株多有新分离的菌株多有Vi抗原，在普通培养基上多次传代后易丢失此抗抗原，在普通培养基上多次传代后易丢失此抗原，这种变异称为原，这种变异称为“V-W变异变异”。3、Vi抗原抗原伤寒沙门氏菌伤寒沙门氏菌丙型副伤寒沙门氏菌丙型副伤寒沙门氏菌部分都柏林沙门氏菌部分都柏林沙门氏菌须鉴定Vi4、血清型、血清型1)以以O:H:Vi形式表示：形式表示：用已知的沙门氏菌用已知的沙门氏菌O和和H单因子血清作玻板凝集试验便可确定一单因子血清作玻板凝集试验便可确定一个沙门氏菌分离物的血清型或抗原式，对可能有个沙门氏菌分离物的血清型或抗原式，对可能有Vi抗原的菌株还须抗原的菌株还须用用Vi 抗血清鉴定之

7、。抗血清鉴定之。举例：举例：1,4,5,12:i:1,2 9,12,Vi:d:2)目前本菌属至少已有目前本菌属至少已有2500个个血清型。对人和温血动物致病血清型。对人和温血动物致病的血清型绝大多数分属于的血清型绝大多数分属于A F群，在疾病中经常出现的不群，在疾病中经常出现的不足足50种。种。常用检验用培养基常用检验用培养基l DHL琼脂琼脂成分成分 蛋白胨蛋白胨 20 g 牛肉膏牛肉膏 3 g 乳糖乳糖 10 g 蔗糖蔗糖 10 g 去氧胆酸钠去氧胆酸钠 1 g 硫代硫酸钠硫代硫酸钠 2.3 g 柠檬酸钠柠檬酸钠 1 g 柠檬酸铁铵柠檬酸铁铵 1 g 中性红中性红 0.03 g 琼脂琼脂

8、18 20 g 蒸馏水蒸馏水 1000 ml pH 7.3l 制法：制法：将除将除中性红中性红和和琼脂琼脂以外的以外的成分溶解于成分溶解于400 ml 蒸馏蒸馏水中，校正水中，校正pH，再将琼，再将琼脂于脂于600 ml蒸馏水中煮沸蒸馏水中煮沸溶解，两液合并，并加入溶解，两液合并，并加入0.5%的中性红水溶液的中性红水溶液6 ml，待冷至待冷至55，倾注平板。，倾注平板。sal.为无色半透明菌落，为无色半透明菌落，产产H2S者为黑色菌落。者为黑色菌落。l SSSS琼脂琼脂(沙门氏沙门氏-志贺氏琼脂志贺氏琼脂)基础培养基基础培养基 牛肉膏牛肉膏 5g 蛋白胨蛋白胨 5g 三号胆盐三号胆盐 3.5

9、g 琼脂琼脂 17g 蒸馏水蒸馏水 1000ml 121,15,15min高压灭菌高压灭菌l 完全培养基完全培养基基础培养基基础培养基 1000ml 乳糖乳糖 10g柠檬酸钠柠檬酸钠 8.5g硫代硫酸钠硫代硫酸钠 8.5g10%柠檬酸铁溶液柠檬酸铁溶液 10ml 1%1%中性红中性红溶液溶液 2.5ml 0.1%0.1%煌绿煌绿溶液溶液 0.33ml加热溶化基础培养基加热溶化基础培养基,按比例加入上述除染按比例加入上述除染料以外之各成分料以外之各成分,充分混合均匀充分混合均匀,矫正至矫正至pH7.0,加入中性红和煌绿溶液加入中性红和煌绿溶液,倾注平板倾注平板.l 注注1:制好的培养基宜当日使用

10、，或保存于制好的培养基宜当日使用，或保存于冰箱内于冰箱内于48h内使用内使用l 注注2:煌绿溶液配好后应在煌绿溶液配好后应在10天以内使用天以内使用l 注注3:可以购用可以购用SS琼脂的干燥培养基琼脂的干燥培养基 sal.为无色半透明菌落，产为无色半透明菌落，产H2S者为中心带黑色，乳糖阳者为中心带黑色，乳糖阳性者为粉红色，中心带黑色。性者为粉红色，中心带黑色。亚硒酸盐胱氨酸亚硒酸盐胱氨酸增菌液增菌液（SCSC）u 成分成分蛋白胨蛋白胨 5 g乳糖乳糖 4 g 亚硒酸氢钠亚硒酸氢钠 4 g磷酸氢二钠磷酸氢二钠 5.5 g磷酸二氢钾磷酸二氢钾 4.5 gL-胱氨酸胱氨酸 0.01 g蒸馏水蒸馏水

11、 1000 mlu 1%L-胱氨酸胱氨酸 氢氧化钠溶液的配氢氧化钠溶液的配制：称取制：称取L-胱氨酸胱氨酸 0.1 g，加，加1 mol/L氢氧化钠氢氧化钠1.5 ml，使溶解，使溶解，再加入蒸馏水再加入蒸馏水8.5 ml即成。即成。u 制法制法 将除将除亚硒酸氢钠亚硒酸氢钠 和和L-L-胱胱氨酸氨酸 以外的各成分溶解于以外的各成分溶解于900 ml蒸馏水中，加热煮沸，蒸馏水中，加热煮沸，待冷备用。待冷备用。另将亚硒酸氢钠另将亚硒酸氢钠 溶解于溶解于100 ml 蒸馏水中，加热煮沸，待蒸馏水中，加热煮沸，待冷，以无菌操作与上液混合。冷，以无菌操作与上液混合。再加入再加入1%L-胱氨酸胱氨酸-氢

12、氧化氢氧化钠钠1 ml。分装于灭菌瓶中，。分装于灭菌瓶中，每瓶每瓶100 ml，pH应为应为7.1氯化镁孔雀绿增菌液氯化镁孔雀绿增菌液（MM）甲液甲液 胰蛋白胨胰蛋白胨 5 g 氯化钠氯化钠 8 g 磷酸二氢钾磷酸二氢钾 1.6 g 蒸馏水蒸馏水 1000 ml 乙液乙液 氯化镁氯化镁 40 g 蒸馏水蒸馏水 100 ml 丙液丙液 0.4%孔雀绿水溶液孔雀绿水溶液 制法制法 分别按上述成分配好后，分别按上述成分配好后，121，15min15min灭菌备灭菌备用。临用前取用。临用前取甲液甲液90 90 mlml、乙液乙液9 ml9 ml、丙液丙液0.9 ml0.9 ml，以无菌操作混，以无菌操

13、作混合即可。合即可。四硫磺酸钠煌绿四硫磺酸钠煌绿增菌液增菌液（TTB）l 基础培养基基础培养基 蛋白胨蛋白胨 5 g 胆盐胆盐 1 g 碳酸钙碳酸钙 10 g 硫代硫酸钠硫代硫酸钠 30 g 蒸馏水蒸馏水 1000 mll 碘溶液碘溶液 碘碘 6 g 碘化钾碘化钾 5 g 蒸馏水蒸馏水 20 mll 制法制法 将将基础培养基基础培养基的各成分加的各成分加入蒸馏水中，加热溶解，分入蒸馏水中，加热溶解，分装每瓶装每瓶100 ml。分装时应随。分装时应随时振摇，使其中的碳酸钙混时振摇，使其中的碳酸钙混匀。匀。121，15 15 min，灭菌。，灭菌。临用时每临用时每100ml100ml基础培养基基础

14、培养基中加入中加入碘溶液碘溶液2 2 ml、0.1%0.1%煌煌绿溶液绿溶液1 1 ml。亚硫酸铋琼脂亚硫酸铋琼脂（BS）l 成分成分蛋白胨蛋白胨 10 g牛肉膏牛肉膏 5 g葡萄糖葡萄糖 5 g硫酸亚铁硫酸亚铁 0.3 g磷酸氢二钠磷酸氢二钠 4 g 煌绿煌绿 0.025 g 0.025 g 柠檬酸铋铵柠檬酸铋铵 2 g 亚硫酸钠亚硫酸钠 6 g琼脂琼脂 18 20 g蒸馏水蒸馏水 1000 mlpH 7.5l 制法制法将将前五种成分前五种成分溶解于溶解于300 ml蒸馏水中蒸馏水中将将柠檬酸铋铵柠檬酸铋铵和和亚硫酸钠亚硫酸钠另用另用50 ml蒸馏水溶解蒸馏水溶解将琼脂于将琼脂于600 ml

15、蒸馏水中煮沸溶解，蒸馏水中煮沸溶解，冷至冷至80。将以上三液合并，补充蒸馏水至将以上三液合并，补充蒸馏水至1000 1000 mlml，矫正，矫正pHpH，加，加0.5%0.5%煌绿水溶液煌绿水溶液5ml5ml，摇匀，冷至摇匀，冷至55 55 时，倾注平板时，倾注平板l 注：此培养基注：此培养基不需高压灭菌不需高压灭菌。制备过。制备过程中不宜过分加热，以免降低其选择程中不宜过分加热，以免降低其选择性。应在性。应在临用前一天临用前一天制备，贮存于室制备，贮存于室温暗处。温暗处。超过超过48 h48 h不宜使用不宜使用。产产H2S者为黑色有金属光泽，不产者为黑色有金属光泽，不产H2S者为灰绿色的菌

16、落。者为灰绿色的菌落。尿素琼脂尿素琼脂l 成分成分 蛋白胨蛋白胨 1 g 氯化钠氯化钠 5 g 葡萄糖葡萄糖 5 g 磷酸二氢钾磷酸二氢钾 2 g 0.4%酚红溶液酚红溶液 3 ml 琼脂琼脂 20 g 蒸馏水蒸馏水 1000 ml 20%尿素溶液尿素溶液 100 ml pH 7.2 将除尿素以外的成分配好，并高将除尿素以外的成分配好，并高压灭菌后，冷至压灭菌后，冷至55，加入经除，加入经除菌过滤的尿素溶液。尿素的最终菌过滤的尿素溶液。尿素的最终浓度为浓度为2%2%，最终，最终pH pH 为为7.27.2，分装，分装于灭菌试管内，放成斜面备用。于灭菌试管内，放成斜面备用。l 试验方法试验方法挑

17、取琼脂培养物接种，在挑取琼脂培养物接种，在3737，培养培养24h24h，观察结果，观察结果，尿素酶阳尿素酶阳性者由于性者由于产碱产碱而使培养基变为而使培养基变为红色红色。氨基酸脱羧酶试验培养基氨基酸脱羧酶试验培养基l 成分成分 蛋白胨蛋白胨 5 g 酵母浸膏酵母浸膏 3 g 葡萄糖葡萄糖 1 g 蒸馏水蒸馏水 1000 ml 1.6%溴甲酚紫溴甲酚紫-乙醇溶液乙醇溶液 1 ml L-氨基酸或氨基酸或DL-氨基酸氨基酸 0.5 g或或1 g/100 ml pH 6.8l 制法制法将除氨基酸以外的成分加热溶解后，将除氨基酸以外的成分加热溶解后，分装每瓶分装每瓶100 ml，加入各种氨基酸、，加入

18、各种氨基酸、赖氨酸、精氨酸和鸟氨酸。赖氨酸、精氨酸和鸟氨酸。L-氨基氨基酸按酸按0.5%加入，加入，DL-氨基酸按氨基酸按1%加加入。再行校正入。再行校正pH至至6.8。l 试验方法试验方法 从琼脂斜面上挑取培养物接种，于从琼脂斜面上挑取培养物接种，于37，培养，培养18-24 h18-24 h。氨基酸脱羧。氨基酸脱羧酶酶阳性者阳性者由于产碱，由于产碱，培养基培养基应呈紫应呈紫色色。阴性者阴性者无碱性产物，但因葡萄无碱性产物，但因葡萄糖产酸而使培养基糖产酸而使培养基变为黄色变为黄色。对照。对照管应为黄色。管应为黄色。ONPG培养基培养基l 成分成分 邻硝基酚邻硝基酚-D-半乳糖苷半乳糖苷（ON

19、PG）60 mg 0.01 mol/L磷酸钠缓冲液磷酸钠缓冲液（pH 7.5）10 ml 1%蛋白胨水（蛋白胨水（pH 7.5）30 mll 制法制法 将将ONPG溶于缓冲液内，加入溶于缓冲液内，加入蛋白胨水，以过滤法除菌，分蛋白胨水，以过滤法除菌，分装于试管内，每管装于试管内，每管0.5 ml。用橡。用橡皮塞塞紧。皮塞塞紧。l 试验方法试验方法 将细菌接种于将细菌接种于37 37 培养培养1-3 h1-3 h和和24 h24 h观察结果。如果观察结果。如果-半乳糖苷半乳糖苷酶产生，则于酶产生，则于1-3 h变黄色变黄色，如，如无此酶则无此酶则24 h不变色。不变色。氢化钾（氢化钾（KCNKC

20、N）培养基）培养基u成分成分 蛋白胨蛋白胨 10 g 氯化钠氯化钠 5 g 磷酸二氢钾磷酸二氢钾 0.225 g 磷酸氢二钠磷酸氢二钠 5.64 g 蒸馏水蒸馏水 1000 ml 0.5%氢化钾溶液氢化钾溶液 20 ml pH 7.6u制法制法 将除氰化钾以外的成分将除氰化钾以外的成分配好后分装烧瓶，配好后分装烧瓶，121，15min15min。每。每100ml100ml培养基培养基加入加入0.5%0.5%氰化钾溶液氰化钾溶液2.0ml2.0ml。u试验方法试验方法3737，培养，培养1-21-2天。天。如有如有细菌生长即为阳性细菌生长即为阳性（不（不抑制），经抑制），经2 2天培养不生天培养

21、不生长为阴性（抑制）。长为阴性（抑制）。缓冲蛋白胨水缓冲蛋白胨水（BP）成分成分 蛋白胨蛋白胨 10 g 氯化钠氯化钠 5 g 磷酸氢二钠磷酸氢二钠（Na2HPO412H2O）9 g 磷酸二氢钾磷酸二氢钾 1.5 g 蒸馏水蒸馏水 1000 ml pH 7.2 制法制法 按上述成分配好后，按上述成分配好后，121，15min15min灭菌。临用时无菌分装每瓶灭菌。临用时无菌分装每瓶225ml225ml。注：本培养基供沙门氏菌注：本培养基供沙门氏菌前增菌前增菌用用前增菌前增菌和增菌增菌l 冻肉、蛋品、乳品及其他冻肉、蛋品、乳品及其他加工食品加工食品均应经过均应经过前增菌前增菌。以无菌。以无菌操作

22、取操作取25 25 g（mlml），加在装有），加在装有225 225 ml缓冲蛋白胨水缓冲蛋白胨水的的500 500 ml 广口瓶内。固体食品可先磨碎或乳化，于广口瓶内。固体食品可先磨碎或乳化，于37 37 培养培养4 4 h（干蛋品（干蛋品1818 24 24 h）。）。l 移取移取10 10 ml，转种于，转种于100 ml100 ml氯化镁孔雀绿增菌液氯化镁孔雀绿增菌液或或四硫磺酸四硫磺酸钠煌绿钠煌绿增菌液内，于增菌液内，于42 42 培养培养1818 24 h24 h。同时，另取。同时，另取10 ml10 ml，转种于转种于100 ml100 ml亚硒酸盐胱氨酸增菌液亚硒酸盐胱氨酸增

23、菌液内，于内，于3737培养培养1818 24 24 h h。为何要用两种不同的增菌液呢？为何要用两种不同的增菌液呢？亚硒酸盐胱氨酸增菌亚硒酸盐胱氨酸增菌液（液（SC）四硫磺酸酸盐四硫磺酸酸盐增菌液增菌液（TTB）+对猪霍乱和羊流对猪霍乱和羊流产产sal有毒性有毒性TTB 适于伤寒沙门氏菌增菌；适于伤寒沙门氏菌增菌；MM 适于其它各种沙门氏菌；适于其它各种沙门氏菌；检样检样前增菌法：冻肉、蛋品、乳品及其它加工食品前增菌法：冻肉、蛋品、乳品及其它加工食品25g+BP 225ml直接增菌法：鲜肉、鲜乳或其它未经加工的食品直接增菌法：鲜肉、鲜乳或其它未经加工的食品25g+灭灭菌生理盐水菌生理盐水25

24、ml，做成检样匀液，做成检样匀液10ml+MM（或（或TTB）100ml10ml+SC100ml检样匀液检样匀液25ml+MM（或（或TTB）100ml检样匀液检样匀液25ml+SC100mlBSDHL（或（或SS、HE、WS）挑取可疑菌落挑取可疑菌落TSI，靛基质试验、尿素（，靛基质试验、尿素（pH 7.2）、）、KCN、赖氨酸、赖氨酸H2S+；靛基质；靛基质-；尿素；尿素-；KCN-；赖氨酸；赖氨酸+；H2S+；靛基质；靛基质+；尿素；尿素-；KCN-；赖氨酸；赖氨酸+；H2S-；靛基质；靛基质+；尿素；尿素-；KCN-；赖氨酸；赖氨酸+/-；非如左述的各种反应结果非如左述的各种反应结果沙

25、门氏菌血清学试验沙门氏菌血清学试验沙门氏菌血清学试验沙门氏菌血清学试验非沙门氏菌非沙门氏菌非沙门氏菌非沙门氏菌甘露醇甘露醇+、山梨醇、山梨醇+ONPG+报告报告4218-24h374237l 鲜肉、鲜蛋、鲜乳或鲜肉、鲜蛋、鲜乳或其它其它未经加工的食品未经加工的食品不必经过前增菌。不必经过前增菌。l 各取各取25g（25ml）加入灭菌生理）加入灭菌生理盐水盐水225ml，按前法做成，按前法做成检样匀检样匀液液；取；取25ml接种于接种于100ml氯化氯化镁孔雀绿增菌液镁孔雀绿增菌液或或四硫磺酸钠煌四硫磺酸钠煌绿绿增菌液内，于增菌液内，于42培养培养24h24h；另取另取25ml25ml接种于接种

26、于100ml100ml亚硒酸盐亚硒酸盐胱氨酸胱氨酸增菌液内增菌液内，于，于37，培，培养养1818 24h24h。分离分离 取增菌液取增菌液1环，划线接种于一个环，划线接种于一个亚硫酸铋琼脂亚硫酸铋琼脂（BS）和一个）和一个DHLDHL琼脂平板琼脂平板（或（或SSSS琼脂平板琼脂平板）。）。两种增菌液可同时划线接种于同一个平板上。两种增菌液可同时划线接种于同一个平板上。于于37分别培养分别培养1818 24 h24 h或或4040 48 h48 h（BSBS）观察各个平板上生长的菌落特征。观察各个平板上生长的菌落特征。选择性琼脂平板选择性琼脂平板沙门氏菌沙门氏菌、沙门氏菌沙门氏菌（即亚利桑那菌

27、（即亚利桑那菌）亚硫酸铋琼脂亚硫酸铋琼脂产硫化氢菌落产硫化氢菌落为黑色有金属光泽、棕褐色或灰色；为黑色有金属光泽、棕褐色或灰色；有些菌株不产生硫化氢有些菌株不产生硫化氢，形成灰绿色的菌落，形成灰绿色的菌落黑色有金属光泽黑色有金属光泽DHLDHL琼脂平板琼脂平板无色半透明，无色半透明，产硫化氢菌落产硫化氢菌落中心带黑色或几乎全黑中心带黑色或几乎全黑色色乳糖乳糖迟缓阳性迟缓阳性或或阴性阴性的菌株与的菌株与前相同；前相同；乳糖阳性乳糖阳性的菌株为粉红色，中的菌株为粉红色，中心带黑色心带黑色SSSS琼脂琼脂无色半透明，无色半透明，产硫化氢菌株产硫化氢菌株中心带黑色，但不如中心带黑色，但不如以上培养基明

28、显以上培养基明显乳糖迟缓阳性乳糖迟缓阳性或或阴性阴性的菌株与的菌株与前相同；前相同；乳糖阳性的菌株乳糖阳性的菌株为粉红色，中为粉红色，中心带黑色，但中心无黑色形成时心带黑色，但中心无黑色形成时与大肠杆菌不能区别。与大肠杆菌不能区别。沙门氏菌属沙门氏菌属各群各群在选择性琼脂平板在选择性琼脂平板上的菌落特征上的菌落特征生化试验生化试验l自选择性琼脂平板上直接挑取数个可疑菌落，自选择性琼脂平板上直接挑取数个可疑菌落，分别接种分别接种三糖铁三糖铁琼脂。琼脂。l在三糖铁琼脂上，只有在三糖铁琼脂上，只有斜面产酸斜面产酸并同时并同时硫化硫化氢（氢（H H2 2S S）阴性）阴性的菌株可以排除，其他的反应结果

29、的菌株可以排除，其他的反应结果均有沙门氏菌的可能，同时也均有不是沙门氏菌的均有沙门氏菌的可能，同时也均有不是沙门氏菌的可能可能斜面斜面底层底层产气产气硫化氢硫化氢可能的菌属和种可能的菌属和种-+/-+沙门氏菌属沙门氏菌属、费劳地氏柠檬酸杆菌、变形杆菌、费劳地氏柠檬酸杆菌、变形杆菌属、缓慢爱德华氏菌属、缓慢爱德华氏菌+/-+沙门氏菌沙门氏菌、费劳地氏柠檬酸杆菌、普通变形费劳地氏柠檬酸杆菌、普通变形杆菌杆菌-+-沙门氏菌属沙门氏菌属、大肠杆菌、蜂窝哈夫尼亚菌、摩、大肠杆菌、蜂窝哈夫尼亚菌、摩根氏菌、普罗菲登斯菌属根氏菌、普罗菲登斯菌属-+-伤寒沙门氏菌伤寒沙门氏菌、鸡沙门氏菌鸡沙门氏菌、志贺氏菌属

30、、大、志贺氏菌属、大肠杆菌、蜂窝哈夫尼亚菌、摩根氏菌、普罗菲肠杆菌、蜂窝哈夫尼亚菌、摩根氏菌、普罗菲登斯菌属登斯菌属+/-大肠杆菌大肠杆菌、肠杆菌属肠杆菌属、克雷伯氏菌属克雷伯氏菌属、沙雷氏沙雷氏菌属菌属、费劳地氏柠檬酸杆菌费劳地氏柠檬酸杆菌注：注：+阳性；阳性；-阴性；阴性；+/-多数阳性，少数阴性。多数阳性，少数阴性。肠杆菌科各属在肠杆菌科各属在三糖铁琼脂三糖铁琼脂内的反应结果内的反应结果l在接种三糖铁的同时，再接种在接种三糖铁的同时，再接种蛋白胨水蛋白胨水（供（供做做靛基质试验靛基质试验）、）、尿素琼脂尿素琼脂（pH7.2）、）、氰氰化钾培养基化钾培养基（KCN）和）和赖氨酸脱羧酶赖氨酸

31、脱羧酶试验培试验培养基及对照培养基各一管，于养基及对照培养基各一管，于37培养培养18-18-24h24h，必要时可延长至，必要时可延长至48h48h。肠杆菌科各属生化反应初步鉴别表肠杆菌科各属生化反应初步鉴别表反应序号反应序号硫化氢硫化氢靛基质靛基质pH7.2尿素尿素氰化钾氰化钾（KCN）赖氨赖氨酸酸脱脱羧酶羧酶判定菌属判定菌属A1沙门氏菌属沙门氏菌属A2沙门氏菌属（少见）、沙门氏菌属（少见）、缓慢爱德华氏菌缓慢爱德华氏菌B1 沙门氏菌属、大肠埃沙门氏菌属、大肠埃希氏菌、甲型副伤寒希氏菌、甲型副伤寒沙门氏菌、大肠埃希沙门氏菌、大肠埃希氏菌、志贺氏菌属氏菌、志贺氏菌属血清型分型鉴定血清型分型鉴

32、定l 抗原的准备抗原的准备l O抗原的鉴定抗原的鉴定 用用A F多价多价O血清做玻片凝集试验，同时用生理盐水做对血清做玻片凝集试验，同时用生理盐水做对照，在生理盐水中自凝者为粗糙形菌株，不能分型。照，在生理盐水中自凝者为粗糙形菌株，不能分型。l H抗原的鉴定抗原的鉴定l Vi抗原的鉴定抗原的鉴定 须强调的是须强调的是，虽然对沙门氏菌有各种新的分，虽然对沙门氏菌有各种新的分类方案，但通常仍惯用简单的通用命名，即类方案，但通常仍惯用简单的通用命名，即以该菌以该菌所致疾病所致疾病或或最初分离地名最初分离地名、或、或抗原式抗原式三种方式来命名。三种方式来命名。群 别菌 型抗 原OHA甲型副伤寒沙门氏菌

33、1,2,12a:-B乙型副伤寒沙门氏菌鼠伤寒沙门氏菌1,4,5,12b:1,2i：1，2C丙型副伤寒(猪霍乱)沙门氏菌6,7(Vi)c:1,5D伤寒沙门氏菌9,12,(Vi)d:-沙门氏菌的快速筛检方法沙门氏菌的快速筛检方法n 显色培养基法显色培养基法 在选择性培养基的基础上，经进一步改良，使目标菌在此培在选择性培养基的基础上，经进一步改良，使目标菌在此培养基上的菌落显示出一定的颜色，便于识别。代表有养基上的菌落显示出一定的颜色，便于识别。代表有 法国生物梅里埃公司的法国生物梅里埃公司的“SMID”(沙门氏菌为粉红色沙门氏菌为粉红色)法国科玛嘉的法国科玛嘉的“沙门氏菌显色培养基沙门氏菌显色培养

34、基”(沙门氏菌典型菌落为紫色沙门氏菌典型菌落为紫色)。n 免疫学方法免疫学方法酶联免疫吸附检测试验（酶联免疫吸附检测试验（ELISA）荧光抗体检测荧光抗体检测n 分子生物学技术分子生物学技术 DNA探针分析方法探针分析方法 PCR技术技术沙门氏菌引起食物中毒的主要原因沙门氏菌引起食物中毒的主要原因 食物受沙门氏菌污染的机会很多，易受污染的食品种类也食物受沙门氏菌污染的机会很多，易受污染的食品种类也很多，包括牲畜、禽、蛋、奶、鱼、虾、贝类制品等。很多，包括牲畜、禽、蛋、奶、鱼、虾、贝类制品等。在某些情况下，豆制品、水、糕点以及食品加工设施表面在某些情况下，豆制品、水、糕点以及食品加工设施表面也可

35、检出。也可检出。兽医上沙门氏菌最为引起高度重视，食品中沙门氏菌检验兽医上沙门氏菌最为引起高度重视，食品中沙门氏菌检验也显得非常重要。也显得非常重要。沙门氏菌食物中毒的主要临床症状沙门氏菌食物中毒的主要临床症状u 胃肠炎胃肠炎 最为常见最为常见,引起轻型或爆发性腹泻引起轻型或爆发性腹泻,伴有低热伴有低热,恶心和呕吐。恶心和呕吐。u 菌血症菌血症或或败血症败血症 以猪霍乱沙门氏菌感染为多，无明显的胃肠炎症状，以猪霍乱沙门氏菌感染为多，无明显的胃肠炎症状，表现为高热、寒战等。常伴有局部病灶如胆囊炎、骨髓炎等。表现为高热、寒战等。常伴有局部病灶如胆囊炎、骨髓炎等。u 肠热症肠热症 即指即指伤寒伤寒和和

36、副伤寒副伤寒。以伤寒为例，病人在临床上出现发热，。以伤寒为例，病人在临床上出现发热，不适等症状。随后，细菌随血流播散至肝、脾、胆囊、肾和骨髓等实不适等症状。随后，细菌随血流播散至肝、脾、胆囊、肾和骨髓等实质器官中，继续大量繁殖，再次进入血流，引起第二次菌血症。病人质器官中，继续大量繁殖，再次进入血流，引起第二次菌血症。病人出现持续高热、肝脾肿大、皮疹和全身中毒症状。出现持续高热、肝脾肿大、皮疹和全身中毒症状。u 携带者携带者 伤寒沙门氏菌感染过后约伤寒沙门氏菌感染过后约3%3%患者可成为携带者。患者可成为携带者。肥达反应肥达反应（Widal test）n用已知伤寒、副伤寒沙门氏菌的用已知伤寒、副伤寒沙门氏菌的O、H抗原，抗原，检测受检血清中有无相应的抗体的半定量试检测受检血清中有无相应的抗体的半定量试管内凝集试验。管内凝集试验。n本试验与细菌分离培养同时进行或在前者失本试验与细菌分离培养同时进行或在前者失败的情况下，能辅助诊断伤寒、副伤寒败的情况下，能辅助诊断伤寒、副伤寒A，B和和C引起的肠热症。引起的肠热症。