教培用血清蛋白电泳的临床应用课件.ppt

1、血清蛋白电泳的临床应用电泳技术的发展历程1809年发现电泳现象1937年建立了界面电泳技术1948年诺贝尔化学奖1950年后区带电泳从发展到成熟1980年 毛细管电泳技术2001年 sebia首次推出全自动毛细管电泳仪19世纪21世纪sebia蛋白电泳技术的变迁滤纸电泳滤纸电泳醋酸纤维素薄膜电泳醋酸纤维素薄膜电泳凝胶电泳凝胶电泳 琼脂糖凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳临床临床 聚丙烯酰胺凝胶电泳聚丙烯酰胺凝胶电泳科研科研毛细管电泳毛细管电泳电泳技术的革命电泳技术的革命3蛋白电泳技术的临床应用 描绘出蛋白组分的全貌描绘出蛋白组分的全貌 各种体液各种体液 血清、血浆血清、血浆 尿液尿液 脑脊液脑脊液 胸腹水

2、胸腹水 全血全血 临床疾病临床疾病 肝病肝病 肾病肾病 肿瘤肿瘤 心脑血管疾病、代谢病、中枢神经病变、血红蛋白分子病心脑血管疾病、代谢病、中枢神经病变、血红蛋白分子病4Capillarys Electrophoresis Principle正极负极检测器氘光源 200 nm约1万伏高压毛细管(内径25微米）样本进入-+温控装置电泳方向毛细管电泳工作原理毛细管电泳工作原理 +毛细管的内表面是带负电荷当毛细管内部充满缓冲液被活化后，在毛细管内表面的负电荷层上形成了一正电荷层毛细管电泳工作原理毛细管电泳工作原理 +阳极阴极+电渗流作用方向内部充满电泳缓冲液的毛细管带电后，内部充满电泳缓冲液的毛细管带

3、电后，-毛细管内的正电荷层整体向阴极移动毛细管内的正电荷层整体向阴极移动，这种现象称之为电渗流，这种现象称之为电渗流+阳极-阴极+电渗流作用方向电场力作用方向在毛细管内部的正电荷粒子在毛细管内部的正电荷粒子同时到受电渗流和电场力的作用，两种作用力方同时到受电渗流和电场力的作用，两种作用力方向一致向一致快速向负极端迁移快速向负极端迁移+-+阳极-阴极+电渗流作用方向电场力作用方向（负电荷）在毛细管内部的负电荷粒子在毛细管内部的负电荷粒子同时到受电渗流和电场力的作用，两种作用力方同时到受电渗流和电场力的作用，两种作用力方向相反；电渗流向相反；电渗流 电场力电场力向负极端迁移向负极端迁移-+阳极-阴

4、极+电渗流作用方向负电荷电场力作用方向样品进入到毛细管之中的运动样品进入到毛细管之中的运动正电荷电场力作用方向无论是带正电、带负电或不带电的粒子，无论是带正电、带负电或不带电的粒子，都在都在电渗流的作用下，向阴极迁移，带正电的，受到电渗流的作用下，向阴极迁移，带正电的，受到同方向的电场力作用，同方向的电场力作用，迁移最快，不带电的迁迁移最快，不带电的迁移速度次之，带负电的迁移速度最慢，移速度次之，带负电的迁移速度最慢，因为它因为它受到与电渗流反方向的电场力作用。受到与电渗流反方向的电场力作用。优点优点性能特征性能特征减少手工操作减少手工操作全自动全自动,人机分离操作人机分离操作操作简单操作简单

5、,可根据用户需求调整操作模式可根据用户需求调整操作模式提供多种检测项目提供多种检测项目供溯源性供溯源性,减少误差减少误差原管条码识别原管条码识别增加用户满意度增加用户满意度高通量高通量优化的工作流程优化的工作流程持续进样、双向通讯、快捷的数据读取持续进样、双向通讯、快捷的数据读取优化结果优化结果用用200nm 氘光直接检测蛋白，无需染色氘光直接检测蛋白，无需染色简化结果分析简化结果分析高分辨率、高清晰度高分辨率、高清晰度M蛋白检测的高灵敏度蛋白检测的高灵敏度毛细管电泳技术的优势毛细管血清蛋白电泳图谱白蛋白GammaBeta-2Beta-1Alpha-2Alpha-1免疫球蛋白免疫球蛋白C3补体

6、补体-1抗胰蛋白酶抗胰蛋白酶结合珠蛋白结合珠蛋白转铁蛋白转铁蛋白白蛋白白蛋白-1 酸性糖蛋白酸性糖蛋白-2 巨球蛋白巨球蛋白血红素结合蛋白血红素结合蛋白q临床疾病的识别q炎症q肝病q肾病qq“M”蛋白的筛查及定量q对疑似骨髓瘤患者检测单克隆免疫球蛋白q早期检出无症状的骨髓瘤患者q对骨髓瘤疾病进行随访及疗效观察血清蛋白电泳的临床应用1314正常血清蛋白电泳图谱白蛋白GammaBeta-2Beta-1Alpha-2Alpha-1免疫球蛋白免疫球蛋白C3补体补体-1抗胰蛋白酶抗胰蛋白酶结合珠蛋白结合珠蛋白转铁蛋白转铁蛋白白蛋白白蛋白-1 酸性糖蛋白酸性糖蛋白-2 巨球蛋白巨球蛋白血红素结合蛋白血红素

7、结合蛋白电泳图谱电泳图谱-急性炎症急性炎症免疫球蛋白免疫球蛋白C3补体补体-1抗胰蛋白酶抗胰蛋白酶结合珠蛋白结合珠蛋白转铁蛋白转铁蛋白白蛋白白蛋白-1 酸性糖蛋白酸性糖蛋白 -2 巨球蛋白巨球蛋白血红素结合蛋白血红素结合蛋白急性期反应蛋白急性期反应蛋白16电泳图谱电泳图谱-慢性炎症慢性炎症电泳图谱电泳图谱-肝脏肝脏肝脏是血清蛋白合成的主要器官肝脏是血清蛋白合成的主要器官白蛋白GammaBeta-2Beta-1Alpha-2Alpha-1免疫球蛋白免疫球蛋白C3补体补体-1抗胰蛋白酶抗胰蛋白酶结合珠蛋白结合珠蛋白转铁蛋白转铁蛋白白蛋白白蛋白-1 酸性糖蛋白酸性糖蛋白-2 巨球蛋白巨球蛋白血红素结

8、合蛋白血红素结合蛋白电泳图谱电泳图谱-肝病肝病19 beta 2 区：多克隆Ig A gamma 区：多克隆IgG 电泳图谱电泳图谱-肝硬化肝硬化Beta-Gamma 桥20Beta Gamma 桥电泳图谱电泳图谱-肾病肾病22电泳图谱电泳图谱-肾病肾病肾小球滤过屏障损伤 白蛋白流失 低白蛋白 高-2贾晓辉,马彧旻.齐齐哈尔医学院学报.,30(16):Alpha-2巨球蛋白23Alba1a2b1 b2g总蛋白浓度降低(低于 60g/l)-2巨球蛋白脂蛋白低白蛋白电泳图谱电泳图谱-肾病综合征肾病综合征三高一低：高脂蛋白血脂三高一低：高脂蛋白血脂24电泳图谱电泳图谱-肾病综合征肾病综合征性别：男性

9、别：男年龄：年龄：24科室：肾脏内科科室：肾脏内科诊断：肾病综合征诊断：肾病综合征原因原因:免疫缺陷病、免疫抑制剂、游离轻链病电泳图谱电泳图谱-低免疫球蛋白低免疫球蛋白26电泳图谱电泳图谱-高免疫球蛋白高免疫球蛋白原因原因:慢性感染、自身免疫病、慢性肝病、慢性肉芽肿血清蛋白电泳图谱常见类型血清蛋白电泳图谱常见类型图谱类型图谱类型 总蛋白总蛋白Alb 1 2 低蛋白血症低蛋白血症 N N N 急性炎症急性炎症/急性时相反应急性时相反应 NN /N 慢性炎症型慢性炎症型 弥漫性肝损害弥漫性肝损害N 肝硬化肝硬化N N N-桥桥肾病肾病 不定不定 弥漫宽弥漫宽球蛋白血症型球蛋白血症型N M蛋白血症型

10、蛋白血症型 在在2-区出现异常峰区出现异常峰高高2（）球蛋白血症）球蛋白血症 妊娠（高妊娠（高型）型）N N 蛋白质缺陷蛋白质缺陷个别区带出现特征性缺乏个别区带出现特征性缺乏 Gamma globulins(免疫球蛋白区带)免疫球蛋白免疫球蛋白是机体的正常生理成分 多克隆 分类 重链：IgG、IgA、IgD、IgE、IgM 轻链：、10种类型10 种免疫球蛋白种免疫球蛋白IgD LambdaIgE LambdaIgE KappaIgD KappaIgA LambdaIgG KappaIgG LambdaIgM LambdaIgA KappaIgM KappaB淋巴细胞淋巴细胞 转化为浆细胞3

11、浆细胞浆细胞 合成抗体,即免疫球蛋白免疫球蛋白.4浆细胞浆细胞免疫球蛋白免疫球蛋白造血干细胞分化为3类细胞:-红细胞红细胞-粒细胞粒细胞-巨核细胞巨核细胞免疫球蛋白免疫球蛋白 在免疫系统中被用来识别和消灭如细菌或病毒等外源物52骨髓骨髓(颅骨,盆骨,肋骨,胸骨)1免疫球蛋白的合成过程免疫球蛋白的合成过程正常浆细胞多克隆免疫球蛋白 P1 P2 P3 P4 P5正常电泳结果正常电泳结果免疫球蛋白电泳结果免疫球蛋白电泳结果正常 所有浆淋巴细胞同步合成免疫球蛋白=多克隆免疫球蛋白多克隆免疫球蛋白32浆细胞恶性增殖多克隆免疫球蛋白单克隆免疫球蛋白异常电泳结果异常电泳结果M蛋白蛋白免疫球蛋白电泳结果免疫球

12、蛋白电泳结果骨髓瘤33IgG LambdaIgG KappaIgM KappaIgM LambdaIgA LambdaIgA Kappa200 nm34多克隆 Igs单克隆Ig-“M”蛋白正常异常什么是M蛋白n 恶性浆细胞增殖恶性浆细胞增殖n 仅次于白血病（血液肿瘤）仅次于白血病（血液肿瘤）n 发病率发病率n 占所有肿瘤的占所有肿瘤的12%，血液肿瘤的，血液肿瘤的10%n ：白人：白人 4/10万；黑人万；黑人 10/10万万n 欧洲：万欧洲：万n 亚洲：亚洲：12/10万万n 中国：无确切数据中国：无确切数据n 发病年龄发病年龄n 老年病，随年龄老年病，随年龄发病率发病率n 欧美：高峰欧美：

13、高峰 6570岁，中位年龄岁，中位年龄 68岁岁n 中国：高峰中国：高峰 5565岁，中位年龄岁，中位年龄 57岁岁n 男女比例男女比例 男：女男：女=22.5:1多发性骨髓瘤(Multiple Myeloma,MM)多发性骨髓瘤临床表现/并发症CalciumRenalAnemiaBoneCRAB38n骨髓瘤相关器官/组织损伤（ROTI）nCRABp 血清钙升高n 2.8 mmol/L 或 升高以上p 肾功能不全n肌酐 p 贫血n 60%多发性骨髓瘤诊治现状晚晚骨折骨折预后差预后差增加负担增加负担感染发生率高感染发生率高肾脏病变不可逆肾脏病变不可逆死亡率死亡率 46多发性骨髓瘤误诊分析多发性骨

14、髓瘤误诊分析471557例多发性骨髓瘤误诊分析多发性骨髓瘤误诊分析吕鸿雁,张金巧.河北医药.,31(9):1052-54误诊率：误诊率：65.17%重视实验诊断重视实验诊断39.8%15.6%19.8%7.6%15.6%国际骨髓瘤国际骨髓瘤 会会 推荐的推荐的MM蛋白早期筛查流程蛋白早期筛查流程49 多发性骨髓瘤分型M蛋白蛋白骨髓克隆性浆细骨髓克隆性浆细胞胞/浆细胞瘤浆细胞瘤ROTI有症状有症状MM 10%无症状无症状MM(冒烟型冒烟型,SMM)10%意义未明意义未明M蛋蛋病病 MGUS 10%早发现、早诊断、早治疗早发现、早诊断、早治疗早发现、早诊断、早治疗早发现、早诊断、早治疗肿瘤肿瘤 多

15、发性骨髓瘤分型M蛋白蛋白骨髓克隆性浆细骨髓克隆性浆细胞胞/浆细胞瘤浆细胞瘤ROTI有症状有症状MM 10%无症状无症状MM(冒烟型冒烟型,SMM)10%意义未明意义未明M蛋蛋病病 MGUS 200 mg/LGamma区：多克隆区：多克隆Ig，异常峰，异常峰C反应蛋白反应蛋白-CRPAlba1a2b1 b2g-1抗胰蛋白（抗胰蛋白（A1AT）缺乏症）缺乏症Alba1a2b1b2g-1抗胰蛋白（抗胰蛋白（A1AT）杂合子表型）杂合子表型表型I-II表型 I-I表型 II-II 2区：触珠蛋白的不同表型区：触珠蛋白的不同表型寡克隆免疫球蛋白异常的电泳图谱常见于常见于:自身免疫病 类风湿关节炎，干燥综

16、合症，红斑狼疮等)病毒、细菌和寄生虫引起的感染 H.I.V.病毒性肝炎 巨细胞病毒感染 与移植相关的自身免疫反应 免疫抑制治疗寡克隆免疫球蛋白稀释液(380 L)用200nm 氘光直接检测蛋白，无需染色性别：男年龄：24科室：肾脏内科诊断：肾病综合征心、脑脏器微循环障碍，心脑血管病变抗凝血蛋白电泳图谱特征占所有肿瘤的12%，血液肿瘤的10%患者2:血清蛋白电泳图谱聚丙烯酰胺凝胶电泳科研患者4:血清蛋白电泳图谱占所有肿瘤的12%，血液肿瘤的10%双M蛋白病高2（）球蛋白血症IgD型骨髓瘤总蛋白浓度降低(低于 60g/l)8 mmol/L 或 升高以上M蛋白可能类型蛋白可能类型 完整的免疫球蛋白分

17、子 重链 轻链 半分子 IgM单体（7S-IgM）型别型别 例数例数%IgG型骨髓瘤 IgA型骨髓瘤 IgM型骨髓瘤 IgD型骨髓瘤 重链病 轻链病 半分子病 双M蛋白病 上海新华医院,2005年出现异常血清蛋白结果出现异常血清蛋白结果需要免疫分型电泳进一步确认需要免疫分型电泳进一步确认646例例M蛋白类型分类蛋白类型分类免疫分型:检测请求在血清蛋白电泳的程序下:“IT Request”76稀释液(380 L)L K M A G ELP 抗血清/ELP solution(20 L)免疫分型:抗血清稀释杯+上机、分析KLIg GIg AIg MELPIgGX IgAX IgMX IgkIglEL

18、PGAMklDILUENT抗血清参考稀释液免疫分型:全自动化 血清稀释 样本与5种抗血清反应(IgG,IgA,IgM,)在液态环境中,抗原抗体反应非常迅速 无需专门孵育 未加入抗血清的标本,作为参照条带(ELP)毛细管电泳分析稀释液稀释液(380 L)L K M A G ELP 抗血清抗血清/ELP 液液(20 L)对照曲线与反应曲线自动叠加 单克隆免疫球蛋白(M蛋白)的鉴定免疫减法免疫减法 与相应抗血清发生反应后,M蛋白峰消失消失免疫分型:结果分析IgG LambdaIgG KappaIgM KappaIgM LambdaIgA LambdaIgA KappaAnti-KappaIgG La

19、mbdaIgG KappaIgM KappaIgM LambdaIgA LambdaIgA KappaAnti-IgG参考曲线参考曲线加入加入IgG抗血清后电泳曲线抗血清后电泳曲线加入加入IgA抗血清后电泳曲线抗血清后电泳曲线加入加入IgM抗血清后电泳曲线抗血清后电泳曲线加入加入Kappa抗血清后电泳曲线抗血清后电泳曲线加入加入Lambda抗血清后电泳曲线抗血清后电泳曲线 80%IgG 15%IgA 5%IgM2/3 Kappa1/3 LambdaELPGAMKL Ig G Ig A Ig M Kappa LambdaM蛋白类型鉴定：减法申请做申请做 IT患者1:血清蛋白电泳结果图谱M蛋白蛋白

20、Zoom放大放大患者1:免疫分型（IT）检测结果IgG Lambda患者1:免疫分型（IT）结果Gamma区曲线异常区曲线异常患者2:血清蛋白电泳图谱申请做申请做 ITZoom放大放大患者2:免疫分型（IT）结果IgM Kappa患者2:免疫分型（IT）结果Beta 2区异常升高区异常升高患者3:血清蛋白电泳图谱申请做申请做 ITZoom放大放大患者3:免疫分型（IT）检测结果IgA Kappa患者3:免疫分型（IT）检测结果患者4:血清蛋白电泳图谱Beta 1区异常升高区异常升高申请做申请做 IT 何时请求免疫分型何时请求免疫分型(IT)电泳检测电泳检测 如果患者血清蛋白电泳出现的M蛋白需要分型如果出现原因不明的丙种球蛋白偏低，患者有高骨髓瘤风险(根据年龄、性别、患病史、.)如果血清电泳结果正常，但患者有骨髓瘤、轻链沉淀病、淀粉样病变、.等疾病临床症状