检验和临床POCT实验室应用课件.ppt

1、检验与临床检验与临床POCT实验实验室应用室应用检验一般了解1检验科方法简单了解2PCT3CRP4心脏标准物5总结2020/11/32检验科和实验室区别检验科和实验室区别检验科检验科：常规工作常规工作 量大量大 临床要求临床要求快快临床检验工作最基本要求临床检验工作最基本要求及时及时 方便方便 准确准确临床检验人员对仪器及试剂要求临床检验人员对仪器及试剂要求管用管用 好用好用 实用实用实验室：特殊项目实验室：特殊项目 科研为主科研为主 量少量少 检验项目：形态学检验项目：形态学 定性和定量定性和定量 2020/11/33检验报告形式一浓度分析1定性2定量二形态报告1细胞2细菌3管型2020/1

2、1/34一按反应原理分类（定量）一按反应原理分类（定量）1 用化学试剂测定方法叫化学法。如蛋白用化学试剂测定方法叫化学法。如蛋白 钙钙 镁镁2 用酶测定方法叫酶法。如葡萄糖用酶测定方法叫酶法。如葡萄糖 谷丙转氨酶谷丙转氨酶3用抗原抗体反应原理方法叫免疫法。用抗原抗体反应原理方法叫免疫法。HBsAg 4用原子吸收方法叫色谱法。钾用原子吸收方法叫色谱法。钾 钠钠5用电泳分离方法叫电泳法。蛋白电泳用电泳分离方法叫电泳法。蛋白电泳 高压液相色谱高压液相色谱6测定蛋白分子用酶联聚合反应即测定蛋白分子用酶联聚合反应即PCR方法。方法。DNA7生物传感器。血气生物传感器。血气 血糖血糖2020/11/35二

3、按方法敏感性分类二按方法敏感性分类1 超微量法超微量法 微克以下微克以下 皮克皮克 纳克纳克 一般用一般用免疫发光法免疫发光法 激素激素 肿瘤标志物肿瘤标志物 2 微量法微量法 毫克以下毫克以下 微克微克 一般用金标一般用金标法或胶乳法散射法法或胶乳法散射法 RF CRP3 常量法常量法 克以下克以下 毫克毫克 一般用生化一般用生化法法 白蛋白白蛋白 甘油三脂甘油三脂2020/11/36根据反应产物特性分1比色 常用生化测定2比浊 抗原抗体测定3散射 可标记乳胶 4测定光强度 往往标记2020/11/37主要反应方式1液体反应 生化 免疫等成本低 线性宽 灵敏度高 2干式反应 干生化 免疫层析

4、 渗滤法 相对灵敏度低 线性窄 成本高 往往单人份包装2020/11/38标记技术分类标记技术分类1 放射物质标记放射物质标记2 荧光物质标记荧光物质标记3 酶物质标记酶物质标记4 金标记（铁金标记（铁 铜铜 硒）硒）5 发光物标记发光物标记2020/11/39测定方法1决定性方法2参考方法3常规方法123的过程叫正确度传递321的过程叫溯源2020/11/310超微量分析（化学发光）目前按方法形式分类目前按方法形式分类 1 板式发光（包被在板上）板式发光（包被在板上）须洗涤和分须洗涤和分离离 反应手续多反应手续多 反应反应 慢慢2均相发光均相发光 分洗涤和无洗涤二种分洗涤和无洗涤二种 简单简

5、单和反应快和反应快 发光按反应方式：发光按反应方式：干式反应和湿反应干式反应和湿反应 仪器分：仪器分：全自动全自动 半自动半自动 2020/11/311化学发光发光免疫化学发光分：免疫化学发光分：1 酶底物发光（硷性磷酸酶）贝克曼酶底物发光（硷性磷酸酶）贝克曼2 直接发光（丫叮脂）直接发光（丫叮脂）西门子西门子 3电发光（钌）电发光（钌）罗氏罗氏 4时间分辨荧光（铕）时间分辨荧光（铕）德普德普5微粒荧光微粒荧光 透景透景6无须分离直接发光无须分离直接发光 博阳博阳2020/11/312方法学要求1精密度 批内 批间 变异系数CV表示2正确度 和目前公认结果比较 偏差53稳定性好4反应快5抗干扰

6、能力强2020/11/313分析仪器按反应状态分类分析仪器按反应状态分类 1 干式反应干式反应 万孚飞测万孚飞测 金标定量金标定量 2 湿式反应湿式反应 生化仪生化仪 发光仪发光仪 2020/11/314四四 按反应方便程度分类按反应方便程度分类 1 手工法手工法 2 半自动半自动 3 全自动全自动2020/11/315仪器要求1精密度好 CV38C 或90次/每分3呼吸频率20次/每分4白细胞12000/uL或4000/uLSIRS主要由微生物感染所引起，其他非感染如严重缺氧，烧伤、急性胰腺炎等也可以造成。2020/11/328炎症诊断试验1，体温测量2，白细胞计数和分类3，血沉4，血清蛋白

7、电泳5，CRP6，IL-6 IL-82020/11/329PCT在脓毒血症应用 1，区分是否细菌感染，越高感染病情越重 2，肺炎中应用 鉴别细菌性和病毒性 3，全身性真菌感染应用 4，脑膜炎鉴别中应用 5，新生儿感染中应用 2020/11/330PCT监控具有高度感染的患者应用1，重危患者2，大手术后3，器官移植2020/11/331PCT在疗效观察中应用1，脓毒症2，多器官衰竭3，休克4，感染后手术治疗2020/11/332CRP1肝脏合成，结构五聚体 是一种急性时相反应蛋白。2特点：本地很低，当受到刺激时（一般6小时）迅速升高可达1000倍。3临床应用普遍。2020/11/333CRP与P

8、CT的应用比较CRP:炎症过程的筛选 6小时后上升2天达高峰 CRP高提示病变存在。PCT：诊断和监测细菌性疾病感染一个参数 是严重细菌性和真菌感染特异性标志。也是脓毒症和炎症活动有关多脏器衰竭的可靠指标。患者好转PCT比CRP反应快，而CRP有较长时间才下降。2020/11/334CRP和PCT的比较相同：都是急性时相反应蛋白CRP是临床运用特点是炎症指标，在感染性炎症和非感染性炎症，组织损伤、局部和全身的轻度 中度 重度的感染和各种轻中度损伤中应用。PCT运用在严重细菌感染及脓毒血症 2020/11/335CRP和PCT的比较PCT指标在细菌感染方面相对特异CRP指标相对特异性差在病毒感染

9、中PCT不升高，CRP会轻中度升高，在细菌感染中CRP呈现一般中度以上升高，持续时间长，PCT只有在严重细菌感染时才会升高，治疗好转就下降。2020/11/336检测项目主要临床意义临床意义：共性有二点 1，诊断和鉴别诊断 2，疗效观察PCT临床意义 PCT作为急性时相反应蛋白（APR)一种，一般认为在持续毒素刺激下，68小时开始升高2020/11/337CRP临床意义1主要用于各种损伤、感染、治疗等观察。2超敏CRP主要用于心血管疾病。BNP 主要用于慢性心衰的评估肌钙蛋白主要用于心肌损伤及梗死2020/11/338PCT临床意义总结PCT只有在严重细菌、真菌、寄生虫感染及脓毒症和多脏器功能

10、衰竭时测定才有意义。在自身免疫、过敏和病毒感染时不升高。因此PCT在细菌性疾病鉴别、监控细菌性感染及病程预后估计等方面有意义。2020/11/339检验科发展方向临床检验发展基本要求：围绕临床检验发展基本要求：围绕 及时及时 方便方便 准确方针准确方针1 整个检验科全自动整个检验科全自动2 POCT（即时检验）（即时检验）3系统化系统化 优点优点 溯源性溯源性 不准确度不准确度4 信息化信息化2020/11/340提高内涵、把握方向、持续进步提高内涵、把握方向、持续进步1做企业或公司：诱惑多做企业或公司：诱惑多 最重要不是选择而是放最重要不是选择而是放弃弃 得到空间更大得到空间更大 坚信基本判

11、断坚信基本判断 项目项目找对找对 成功一大半成功一大半2生存法则：守住底线、创造空间生存法则：守住底线、创造空间3确定方向：想做什么？能做什么？确定方向：想做什么？能做什么？4市场要什么：不是你有我有。而是排他性即唯市场要什么：不是你有我有。而是排他性即唯 一性一性5社会需要什么：可靠、放心、方便、环保社会需要什么：可靠、放心、方便、环保 最好创造新产业最好创造新产业2020/11/341目前市场上哪些品牌可以真正实现一步法加样？PCT/心标等：明德、乐普、基蛋（金标半定量）CRP：迪倍思（金标半定量，加样后需补加缓冲液），其他品牌均需要加样前稀释/预处理2020/11/342国赛CRP-散射

12、比浊法操作步骤：2020/11/343禾柏CRP-散射比浊法2020/11/344艾克美CRP-荧光免疫法2020/11/345奥普CRP-金标法2020/11/346凯创CRP-金标法2020/11/347热景CRP-上转发光法2020/11/348检验科需要项目和方法 检测简单方便 检测快速，成本低，高的特异性和敏感性 能够反映疾病的严重程度 早期准确诊断 反映预后和治疗的疗效全自动 信息化2020/11/349荧光免疫法干式(POCT)国内代表万孚2020/11/350特点：专一激发光及双抗体保证高特异性；信号级联放大保证高灵敏度p光路特异（专一激发光和吸收光），吸收光背景干净，光信号特

13、异性高p荧光微球共价标记：偶联效率高，级联放大荧光信号，灵敏度高，量程大p夹心法：免疫反应特异性较高2020/11/351常见免疫学检测方法方法学/免疫学 标记物 检测方法 代表厂家举例 POCT 荧光定量 荧光免疫层析 双抗体夹心法 异硫氰酸荧光素 荧光强度 万孚、艾克美 时间分辨免疫层析双抗体夹心法 镧系元素时间分辨测量荧光雷度微流控双抗体夹心法荧光素 荧光强度博适、微点比浊法抗原抗体一步法/orion、国赛、禾柏 金标法双抗体夹心法胶体金 胶体金颗粒颜色 奥普、凯创、瑞莱上转发光双抗体夹心法UCP（稀土颗粒）发光强度热景2020/11/352总结检验主要检测有方法检验趋势POCT检验方法类型及要求检验的临床意义2020/11/353 谢谢2020/11/354人有了知识，就会具备各种分析能力，明辨是非的能力。所以我们要勤恳读书，广泛阅读，古人说“书中自有黄金屋。”通过阅读科技书籍，我们能丰富知识，培养逻辑思维能力；通过阅读文学作品，我们能提高文学鉴赏水平，培养文学情趣；通过阅读报刊，我们能增长见识，扩大自己的知识面。有许多书籍还能培养我们的道德情操，给我们巨大的精神力量，鼓舞我们前进。