临床输血学实验讲解课件.ppt

1、Testing Specimen Requirement2ml EDTA whole blood Fill in the tube label(s)with name 临床输血学实验临床输血学实验Transfusion Medicine(blood transfusion laboratories)上海市第六人民医院上海市第六人民医院Shanghai Sixth People Hospital 输血科输血科Transfusion DepartmentHistoryAncient times 敬畏血液敬畏血液-生命的源泉生命的源泉-饮血疗饮血疗法法The period 1500-1800 治疗精

2、神病治疗精神病 血液有毒血液有毒 放血疗法放血疗法-人体血液循环，为输血奠定基础人体血液循环，为输血奠定基础-血液血液的携氧功能，合理治疗手段的携氧功能，合理治疗手段The discovery of blood groups 血型之父血型之父-Landsteiner人类血型的发现，为安全输人类血型的发现，为安全输血提供重要保证。血提供重要保证。而且，在遗传学、人类学、而且，在遗传学、人类学、法医学、免疫学、部分疾病法医学、免疫学、部分疾病的发病机制探讨上也具有重的发病机制探讨上也具有重要意义。要意义。While blood cell antigens:Red cell antigensHLA

3、antigensGranulocytes-specific antigensPlatelets（22）Part oneRed blood cell group目的要求：目的要求：掌握掌握ABO血型的鉴定血型的鉴定 熟悉熟悉Rh血型的鉴定血型的鉴定 ABO SYSTEMPrinciple of procedure红细胞上具有红细胞上具有A抗原者为抗原者为A型型-Red blood cells possess A blood group antigens有有B抗原者为抗原者为B型型-Red blood cells possess B blood group antigensA和和B抗原都没有者为抗

4、原都没有者为O型型-Red blood cells lack A and B blood group antigensA和和B抗原都有者为抗原都有者为AB型型-Red blood cells possess A and B blood group antigensRh SYSTEMThe most complex in the red cells antigenIndividuals who possess the D antigen are Rh positive,who lack it are Rh negative.The D antigen is capable of stimulat

5、ing production of Anti-D in persons lacking the D antigen.Anti-D is a clinically significant antibody capable of causing RBC destruction and may result in hemolytic disease of the newborn and transfusion reaction.已发现的抗原已发现的抗原40多个。多个。涉及临床主要是涉及临床主要是5个抗原：个抗原：C、c、D、E、e及其相应的特异性抗体。及其相应的特异性抗体。Four other an

6、tigens(C、c、E、e)account for almost all of the Rh-related transfusion problems.They are less antigenic than D,and/or the antibodies are less clinically dangerous.But they can cause the transfusion reaction.Materials RequiredCentrifuge0.9%salinepipetterreagents:The monoclonal antibody(IgM)include Anti-

7、A 、Anti-B、Anti-D 5%Standard RBC-AffirmagenMethodsSolid phase adherence testTube testGel testManualSemi-automated systemAutomated systemPROCEDURESpecimen collection and preparationRed blood cell suspensions(4%RBC)can be prepared using the following combinations of saline and packed red blood cells:Sa

8、line Volume-2mlPacked RBC Volume-100ul被检者被检者RBC用生理盐水配成用生理盐水配成2-5%悬液待用悬液待用(2ml 0.9%NS+100ul 压积红细胞）压积红细胞）TEST PROCEDURE-tube test正定型正定型：取小试管三只，分别用记号笔标记后加抗取小试管三只，分别用记号笔标记后加抗A A、抗抗B B、抗抗D D血清各一滴，然后加受检者血清各一滴，然后加受检者RBCRBC悬液悬液一滴。一滴。blood grouping Add one drop of Anti-A、Anti-B、Anti-D to three tubes separate

9、lyAdd one drop of a 2-5%RBC suspension to three tubes separatelyTEST PROCEDURE反定型反定型：取小试管三只，分别用记号笔标记后加受检取小试管三只，分别用记号笔标记后加受检者血清一滴，然后加标准者血清一滴，然后加标准A A、B B及及O O型型RBCRBC各一滴各一滴。reverse groupingreverse groupingAdd one drop of serum/plasma to three tubes separatelyAdd one drop of 5%standard RBC to three tu

10、bes separately将上述混匀后静置数分钟或将上述混匀后静置数分钟或30003000r/mr/m离心离心1515s s肉眼判肉眼判断凝集度。断凝集度。Shake gently to mix contents of reaction tubes.Centrifuge six tubes with 3000r/s,15m.Shake gently with 45-60 angles.Evaluate six tubes for agglutination and/or hemolysis upon test completion.Record the reaction strength o

11、n the paper.4+一个结实的大凝块，背景清楚。一个结实的大凝块，背景清楚。3+数个数个结实的凝块，背景清楚。结实的凝块，背景清楚。2+中等大小的凝块加小凝块，背景清楚。中等大小的凝块加小凝块，背景清楚。1+小凝块，背景较浑浊。小凝块，背景较浑浊。+或或W+细胞有微小凝块，背景红色浑浊，通常细胞有微小凝块，背景红色浑浊，通常用显微镜观察。用显微镜观察。MF混合外观凝集，少数红细胞形成较大的混合外观凝集，少数红细胞形成较大的凝集块，而周围是游离的红细胞。凝集块，而周围是游离的红细胞。0(negative)阴性，红细胞呈游离状态，无凝集象阴性，红细胞呈游离状态，无凝集象H(hemolysi

12、s)溶血，有游离血红蛋白。溶血，有游离血红蛋白。Evaluate the agglutination strengthEvaluate the agglutination strengthAnti-AAnti-AAnti-BAnti-BAnti-DAnti-DAcAcBcBcOcOcgrouping+A A RhD RhD positive+B B RhD RhD positive+O O RhD RhD positive+AB AB RhD RhD positiveInterpretation of results Grouping anomaliesCold auto-antibodies

13、Acquired BUnexpected mixed field reactionsPartial or weak DD negativeIntrauterine transfusionsRhD negative verification Reagents:three different Anti-D human(IgG)monoclonal antibody MethodIndirect antiglobulin test(IAT)Gene test Indirect antiglobulin testIncubating the donors red cells with the Rh t

14、yping seraWashing the cells three timesAdding AHGCentrifuging the mixtureObserving it for agglutinationO有一种表现自己的性格,行动受感情左右,喜欢政治,好胜心强,对立斗争有戒心与喜欢交友并存,能看清形势,很注意别人对自己的好恶.有信念和理想.率直,具有现时与罗曼蒂克双重性.言行带有夸张性，讲话带有教育人和教训人的语气A内心想法不愿为人所知.对别人情绪及环境变化有敏锐反应,但对别人的想法缺乏客观理解.思想行动慎重而有规律,个性内向,没个性谨小慎微固步自封,遵从常理,重视家庭,富于计划性.擅长以

15、说服和说明的调子讲话B开放型对人缺乏戒心,情绪善变,活动力强,不原受约束,行动奔放光明正大反复无常,富于灵活性,欢热闹场合.固执己见,善于批评,先下结论后作说明AB善于待人接物,很注意合情合理,期望在社会上施展能力,注意别人对自己的感情,厌恶表里不一.个性中庸,富有实践精神计划性强不喜欢指手划脚容易疲劳.表情不丰富,正式场合讲话呆板,回避感情激烈的讲话或事件The relationship between ABO group and personality OABAB ABO group and amativenessfemalemalePart twoRed cell compatibili

16、ty testing-Crossmatch 目的要求：目的要求：掌握交叉配血试验的原理掌握交叉配血试验的原理 熟悉交叉配血试验的操作熟悉交叉配血试验的操作 CROSSMATCHING The crossmatch is defined as a procedure to exclude incompatibility between donor and recipient.Crossmatching will pick up incompatibilities between the donor and recipient that will not be evident on blood t

17、yping(as blood typing is not available against every blood group,just the major ones).In addition,the crossmatch procedure will not pick up low titer antibodies and thus will not prevent delayed-type hemolytic transfusion reactions Immediate spin crossmatch主侧配血主侧配血-Major crossmatch(most important)-c

18、omparing donor eryghrocytes to recipient serum antibodies in recipient serum against donor erythrocytes.次侧次侧配血配血-Minor crossmatch This compares donor serum to recipient erythrocytes and checks for preformed antibodies in donor serum that could hemolyse recipient red cellsChoice of techniques盐水介质盐水介质

19、-saline酶介质酶介质-enzyme+liss抗球蛋白介质抗球蛋白介质-IAT Crossmatch procedure Major crossmatch:Add 1d of 5%suspension of donor RBCs and 1d recipient plasma/serum into the tube取受血者血清取受血者血清1-2滴滴+献血员献血员2-5%红细胞盐水悬红细胞盐水悬液液1滴滴Minor crossmatchAdd 1d of 5%suspension of recipient RBCs and 1d donor plasma/serum into the tub

20、e,取受血者取受血者2-5%红细胞盐水悬液红细胞盐水悬液1滴滴+献血员血献血员血清清1-2滴滴将上述混匀后静置数分钟或将上述混匀后静置数分钟或30003000r/mr/m离心离心1515s s肉眼判断凝集度。肉眼判断凝集度。Centrifuge six tubes with 3000r/s,15m.Shake softly with 45-60 angles.Evaluate two tubes for agglutination under the microscope.ResultWhen there is an incompatible reaction on the major cro

21、ssmatch,the donor blood should not be transfusion under any circumstances.When there is an incompatible reaction on the minor crossmatch,the transfusion can go ahead.However,if the donated serum is likely to contribute substantially to the plasma volume of the recipient,the serum should be removed f

22、rom the donor whole blood.Selection of bloodRed cell components-the same ABO and RhD group as the patient If ABO identical blood is not available-group O RBC+group AB plasmaIf RhD-negative blood are limited-RhD positive blood may be selected Patient with clinically significant red cell antibodyPatie

23、nt with autoimmune haemolytic anaemiaMassive blood transfusionPart threeCoombstest目的要求：目的要求：掌握直接、间接抗人球蛋白试验掌握直接、间接抗人球蛋白试验的原理的原理熟悉直接、间接抗人球蛋白试验熟悉直接、间接抗人球蛋白试验的操的操了解直接、间接抗人球蛋白试验了解直接、间接抗人球蛋白试验的临床应用的临床应用 一、抗人球蛋白试验的原理一、抗人球蛋白试验的原理 倘若用提纯的或在人的全血倘若用提纯的或在人的全血清内的人的球蛋白给动物（如兔清内的人的球蛋白给动物（如兔和山羊）注射，动物对外来的蛋和山羊）注射，动物对外来

24、的蛋白质将会产生抗体，即抗人球蛋白质将会产生抗体，即抗人球蛋白。白。抗人球蛋白血清，在适当抗人球蛋白血清，在适当处理之后将会与人球蛋白发生特处理之后将会与人球蛋白发生特异性反应。如果球蛋白分子，或异性反应。如果球蛋白分子，或者抗体或补体附着于红细胞膜上者抗体或补体附着于红细胞膜上，抗球蛋白血清将会与球蛋白结，抗球蛋白血清将会与球蛋白结合。因为球蛋白附着于红细胞上合。因为球蛋白附着于红细胞上，抗球蛋白血清与球蛋白分子的，抗球蛋白血清与球蛋白分子的结合就引起红细胞凝集反之，将结合就引起红细胞凝集反之，将不会被凝集。不会被凝集。直接抗球蛋白试验直接抗球蛋白试验证实体内被致敏的红细胞。证实体内被致敏的

25、红细胞。洗涤后的患者红细胞可直接洗涤后的患者红细胞可直接进行抗人球蛋白血清检查进行抗人球蛋白血清检查。间接抗球蛋白试验间接抗球蛋白试验证实体外被红细胞的致敏证实体外被红细胞的致敏。血清与红细胞孵育，然血清与红细胞孵育，然后用生理盐水洗涤红细后用生理盐水洗涤红细胞以除去未结合到红细胞以除去未结合到红细胞上多余的抗体。若加胞上多余的抗体。若加入抗人球蛋白血清导致入抗人球蛋白血清导致的红细胞凝集，可证明的红细胞凝集，可证明是红细胞表面具有与血是红细胞表面具有与血清中的抗体相同特异性清中的抗体相同特异性的表面抗原。的表面抗原。意义：意义：检查受检红细胞是否在体内已检查受检红细胞是否在体内已被抗体或补体

26、致敏。被抗体或补体致敏。用于：用于：新生儿溶血病新生儿溶血病溶血性输血反应溶血性输血反应自身免疫溶血性贫血自身免疫溶血性贫血药物诱导溶血性贫血药物诱导溶血性贫血二、操作二、操作 1、直接抗球蛋白试验操作、直接抗球蛋白试验操作 取一试管放一滴受检者血液，用生取一试管放一滴受检者血液，用生理盐洗涤理盐洗涤3-43-4次，末次洗涤后，配成次，末次洗涤后，配成2-5%2-5%RBCRBC悬液待用。悬液待用。取一试管放取一试管放1-21-2滴多价抗人球蛋白血滴多价抗人球蛋白血清（清（IgG+CIgG+C3 3），），再加待用再加待用RBCRBC一滴一滴混混匀，匀，30003000r/min/min 离心

27、离心 1515s。持一定的角度轻轻地摇动持一定的角度轻轻地摇动试管直到松动试管底细胞试管直到松动试管底细胞。倘若观察到均匀的细胞。倘若观察到均匀的细胞悬液为阴性；有凝集物为悬液为阴性；有凝集物为阳性。阳性。（4）抗抗IgG阳性对照同（阳性对照同（2）、）、抗抗C3阳性对照细胞（一份阳性对照细胞（一份ACD抗凝抗凝血血+九份九份10%蔗糖，蔗糖，37。C 15m，洗三洗三次，次，37。C水浴水浴30m，配成配成2-5%红细红细胞悬液）阴性对照用正常人胞悬液）阴性对照用正常人“O”型型红细胞。红细胞。2、间接抗球蛋白试验间接抗球蛋白试验意义：检查受检者血清中有否有意义：检查受检者血清中有否有红细胞

28、的不规则抗体，适用于抗红细胞的不规则抗体，适用于抗体筛查和鉴定及交叉配合试验等。体筛查和鉴定及交叉配合试验等。反反应应物物 被被检检管管 阳阳性性对对照照 阴阴性性对对照照 血血清清 2滴滴 5%RBC 1滴滴 5%D阳阳性性细细胞胞 1滴滴 1滴滴 IgG抗抗D血血清清 2滴滴 AB型型血血清清 2滴滴 混混匀匀，置置37。C水水浴浴半半小小时时每每管管用用充充分分的的盐盐水水至至少少洗洗涤涤三三次次。末末次次离离心心后后必必须须尽尽量量弃弃去去上上清清液液。抗抗球球蛋蛋白白血血清清 2滴滴 2滴滴 2滴滴 （2）上述试管中血清于红细胞上述试管中血清于红细胞混匀，离心（混匀，离心（3000r/min 15s）倘倘若阳性对照管呈现凝集，阴性对若阳性对照管呈现凝集，阴性对照管呈现不凝集，受检管出现凝照管呈现不凝集，受检管出现凝集为阳性，不凝集则为阴性。集为阳性，不凝集则为阴性。谢谢谢谢