诊断-血液学一般检查课件.ppt

1、2022年10月21日星期五诊断诊断血液学一般检血液学一般检查查1.1.血红蛋白测定血红蛋白测定-氰化高铁血红蛋白（氰化高铁血红蛋白（HiCNHiCN）测定法）测定法 n该法具有操作简便，结果稳定可靠，试剂容易保该法具有操作简便，结果稳定可靠，试剂容易保存等优点，被国际血液学标准化委员会存等优点，被国际血液学标准化委员会(ICSH)(ICSH)推推荐为参考方法，为我国测定血红蛋白首选方法。荐为参考方法，为我国测定血红蛋白首选方法。实实 验验 一一血液在血红蛋白转化液中溶血后，血红蛋白血液在血红蛋白转化液中溶血后，血红蛋白被高铁氰化钾被高铁氰化钾KK3 3Fe(CN)Fe(CN)6 6 氧化为高

2、铁血红蛋白氧化为高铁血红蛋白（HiHi），后者与氰离子（），后者与氰离子（CNCN-）结合生成稳定）结合生成稳定的棕红色氰化高铁血红蛋白（的棕红色氰化高铁血红蛋白（HiCNHiCN）。在特定）。在特定波长（波长（540nm540nm）和光径（比色杯内径）和光径（比色杯内径1.0cm1.0cm）条）条件下具有一定的吸光度，通过用标准液制备的件下具有一定的吸光度，通过用标准液制备的标准曲线，可求出血红蛋白浓度来。标准曲线，可求出血红蛋白浓度来。原原 理理HbHb HiHi+CNCN-HiCNHiCNK K3 3Fe(CN)Fe(CN)6 6实实 验验 一一试剂试剂血红蛋白转化液（文齐氏液）：血红蛋

3、白转化液（文齐氏液）：氰化钾（氰化钾（KCNKCN）0.05g 0.05g高铁氰化钾高铁氰化钾KK3 3Fe(CN)Fe(CN)6 6 0.20g 0.20g无水磷酸二氢钾（无水磷酸二氢钾（KHKH2 2POPO4 4）0.14g 0.14gTriton X100 1.0mlTriton X100 1.0ml蒸馏水蒸馏水 加至加至1000ml1000ml器材器材1.1.血红蛋白吸管，血红蛋白吸管，5ml5ml吸管吸管2.2.大试管大试管3.7213.721分光光度计分光光度计上述试剂为淡黄上述试剂为淡黄色溶液，贮存于棕色溶液，贮存于棕色瓶中室温保存，色瓶中室温保存，其中非离子表面活其中非离子表

4、面活性剂可加速溶血，性剂可加速溶血，缩短转化时间，防缩短转化时间，防止因血浆蛋白改变止因血浆蛋白改变引起的混浊引起的混浊标本来源标本来源EDTA-KEDTA-K2 2抗凝全血或抗凝全血或毛细血管采血毛细血管采血实实 验验 一一 操作操作 1.1.取血红蛋白转化液取血红蛋白转化液5.0ml5.0ml加入大加入大试管中。试管中。2.2.用血红蛋白吸管吸取全血用血红蛋白吸管吸取全血20l20l，轻拭管尖外余血，并准确调节血柱轻拭管尖外余血，并准确调节血柱液面至液面至20l20l。加入到准备好的血红。加入到准备好的血红蛋白转化液底部，并用上清液吸、蛋白转化液底部，并用上清液吸、吐两次洗净血红蛋白吸管内

5、残余血吐两次洗净血红蛋白吸管内残余血液，充分混匀，静置液，充分混匀，静置5 5分钟。分钟。实实 验验 一一3.3.于于722722分光光度计上以转化液为分光光度计上以转化液为空白进行比色测定，波长空白进行比色测定，波长540nm,540nm,光光径径1.0cm1.0cm。4.4.通过标准曲线间接求出血液中通过标准曲线间接求出血液中HbHb的含量的含量实实 验验 一一q将将HiCNHiCN标准液倍比稀释（如标准液倍比稀释（如50g/L50g/L、100g/L100g/L、150g/L150g/L、200g/L200g/L）后）后,在所用的分光光度计上在所用的分光光度计上540nm540nm处，光

6、径处，光径1.0cm1.0cm，以转化液为空白测定各稀释度的吸光度。以标准品血红以转化液为空白测定各稀释度的吸光度。以标准品血红蛋白含量为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线蛋白含量为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线,或求出换算常数或求出换算常数K(K=Hb/A)K(K=Hb/A)。则通过待测标本吸光度。则通过待测标本吸光度值查标准曲线或用值查标准曲线或用K K值计算血红蛋白浓度（值计算血红蛋白浓度（Hb=KHb=KA A）。）。附附HiCNHiCN标准曲线绘制和标准曲线绘制和K K值计算：值计算：实实 验验 一一 参考值参考值 成年男性：成年男性：（120120160160）g/Lg

7、/L成年女性：成年女性：（110110150150）g/Lg/L新生儿：新生儿：（170170200200）g/Lg/L 注意事项注意事项 1.1.试剂因含氰化钾，虽浓度较低，但在配制、保存、试剂因含氰化钾，虽浓度较低，但在配制、保存、使用中需妥善。使用中需妥善。2.2.标准曲线或标准曲线或K K值，应定期检查、校准。值，应定期检查、校准。报告方式报告方式 HbHb：_g/L_g/L实实 验验 一一2.2.白细胞计数白细胞计数 原理原理 血液用白细胞稀释液（血液用白细胞稀释液（2%2%醋酸溶液）稀释，使红细醋酸溶液）稀释，使红细胞溶解，白细胞形态更加清晰后，充入血细胞计数胞溶解，白细胞形态更加

8、清晰后，充入血细胞计数池，于显微镜下计数一定体积内的白细胞数，经换池，于显微镜下计数一定体积内的白细胞数，经换算求出每升血液中的白细胞数量算求出每升血液中的白细胞数量 实实 验验 一一1.1.血细胞计数板，盖玻片血细胞计数板，盖玻片2.2.血红蛋白吸管（具有血红蛋白吸管（具有10l10l及及20l20l刻度）刻度）3.1ml3.1ml吸管，小试管，玻棒吸管，小试管，玻棒4.4.光学显微镜光学显微镜 器材器材 实实 验验 一一 试剂试剂 白细胞稀释液：冰醋酸白细胞稀释液：冰醋酸 2ml 2ml1%1%龙胆紫龙胆紫 1ml 1ml或结晶紫数滴或结晶紫数滴蒸馏水加至蒸馏水加至 100ml 100ml

9、 标本来源标本来源 EDTA-KEDTA-K2 2抗凝全血或毛细血管采血抗凝全血或毛细血管采血实实 验验 一一1.1.加稀释液加稀释液：取白细胞稀释液：取白细胞稀释液0.38ml0.38ml于一干净小试管中。于一干净小试管中。2.2.加血加血：用血红蛋白吸管取全血（指血或：用血红蛋白吸管取全血（指血或EDTA-KEDTA-K2 2抗凝血）抗凝血）20l20l，轻拭，轻拭管尖外余血，准确调节血液液面至管尖外余血，准确调节血液液面至20l20l处，将血红蛋白吸管插入白处，将血红蛋白吸管插入白细胞稀释液中（即小试管底部），迅速将血液放出，并用上清液吸细胞稀释液中（即小试管底部），迅速将血液放出，并用

10、上清液吸吐两次洗净血红蛋白吸管内残余血液。吐两次洗净血红蛋白吸管内残余血液。3.3.溶血溶血：轻轻混匀后室温静置，待液体变为棕褐色，即红细胞被完全：轻轻混匀后室温静置，待液体变为棕褐色，即红细胞被完全破坏。破坏。4.4.冲池冲池：用微量吸管或玻棒取适量混匀的白细胞悬液充入血细胞计数：用微量吸管或玻棒取适量混匀的白细胞悬液充入血细胞计数池（一次充好，液体不可外溢，不可有气泡，否则擦净重充），室池（一次充好，液体不可外溢，不可有气泡，否则擦净重充），室温水平静置温水平静置2 23 3分钟，待细胞下沉后显微镜下计数。分钟，待细胞下沉后显微镜下计数。5.5.计数计数：将血细胞计数盘放在显微镜载物台上，

11、低倍镜下计数：将血细胞计数盘放在显微镜载物台上，低倍镜下计数四角四角4 4个个大方格内大方格内白细胞总数。（压线细胞计数原则：数上不数下，数左不白细胞总数。（压线细胞计数原则：数上不数下，数左不数右）数右）操作操作 实实 验验 一一6.6.计算计算：白细胞：白细胞/L=(N/4)/L=(N/4)101010106 620=(N/20)20=(N/20)10109 9式中式中N N表示四个大方格内数得的白细胞总表示四个大方格内数得的白细胞总数。数。/4:/4:为平均每个大方格（为平均每个大方格（0.1mm0.1mm3 3）稀释液内）稀释液内 WBC WBC数。数。1010：将一个大方格白细胞数换

12、算为：将一个大方格白细胞数换算为1l1l 内的白细胞数。内的白细胞数。10106 6：1L=101L=106 6ll。2020：为血液稀释倍数。：为血液稀释倍数。白白白白白白白白白细胞计数区白细胞计数区实实 验验 一一计数池构造计数池构造实实 验验 一一低倍镜下的计数池大方格结构低倍镜下的计数池大方格结构实实 验验 一一低倍镜下的白细胞形态（低倍镜下的白细胞形态（10X1010X10）实实 验验 一一白细胞计数操作步骤白细胞计数操作步骤实实 验验 一一 报告方式报告方式 白细胞数（白细胞数（WBCWBC）：）：_10109 9/L/L 参考值参考值 成人：成人：（4 41010）10109 9

13、/L/L新生儿：（新生儿：（15152020）10109 9/L/L实实 验验 一一1.1.采血及计数室充液注意事项采血及计数室充液注意事项:n毛细血管采血部位的皮肤必须正常，凡局部有水肿、发炎、紫绀毛细血管采血部位的皮肤必须正常，凡局部有水肿、发炎、紫绀或冻疮等均不可穿刺采血。或冻疮等均不可穿刺采血。n穿刺必须足够深，使血液自行流出或轻施压力即可流出。穿刺必须足够深，使血液自行流出或轻施压力即可流出。nEDTA-KEDTA-K2 2抗凝全血使用前需混匀。抗凝全血使用前需混匀。n计数盘和盖玻片在使用前需用稠布或纱布擦拭干净。计数盘和盖玻片在使用前需用稠布或纱布擦拭干净。n血红蛋白吸管内腔一定要

14、干燥，否则会影响吸血量及导致溶血。血红蛋白吸管内腔一定要干燥，否则会影响吸血量及导致溶血。n毛细血管采血动作必须迅速否则常易凝固，若作血红蛋白和红细毛细血管采血动作必须迅速否则常易凝固，若作血红蛋白和红细胞计数两项时，应先取红细胞计数标本，后作血红蛋白测定。胞计数两项时，应先取红细胞计数标本，后作血红蛋白测定。n手指血红细胞与静脉采血有差异且影响因素多，条件允许时应尽手指血红细胞与静脉采血有差异且影响因素多，条件允许时应尽量静脉采血。量静脉采血。注意事项注意事项 实实 验验 一一2 2一定要在稀释液转为棕褐色后方能充池计数，否则因一定要在稀释液转为棕褐色后方能充池计数，否则因RBCRBC残存而干扰计数使结果偏高。残存而干扰计数使结果偏高。3 3白细胞稀释液不能破坏有核红细胞，某些病理情况下白细胞稀释液不能破坏有核红细胞，某些病理情况下外周血出现大量有核红细胞，可使白细胞计数结果偏外周血出现大量有核红细胞，可使白细胞计数结果偏高，应进行校正。高，应进行校正。校正公式：校正公式：WBC=AWBC=A100/(100+B)100/(100+B)其中其中A:A:校正前校正前WBCWBC数；数；B:B:分类计数分类计数100100个个WBCWBC时遇到的有时遇到的有核核RBCRBC数。数。实实 验验 一一