三体综合征产前诊断满分课件.ppt

1、儿儿不不正正常，常，前前来来进进行行遗遗传传咨咨询。询。经经询询问问得得知，知，张张某某的的一一表表姐姐曾曾生生育育一一智智力力低低下下儿儿子，子，经经某某医医院院诊诊断断为为先先天天愚愚型，型，但但具具体体核核型型不不详。详。张张某某孕孕前前检检查查各各项项优优生生指指标标均均正正常，常，孕孕前前无无感感冒冒服服药药史，史，无无有有毒毒有有害害物物质质接接触触史。史。张张某某的的丈丈夫，夫，32岁，岁，司司机，机，有有烟烟酒酒嗜嗜好，好，在在妻妻子子怀怀孕孕前前半半年年已已戒戒酒，酒，减减少少吸吸烟烟量。量。两两人人核核型型检检查查均均正正常，常，家家族族中中其其他他特特殊殊疾疾病病患患者。

2、者。根根据据张张某某的的情情况，况，作作中中孕孕期期唐唐氏氏筛筛查查，结结果果张张某某血血清清的的AFP,hCG和和uE3检检查查结结果果阳阳性性，再再进进行行B超超检检查查胎胎儿儿情情况，况，证证实实胎胎儿儿胎胎龄龄正正确，确，发发育育正正常。常。根根据据上上述述资资料，料，张张某某所所孕孕胎胎儿儿具具有有21三三体体综综合合症症的的高高风风险险，建建议议进进行行产产前前诊诊断断。孕妇就诊孕妇就诊 常规筛查常规筛查综合分析风险值综合分析风险值孕期检查孕期检查进一步确诊进一步确诊羊膜穿刺羊膜穿刺产前诊断产前诊断定义对象方法产前通过遗传学检测和影像学检查，对高风险胎儿进行明确诊断，通过对患胎的选

3、择性流产达到胎儿选择的目的，从而降低出生缺陷率，提高优生质量和人口素质。产前诊断又称宫内诊断。它是为了了解胎儿在子宫内的健康情况，有无先天性畸形或遗传病，用某些特殊检查方法在子宫内对胎儿进行诊断，以便及早采取措施避免残疾儿的出生，提高出生人口的素质，是有生学的重要组成部分。产前诊断产前诊断定义对象方法儿儿不不正正常，常，前前来来进进行行遗遗传传咨咨询。询。经经询询问问得得知，知，张张某某的的一一表表姐姐曾曾生生育育一一智智力力低低下下儿儿子，子，经经某某医医院院诊诊断断为为先先天天愚愚型，型，但但具具体体核核型型不不详。详。张张某某孕孕前前检检查查各各项项优优生生指指标标均均正正常，常，孕孕前

4、前无无感感冒冒服服药药史，史，无无有有毒毒有有害害物物质质接接触触史。史。张张某某的的丈丈夫，夫，32岁，岁，司司机，机，有有烟烟酒酒嗜嗜好，好，在在妻妻子子怀怀孕孕前前半半年年已已戒戒酒，酒，减减少少吸吸烟烟量。量。两两人人核核型型检检查查均均正正常，常，家家族族中中其其他他特特殊殊疾疾病病患患者。者。根根据据张张某某的的情情况，况，作作中中孕孕期期唐唐氏氏筛筛查查，结结果果张张某某血血清清的的AFP,hCG和和uE3检检查查结结果果阳阳性性，再再进进行行B超超检检查查胎胎儿儿情情况，况，证证实实胎胎儿儿胎胎龄龄正正确，确，发发育育正正常。常。根根据据上上述述资资料，料，张张某某所所孕孕胎胎

5、儿儿具具有有21三三体体综综合合症症的的高高风风险险，建建议议进进行行产产前前诊诊断断。产前诊断产前诊断定义对象方法产前诊断产前诊断定义对象方法通过对21三体综合征的诊断设计，培养运用遗传学现代技术解决医学实际问题的能力。二、二、实实细胞，通过羊膜穿刺获取羊水中的胎儿细胞，经体外培养后通过G显带实验进行核型分析，判断染色体是否畸形，诊断是否患有21三体综合征。染料染色后，使染色体显带的技术。Giemsa染料是由噻嗪和曙红组成的，着色时DNA先于2个噻嗪分子结合，然后再与一个曙红分子结合，形成沉淀物，而DNA的某些部位对染料不敏感，由此形成明暗相间的条带。温箱，载玻片，盖玻片，恒温水浴锅，光学显

6、微镜，标本板，玻璃铅笔，定时钟，染色缸，直柄虹膜镊，滴管。（2）药品：pH6.8 PBS，Giemsa，0.025%胰蛋白酶（取0.9%氯化钠100ml，加0.25%胰蛋白酶1ml）。四、四、实实四、四、实实细细胞胞体体l无菌离心管内，1500r/min常温离心10min，移去上清，留约0.5ml上清液，枪尖混匀，分装吸取至3个60mm培养皿（falcon），每皿添加4ml羊水完全培养基，37 5%CO2培养箱中培养6-7d。四、四、实实制制有若干梭形型细胞克隆生长，每个克隆细胞状态较好且形成细胞岛，更换新鲜培养液，每天观察，2-3d后，每个细胞岛已长成一个个较大克隆且细胞融合度达70%-80

7、%，并出现数目不等的较多圆形，类圆形透亮细胞时，可进行细胞收获，收获前一天或当天更换培养液，加入秋水仙素，终浓度为0.1微克每毫升，作用4-4.5h,镜下观察有大量“鱼眼样”透明细胞出现时，即可收获。吸取培养上清至一新离心管，加入0.25%胰酶，37消化2min，1000r/min离心10min，弃上清，加入0.075 mol/L KCl 低渗液，3712-13min，用3:1甲醇/冰醋酸预固定和固定后，滴片，常规G显带。四、四、实实显显75烤箱中烤片3h。2、放入预温至37的0.025%胰酶溶液中（pH=7.27.4）消化1min左右，每次的作用时间并不完全相同，可先试一张片子，再根据显带效

8、果调整胰酶作用时间。显显10min，自来水冲洗干净，晾干后，即可阅片。4、镜检：在显微镜高倍目镜下检查显带标本，在染色体上若出现清晰的深浅相间的带型，即为可取标本，可供摄像分析四、四、实实结果判断结果判断纯合型嵌合型易位型结结果果2.5%，患儿体细胞染色体有47条，有一条额外的21号染色体，核型为47，XX（或XY）+21。其发生机制为亲代（多为母亲）的生殖细胞在减数分裂时染色体不分离所致。核核型型结果判断结果判断纯合型嵌合型易位型结结果果2.5%-5%，是指受精卵在有丝分裂期间染色体不分离而导致的，因此只是部分而不是所有的细胞存在缺陷。患儿体内含有正常和21-三体细胞二种细胞株，形成嵌合体，

9、核型为46，XX（或XY）/47，XX（或XY）+21，其临床表现随正常细胞所占百分比而定。嵌合型的患儿的智商较其它两型高，临床并发症的发生率也相对较少。结果判断结果判断纯合型嵌合型易位型核核型型结结果果5%，多为罗伯逊易位，即着丝粒融合，其额外的21号染色体长臂易位到另一近端着丝粒染色体上。最常见为D/G易位，D组中以14号染色体为主，核型为46，XX（或XY）-14，+t（14q;21q），少数为15号染色体。另一种为G/G易位，是由于G 组中两个21号染色体发生着丝粒融合，形成等臂染色体，核型为46，XX（或XY）-21，+t（21q；21q）。易位型有所不同。一般规律是标本存放时间越长，在胰蛋白酶当中处理时间越长。太新鲜的标本，染色体会出现毛茸现象。片龄很长的标本往往会导致斑点状的染色体。（2）胰蛋白酶温度：温度越高，反应的速度就越快，一般是室温，但温度必须稳定至少20min。（3）胰蛋白酶处理的时间：如果细胞呈紫蓝色，说明胰蛋白酶的作用时间不够，如果细胞呈桃红色，说明作用时间刚好。thank you