几种鱼类血液指标及不同器官消化酶活性比较教材课件.ppt

1、几种鱼类血液指标及不同器官几种鱼类血液指标及不同器官消化酶活性比较消化酶活性比较引言n鱼类消化酶主要有蛋白酶，脂肪酶和淀粉酶等几种，鱼类消化酶的活性随种类，生长阶段和健康状况的不同而有差异，同时受水体温度，盐度，无机离子以及饲料等因素的影响，鱼类消化酶研究可用于指导筛选饲料配方，开发新的饲料源和确立适宜养殖条件。n而鱼类的血液指标则包括血液生理指标和血液生化指标，生理指标包含红细胞数目，白细胞数目，血沉降值；血液生化指标包含血糖，血脂，血胆固醇。正常血液指标值能反映物种的属性和动物的生理状态。鱼类血液与其代谢、营养及健康状况有着密切的联系。一一.血样及酶液制备血样及酶液制备n血样制备：尾静脉采

2、血，将血液分装于2支不同的离心管内，一支用肝素抗凝，4保存，用于血液生理指标测定；另一支不加抗凝剂，血液在室温凝结2h后，4，2000r/min离心10min。取上清于-80保存，用于血液生化指标测定。n酶液制备：将4种鱼置冰盘脊椎处死，取出胃、肝脏、肠等，剔除内容物及结缔组织，用预冷去离子水冲洗干净，于4下剪碎。按样品重的5倍加入PH7.0的冷冻去离子水，玻璃匀浆器匀浆，匀浆液4下以3000rpm/min的速率离心30分钟，收集上清液为消化酶粗酶提取液，置于4冰箱中保存，24h内检测酶活力。二二.血液指标的测定血液指标的测定 n血液生理指标测定：n1.红细胞计数n2.白细胞计数n3.红细胞沉

3、降率n4.红细胞比容n血液生化指标测定：n1.血糖：邻甲苯胺法；n2.血清总脂：香草醛比色法；n3.血清胆固醇：邻苯二甲醛法。（试剂盒）三三.消化酶指标测定消化酶指标测定n1.蛋白酶活力测定对照管测定管适当稀释酶溶液/1ml去离子水1ml/37水浴预热35分钟0.5酪素（预热过）2ml2ml37水浴准确反应15分钟10%三氯乙酸3ml3ml离心去除沉淀取上清液于另外试管内1ml1ml0.55M碳酸钠5ml5ml福林试剂1ml1mln蛋白酶活力单位定义：在37下每分钟水解0.5%酪素产生1g酪氨酸为一个酶活力单位U。n蛋白酶的活力单位=A/15FnA为样品测得光密度查曲线得到相应酪氨酸的g数；F

4、为酶液最终稀释倍数；15为反应时间（min）。n2.淀粉酶活力测定对照管测定管0.04%可溶性淀粉5ml5ml将两管在37水浴预热25分钟酶液/0.1ml测定管混匀后，再置37水浴中反应7.5分钟0.01N碘应用液5ml5mln淀粉酶活力单位定义：在37、30min内，100ml酶液中的淀粉酶能完全水解淀粉10mg称为一个淀粉酶活力单位。n淀粉酶活力单位/100ml=（对照管光密度-测定管光密度）/对照管光密度2/1030/7.5100/1=（对照管光密度-测定管光密度）/对照管光密度80n3.脂肪酶活力测定n 将分光光度计于420nm处以Tris缓冲液调零，1cm光径玻璃比色皿；然后将底物缓

5、冲液在37预温5min以上。往相应编号试管中加入0.05ml新鲜血清，再用5ml加样器吸取4ml预温的底物缓冲液冲入试管中，迅速用冰箱保鲜膜盖住管口，立即颠倒混合5次。然后迅速倒入比色皿中在420nm处比浊，读取吸光度值（A1）。再将此比色液倒入原试管中置37准确水浴10min，再用上法比色读取吸光度值（A2）。最后取底物缓冲液4ml加0.9%氯化钠50L，420nm比浊，读取吸光度值（As）。n脂肪酶活力计算方法：U=（A1-A2）/As*3632(单位U/L)nAs=0.681四四.结果探讨结果探讨n1.鱼类食性对消化酶的影响鱼类食性对消化酶的影响n 鱼类的食性一般分为肉食性、草食性和杂食

6、性，它与消化器官组织结构和消化机能是相适应的，消化器官组织结构不同，所承担的消化机能不同，因而消化酶活性也呈明显差异。n 一般肉食性鱼类的消化道短，蛋白酶活性强，草食性鱼类的消化道长，淀粉酶活性强。n 蛋白酶活性从高到低顺序为：肉食性鱼类杂食性鱼类滤食性鱼类草食性鱼类；鱼类淀粉酶活性也明显与食性相关。n 有什么样的食性，就有什么样消化酶的组成状况，而且消化酶活力大小变化程度与食物组成的变化程度是相关的，这正是鱼类对本身生态环境的一种适应。n2.鱼类自身生长阶段对消化酶的影响鱼类自身生长阶段对消化酶的影响n 随鱼体的生长，鱼需要营养成分的质与量也随之变化。消化器官随着生长相对增大，内分泌机能增强

7、，从而使消化酶也随之相适应而变化。因而，由于季节不同、环境水温变化，鱼类表现出不同的生长速度。n3.血液生理指标n 鱼类血液性状指标的高低与鱼类活动性及食性有关，活动性强的鱼类高于活动性弱的鱼类，肉食性鱼类高于草食性鱼类，草食性鱼类高于杂食性鱼类。n血液生化指标n 本试验对四种鱼类血液的一些有机化学成分，如血糖、血总脂、血胆固醇等进行了初步的测定，结果可以作为它们正常生理常数参考值，而且这些指标观测值的变化指示了它们对环境改变的反应。五五.实验反思实验反思n1.实验材料比较单一n 实验只选取了4种常见的肉食性经济鱼类作为研究对象，由于肉食性鱼类食物组成相似，导致实验数据差别不大，可比性不太强。n2.实验目的比较简单n 实验只是简单测定了4种鱼类的血液指标和消化酶指标，可以适当增加一些实验条件，比如增加不同PH或温度梯度下鱼类的消化酶指标，也可以增加不同饲料对鱼类消化酶的影响。六六.感言感言n 大学四年时光一晃就要过去了，四年的大学生活也给我留下了许多的美好回忆，而这篇论文的完结我需要感谢的人实在是太多了，首先是我的指导老师齐老师，他一直关心着我论文的写作进展，并且给我提出了许多重要的建议，然后还有我的王瑞师兄，是他在百忙中数次帮我修改论文，最后我还要感谢四年来教过我的恩师们，是你们把我从一个幼稚的高中生转变为现在的一名合格的大学生。