母婴阻断知识培训课件.ppt

1、艾滋病病毒在外界的抵抗力nHIV病毒一旦离开宿主细胞在外界环境中生存能力很快消失nHIV对环境中的物理因素和化学因素抵抗力均较弱，比乙型肝炎病毒（HBV）的抵抗力低得多n对HBV有效得消毒和灭活 方法均适用于HIV1.母亲因素n血浆HIV载量越高,母婴传播的危险性越大nCD+4T细胞计数下降,增加HIV母婴传播的概率n有AIDS症状是HIV母婴传播的危险因素之一2.分娩因素n随胎膜破裂时间延长,母婴传播的危险增加。n经产道分娩者母婴传播高于剖宫产。n胎盘早剥、羊膜腔穿刺、分娩时会阴撕裂时母婴传播的危险增加。3.哺乳因素（4月龄感染率是3.8%,24月龄时为179%)HIV母婴传播的危险因素母婴

2、传播的危险因素HIV感染孕妇母婴阻断的干预措施1.提供孕前及孕期的 检测咨询nHIV感染妇女,建议暂缓结婚nHIV阳性的孕妇自愿终止妊娠（主要阻断方式）n对要求继续妊娠的孕妇提供免费的抗病毒治疗和孕期保健咨询（药物治疗+产科干预+人工喂养）HIV感染孕妇母婴阻断的干预措施2.提供适宜的安全助产服务 尽量避免会阴侧切、人工破膜、胎头吸引器或产钳助产等，剖宫产为目前最佳的分娩方式，终止妊娠的最佳时间为38周3.提供科学的婴儿喂养咨询、指导(人工喂养）4.为 感染孕产妇所生儿童提供随访与艾滋病检测 满1、3、6、9、12和18月龄随访。HIV感染孕妇母婴阻断的用药方案预防性抗病毒用药方案：n临床期或

3、期，CD4+T淋巴细胞计数350/mm3治疗性抗病毒用药方案：n临床期或期，CD4+T淋巴细胞计数350/mm3 1.齐多夫定(AZT)nAZT是最早、最广泛用于预防HIV母婴传播的抗病毒药物,属于核苷类抗逆转录酶抑制剂。2.奈韦拉平(NVP)nNVP是孕晚期使用得最普遍的非核苷逆转录酶抑制剂,主要在分娩前使用。n3.拉米夫定(3TC)n联合疗法可更久地抑制病毒复制,减少病毒负荷量,延迟病毒耐药性的出现。预防性抗病毒药物1.孕期和分娩时：从妊娠14周或14周后尽早服用（其中一种）n齐多夫定（AZT）300mg+拉米夫定（3TC）150mg+洛匹那韦/利托那韦（克力芝）（LPV/r）400/10

4、0mg，每天2次；直至分娩结束。nAZT300mg+3TC150mg，每天2次，依非韦伦（EFV）600mg，每天1次，直至分娩结束。2.分娩后：人工喂养：停用抗病毒药物n母乳喂养，持续应用抗病毒药物至停止母乳喂养后1周。预防性抗病毒药物1.奈韦拉平（NVP）方案:至出生后46周n体重2500g，服NVP 15mg（即混悬液1.5ml），QDn25002000g，服NVP 10mg（即混悬液1.0ml），QD；至出生后46周n2000g，服NVP 2mg/kg（即混悬液0.2ml/kg），QD；至出生后46周2.齐多夫定（AZT）方案:至出生后46周n体重2500g，服AZT 15mg（即混悬

5、液1.5ml），BIDn25002000g，服AZT 10mg（即混悬液1.0ml），BIDn2000g，服AZT 2mg/kg（即混悬液0.2ml/kg），BID 孕期没有接受HIV检测，临产时才发现 感染的孕产妇1.选择人工喂养者。（1）产妇：服用单剂量NVP 200mg及AZT 300mg+3TC 150mg，BID，至分娩结束；产后继续服用AZT 300mg+3TC 150mg，BID，连续服用7天。（2）婴儿：出生后尽早（612小时内）服用单剂量NVP 2mg/kg（即混悬液0.2ml/kg），同时服用AZT 4mg/kg（即混悬液0.4ml/kg），BID，至出生后46周。或服用N

6、VP至出生后46周：体重2500g，服用NVP 15mg（即混悬液1.5ml），QD；体重25002000g，服用NVP 10mg（即混悬液1.0ml），QD；体重2000g，服用NVP 2mg/kg（即混悬液0.2ml/kg），QD；。孕期没有接受HIV检测，临产时才发现 感染的孕产妇2.选择母乳喂养者：任选一种。产妇：服用AZT+3TC+LPV/r或AZT+3TC+EFV（用法及剂量同上），至停止母乳喂养后1周。婴儿：出生后尽早（612小时内）服用NVP，每天1次，至出生后6周（用量同前）。（对于产后才发现的感染产妇，产妇可暂不用抗病毒药物，婴儿采用此方案）。治疗性抗病毒药物应用孕产妇治疗

7、性应用抗病毒药物：n尽早开始服用AZT 300mg+3TC 150mg，每天2次，EFV 600mg，每天1次；n或者CD4+T淋巴细胞计数250/mm3时，还可以选择尽早服用AZT 300mg+3TC 150mg+NVP 200mg，每天2次。婴儿应用抗病毒药物：同前n梅毒在我国死灰复燃！梅毒在我国死灰复燃！n我国政府庄严承偌：消除先天梅毒！我国政府庄严承偌：消除先天梅毒！孕妇筛查梅毒的重要意义孕妇筛查梅毒的重要意义n梅毒定义：由苍白密螺旋体引起的慢性全身性性传播梅毒定义：由苍白密螺旋体引起的慢性全身性性传播疾病。可通过胎盘传给下代。乙类传染病。疾病。可通过胎盘传给下代。乙类传染病。n发病率

8、高：发病率高：约约90%90%为潜伏梅毒，易忽视，有传染，只为潜伏梅毒，易忽视，有传染，只能通过筛查发现。能通过筛查发现。n危害大：危害大：n早期梅毒早期梅毒100%100%感染胎儿感染胎儿n妊娠各期都可感染胎儿妊娠各期都可感染胎儿n治疗有效：早期梅毒治愈率达治疗有效：早期梅毒治愈率达95%95%以上以上生物学特性生物学特性n病原体：苍白螺旋体，抵抗力低：人体外存活力仅病原体：苍白螺旋体，抵抗力低：人体外存活力仅1-1-2 2小时，耐低温，不耐干燥，对肥皂水和常用消毒剂小时，耐低温，不耐干燥，对肥皂水和常用消毒剂敏感。敏感。n免疫性差免疫性差 ：无先天和后天的免疫力，可重复感染无先天和后天的免

9、疫力，可重复感染n储存宿主：人是唯一储存宿主：人是唯一n感染途径：直接感染、间接感染、垂直感染感染途径：直接感染、间接感染、垂直感染n分类：获得性梅毒、先天性梅毒。分类：获得性梅毒、先天性梅毒。梅毒的典型临床分期梅毒的典型临床分期 早期梅毒早期梅毒 晚期梅毒晚期梅毒 潜伏梅毒潜伏梅毒 先天梅毒先天梅毒n期：（硬下疳期）期：（硬下疳期）n期：皮肤粘膜损害期：皮肤粘膜损害（感染后（感染后2 2月月-2-2年）年）n期（晚期）：病期期（晚期）：病期2 2年以上，各器官系年以上，各器官系统永久性受损统永久性受损梅毒的诊断方法n诊断：流行病学史、临床表现、实验室检查n血清学诊断：常用n梅毒螺旋体抗原血清

10、试验确诊实验强调：对所有孕妇的早期筛查！强调：对所有孕妇的早期筛查！初筛：梅毒抗体初筛：梅毒抗体+梅毒确诊实验：梅毒确诊实验：TPPA，RPR梅毒的诊断梅毒血清学试验的结果解释梅毒血清学试验的结果解释RPRRPRTPPATPPA意义意义+-RPRRPR假阳性假阳性+现症梅毒，部分晚期梅毒现症梅毒，部分晚期梅毒-+极早期梅毒，或以往感染过梅毒，或极早期梅毒，或以往感染过梅毒，或早期梅毒治愈后早期梅毒治愈后-排除梅毒感染排除梅毒感染为梅毒感染孕产妇提供干预措施1.为梅毒感染孕妇提供规范治疗。n对于孕早期发现的梅毒感染孕妇，应当在孕早期与孕晚期各提供1个疗程的抗梅毒治疗；n对于孕中、晚期发现的感染孕

11、妇，应当立刻给予2个疗程的抗梅毒治疗，2个治疗疗程之间需间隔4周以上（最少间隔2周），第2个疗程应当在孕晚期进行。n对临产时发现的梅毒感染产妇也应当立即给予治疗。2.提供适宜的安全助产服务（减少在分娩过程中新生儿感染梅毒）。梅毒感染孕产妇治疗方案梅毒感染孕产妇治疗方案 推荐方案。1.普鲁卡因青霉素G，80万单位/日，肌内注射，连续15日；2.苄星青霉素240万单位，分两侧臀部肌内注射，每周1次，共3次。替代方案。n若没有青霉素，可用头孢曲松，1克/日，肌内注射或静脉给药，连续10 天；n青霉素过敏者：可用红霉素治疗（禁用四环素、多西环素），红霉素500mg，每日4次，口服，连服15天。为梅毒感

12、染孕产妇所生儿童提供干预措施1.新生儿预防性治疗n对孕期未接受规范性治疗（包括孕期未接受全程、足量的青霉素治疗，接受非青霉素方案治疗或在分娩前1个月内才进行抗梅毒治疗）的孕产妇所生儿童进行预防性治疗；n对出生时非梅毒螺旋体抗原血清学试验阳性、滴度不高于母亲分娩前滴度的4倍且没有临床表现的儿童也需要进行预防性治疗。为梅毒感染孕产妇所生儿童提供干预措施2.先天梅毒n对出生时非梅毒螺旋体抗原血清学试验阳性且滴度高于母亲分娩前滴度的4倍，或暗视野显微镜检测到梅毒螺旋体，或梅毒螺旋体IgM抗体检测阳性的儿童诊断为先天梅毒。梅毒感染孕产妇所生新生儿治疗方案梅毒感染孕产妇所生新生儿治疗方案 出生后应用苄星青

13、霉素G，5万单位/公斤体重，分双臀肌肉注射。先天梅毒患儿的治疗方案 脑脊液正常者。n苄星青霉素G，5万单位/公斤，1次注射（分两侧臀肌）。脑脊液异常者。n水剂青霉素G，每日5万单位/公斤，分2次静脉滴注，连续1014天；n或普鲁卡因青霉素G，每日5万单位/公斤，肌注，连续1014天。n如无条件检查脑脊液者，可按脑脊液异常者治疗。孕妇梅毒所生婴儿的随访：孕妇梅毒所生婴儿的随访：1 1、经过充分治疗的梅毒孕妇所生婴儿：、经过充分治疗的梅毒孕妇所生婴儿：（1 1）出生时血清反应阳性：）出生时血清反应阳性：n未超过母亲的血清滴度未超过母亲的血清滴度应每月复查应每月复查1 1次；次；n8 8个月时如呈阴

14、性且无临床表现个月时如呈阴性且无临床表现可停止观察。可停止观察。（2 2）出生时血清反应阴性：）出生时血清反应阴性：n应于出生后应于出生后1 1、2 2、3 3及及6 6个月复查，至个月复查，至6 6个月时仍阴个月时仍阴性，且无先天梅毒的临床表现，可除外梅毒。性，且无先天梅毒的临床表现，可除外梅毒。产妇的随访：产妇的随访：n梅毒经充分治疗后，应随访梅毒经充分治疗后，应随访3 3年：年：n第一年：每第一年：每3 3个月复查一次个月复查一次n第二年：每半年复查一次第二年：每半年复查一次n第三年：复查一次第三年：复查一次n神经梅毒：神经梅毒：n随访随访CSFCSF，每半年一次，直至，每半年一次，直至

15、CSFCSF正常正常产妇的随访（续）产妇的随访（续）n如疗后如疗后6 6个月内血清抗体滴度下降个月内血清抗体滴度下降4 4倍：倍：n原因：治疗失败、再感染、神经梅毒或合并原因：治疗失败、再感染、神经梅毒或合并HIVHIV感染感染n处理：加倍剂量重新治疗，作脑脊液检查处理：加倍剂量重新治疗，作脑脊液检查n血清抗体转阴时间：血清抗体转阴时间：n一期：一期：1 1年以内年以内n二期：二期：2 2年以内年以内n少数晚期梅毒：可持续在低滴度少数晚期梅毒：可持续在低滴度3 3年以上年以上性伴的治疗与随访性伴的治疗与随访n性伴应检查与治疗：性伴应检查与治疗：n不能到医院检查的性伴，可进行流行病学治疗；不能到

16、医院检查的性伴，可进行流行病学治疗；n治疗后禁止性生活治疗后禁止性生活2 2周。周。n性伴追踪的时间：性伴追踪的时间：n一期梅毒：一期梅毒：3 3个月个月n二期梅毒：二期梅毒：6 6个月个月n早期潜伏：早期潜伏：12241224个月个月梅毒患者的婚育指导：梅毒患者的婚育指导：n凡确诊为梅毒者应暂缓结婚，正规治疗后临床凡确诊为梅毒者应暂缓结婚，正规治疗后临床治愈或治愈或RPRRPR滴度下降滴度下降4 4倍以上可结婚，但倍以上可结婚，但RPRRPR应转应转阴才能生育阴才能生育n患者在确诊为早期梅毒前患者在确诊为早期梅毒前3 3个月内，与之有性接个月内，与之有性接触者，虽触者，虽RPRRPR阴性，应

17、给予预防性治疗阴性，应给予预防性治疗n充分咨询，特别是胎儿的去留应知情选择充分咨询，特别是胎儿的去留应知情选择乙肝病毒流行概况n中国卫生部2008年调查结果：n1992年 9.75%2006年7.18%nWHO2001指出：母亲围产期传染新生儿nHBeAg 阳性者：70%-90%nHBeAg 阴性HBsAg阳性：5-20%乙肝的母婴传播途径及影响因素n母婴传播途径：n宫内感染n产时感染n产后感染n影响因素n母亲HBV感染状态：HBV DNAn先兆流产保胎史作用机理n乙肝疫苗系主动免疫，产生保护性抗体持续时间长，并有记忆性免疫反应。可终身受益。nHBIG系被动免疫，产生的保护性抗体持续时间短，无

18、记忆性免疫反应。主要针对HBV产时传播及填补乙肝疫苗的早期空白。HBsAg阴性母亲新生儿的免疫n对HBsAg阴性母亲的新生儿可用5g重组酵母或10gCHO 乙型肝炎疫苗免疫;n对新生儿时期未接种乙型肝炎疫苗的儿童应进行补种为乙肝表面抗原阳性孕产妇及所生儿童提供干预措施n对于乙肝表面抗原阳性孕产妇：n医务人员应当详细了解其肝炎病史及治疗情况n密切监测肝脏功能n给予科学的营养支持和指导。n对乙肝表面抗原阳性孕产妇所生新生儿：n在出生后12-24小时内及1月龄注射乙肝免疫球蛋白（100 IU）n乙肝疫苗（10g重组酵母乙肝疫苗或20g中国仓鼠卵母细胞乙肝疫苗）三次：24小时内、1月龄、6月龄乙肝患者

19、是否母乳喂养？n拉米夫定已被归为哺乳期安全程度为L2(比较安全)等级的药物。n迄今各种乙肝治疗指南中均很少提及HBV感染的妊娠及哺乳期妇女用药的安全问题。n需要抗病毒治疗的HBV感染哺乳期妇女需要母乳喂养婴儿时，可以选择拉米夫定治疗。分娩方式对母婴传播的影响n避免羊膜腔穿刺,并缩短分娩时间,保证胎盘的完整性，尽量减少新生儿暴露于母血的机会nHBsAg和HBeAg双阳性孕妇所分娩的婴儿,经主被动免疫后,阴道分娩与剖宫产手术分娩两种分娩方式对母婴阻断效果无影响。孕期HBIG是否应用：观点不同观点一：接种HBIG对孕妇健康不利，可能引起病毒变异，并且大量免疫复合物沉着会引起肝外表现。观点二：从怀孕第

20、28周起开始每4周注射HBIG 200 IU次至分娩明显预防胎儿乙肝病毒的宫内感染。观点三：孕末期用HBIG 200IU隔4w连用3次的方法对阻断乙肝病毒的宫内感染效果不显著。观点四：HBsAg和HBeAg双阳性宫内感染率较高,有必要加大HBIG的用量400IU，可基本阻断HBV垂直传播。观点五：母亲血乙肝病毒含量103拷贝/ml,孕期可不注射HBIG,新生儿出生后接受联合免疫即可。父亲父亲HBsAgHBsAg（)是否需阻断父婴传播是否需阻断父婴传播?n父婴传播率1525n男方乙肝病毒检测HBsAg（），妻子为无乙肝感染病史者阻断方法：n孕前女方用HBVac主动免疫致抗HBs（）后自然妊娠,从

21、怀孕第28周起开始每4周注射HBIG 200 IU次至分娩。n父为乙型肝炎病毒携带者，如新生儿生后检测HBsAg（)需要注射乙肝免疫球蛋白，否则不需要。n不推荐为HCV 感染母亲所生婴儿在出生时常规检测HCV抗体,(因为其可从母体被动获得抗体而有较高的阳性率。)可在年龄满18 个月后检测HCV抗体。n母亲为HCV感染者的婴儿如果想早期诊断可以考虑在12个月时检测HCV-RNA。n217岁的HCV感染者应是合适的治疗候选者(与成人采用相同的候选标准)。n儿童的治疗方案是聚乙二醇干扰素-2b每周1次,每次60 g/,联合利巴韦林每日15 mg/kg,疗程48周。HCVHCV母婴阻断母婴阻断预防职业

22、暴露的措施进行可能接触病人血液、体液的诊疗和护理工作时,必须佩戴手套。操作完毕脱去手套后,应立即洗手。在进行有可能发生血液、体液飞溅的诊疗和护理操作过程中，医务人员除需佩戴手套和口罩外，还应带防护眼镜，必要时还应穿隔离服。医务人员在进行接触病人血液、体液的诊疗和护理操作时,若手部皮肤存在破损时,必须戴双层手套。使用后的锐器应当直接放入利器盒内或毁型器内，抽血时建议使用真空采血器，并应用蝶型采血针。n禁止对使用后的一次性针头复帽。n禁止用手直接接触使用过的针头、刀片等锐器。意外暴露后的处理：用肥皂液和流动清水清洗被污染局部污染眼部等粘膜时,应用大量生理盐水反复对粘膜进行冲洗存在伤口时应轻柔挤压伤

23、处,尽可能挤出血液,再用肥皂液和流动清水冲洗伤口用75%乙醇或0.5%碘伏对伤口局部进行消毒、包扎处理 意外暴露后的处理血清学检测：应立即检测HBsAg、抗-HBs、ALT等，并在3和6个月内复查处理：主动和被动免疫。如已接种过乙型肝炎疫苗,且已知抗-HBs10 mU/mL者,可不进行特殊处理。如未接种过乙型肝炎疫苗,或虽接种过乙型肝炎疫苗,但抗-HBs10 mU/mL或抗-HBs水平不详,应立即注射HBIG 200400 U,并同时接种乙型肝炎疫苗(20g),此后于1个月、6个月分别接种乙型肝炎疫苗(各20g)乙肝意外暴露后的处理n危险程度的评估n局部处理n抗逆转录病毒治疗（ART）n基本用

24、药方案：首选AZT+3TC组合，服用28日n强化用药方案：首选AZT+3TC+IDV，服用28日n开始时间尽量在2h内，最好不超过24h，即使超过24h也建议预防用药。nHIV感染监测：立即、4周、8周、12周和6个月检测HIV抗体，有条件的监测HIV P24抗原和HIV RNAn职业暴露后登记及上报HIV 综合性实验综合性实验 植物体内植物体内过氧化物酶活性测定过氧化物酶活性测定及及同工酶电泳同工酶电泳过氧化物酶活性测定过氧化物酶活性测定一、原理一、原理 1.过氧化物酶过氧化物酶perox idase,POD：广泛存在于各种动物、植物和微生物 体内。催化由过氧化氢参与的各种还原剂的氧化反应:

25、RH2+H2O22H2O+R 2.POD 分子结构特点：分子结构特点：POD 是一种由单一肽链与卟啉构成的血红素蛋白,脱 辅基蛋白分子须与血红素结合才构成全酶。3.POD的主要生理功能：的主要生理功能：参与活性氧代谢过程；参与活性氧代谢过程；参与木质素和木栓质的合成；参与木质素和木栓质的合成；参与生长素的降解。参与生长素的降解。二、实验材料与试剂二、实验材料与试剂 1.1.材料材料：玉米幼苗 2.2.试剂：试剂：0.1mol/L 磷酸缓冲液（pH6.0）；0.1mol/L 磷酸缓冲液（pH7.0）愈创木酚；H2O2三、实验步骤三、实验步骤 1.提取酶液：取样品1.0g，加入2ml的0.05mo

26、l/L pH5.5的磷酸缓冲液，冰浴研 磨，10000rpm，4离心后取上清，即为粗酶液。2.酶活性测定：采用愈创木酚比色法测定，对照为煮沸5分钟的粗酶液，反应 体系包括：0.05mol/L pH5.5的磷酸缓冲液2.9ml；0.05 mol/L愈创木酚1ml;2%H202 1ml；粗酶液0.1 ml，反应1分钟后，立刻在470nm下，测定OD值。以每分钟在470nm处吸光度的变化0.01为一个酶活单位。3.计算酶活性：选取OD值变化较均匀的一段数据，代入公式计算；以作为1个过氧化物酶活力单位（U）。酶活力=活力单位(U)w(g FW)注：W=W总（g F W)V(ml)/V总 POD活性U/

27、g.min=注：A470为反时间内吸光度的变化，w为样品质量 t为反应时间 Vt为提取酶液总体积 Vs为测定时间酶液体积A470*VtW*Vs*0.01*t同工酶电泳同工酶电泳 一、原理一、原理 聚丙烯酰胺凝胶由丙烯酰胺和交联剂甲叉双丙烯酰胺在催化剂作用下聚合而聚丙烯酰胺凝胶由丙烯酰胺和交联剂甲叉双丙烯酰胺在催化剂作用下聚合而成，具有三维网状结构，其网孔大小可由凝胶浓度和交联度加以调节。凝胶电泳兼成，具有三维网状结构，其网孔大小可由凝胶浓度和交联度加以调节。凝胶电泳兼有电荷效应和分子筛效应。被分离物质由于所载电荷数量、分子大小和形状的差异，有电荷效应和分子筛效应。被分离物质由于所载电荷数量、分

28、子大小和形状的差异，因此在电泳时产生不同的泳动速率而相互分离。因此在电泳时产生不同的泳动速率而相互分离。利用特异性的颜色反应使待测酶着色，这样就可在凝胶中展现出酶谱。过氧化物酶是植物体内常见的氧化酶。植物体内许多生理代谢过程常与它的活性及其同工酶的种类有关。利用过氧化物酶能催化利用过氧化物酶能催化H H2 2O O2 2把联苯胺氧化成蓝色或棕褐色产物的原理，将经把联苯胺氧化成蓝色或棕褐色产物的原理，将经过电泳后的凝胶置于有过电泳后的凝胶置于有H H2 2O O2 2及联苯胺的溶液染色，出现蓝色或棕褐色部位即为过氧及联苯胺的溶液染色，出现蓝色或棕褐色部位即为过氧化物酶同工酶在凝胶中存在的位置，多

29、条有色带即构成过氧化物酶同工酶谱。本实化物酶同工酶在凝胶中存在的位置，多条有色带即构成过氧化物酶同工酶谱。本实验利用垂直板凝胶电泳，采用验利用垂直板凝胶电泳，采用TrisTrisGlyGly缓冲系统来分离阴离子过氧化物酶同工酶。缓冲系统来分离阴离子过氧化物酶同工酶。二、材料、仪器设备及试剂二、材料、仪器设备及试剂 1.1.材料：材料：玉米幼苗 2.2.仪器设备：仪器设备：稳流稳压电泳仪；冷冻离心机及离心管；pH试纸；3.3.试剂：试剂：（1)分离胶缓冲液（pH8.9）：1mol/L HCl 48ml，Tris36.6g，TEMED0.23ml，加水定容 至100ml。(2)分离胶贮液：30g丙

30、烯酰胺，0.8g甲叉双丙烯酰胺，加水溶解并定容至100ml，过滤 后使用。(3)过硫酸铵溶液：过硫酸铵0.2g，加水定容至100ml制胶时现配现用）。(4)浓缩胶缓冲液：1mol/L HCl48mlTris5.98gTEMED0.46ml，调pH6.7，并定容至 100ml。(5)浓缩胶贮备液：丙烯酰胺10g，甲叉双丙烯酰胺2.5g,加水定容到100ml，使用前过滤。(6)电极缓冲液：Tris 6.0g，Gly 28.8g，用水定容至1000ml（pH8.3），用前稀释10倍。(7)四甲基乙二胺（TEMED）。(8)0.1的溴酚蓝水溶液。(9)联苯胺染色母液：联苯胺1g冰醋酸18mlH2O2m

31、l溶解贮于棕色瓶中。三、实验步骤三、实验步骤 1.安装电泳槽 2.凝胶的配制 3.过氧化物酶的提取：称取1g待测植物鲜样置于冰浴上的研钵内，加入1ml H2O 或0.05mol/L TrisHCl缓冲液（pH6.8）研成匀浆，转入离心管，再用2ml前 述溶液将附着在研钵壁上的研磨样品洗下并全部转入离心管，3500rpm离心 1520min，上清液即为酶提取液，供电泳分析用。4.点样：取10ul样品加等体积的40%的蔗糖溶液和5ul 2%的溴酚蓝 5.电泳 6.剥胶：电泳完毕，将电泳槽取出，倒去缓冲液，取下凝胶管，放入培养皿中。用一个带有长针头的注射器，吸满水，将针头沿管壁插入，同时慢慢地将注 射器中的水推出，并不断转动凝胶管，将凝胶管挤脱出来，也可用洗耳球挤压。7.染色：取0.5ml联苯胺母液H2O 9.3ml0.2ml3H2O2，混匀后倒入盛有凝胶 条的培养皿。10min后用自来水冲洗，这时蓝色带也慢慢变成棕褐色。8.记录酶谱，并计算各同工酶的迁移率。