微生物和免疫学实验培训课件.ppt

1、微生物和免疫学实验肥达试验肥达试验l原理：用已知的原理：用已知的伤寒伤寒沙门菌沙门菌菌体（菌体（O）抗原抗原和和鞭毛（鞭毛（H）抗原，以及引起副伤寒的抗原，以及引起副伤寒的甲型甲型副伤寒沙门菌、副伤寒沙门菌、乙型乙型副伤寒沙门菌副伤寒沙门菌H抗原抗原的的诊断菌液与受检血清做试管或微孔板凝集诊断菌液与受检血清做试管或微孔板凝集实验，测定受检血清中有无相应抗体及其实验，测定受检血清中有无相应抗体及其效价的试验。效价的试验。2微生物和免疫学实验操作：肥达试验（试管凝集反应）操作：肥达试验（试管凝集反应）l器材：试管器材：试管6支支/人，试管架人，试管架1个个/2人人 吸管吸管1支支/人，标签人，标签

2、1个个/人人l已知：已知：伤寒伤寒H抗原、抗原、O抗原抗原（4人人/组）组）甲型副伤寒甲型副伤寒H抗原抗原 乙型副伤寒乙型副伤寒H抗原抗原l待检：病人血清（待检：病人血清（1:10稀释）稀释）3微生物和免疫学实验0.5 ml生理盐水生理盐水 1 2 3 4 560.5 ml 0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml0.5ml血清血清1：40 1：80 1：160 1：320 1：640 对照对照加菌液加菌液0.5ml/管（管（61），震荡混匀，），震荡混匀，43水浴水浴1.5 h，观察结果，观察结果4微生物和免疫学实验一、糖发酵试验一、糖发酵试验由于细菌各自具有不同的酶系统，故对

3、糖（醇）类由于细菌各自具有不同的酶系统，故对糖（醇）类的分解能力不尽相同。的分解能力不尽相同。产酸产气产酸产气 指示剂变色，指示剂变色，小倒管内有气泡小倒管内有气泡；以以 表示表示 产酸产酸 指示剂变色；以指示剂变色；以表示表示 不能分解不能分解 指示剂指示剂不不变色变色；以；以表示表示指示剂为酸性复红指示剂为酸性复红细菌生化反应细菌生化反应5微生物和免疫学实验二二、硫化氢试验、硫化氢试验 硫化氢遇铅盐或硫化氢遇铅盐或铁盐形成黑色硫化铅或铁盐形成黑色硫化铅或硫化亚铁沉淀物硫化亚铁沉淀物。6微生物和免疫学实验三三、吲哚（靛吲哚（靛基质基质）试验试验 有些细菌分解色氨酸有些细菌分解色氨酸生成吲哚（

4、靛生成吲哚（靛基质基质），与），与加入加入的的二甲基氨基苯甲二甲基氨基苯甲醛醛反应生反应生成玫瑰成玫瑰吲哚吲哚呈玫瑰呈玫瑰红色为阳性红色为阳性；黄色为阴性黄色为阴性。7微生物和免疫学实验四四、尿素、尿素酶酶试验试验 有些细菌具有有些细菌具有尿素尿素酶，酶，能分解尿素形成大量的氨，能分解尿素形成大量的氨，使使培养基培养基PH上升，而变成上升，而变成碱性，使含有酚红指示剂的碱性，使含有酚红指示剂的培养基培养基呈红色为阳性呈红色为阳性；不变不变色为阴性色为阴性。8微生物和免疫学实验肠道杆菌（肠道杆菌（G）9微生物和免疫学实验肠道杆菌的鉴定肠道杆菌的鉴定标本增菌培养标本增菌培养接种接种SS平板平板双糖

5、铁培养基初步鉴定双糖铁培养基初步鉴定其他生化反应鉴定其他生化反应鉴定血清学鉴定血清学鉴定有菌有菌可疑的乳白色菌落可疑的乳白色菌落10微生物和免疫学实验SS培养基培养基胆盐胆盐枸橼酸盐枸橼酸盐煌绿煌绿乳糖乳糖蛋白胨蛋白胨中性红中性红抑制杂菌生长抑制杂菌生长被非致病菌分解产酸被非致病菌分解产酸被致病菌分解产碱被致病菌分解产碱酸：红酸：红 碱：黄碱：黄11微生物和免疫学实验双糖铁培养基双糖铁培养基 上层上层 （固体）下层下层 （半固体）乳糖乳糖硫酸亚铁硫酸亚铁酚红酚红葡萄糖葡萄糖12微生物和免疫学实验生化反应表生化反应表葡葡乳乳麦麦甘甘蔗蔗H2S尿素尿素靛靛大肠大肠-痢疾痢疾-伤寒伤寒-/+-变形变

6、形-13微生物和免疫学实验白喉棒状杆菌：白喉棒状杆菌：G+一端或两端膨大，排列不规则，常一端或两端膨大，排列不规则，常呈栅栏状或英文字母样，如呈栅栏状或英文字母样，如V、W、X等等其其 他他 细细 菌菌革兰染色革兰染色14微生物和免疫学实验Albert染色染色观察白喉杆菌异染颗粒观察白喉杆菌异染颗粒一端或两端一端或两端15微生物和免疫学实验鉴别选择培养基鉴别选择培养基 含含0.03%0.04%亚碲酸钾血平板亚碲酸钾血平板亚碲酸钾血琼脂平板上形成黑色菌落亚碲酸钾血琼脂平板上形成黑色菌落16微生物和免疫学实验炭疽杆菌：炭疽杆菌：G粗大杆菌，两端平切、排列呈粗大杆菌，两端平切、排列呈竹节状竹节状；有

7、荚膜，有荚膜，芽胞芽胞呈椭圆形，位于菌体中央呈椭圆形，位于菌体中央18微生物和免疫学实验3035，普通琼脂培养基上形成灰白色粗糙，普通琼脂培养基上形成灰白色粗糙型型菌落，边缘不整齐，在低倍镜下观察呈卷发状菌落，边缘不整齐，在低倍镜下观察呈卷发状炭疽杆菌培养基炭疽杆菌培养基19微生物和免疫学实验结核杆菌：罗氏培养基结核杆菌：罗氏培养基20微生物和免疫学实验厌氧芽胞梭菌厌氧芽胞梭菌破伤风梭菌破伤风梭菌肉肉毒毒梭梭菌菌产气荚膜梭菌产气荚膜梭菌21微生物和免疫学实验破伤风梭菌：庖肉培养基、毒素动物试验破伤风梭菌：庖肉培养基、毒素动物试验产气荚膜梭菌：血平板（靶样溶血）、庖肉培养基产气荚膜梭菌：血平板（

8、靶样溶血）、庖肉培养基 高层琼脂断裂试验、汹涌发酵试验高层琼脂断裂试验、汹涌发酵试验肉毒梭菌：肉毒梭菌：庖肉培养基庖肉培养基22微生物和免疫学实验真菌真菌形态与结构形态与结构单细胞真菌单细胞真菌 圆形或卵圆形圆形或卵圆形 酵母菌酵母菌(yeast)多细胞真菌多细胞真菌 菌丝和孢子菌丝和孢子 丝状菌丝状菌(filamentous fungus)交织成团交织成团 或霉菌或霉菌(mold)二相性二相性(dimorphic)23微生物和免疫学实验真真 菌（菌（fungus）大大 分分 生生 孢孢 子子24微生物和免疫学实验厚厚 膜膜 孢孢 子子25微生物和免疫学实验白假丝酵母菌（白色念珠菌）白假丝酵母

9、菌（白色念珠菌）G+26微生物和免疫学实验新生隐球菌（新型隐球菌）新生隐球菌（新型隐球菌）墨汁负染墨汁负染27微生物和免疫学实验真菌培养物真菌培养物新生隐球菌：表面粘稠新生隐球菌：表面粘稠白假丝酵母菌：浓厚的酵母气味白假丝酵母菌：浓厚的酵母气味28微生物和免疫学实验第第6管管 均匀混浊均匀混浊 少量凝集少量凝集 细菌部分沉于管底，液体半澄清，凝集细菌部分沉于管底，液体半澄清，凝集 呈颗粒状呈颗粒状 大部分凝集，液体轻度混浊，凝集块较大大部分凝集，液体轻度混浊，凝集块较大 全部凝集，液体澄清，大片凝集块全部凝集，液体澄清，大片凝集块l以出现以出现凝集的血清凝集的血清最高最高稀释倍数为该血清稀释倍数为该血清抗体效价抗体效价lO达到达到1:80，H达到达到1:160 H甲甲或或H乙乙达到达到1:80或以上有诊断意义或以上有诊断意义结果判断结果判断29微生物和免疫学实验 血清稀释度血清稀释度 菌液菌液 1：40 1：80 1：160 1：320 1：640伤寒伤寒H伤寒伤寒O甲副甲副H乙副乙副H 记录结果记录结果*吸管放桶，试管放锅吸管放桶，试管放锅30微生物和免疫学实验作业作业l示教片：肠道杆菌、示教片：肠道杆菌、其他细菌其他细菌、真真菌菌l肥达试验：原理、步骤、结果、分析肥达试验：原理、步骤、结果、分析31微生物和免疫学实验