新版GMP微生物控制常识概要课件.ppt

1、微生物控制常识微生物控制常识国外消毒行业状况国外消毒行业状况美国的消毒产品主要是含氯化合物、过氧化物、季铵盐化合物欧洲的消毒产品主要是酚类化合物、醛类化合物、季铵盐化合物，限制使用过氧化物，禁止使用含氯化合物日本只使用含氯化合物、过氧化物，氧化电位水，允许使用季铵盐国内外消毒产品的差异国内外消毒产品的差异消毒技术标准不一样区分消毒产品的方法不一样使用过程的控制不一样国家对消毒药品或器械的管理国家对消毒药品或器械的管理根据中华人民共和国传染病防治法、中华人民共和国传染病防治法实施办法和消毒管理办法的有关规定，在中华人民共和国境内生产、经营、使用和检验消毒产品的组织，医疗卫生机构以及传染病疫源地和

2、其他一切需要消毒的场所，所使用的消毒药品或器械必须经中华人民共和国卫生部批准，并按批准使用的范围和方法在消毒中使用。中华人民共和国卫生部规定消毒药、械按其性能特点，可在物体表面、环境、水体、织物等范围内使用。所有消毒药、械的许可批件均可按产品名称或批件号在卫生部官方网站上查询。消毒和灭菌的区别消毒和灭菌的区别消毒是指将传播媒介上的病原微生物清除或杀灭，使其达到无害化。灭菌是指将传播媒介上一切微生物全部清除或杀灭，特别是抗力最强的细菌芽孢。消毒剂的效能划分消毒剂的效能划分高效消毒剂：指可杀灭一切细菌繁殖体（包括分枝杆菌）、病毒、真菌及其孢子等，对细菌芽孢（致病性芽孢菌）也有一定杀灭作用，达到高水

3、平消毒要求的制剂。中效消毒剂：指可杀灭分枝杆菌、真菌、病毒、及细菌繁殖体等微生物，达到消毒要求的制剂。低效消毒剂：指仅可杀灭细菌繁殖体和亲脂病毒，达到消毒要求的制剂。消毒剂（Disinfectant）：能够破坏有害细菌（但不是孢子）生长的一类化学或物理试剂。由于其毒性而通常仅作用于非生命物质。杀菌剂（Antiseptic）：能够破坏微生物并且适用于皮肤消毒（低毒性的）的一类化学物质。抑菌剂（Bacteriocide):使细菌致死抑菌（Bacteriostatic）:抑制任何细菌的增长杀孢子剂（Sporicide）:使孢子致死杀真菌剂（Fungicide）:杀死真菌的试剂熏蒸（Fumigatio

4、n）:用消毒剂的蒸气进行消毒的过程。通常用于封闭的环境如房间或隔离箱灭菌（Sanitisation）:降低微生物污染水平的过程，可以通过化学试剂或物理过程（如：氯，加热，紫外灯）实现这一过程消毒剂的基本定义化学主份类别举例醛类杀孢子剂2戊二醛醇类一般消毒剂，抗菌/病毒70%异丙醇、75酒精含氯和次氯酸钠杀孢子剂0.5%次氯酸钠酚类一般消毒剂500g/g氯甲酚、氯二甲酚臭氧杀孢子剂8气体重量过氧化氢气态灭菌剂，液体杀孢子剂，抗菌剂4g/g，1025溶液，3溶液替代缩二胍抗菌剂0.5%氯己定（洗必泰）过氧乙酸液态/气态灭菌剂0.2%，1g/g环氧乙烷气态灭菌剂600g/g季铵盐类一般消毒剂，抗菌剂

5、200g/g苯扎氯铵（洁尔灭）-丙内酯杀孢子剂100g/g各种微生物对消毒剂的抵抗力各种微生物对消毒剂的抵抗力目前认为，微生物对消毒因子的敏感性，从低到高的排列顺序为：1.亲脂病毒（有脂质膜的病毒），例如乙肝病毒、流感病毒等2.细菌繁殖体3.真菌4.亲水病毒（没有脂质包膜的病毒），例如甲型肝炎病毒、脊髓灰质病毒等5.分枝杆菌，例如炭疽杆菌芽孢、龟分枝杆菌等6.细菌芽孢，例如炭疽杆菌芽孢、枯草杆菌芽孢等7.朊病毒（感染性蛋白质）常规的消毒手段常规的消毒手段1.低热消毒法（巴斯德消毒法）：至今国内外仍然广泛应用于对牛奶、对血清或者是对一些医疗器械的消毒。2.热力灭菌：在所有的可利用的消毒灭菌方法中

6、，热力灭菌是一种应用最早，效果最可靠，使用最广泛的方法，热可以灭活一切微生物，包括细菌繁殖体，真菌，病毒和抵抗力最强的芽孢，并且加热时温度越高，杀伤力越大。因此，热力灭菌不仅广泛应用于医学消毒灭菌，而且工业灭菌上也深受重视。3.过滤灭菌：以物理阻留的方法，去除介质中的微生物，主要用于液体和气体物质的洁净消毒处理。如微孔滤膜除菌4.微波杀菌：紫外线等5.化学消毒：次氯酸钠，碳酸，乙醇，臭氧，环氧乙烷等安全、低残留，对设备或表面尽可能无腐蚀性，对产品无毒，无污染宜与常规使用的清洁剂相容，水中溶解度高符合需要控制微生物的类型和数量本身及其使用浓度的溶液稳定水的硬度，有机物或其他物质对其消毒效力影响小

7、。消毒剂选择的一般原则浓度：并非浓度越高消毒效力越好，应按照供应商提供的信息配制合理的消毒剂浓度污染程度：包括生物负荷及类型 pH：不同类型的消毒剂有不同的最佳pH使用范围温度：通常消毒剂效力虽温度升高而增加，但也有例外，如次氯酸不适合于高温使用水的硬度或金属离子：一些消毒剂的效力会因金属离子或硬水而下降配方：许多消毒剂的乙醇溶液消毒效力会非常高。螯合剂和缓冲盐也可以提高消毒剂的效力接触时间：保证充分的接触时间确保消毒剂效力影响消毒剂效力的主要因素消毒剂在选择时应根据抗菌谱选择安全性高，低毒的产品消毒剂的效力会受到溶液浓度，pH值，生物污染水平，接触表面材质等多种因素影响小结从从2010201

8、0版版GMPGMP看看 无菌更衣与除菌过滤要求无菌更衣无菌更衣1.新版GMP对无菌更衣的要求2.无菌更衣过程3.人员培训与确认各环节降低污染的措施各环节降低污染的措施人、机、料、法、环五方面人员人员洁净区内的人数应当严加控制，检查和监督应当尽可能在无菌区生产的洁净区外进行。生产管理生产管理当无菌生产正在进行时，应当特别注意减少洁净区内的各种活动。应当减少人员走动，避免剧烈活动散发过多的微粒和微生物。由于所穿工作服的特性，环境的温湿度应当保证操作人员的舒适性。来自人员的污染占整个生产污染的比例？人员人员第二十三条 应当按照操作规程更衣和洗手，尽可能减少对洁净区的污染或将污染物带入洁净区。从新版从

9、新版GMPGMP看看除菌过滤工艺及验证除菌过滤工艺及验证灭菌方法灭菌方法基本要求第八章设备第四十一条过滤器应当尽可能不脱落纤维。严禁使用含石棉的过滤器。过滤器不得因与产品发生反应、释放物质或吸附作用而对产品质量造成不利影响。第四十二条进入无菌生产区的生产气体（如压缩空气、氮气，但不包括可燃性气体）均应经过除菌过滤，应当定期检查除菌过滤器和呼吸过滤器的完整性。生物制品附录第二十五条管道系统、阀门和呼吸过滤器应当便于清洁和灭菌。宜采用在线清洁、在线灭菌系统。密闭容器（如发酵罐）的阀门应当能用蒸汽灭菌。呼吸过滤器应为疏水性材质，且使用效期应当经验证。第四十七条 培养基宜在线灭菌。向发酵罐或反应罐中通

10、气以及添加培养基、酸、碱、消泡剂等成分所使用的过滤器宜在线灭菌。第七十五条第七十五条 非最终灭菌产品的过滤除菌应当符合以下要求：非最终灭菌产品的过滤除菌应当符合以下要求：（一）可最终灭菌的产品不得以过滤除菌工艺替代最终灭菌工艺。如果药品不能在其最终包装容器中灭菌，可用0.22m（更小或相同过滤效力）的除菌过滤器将药液滤入预先灭菌的容器内。由于除菌过滤器不能将病毒或支原体全部滤除，可采用热处理方法来弥补除菌过滤的不足。（二）应当采取措施降低过滤除菌的风险。宜安装第二只已灭菌的除菌过滤器再次过滤药液，最终的除菌过滤滤器应当尽可能接近灌装点。（三）除菌过滤器使用后，必须采用适当的方法立即对其完整性进

11、行检查并记录。常用的方法有起泡点试验、扩散流试验或压力保持试验。（四）过滤除菌工艺应当经过验证，验证中应当确定过滤一定量药液所需时间及过滤器二侧的压力。任何明显偏离正常时间或压力的情况应当有记录并进行调查，调查结果应当归入批记录。（五）同一规格和型号的除菌过滤器使用时限应当经过验证，一般不得超过一个工作日。风险风险设计设计完整性完整性验证验证时限与反复使用时限与反复使用不同灭菌工艺的无菌保证能力不同灭菌工艺的无菌保证能力过度杀过度杀灭法灭法Fo1210-6热稳定性好的产品热稳定性好的产品以杀灭微生物作为实现无菌的手段以杀灭微生物作为实现无菌的手段残存概残存概率法率法Fo810-6热稳定性一般产

12、品热稳定性一般产品工艺过程将防止产品被耐热菌污染放在首位工艺过程将防止产品被耐热菌污染放在首位,而不是仅依赖最终灭菌去消除污染而不是仅依赖最终灭菌去消除污染 流通蒸流通蒸汽法汽法不不计计算算Fo0.1%热不稳定产品热不稳定产品以无菌生产工艺（除菌过滤）为基础，加热以无菌生产工艺（除菌过滤）为基础，加热是除菌过滤的补充手段是除菌过滤的补充手段除菌除菌过滤法过滤法LRV70.1%不能加热的产品不能加热的产品LRV=log reduction value LRV=log reduction value 过滤对数下降值过滤对数下降值,一般上游为一般上游为10107 7下游为下游为1 1，则，则LRV=

13、7LRV=7灭菌工艺选择的决策树灭菌工艺选择的决策树 产品是否可以产品是否可以121湿热灭菌湿热灭菌15分钟分钟 产品是否可以湿热灭菌产品是否可以湿热灭菌F08分分钟，达到钟，达到SAL106产品处方是否可以通过产品处方是否可以通过微生物滞留过滤器过滤微生物滞留过滤器过滤（四）（四）使用无菌组分使用无菌组分配制和灌封配制和灌封（一）（一）使用高压灭使用高压灭菌锅菌锅12115分钟分钟（三）（三）无菌过滤和无菌过滤和无菌加工结合使用无菌加工结合使用否否是是否否是是否否是是（二）（二）使用湿热灭使用湿热灭菌菌F08分钟分钟除菌过滤的风险除菌过滤的风险 过滤前料液的生物负荷过滤前料液的生物负荷 过滤

14、器的选择风险与验证困难过滤器的选择风险与验证困难 过滤工艺的操作与控制过滤工艺的操作与控制 过滤系统的设计与灭菌验证过滤系统的设计与灭菌验证应该在什么时候做完整性测试应该在什么时候做完整性测试?灭菌前？灭菌前？灭菌后，过滤前使用前？灭菌后，过滤前使用前？过滤后？过滤后？什么时候检测完整性？什么时候检测完整性？FDA对无菌过滤工艺的指南对无菌过滤工艺的指南正常情况下正常情况下,滤器应在过滤前，即组装好后，且灭菌后滤器应在过滤前，即组装好后，且灭菌后执行完整性检测执行完整性检测.非常重要的是非常重要的是:在过滤后在过滤后对滤器进行完整性检测对滤器进行完整性检测,从而查从而查看滤器是否泄漏和膜已破损

15、看滤器是否泄漏和膜已破损.一般认为一般认为过滤前后过滤前后的常规性完整性检测是现行的常规性完整性检测是现行GMP的要求的要求.EU GMP对于已灭菌的滤器的完整性检测应该在对于已灭菌的滤器的完整性检测应该在使用前和使用后立使用前和使用后立即执行即执行,例如泡点例如泡点,扩散流及压力保持试验扩散流及压力保持试验.测试起泡点的方法测试起泡点的方法 冲洗冲洗 加压加压增加压力直到连续起泡在下游出现增加压力直到连续起泡在下游出现扩散流测试方法扩散流测试方法上上 游游 压压 力力压缩空气压缩空气下游监测气下游监测气流速度流速度水浸入法测试水浸入法测试02.6bar02.6barP atmP atm02.

16、6bar02.6bar01020Time (min.)装上干的滤芯装上干的滤芯在上游充满水在上游充满水加压并保持加压并保持测量压力衰减测量压力衰减压力导致折叠式滤膜进一步压力导致折叠式滤膜进一步压缩压缩现象是有一定的水流现象是有一定的水流完整性测试失败处理措施完整性测试失败处理措施替换过滤柱并且替换过滤柱并且退回膜去分析退回膜去分析再湿润过滤器，使再湿润过滤器，使用两倍于初次湿润用两倍于初次湿润压或冲洗量或浸泡压或冲洗量或浸泡时间或者使用高压时间或者使用高压差在过滤器两边差在过滤器两边再测试再测试过滤器是否过滤器是否通过测试通过测试完整性测试评完整性测试评估是否改变估是否改变否否是是使用前使用

17、前是否边是否边缘失败缘失败是是否否你能否重装你能否重装过滤柱过滤柱用标准程序重装用标准程序重装和冲洗过滤器和冲洗过滤器记录价值和程序记录价值和程序能能否否再测试再测试是是否否使用后使用后测试在使用前还是使用后测试在使用前还是使用后是否边是否边缘失败缘失败冲洗过滤器，使冲洗过滤器，使用两倍冲洗量或用两倍冲洗量或者浸泡时间者浸泡时间再测试再测试过滤器是否过滤器是否通过测试通过测试冲洗过滤器冲洗过滤器，使用两倍，使用两倍于初次湿润于初次湿润压或者使用压或者使用高压在过滤高压在过滤器两边器两边记录价值和程序记录价值和程序完整性测试评完整性测试评估是否接近规估是否接近规范值范值70/30异丙醇润异丙醇润

18、湿，检测湿，检测是是否否是是否否否否是是为什么要进行完整性测试为什么要进行完整性测试?u除菌工艺需要：除菌工艺需要：u滤器性能滤器性能u过滤线的设计与滤器灭菌过滤线的设计与滤器灭菌u完整性测试标准的确定完整性测试标准的确定u法规要求及贸易需要法规要求及贸易需要u出口认证（出口认证（FDA，COS,EDMF）uSFDA检查检查法规中认可的两类完整性测试方法法规中认可的两类完整性测试方法分类分类测试名称测试名称测试实施者测试实施者破坏性破坏性细菌挑战测试细菌挑战测试制造商制造商非破坏性非破坏性起泡点测试，扩起泡点测试，扩散测试散测试制造商及制造商及使用使用者者灭菌方法灭菌方法第七十五条第七十五条

19、非最终灭菌产品的过滤除菌应当符非最终灭菌产品的过滤除菌应当符合以下要求：合以下要求：（五）同一规格和型号的除菌过滤器使用时限应（五）同一规格和型号的除菌过滤器使用时限应当经过验证，一般不得超过一个工作日。当经过验证，一般不得超过一个工作日。其他章节中对过滤的要求其他章节中对过滤的要求 设备设备 第四十一条第四十一条 过滤器应当尽可能不脱落纤维。过滤器应当尽可能不脱落纤维。严禁使用含石棉的过滤器。过滤器不得因与产严禁使用含石棉的过滤器。过滤器不得因与产品发生反应、释放物质或吸附作用而对产品质品发生反应、释放物质或吸附作用而对产品质量造成不利影响量造成不利影响。过滤器析出物评估过滤器析出物评估在注

20、射剂管理委员会的在注射剂管理委员会的15及及26号报告中描述了过滤器析出物号报告中描述了过滤器析出物评估方法。评估方法。了解析出物水平有利于：了解析出物水平有利于：决定过滤器预先冲洗体积决定过滤器预先冲洗体积 决定过滤器能否用于小体积过滤（无法冲淡和稀释析出决定过滤器能否用于小体积过滤（无法冲淡和稀释析出物）物）直接灌装（这时第一瓶的析出物含量最高直接灌装（这时第一瓶的析出物含量最高）考虑使用两种方法考虑使用两种方法：_在实际药物中的析出物在实际药物中的析出物 _用溶剂来模拟，检测析出物用溶剂来模拟，检测析出物设备设备 第四十二条第四十二条 进入无菌区生产区的生产用气体进入无菌区生产区的生产用

21、气体（如压缩空气、氮气，但不包括可燃性气体）（如压缩空气、氮气，但不包括可燃性气体）均应经过除菌过滤，应当定期检查除菌过滤器均应经过除菌过滤，应当定期检查除菌过滤器和呼吸过滤器的完整性。和呼吸过滤器的完整性。无菌工艺模拟试验无菌工艺模拟试验 -培养基灌装培养基灌装主要内容 1.1.培养基灌装的技术要求培养基灌装的技术要求 2.2.培养基灌装的实施要点培养基灌装的实施要点 3.3.结果解释和偏差调查结果解释和偏差调查1.培养基灌装的技术要求欧盟灭菌工艺决策树能否能否121，15分钟湿热灭分钟湿热灭菌菌能否采用能否采用F F0 088的湿热灭菌，的湿热灭菌，以达到以达到SAL10SAL10-6-6

22、121，15分钟湿热灭菌分钟湿热灭菌能否对药液除菌过滤能否对药液除菌过滤无菌原料，无菌配制，无菌无菌原料，无菌配制，无菌灌封灌封是否药液除菌过滤及无菌灌封药液除菌过滤及无菌灌封否否是是采用采用F08的湿热灭菌，以达到的湿热灭菌，以达到SAL10-6无菌工艺模拟试验定义 无菌工艺模拟试验无菌工艺模拟试验Process Simulation Testing（PST）培养基灌装培养基灌装 Media Fill采用培养基代替药品进行无菌灌装对无菌工艺进采用培养基代替药品进行无菌灌装对无菌工艺进行验证。此模拟工艺称之为行验证。此模拟工艺称之为“培养基灌装培养基灌装”。进行培养基灌装的目的 验证一个无菌工

23、艺验证一个无菌工艺 对无菌工艺过程无菌保证水平的综合评估（对无菌工艺过程无菌保证水平的综合评估（设备、人员设备、人员、操作、灭菌过程、操作、灭菌过程、生产生产环境环境等等）对无菌操作人员进行资格确认对无菌操作人员进行资格确认 确认进行重大变更后对无菌工艺的影响确认进行重大变更后对无菌工艺的影响 作为问题调查的手段作为问题调查的手段 综合反映生产线整体的无菌保证情况，无体现具体某批产综合反映生产线整体的无菌保证情况，无体现具体某批产品或某个产品的无菌性品或某个产品的无菌性培养基灌装试验的频率 初始验证：每班次连续做初始验证：每班次连续做3批验证批验证 随后每半年针对不同班次随后每半年针对不同班次

24、/工艺进行一次再验证工艺进行一次再验证 所有日常操作人员每年都必须参加所有日常操作人员每年都必须参加至少至少一次培养基一次培养基灌装验证灌装验证 空气净化系统、设备、生产工艺及人员重大变更后空气净化系统、设备、生产工艺及人员重大变更后，应当重复进行培养基模拟灌装试验，应当重复进行培养基模拟灌装试验培养基灌装试验的频率影响无菌灌装过程中无菌保证水平的重大变更需要进行影响无菌灌装过程中无菌保证水平的重大变更需要进行培养基灌装培养基灌装判断：判断：1.灌装层流改造灌装层流改造2.胶塞进料装置变更胶塞进料装置变更3.终端无菌过滤器改变位置终端无菌过滤器改变位置4.灭菌程序变更灭菌程序变更培养基灌装批量

25、培养基灌装容器的数量应当足以保证评价的有效性。批培养基灌装容器的数量应当足以保证评价的有效性。批量较小的产品，培养基灌装的数量应当至少等于产品量较小的产品，培养基灌装的数量应当至少等于产品的批量的批量 批次量批次量5000瓶，通常瓶，通常500010000瓶瓶 手工灌装手工灌装 VS 隔离器无菌生产工艺隔离器无菌生产工艺 跨班次生产，大批量生产跨班次生产，大批量生产灌装速度、瓶子尺寸、灌装量 原则原则 速度慢，产品暴露时间长；速度快，有时造成较多速度慢，产品暴露时间长；速度快，有时造成较多的干扰的干扰 瓶子大（包括敞口大小），灌装速度慢瓶子大（包括敞口大小），灌装速度慢 尽量按产品实际灌装体积

26、尽量按产品实际灌装体积或更多或更多，体积应能充分接，体积应能充分接触所有表面、并足够支持微生物生长触所有表面、并足够支持微生物生长 举例：举例：多规格的瓶子多规格的瓶子-最慢的速度，最大的瓶子规格最慢的速度，最大的瓶子规格;最小最小的瓶子规格，最快的速度的瓶子规格，最快的速度 单一规格的瓶子单一规格的瓶子 正常或略慢速度正常或略慢速度 最长允许的灌装时间（如考察操作人员疲劳操作风险最长允许的灌装时间（如考察操作人员疲劳操作风险）有代表性的正常性操作活动的数量、种类和复杂性，有代表性的正常性操作活动的数量、种类和复杂性，非常规的干扰和各类突发事件（如维修、灌装中断等非常规的干扰和各类突发事件（如

27、维修、灌装中断等）冻干过程冻干过程 生产线速度和模具的规格生产线速度和模具的规格最差条件挑战最差条件挑战 人员数量及其活动，换班，休息，更衣等人员数量及其活动，换班，休息，更衣等 具有代表性数量的无菌操作（如添加容器，密封件，具有代表性数量的无菌操作（如添加容器，密封件，无菌原料成分）或者转移无菌原料成分）或者转移 设备无菌连接和拆卸设备无菌连接和拆卸 取样操作取样操作 各个工艺步骤的最长持续时间挑战各个工艺步骤的最长持续时间挑战最差条件挑战应当根据产品的剂型、培养基的选择性、澄清度、浓度和灭菌的适用性应当根据产品的剂型、培养基的选择性、澄清度、浓度和灭菌的适用性选择培养基选择培养基 TSB或

28、或FTM（澄清）（澄清）某些情况下应该考虑使用厌氧性培养基某些情况下应该考虑使用厌氧性培养基 应该进行促菌生长实验应该进行促菌生长实验 标准菌株标准菌株 环境分离菌环境分离菌培养基选择 在在20-25条件下培养条件下培养7天天(培养真菌培养真菌)，30-35下下 7天天(培培养细菌养细菌)确保其内壁和瓶塞充分接触培养基确保其内壁和瓶塞充分接触培养基 培养基促生长试验培养基促生长试验 应由有资质的人员进行检查应由有资质的人员进行检查 无缺损的瓶均应该培养，任何不作培养的瓶子都应说明无缺损的瓶均应该培养，任何不作培养的瓶子都应说明不作培养的原因不作培养的原因 要进行物料平衡计算要进行物料平衡计算培

29、养及读数2.培养基灌装的实施要点培养基灌装的先决条件 洁净室洁净室/设备的验证状态确认设备的验证状态确认 经过重大维修或变更后进行了生产线的运行确认或性能经过重大维修或变更后进行了生产线的运行确认或性能确认确认 参与培养基灌装的人员接受了培训参与培养基灌装的人员接受了培训 无菌操作无菌操作 洁净室行为洁净室行为 微生物基础知识微生物基础知识 培养基灌装方案培养基灌装方案 明文规定的工艺过程及最差条件明文规定的工艺过程及最差条件培养基灌装方案设计 分析工艺流程，确定风险因素 绘制流程图 通过分析确定可能造成产品污染的风险因素 灌装时间灌装时间干扰活动（时间、次数、种类包干扰活动（时间、次数、种类

30、包括停机、维修、调整）括停机、维修、调整）冻干过程冻干过程设备装配（如灌装前的装机）设备装配（如灌装前的装机）人员数量及其活动人员数量及其活动无菌操作（如各种无菌部件操作无菌操作（如各种无菌部件操作、产品转移）、产品转移）不同班次轮换，着装更换不同班次轮换，着装更换生产中出现的无菌管道连接生产中出现的无菌管道连接无菌样品取样无菌样品取样灌装速度灌装速度重量检查重量检查容器密闭性（大小、种类、与设备容器密闭性（大小、种类、与设备匹配程度匹配程度）某些特殊操作（如进行清洁前的操某些特殊操作（如进行清洁前的操作）作）灌装过程流程图灌装部件装配管道排液正式灌装灌装量检查添加胶塞处理倒瓶人员进出班次轮换

31、设置灌装参数停机维修环境监测收集转移冻干压塞暂存压盖人员操作 人员操作时间 时间风险因素灌装速度灌装时间长短干扰操作及次数人员数量停机操作转移操作 时间 暂存位置时间 时间 干扰操作 任何进入任何进入A级级区区的操作都为干扰操作，应包括所有类的操作都为干扰操作，应包括所有类型的干扰操作型的干扰操作 常规的（灌装线装配，称量调节，加胶塞，处理倒常规的（灌装线装配，称量调节，加胶塞，处理倒瓶，取样，环境监测）瓶，取样，环境监测）非常规的（设备故障，灌装线堵塞，轨道调节，拆非常规的（设备故障，灌装线堵塞，轨道调节，拆卸卸/替换破损的部件）替换破损的部件）数量：干扰的次数应该不少于正常生产时发生的次数

32、量：干扰的次数应该不少于正常生产时发生的次数数人员 人数：模拟无菌区可能容纳最多的人数人数：模拟无菌区可能容纳最多的人数 活动：最多换班次数，不同时间段（日班和中夜班）活动：最多换班次数，不同时间段（日班和中夜班），进行正常操作，进行正常操作 频率：无菌区工作人员至少每年参与一次成功的培养频率：无菌区工作人员至少每年参与一次成功的培养基灌装基灌装环境监控和微生物限度控制 制定环境监测计划，综合形成书面方案制定环境监测计划，综合形成书面方案 如何制定环境监测计划如何制定环境监测计划 其他一些因素的考虑其他一些因素的考虑 方案的批准方案的批准 制定培养基灌装过程的微生物负荷的监控计划制定培养基灌装

33、过程的微生物负荷的监控计划,便于偏便于偏差调查差调查环境监控方案 应用风险评估的方法确定关键监控点应用风险评估的方法确定关键监控点 给产品构成最大风险的位置，如产品暴露位置、直接接给产品构成最大风险的位置，如产品暴露位置、直接接触表面触表面 人员人员 按实际需要选择合适的监测方法按实际需要选择合适的监测方法 空气浮游菌空气浮游菌 沉降菌沉降菌 接触碟接触碟/棉签法棉签法 合理制定控制标准合理制定控制标准 体现全面监控、动态监控体现全面监控、动态监控干热隧道胶塞漏斗灌装站风险点风险点-产品暴露区域产品暴露区域 瓶子裸露区瓶子裸露区灌装站区域灌装站区域胶塞裸露区胶塞裸露区至冻干机干热隧道胶塞漏斗灌

34、装站例如：例如：在左、中、右各设置一个连续粒子监测点在左、中、右各设置一个连续粒子监测点在灌装站左右设置两个浮游菌取样点在灌装站左右设置两个浮游菌取样点在左、中、右各设置一个沉降菌取样点在左、中、右各设置一个沉降菌取样点在轨道、灌装针头、胶塞盘各处设置多个表面取样点在轨道、灌装针头、胶塞盘各处设置多个表面取样点可以参考ISO14644 文件记录：文件记录：过程控制检测和实验室检测结果过程控制检测和实验室检测结果环境和人员监测结果环境和人员监测结果设备功能（批报警记录，过滤器完整性测试）设备功能（批报警记录，过滤器完整性测试）人员干扰操作、偏差、中断等人员干扰操作、偏差、中断等 -发生时间和持续

35、发生时间和持续时间时间培养基报废记录培养基报废记录生产线清场记录生产线清场记录过程录像过程录像培养基灌装过程记录培养基灌装过程记录 无菌生产区域无菌生产区域 管道系统管道系统 冻干机冻干机 过程中的过程中的培养基泄漏培养基泄漏 培养基的撤出和报废培养基的撤出和报废 培养基灌装过程培养基灌装过程/灌装前不得故意设计不具代表性的大灌装前不得故意设计不具代表性的大清场、消毒清场、消毒应当采取措施保证验证不能对生产造成不良影响培养基灌装结束后的清场和清洗培养基灌装的接受标准培养基模拟试验的目标是零污染，应当遵循以下原则：培养基模拟试验的目标是零污染，应当遵循以下原则：1.灌装数量少于灌装数量少于500

36、0支时，不得检出污染品；支时，不得检出污染品；2.灌装数量在灌装数量在5000至至10000时：时：(1)有有1支污染，需进行调查，并考虑重复培养基灌装试验支污染，需进行调查，并考虑重复培养基灌装试验(2)2支污染，需进行调查，进行再验证支污染，需进行调查，进行再验证3.灌装超过灌装超过10000支时：支时：(1)1支污染，需进行调查支污染，需进行调查(2)2支污染，需进行调查，进行再验证支污染，需进行调查，进行再验证4.发生任何微生物污染时，均应进行调查。发生任何微生物污染时，均应进行调查。培养结果阳性调查 当培养基灌装出现阳性结果时，不管是否符合合格标准当培养基灌装出现阳性结果时，不管是否

37、符合合格标准，都必须进行调查，科学评估工艺的可靠性以及上市产，都必须进行调查，科学评估工艺的可靠性以及上市产品可能存在的风险。品可能存在的风险。发现任何阳性结果样品均属应进行调查。分离到的微生发现任何阳性结果样品均属应进行调查。分离到的微生物应鉴别到种。调查过程中应详细分析可能的产生阳性物应鉴别到种。调查过程中应详细分析可能的产生阳性结果的原因。结果的原因。对于超出标准的结果，应当在调查清楚原因后再次进行对于超出标准的结果，应当在调查清楚原因后再次进行培养基灌装。培养基灌装。培养结果阳性调查在明确纠偏行动前，需考虑暂停生产。在工艺重新确认前的在明确纠偏行动前，需考虑暂停生产。在工艺重新确认前的

38、产品不得放行。产品不得放行。在在本次本次培养基灌装之后生产的到下一次成功的培养基灌装培养基灌装之后生产的到下一次成功的培养基灌装之间的产品都需要被进行回顾，评估其无菌失败的风险。之间的产品都需要被进行回顾，评估其无菌失败的风险。在该次培养基灌装和上一次成功的培养基灌装之间的产品在该次培养基灌装和上一次成功的培养基灌装之间的产品也需要被进行回顾，评估其无菌失败的风险。也需要被进行回顾，评估其无菌失败的风险。必要时，需制定纠偏和预防性措施，并进行工艺的重新确必要时，需制定纠偏和预防性措施，并进行工艺的重新确认。认。污染调查举例 发现污染瓶的调查应该从人、机、料、法、环各个方面进行发现污染瓶的调查应

39、该从人、机、料、法、环各个方面进行调查。调查。（1）生产环境监测数据（粒子、浮游菌、沉降碟等）生产环境监测数据（粒子、浮游菌、沉降碟等）（2）对人员的监测结果）对人员的监测结果（3）高效过滤器的完整性检测数据）高效过滤器的完整性检测数据（4）层流台性能数据（气流流速、压差记录等）层流台性能数据（气流流速、压差记录等）（5）生产房间监控数据（空气流向、工作台面气流方向速度）生产房间监控数据（空气流向、工作台面气流方向速度）（6）人员培训情况，操作资质和能力）人员培训情况，操作资质和能力（7）干扰模拟的执行情况）干扰模拟的执行情况（8）无菌室生产用具和其他相关物品的）无菌室生产用具和其他相关物品的

40、灭菌灭菌储存情况储存情况污染调查举例污染调查举例（9 9）微生物鉴定结果，以帮助确定来源）微生物鉴定结果，以帮助确定来源（1010）清洁消毒流程的执行情况）清洁消毒流程的执行情况（1111）设备仪器的校验结果）设备仪器的校验结果（1212）生产前后产品过滤器的泄露测试数据）生产前后产品过滤器的泄露测试数据（1313）生产过程发生的偏差）生产过程发生的偏差（1414）设备的）设备的CIP/SIPCIP/SIP的情况的情况（1 15 5）生产线和培养基）生产线和培养基灌装灌装的历史数据分析的历史数据分析污染调查举例 根据调查分析确定可能引起污染的原因，针对性制定有效措施。根据调查分析确定可能引起污

41、染的原因，针对性制定有效措施。所有调查行动、改进措施和结果都应当形成正式文件记录。所有调查行动、改进措施和结果都应当形成正式文件记录。培养基灌装失效 培养基灌装试验结果被认作无效的情况不应该频培养基灌装试验结果被认作无效的情况不应该频繁发生，繁发生，更不能直接将失败的培养基灌装结果视为无效更不能直接将失败的培养基灌装结果视为无效 在符合明确的书面规程要求的情况下才能做出试在符合明确的书面规程要求的情况下才能做出试验无效的判定，此时，应给出支持文件并充分说验无效的判定，此时，应给出支持文件并充分说明理由，并且在实际生产中遇到类似情况时也应明理由，并且在实际生产中遇到类似情况时也应同样处理。同样处

42、理。失效失效=无测试无测试注意注意:如果不可接受的情况发生，最好先停止培如果不可接受的情况发生，最好先停止培养基灌装，再判断是否是失效养基灌装，再判断是否是失效.培养基灌装失效 以下是可能造成培养基灌装失效结果的问题以下是可能造成培养基灌装失效结果的问题:培养基促生长试验失败培养基促生长试验失败 在无菌生产区域的物理条件发生问题在无菌生产区域的物理条件发生问题(例如断电、例如断电、HEPA发生泄漏发生泄漏)培养基灌装过程中一些违反规程的操作，这些操作可能培养基灌装过程中一些违反规程的操作，这些操作可能造成批生产中止造成批生产中止/报废报废 培养基灌装可能因为上述的任何一个或所有类似其他原因培养基灌装可能因为上述的任何一个或所有类似其他原因造成失效造成失效,这些问题可能造成灌装的中止或失效。但是，培这些问题可能造成灌装的中止或失效。但是，培养基灌装中止的事件需要有详细的说明记录养基灌装中止的事件需要有详细的说明记录。培养基灌装是对无菌工艺过程无菌保证水平的综合评估，目标是零污染。谢谢 谢！谢！