学习微生物培养的基本技术课件-人教版.ppt

1、(选修选修)第五章第五章学习微生物培学习微生物培养的基本技术养的基本技术人 大 附 中 实验目的实验目的 1 1、通过对牛肉膏蛋白胨培养基的配制，理解配、通过对牛肉膏蛋白胨培养基的配制，理解配制培养基的一般步骤和方法。制培养基的一般步骤和方法。2 2、了解灭菌的基本原理，以及实验室中常用、了解灭菌的基本原理，以及实验室中常用的灭菌方法。的灭菌方法。3 3、初步掌握细菌培养的基本技术。、初步掌握细菌培养的基本技术。人 大 附 中【实验原理实验原理】根据某种细菌的营养需要而选择多种原料配制而成根据某种细菌的营养需要而选择多种原料配制而成的培养基，不仅含有这种细菌生长繁殖所需要的各的培养基，不仅含有

2、这种细菌生长繁殖所需要的各种营养物质，还要有适宜的种营养物质，还要有适宜的pHpH。本实验所用的牛肉。本实验所用的牛肉膏蛋白胨培养基。膏蛋白胨培养基。配制好的培养基必须经过灭菌。灭菌是指杀死一定配制好的培养基必须经过灭菌。灭菌是指杀死一定环境中所有微生物的细胞、芽孢和孢子。培养基一环境中所有微生物的细胞、芽孢和孢子。培养基一般采用高压蒸气灭菌法，最终使菌体蛋白质凝固变般采用高压蒸气灭菌法，最终使菌体蛋白质凝固变性，从而达到灭菌的目的。接种环是用火焰烧灼灭性，从而达到灭菌的目的。接种环是用火焰烧灼灭菌的。菌的。将某种细菌接种在彻底灭菌的培养基上，经过一段将某种细菌接种在彻底灭菌的培养基上，经过一

3、段时间的培养后，就能够得到生长良好的细菌群体，时间的培养后，就能够得到生长良好的细菌群体，它们在培养基上会呈现出一定的形态特征。它们在培养基上会呈现出一定的形态特征。人 大 附 中【材料用具材料用具】芽孢杆菌或金黄色葡萄球菌，牛肉膏，蛋白芽孢杆菌或金黄色葡萄球菌，牛肉膏，蛋白胨，琼脂。胨，琼脂。天平，角匙，天平，角匙，200 mL200 mL烧杯，试管，漏斗，量烧杯，试管，漏斗，量筒，玻璃棒，滴管，胶管，弹簧夹，铁架台，筒，玻璃棒，滴管，胶管，弹簧夹，铁架台，酒精灯，石棉网，三角架，火柴，纱布，棉酒精灯，石棉网，三角架，火柴，纱布，棉花，牛皮纸，线绳，标签，接种环，精密花，牛皮纸，线绳，标签，

4、接种环，精密pHpH试纸（或试纸（或pHpH计），金属小筐，高压蒸气灭菌计），金属小筐，高压蒸气灭菌锅，恒温箱。锅，恒温箱。NaCl，1 molL的的NaOH溶液，体积分数为溶液，体积分数为75的酒精溶液，蒸馏水。的酒精溶液，蒸馏水。人 大 附 中方法步骤方法步骤1.培养基的配制培养基的配制l称量、溶化、调称量、溶化、调pH、培养基的分装、加棉塞、培养基的分装、加棉塞、包扎包扎2.灭菌灭菌3.搁置斜面搁置斜面4.接种接种5.培养培养人 大 附 中人 大 附 中人 大 附 中人 大 附 中人 大 附 中人 大 附 中人 大 附 中人 大 附 中人 大 附 中人 大 附 中人 大 附 中人 大 附

5、 中人 大 附 中人 大 附 中人 大 附 中人 大 附 中人 大 附 中人 大 附 中人 大 附 中人 大 附 中人 大 附 中人 大 附 中人 大 附 中人 大 附 中人 大 附 中人 大 附 中人 大 附 中人 大 附 中人 大 附 中人 大 附 中人 大 附 中讨论讨论1.在高压蒸气灭菌开始以前，为什么要将灭菌锅内在高压蒸气灭菌开始以前，为什么要将灭菌锅内的冷空气排除？的冷空气排除？2.灭菌完毕以后，如果压力未降到灭菌完毕以后，如果压力未降到0就打开排气阀，就打开排气阀，会出现什么现象？为什么？会出现什么现象？为什么？3.接种操作为什么一定要在火焰旁进行？接种操作为什么一定要在火焰旁进

6、行？人 大 附 中l（05北京）北京）31.（20分）某化工厂的污水池中，含有一种有害分）某化工厂的污水池中，含有一种有害的、难以降解的有机物化合物的、难以降解的有机物化合物A。研究人员用化合物。研究人员用化合物A、磷酸、磷酸盐、镁盐以及微量元素配制的培养基，成功地筛选到能高效盐、镁盐以及微量元素配制的培养基，成功地筛选到能高效降解化合物降解化合物A的细菌（目的菌）。实验的主要步骤如图所示，的细菌（目的菌）。实验的主要步骤如图所示，请分析回答问题：请分析回答问题：人 大 附 中l（1）培养基中加入化合物）培养基中加入化合物A的目的是筛选的目的是筛选目的菌目的菌，这种培养基属，这种培养基属于于选

7、择选择 培养基。培养基。l（2）“目的菌目的菌”生长所需的氮源是来自培养基中的生长所需的氮源是来自培养基中的化合物化合物A，实验需要振荡培养，由此推测实验需要振荡培养，由此推测“目的菌目的菌”的代谢类型是的代谢类型是异养需异养需氧型氧型。l（3）培养若干天后，应选择培养瓶中化合物）培养若干天后，应选择培养瓶中化合物A含量含量减少减少的培的培养液，接入新的培养液中连续培养，使养液，接入新的培养液中连续培养，使“目的菌目的菌”的数量的数量增加增加。l（4）转为固体培养基时，常采用）转为固体培养基时，常采用划线划线 的方法接种，获得单菌的方法接种，获得单菌落后继续筛选。落后继续筛选。l（5）若研究）

8、若研究“目的菌目的菌”的生长规律，将单个菌落进行液体培养，的生长规律，将单个菌落进行液体培养，可采用可采用定期取样定期取样 方法进行方法进行计数，以时间为横坐标，以计数，以时间为横坐标，以细菌数细菌数目的目的对数对数为纵坐标，绘制生长曲线。为纵坐标，绘制生长曲线。l（6）实验结束后，使用过的培养液应进行）实验结束后，使用过的培养液应进行灭菌灭菌处理后，才处理后，才能倒掉。能倒掉。人 大 附 中验证细菌分布的广泛性验证细菌分布的广泛性 （选修课、研究性学习）（选修课、研究性学习）应如何配培养基？如何取样？应如何减少实验应如何配培养基？如何取样？应如何减少实验误差？对照实验应如何设置？误差？对照实

9、验应如何设置？第第1套套开盖，在空气中暴露开盖，在空气中暴露10s第第2套套用手指接触培养基用手指接触培养基10s第第3套套用硬币接触培养基用硬币接触培养基10s第第4套套用滤纸擦一下课桌，再接触培养基用滤纸擦一下课桌，再接触培养基10s第第5套套对照（不打开盖）对照（不打开盖）人 大 附 中检查自来水中的大肠杆菌是否超标l大肠杆菌常常作为水污染的指示菌，如果水中不存在大肠杆菌或含大肠杆菌常常作为水污染的指示菌，如果水中不存在大肠杆菌或含量很少，表明水没有被病原菌污染。我国规定：量很少，表明水没有被病原菌污染。我国规定：1000mL自来水中大自来水中大肠杆菌的数量不超过肠杆菌的数量不超过3个。

10、个。l培养基：伊红培养基：伊红美蓝培养基美蓝培养基人 大 附 中自生固氮菌的分离自生固氮菌的分离设计实验：农田的表层土壤中固氮菌的含量比较设计实验：农田的表层土壤中固氮菌的含量比较多，根据什么原理将其与其它细菌分开？选用什多，根据什么原理将其与其它细菌分开？选用什么培养基？么培养基？讨论：为什么盛放无氮培养基的培养皿应是灭过讨论：为什么盛放无氮培养基的培养皿应是灭过菌的？菌的？假设黏液中有三种自生固氮菌，如何将三种细菌假设黏液中有三种自生固氮菌，如何将三种细菌分开？（稀释分开？（稀释接种在无氮培养基上接种在无氮培养基上镜镜检检再稀释）再稀释）人 大 附 中2.2.微生物菌种的分离方法微生物菌种

11、的分离方法（1）液体稀释法）液体稀释法将待分离的样品经过大量稀释后，取稀释液均匀地涂布将待分离的样品经过大量稀释后，取稀释液均匀地涂布在培养皿中的培养基表面，培养后就可能得到单个菌在培养皿中的培养基表面，培养后就可能得到单个菌落。落。（2 2）平板划线分离）平板划线分离 将已经熔化的培养基倒入培养皿中制成平板，用接种环将已经熔化的培养基倒入培养皿中制成平板，用接种环沾取少量待分离的材料，在培养基表面平行或分区划沾取少量待分离的材料，在培养基表面平行或分区划线，在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随线，在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成纯种的单着

12、线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成纯种的单个菌落。个菌落。（3）利用选择培养基进行分离）利用选择培养基进行分离人 大 附 中l（0404天津）（天津）（1 1）人们不会在热泉中发现活着）人们不会在热泉中发现活着的嗜冷海藻，而经常可以在冷水环境中分离出的嗜冷海藻，而经常可以在冷水环境中分离出嗜热微生物。请根据酶的特性分析产生这种现嗜热微生物。请根据酶的特性分析产生这种现象的原因。象的原因。l（2 2）淀粉酶可以通过微生物发酵生产。为了）淀粉酶可以通过微生物发酵生产。为了提高酶的产量，请你设计一个实验，利用诱变提高酶的产量，请你设计一个实验，利用诱变育种方法，获得产生淀粉酶较多的菌株。育种方法，

13、获得产生淀粉酶较多的菌株。写出主要实验步骤。写出主要实验步骤。根据诱发突变率低和根据诱发突变率低和诱发突变不定向性的特点预期实验结果。诱发突变不定向性的特点预期实验结果。l提示：生产菌株在含有淀粉的固体培养基上，提示：生产菌株在含有淀粉的固体培养基上，随着生长可释放淀粉酶分解培养基中的淀粉，随着生长可释放淀粉酶分解培养基中的淀粉，在菌落周围形成透圈。在菌落周围形成透圈。人 大 附 中1.抓住导线将加热丝从加热腔垂直拿出，小心不要将腔内壁的绝缘片带出或划破。抓住导线将加热丝从加热腔垂直拿出，小心不要将腔内壁的绝缘片带出或划破。2.将备用加热丝原样垂直装回。注意：加热腔内壁贴有绝缘片，安装时请保证

14、绝缘片紧贴腔体内壁。将备用加热丝原样垂直装回。注意：加热腔内壁贴有绝缘片，安装时请保证绝缘片紧贴腔体内壁。3.确定加热丝已安放后，旋紧固定螺丝，再将导线固定到接线柱上。确定加热丝已安放后，旋紧固定螺丝，再将导线固定到接线柱上。4.上盖帽子原样安放好，先将三颗内六角螺丝分别旋上，在确定三颗螺丝都旋上后，均匀将螺丝旋紧。上盖帽子原样安放好，先将三颗内六角螺丝分别旋上，在确定三颗螺丝都旋上后，均匀将螺丝旋紧。5、禁止使用河豚鱼、毒蘑菇、发芽马铃薯等含有毒有害物质的食品及原料，餐饮业禁止使用亚硝酸盐。、禁止使用河豚鱼、毒蘑菇、发芽马铃薯等含有毒有害物质的食品及原料，餐饮业禁止使用亚硝酸盐。6、豆浆、四

15、季豆等生食有毒食物，应按要求煮熟焖透，谨慎提供贝类、海螺类以及深海鱼的内脏，有效预防豆浆、四季豆、瘦肉精、雪卡毒素等中毒。、豆浆、四季豆等生食有毒食物，应按要求煮熟焖透，谨慎提供贝类、海螺类以及深海鱼的内脏，有效预防豆浆、四季豆、瘦肉精、雪卡毒素等中毒。7.严防发生投毒事件。外部人员不得随意进入食品加工出售间，注意炊事人员的思想建设，及时化解矛盾，以免发生过激行为。严防发生投毒事件。外部人员不得随意进入食品加工出售间，注意炊事人员的思想建设，及时化解矛盾，以免发生过激行为。8.工作结束后，调料加盖，工具、用具洗刷干净，定位存放；灶上、灶下地面清洗冲刷干净，不留残渣、油污，不留卫生死角，及时清除垃圾工作结束后，调料加盖，工具、用具洗刷干净，定位存放；灶上、灶下地面清洗冲刷干净，不留残渣、油污，不留卫生死角，及时清除垃圾