五节临床常用免疫学检查课件.ppt

1、第五节 临床常用免疫学检查临床常用免疫学检查 血清免疫球蛋白检测血清免疫球蛋白检测 血清补体检测血清补体检测 细胞免疫检测细胞免疫检测 肿瘤标志物检测肿瘤标志物检测 自身抗体检测自身抗体检测 器官与骨髓移植的检测器官与骨髓移植的检测血清免疫球蛋白检测 免疫球蛋白（免疫球蛋白（immnoglobulin,Ig）是）是B细胞在识别抗细胞在识别抗原后增殖、分化细胞所分泌的具有原后增殖、分化细胞所分泌的具有抗体活性和抗体活性和/或抗体样或抗体样结构结构的球蛋白。存在于机体的血液、体液、外分泌液和的球蛋白。存在于机体的血液、体液、外分泌液和淋巴细胞膜上。用免疫电泳可将其分为淋巴细胞膜上。用免疫电泳可将其

2、分为5类类IgG、A、M、D、E。免疫球蛋白有特异性识别抗原的功能，即免疫球蛋白有特异性识别抗原的功能，即一种抗体一种抗体只能与相应的抗原决定簇反应只能与相应的抗原决定簇反应。免疫球蛋白贯穿机体免。免疫球蛋白贯穿机体免疫应答的全过程，对免疫应答的产生、发展、调节均有疫应答的全过程，对免疫应答的产生、发展、调节均有重要的影响。重要的影响。一免疫球蛋白（IgG）IgG是血清中最主要的免疫球蛋白是血清中最主要的免疫球蛋白，约占血清总量的约占血清总量的75%，IgG是唯一可通过胎盘从母体转移到胎儿的免疫球是唯一可通过胎盘从母体转移到胎儿的免疫球蛋白。正常情况成人高于儿童，女性略高于男性。蛋白。正常情况

3、成人高于儿童，女性略高于男性。【临床意义临床意义】IgG增高增高 多克隆性增高：多克隆性增高：IgG、A、M增高增高。单克隆性增高：单克隆性增高：某一种某一种Ig增高。主要增高。主要见于见于 免疫增生性疾病，如（免疫增生性疾病，如（MM）。）。IgG减低减低 先天性、获得性、联合免疫缺陷病，重链、先天性、获得性、联合免疫缺陷病，重链、轻链病，肾病综合症、病毒感染轻链病，肾病综合症、病毒感染。四免疫球蛋白（IgE）IgE仅占血清总仅占血清总 Ig的的0.002%。是一种亲细胞抗体，主要的生物学功能是参与是一种亲细胞抗体，主要的生物学功能是参与I型型变态反应。此外，还参与抗寄生虫感染等。变态反应。

4、此外，还参与抗寄生虫感染等。【临床意义临床意义】增高：增高：IgE型型MM、重链病、肝病、自身免疫病、各种、重链病、肝病、自身免疫病、各种 过敏性疾病、寄生虫感染、免疫复合物引起的过敏性疾病、寄生虫感染、免疫复合物引起的 肾炎等，肾炎等，减低：减低：先天性和获得性丙种先天性和获得性丙种Ig缺陷病、恶性肿瘤、微缺陷病、恶性肿瘤、微 血管扩张共剂失调症、长期可的松治疗。血管扩张共剂失调症、长期可的松治疗。五种免疫球蛋白的生物化学特性 免疫球蛋白免疫球蛋白 血清含量血清含量/L 占血清占血清Ig%沉降系数沉降系数 电泳位置电泳位置 抗原结合价抗原结合价 产生顺序产生顺序 IgG 816g/L 708

5、0 7 ra-a1 2 2 血清型血清型IgA 7103350mg 1015 6.614 ra-a 2 3 分泌型分泌型 IgA 不等不等 4 3 IgM 0.482.12g 510 1819 r1-1 10 1 IgD 0.60.2mg 0.021 7 r1 2 4 IgE 0.10.9mg 0.002 8 r1 2 5五血清M蛋白 M蛋白或称单克隆免疫球蛋白，由浆细胞异常增殖所产生的，蛋白或称单克隆免疫球蛋白，由浆细胞异常增殖所产生的，具有相同分子结构和电泳迁移率免疫球蛋白，但不具有抗体活性。具有相同分子结构和电泳迁移率免疫球蛋白，但不具有抗体活性。参考值参考值 蛋白蛋白(免疫免疫)电泳、

6、免疫比浊：正常人为阴性电泳、免疫比浊：正常人为阴性【临床意义临床意义】多发性骨髓瘤：多发性骨髓瘤：IgG型型IgA型，型，IgD和和IgE罕见罕见 巨球蛋白血症：大量的单克隆巨球蛋白血症：大量的单克隆IgM 重轻链病：重轻链病：Ig重链（重链（、）；单克隆游离轻链）；单克隆游离轻链 半分子病：由一条重链和一条轻链组成的单克隆半分子病：由一条重链和一条轻链组成的单克隆Ig片段异常增生片段异常增生 7SIgG病：恶性病：恶性M蛋白病蛋白病 血清补体检测 补体补体(complement,C)是一组具有酶原活性的糖蛋白是一组具有酶原活性的糖蛋白,是是抗体发挥溶细胞作用的必要条件。抗体发挥溶细胞作用的必

7、要条件。按先后顺序分别称为按先后顺序分别称为C1(C1q、C1r、C1s)C9。参与。参与旁路途径中的成分则以因子命名，如旁路途径中的成分则以因子命名，如B、D、P、H、I等。等。在炎症组织内的补体有在炎症组织内的补体有90%是血清中扩散而来，是血清中扩散而来，补体补体+体液因子体液因子+免疫细胞共同参与机体的抗感染免疫反应。免疫细胞共同参与机体的抗感染免疫反应。具具有有介导细胞溶解、调理吞噬、免疫黏附以及参与炎症反应介导细胞溶解、调理吞噬、免疫黏附以及参与炎症反应引起的机体免疫损伤引起的机体免疫损伤等作用。等作用。免疫复合物既能启动补体系统活化途径，也能启动补免疫复合物既能启动补体系统活化途

8、径，也能启动补体替代途径。体替代途径。补体系统的基本特征：补体系统的基本特征：补体作用无特异性，补体作用无特异性，与反应体系中的抗原与反应体系中的抗原抗体复合物结合。抗体复合物结合。补体系统有两个放大系统补体系统有两个放大系统，一是由少量，一是由少量C1q引起酶级联反应，使引起酶级联反应，使许多许多C3分子被分解；另一个是分子被分解；另一个是C3转化酶的正调节作用。转化酶的正调节作用。不稳定性不稳定性，一些补体成分（如，一些补体成分（如C1、C2、C5、C8）性质不稳定，）性质不稳定，经经56oC30min处理就丧失活性。即使在处理就丧失活性。即使在10oC下，其活性不能保持下，其活性不能保持

9、34d，故需放置，故需放置-20oC以下保存。以下保存。连锁反应连锁反应，补体成分以非活性蛋白前体存在于血浆中，当补体第补体成分以非活性蛋白前体存在于血浆中，当补体第1个成分被激活后，依次地活化直至最后一个补体成分。被激活的个成分被激活后，依次地活化直至最后一个补体成分。被激活的成分具有酶或其它生物学活性。成分具有酶或其它生物学活性。作用的两面性作用的两面性，激活的补体有生理和病理方面作用，前者表现为，激活的补体有生理和病理方面作用，前者表现为抗感染防御，溶解病原体，清除免疫复合物和调节免疫功能等作抗感染防御，溶解病原体，清除免疫复合物和调节免疫功能等作用；后者表现为引起组织损伤，参与免疫病理

10、过程。用；后者表现为引起组织损伤，参与免疫病理过程。一一.总补体溶血活性（总补体溶血活性（CH50）测定）测定原理：原理：补体（补体（C1C9）能使溶血素（抗体）致敏的绵羊红细胞溶）能使溶血素（抗体）致敏的绵羊红细胞溶解。既抗原抗体复合物激活待测血清中的解。既抗原抗体复合物激活待测血清中的C1，从而引起补体，从而引起补体传统活化途径的连锁反应，最终导致羊红细胞溶解。传统活化途径的连锁反应，最终导致羊红细胞溶解。补体溶血程度与活性相关，呈一特殊的补体溶血程度与活性相关，呈一特殊的S曲线。一般以曲线。一般以50%溶血作为检测终点（即溶血作为检测终点（即CH50）。）。【临床意义临床意义】活性增高：

11、活性增高：急性炎症、感染、急性炎症、感染、组织损伤、恶性肿瘤等组织损伤、恶性肿瘤等 活性减低：活性减低：各种免疫性复合物各种免疫性复合物 性疾病，性疾病，合成不足见于急合成不足见于急 慢性病毒性肝炎和遗传性慢性病毒性肝炎和遗传性 补体成分缺补体成分缺 陷症等。陷症等。二二.补体补体C3检测检测 补体补体C3是一种由肝脏合成的是一种由肝脏合成的2-球蛋白，在补体球蛋白，在补体系统中含量最高，是传统和旁路途径被激活的关键物系统中含量最高，是传统和旁路途径被激活的关键物质。质。【临床意义临床意义】1.增高：急性炎症、传染病早期、肿瘤、排异反应等。增高：急性炎症、传染病早期、肿瘤、排异反应等。2.减低

12、：急性肾小球肾炎、部分自身免疫病患者。减低：急性肾小球肾炎、部分自身免疫病患者。3.血清补体血清补体C3活性的检测对疾病的进程和疗效判断提活性的检测对疾病的进程和疗效判断提 供了重要的依据。供了重要的依据。三三.补体旁路补体旁路B因子检测因子检测 补体旁路补体旁路B因子是一种不耐热的因子是一种不耐热的-球蛋白。球蛋白。B因子因子是补体旁路活化途径中的一个重要成分，又称是补体旁路活化途径中的一个重要成分，又称C3激活激活剂前体。剂前体。【临床意义临床意义】1.增高：某些自身免疫性疾病、肿瘤、肾病综合症等增高：某些自身免疫性疾病、肿瘤、肾病综合症等 2.减低：肝病、急性肾小球肾炎、自身免疫性溶血性

13、减低：肝病、急性肾小球肾炎、自身免疫性溶血性 贫血等贫血等 肿瘤标志物检测 恶性肿瘤是给人类带来深重苦难的疾病，严重威恶性肿瘤是给人类带来深重苦难的疾病，严重威胁着人类健康。据统计，我国每年约有胁着人类健康。据统计，我国每年约有160万人患肿万人患肿瘤，瘤，100万人以上死于肿瘤万人以上死于肿瘤。肿瘤的及时发现与诊断，对于肿瘤患者提高治愈肿瘤的及时发现与诊断，对于肿瘤患者提高治愈率及延长生命是至关重要的。率及延长生命是至关重要的。肿瘤的诊断除了临床、肿瘤的诊断除了临床、影象学、病理外，临床实验室辅助检测手段，主要是影象学、病理外，临床实验室辅助检测手段，主要是测定肿瘤患者血液和体液中的肿瘤标志

14、物。测定肿瘤患者血液和体液中的肿瘤标志物。一肿瘤的概念 肿瘤（肿瘤（tumor）是细胞呈现不能控制和进行性生长为是细胞呈现不能控制和进行性生长为特征的一类异常肿块。特征的一类异常肿块。肿瘤的细胞生物学行为：肿瘤的细胞生物学行为：生长缓慢、有完整包膜、与周围组织生长缓慢、有完整包膜、与周围组织 良性肿瘤良性肿瘤 分界清楚和不发生转移分界清楚和不发生转移肿瘤肿瘤 恶性肿瘤恶性肿瘤 生长快、无完整包膜、向邻近组织侵润生长快、无完整包膜、向邻近组织侵润 生长和向远处转移，严重危害人的生命生长和向远处转移，严重危害人的生命 肿瘤标志物（肿瘤标志物（tumor marker,TM）是指在肿瘤的发）是指在肿

15、瘤的发生和增殖过程中，由肿瘤细胞生和增殖过程中，由肿瘤细胞本身所产生的本身所产生的或者是由或者是由机机体肿瘤细胞反应而产生的体肿瘤细胞反应而产生的，反映肿瘤存在和生长的一类，反映肿瘤存在和生长的一类物质，包括蛋白质、激素酶（同工酶）、多胺及癌基物质，包括蛋白质、激素酶（同工酶）、多胺及癌基因因产物等。产物等。可用生物化学、免疫学及分子生物学等方法进行测定。可用生物化学、免疫学及分子生物学等方法进行测定。对肿瘤的辅助诊断、鉴别诊断、疗效观察、病情监测以对肿瘤的辅助诊断、鉴别诊断、疗效观察、病情监测以及预后的评价具有一定的价值。及预后的评价具有一定的价值。肿瘤标志物定义：肿瘤标志物定义：二.蛋白质

16、肿瘤标志物的检测蛋白质肿瘤标志物的检测（1）甲胎蛋白（）甲胎蛋白（alpha-fetoprotein，AFP）参考值参考值 RIA 和和ELISA法法；成人；成人25g/L 是胎儿早期由肝脏合成的血清中主要的蛋白质。胎儿在是胎儿早期由肝脏合成的血清中主要的蛋白质。胎儿在1216周时血浆中含量可达到周时血浆中含量可达到3000g/L，随后逐渐降低，出生后，随后逐渐降低，出生后AFP合成合成很快受抑制，周岁婴儿的浓度接近成人水平。很快受抑制，周岁婴儿的浓度接近成人水平。一般健康成人血浆一般健康成人血浆AFP浓度浓度20g/L。当。当肝细胞肝细胞或或生殖腺胚胎生殖腺胚胎组织组织发生恶性病变时，有关基

17、因重新激活，原来已丧失合成发生恶性病变时，有关基因重新激活，原来已丧失合成aFP能能力的细胞重新开始合成，血中力的细胞重新开始合成，血中aFP含量升高。含量升高。临床意义临床意义 成人血清成人血清AFP升高见于升高见于：（1）原发性肝癌原发性肝癌(70-90%)(70-90%)可在症状出现前可在症状出现前6-126-12个月作出诊断个月作出诊断，大于大于300g/L300g/L，是原发性肝癌重要的指标。但约有，是原发性肝癌重要的指标。但约有18%18%的病人的病人AFPAFP不升高不升高。（2）病毒性肝炎，肝硬化病毒性肝炎，肝硬化患者患者AFP浓度有不同程度升高，但其水平通浓度有不同程度升高，

18、但其水平通常低于常低于300g/L。（3）生殖腺胚胎癌生殖腺胚胎癌（睾丸癌、卵巢癌、畸胎瘤（睾丸癌、卵巢癌、畸胎瘤 等），胃癌或胰腺癌等），胃癌或胰腺癌时时AFPAFP升高。升高。（4）孕妇血清孕妇血清AFPAFP增高增高，中期达高峰，多中期达高峰，多 15 g/L。临床意义临床意义（1）消化道恶性肿瘤：消化道恶性肿瘤：整个胃肠道恶性肿瘤均可增高。整个胃肠道恶性肿瘤均可增高。非消化非消化道恶性肿瘤道恶性肿瘤：如卵巢癌、乳腺癌、肺癌等也有不同程度升高。：如卵巢癌、乳腺癌、肺癌等也有不同程度升高。（2）CEA连续随访监测连续随访监测，可用于恶性肿瘤手术后或化疗患者的，可用于恶性肿瘤手术后或化疗患者

19、的疗效观察及预后判断。一般情况下，病情好转时血清疗效观察及预后判断。一般情况下，病情好转时血清ECA浓度下浓度下降，病情恶化时升高。降，病情恶化时升高。（3）CEA与其它肿瘤标志物结合与其它肿瘤标志物结合测定可提高癌肿的检出率。测定可提高癌肿的检出率。检检测胸、腹水或胃液的测胸、腹水或胃液的CEA含量对鉴别诊断有意义。含量对鉴别诊断有意义。（4）非肿瘤性疾病：）非肿瘤性疾病：肠道憩室、直肠息肉、结肠炎、肝硬化、肝肠道憩室、直肠息肉、结肠炎、肝硬化、肝炎和肺部疾病炎和肺部疾病ECA也有不同程度的升高，但阳性率较低。大量吸也有不同程度的升高，但阳性率较低。大量吸烟者、妊娠也可增高。烟者、妊娠也可增

20、高。二.蛋白质肿瘤标志物的检测蛋白质肿瘤标志物的检测（3）前列腺特异性抗原）前列腺特异性抗原(Prostate specific antigen，PSA)血清血清PSA 分子形式：分子形式：复合型复合型PSA(t-PSA)参考值参考值 4.0 g/L F/T比值比值0.25游离型游离型PSA(f-PSA)参考值参考值 1 g/L （PSA）是一种仅由前列腺上皮细胞分泌的糖蛋白，当）是一种仅由前列腺上皮细胞分泌的糖蛋白，当正常腺管结构遭到良性、恶性肿瘤或炎症的破坏时，其血浆正常腺管结构遭到良性、恶性肿瘤或炎症的破坏时，其血浆中中PSA水平升高。正常人血清中水平升高。正常人血清中PSA4ug/L。

21、注意：注意：采集病人的血清标本前，若进行前列腺按摩，将导采集病人的血清标本前，若进行前列腺按摩，将导 致血清致血清PSA升高。升高。临床意义临床意义（1）前列腺癌前列腺癌患者可见血清患者可见血清PSA浓度升高。浓度升高。t-PSA血清浓度和阳血清浓度和阳性率随着病程的进展而增高，因此，性率随着病程的进展而增高，因此，PSA可作为监测前列腺癌病可作为监测前列腺癌病情变化和疗效的重要指标。情变化和疗效的重要指标。（2）前列腺肥大、前列腺炎）前列腺肥大、前列腺炎，也可见，也可见t-PSA和和f-PSA水平轻度升高水平轻度升高，必须结合其它检查进行鉴别。，必须结合其它检查进行鉴别。（3）单独使用单独使

22、用t-PSA和和f-PSA升高来诊断前列腺癌时很难排除前列升高来诊断前列腺癌时很难排除前列腺增生症，特别是当腺增生症，特别是当t-PSA在在5 g/L-10 g/L时。此时应用时。此时应用t-PSA和和f-PSA来判断。来判断。t-PSA/f-PSA25%时提示前列腺增生症时提示前列腺增生症。二.糖脂类肿瘤标志物检测糖脂类肿瘤标志物检测（1 1）CA19-9、CA50 CA19-9在在消化道腺癌消化道腺癌病人血清中的浓度可明显升高，是病人血清中的浓度可明显升高，是胰腺胰腺癌和胆管癌癌和胆管癌的肿瘤标志物。的肿瘤标志物。（2 2）CA125 CA125是存在于卵巢肿瘤的上皮细胞内的糖蛋白类相关抗

23、是存在于卵巢肿瘤的上皮细胞内的糖蛋白类相关抗原，作为原，作为卵巢癌卵巢癌的辅助诊断是个重要的标志物。的辅助诊断是个重要的标志物。（3 3）CA15-3 CA15-3 是乳腺细胞上皮表面糖蛋白的变异体，因为对乳腺是乳腺细胞上皮表面糖蛋白的变异体，因为对乳腺癌有一定的特异性，尤其晚期乳腺癌癌有一定的特异性，尤其晚期乳腺癌100%，故作为，故作为诊断乳腺癌诊断乳腺癌的的重要标志物。重要标志物。部分肿瘤标志物选择范围：部分肿瘤标志物选择范围：癌种癌种 肿瘤标志物选择顺序肿瘤标志物选择顺序 睾丸肿瘤睾丸肿瘤 -HCG、AFP,、AKP、CEA 膀胱肿瘤膀胱肿瘤 ABO(H)、CEA、TPA前列腺癌前列腺

24、癌 PSA(包括包括T-PSA、F-PSA及及f/t)、PAP乳腺癌、宫颈癌乳腺癌、宫颈癌 CA153、CA125、CEA、72-4结直肠癌结直肠癌 CEA、CA19-9、CA50、CA125、CA242肝癌、胰腺癌肝癌、胰腺癌 AFP、CEA、CA50、CA19-9、APT肺癌肺癌 CA50、CEA/SCC、NSE、SYFRA-211卵巢癌卵巢癌 CA125、CA50、-HCG、CEA白血病、淋巴瘤白血病、淋巴瘤 白细胞分化抗原白细胞分化抗原机体感染机体感染HBVHBV后产生后产生3 3种不同的抗原抗体系统种不同的抗原抗体系统 乙型肝炎病毒表面抗原抗体乙型肝炎病毒表面抗原抗体 （HBsAgH

25、BsAg、HBsAbHBsAb）乙型肝炎病毒核心抗原抗体乙型肝炎病毒核心抗原抗体 （HBcAgHBcAg、HBcAbHBcAb）乙型肝炎病毒乙型肝炎病毒e e抗原抗体抗原抗体 （HBeAgHBeAg、HBeAbHBeAb）HBcAg存在于肝细胞核内，不游离于血清中，不作常规检查 病毒性肝炎标志物病毒性肝炎标志物乙型病毒性肝炎标志物乙型病毒性肝炎标志物检验检验 参考值 均为阴性各标志物阳性的临床意义1.HBsAgn 为HBV感染的指标n 感染后12个月出现，持续数周、数月、数年，甚至终身n 提示可能的感染，如阳性可作为传染性的标志 之一HBsAg+乙型肝炎潜伏期和急性期慢性迁延性肝炎、慢性活动性

26、肝炎、肝硬化、肝癌慢性HbsAg携带者2.抗-HBs 为一种保护性抗体，对HBsAg有一定的中和作用 在HBsAg转阴后出现，可持续多年，其滴度与保护作用相平行 阳 性曾感染过HBV，有一定的免疫力，现已恢复接种乙肝疫苗后被动性获得抗 HBs抗体3.HBeAg阳 性是病毒复制、传染性强的指标急性肝炎者，若持续阳性，易转变为慢性肝炎HBeAg和HBsAg阳性的孕妇可将乙肝病毒垂直传播给新生儿（70%90%）4.抗-HBe-出现于急性感染的恢复期，持续时间较长-是HBV复制减少的标志，传染性可能较前减弱 见于HBeAg转阴者，示病毒复制减少，传染性减低 部分慢性乙型肝炎、肝硬化和肝癌患者阳性5.抗

27、-HBc 不是中和抗体 是HBV对肝细胞损害程度的标志 主要检测抗-HBc IgM和抗-HBc 总抗体（1）抗-HBc IgM 乙肝病毒近期感染的灵敏指标，持续复制指标，提示有传染性阳性急性乙肝，可用于判断病毒复制和传染性慢性活动性肝炎（2）抗-HBc IgG 感染后1个月开始升高，持续时间长，以往乙肝病毒感染的最好指标（感染流行的指标）6.乙型肝炎病毒DNA（HBV-DNA）HBV-DNA定性和定量测定是乙型肝炎的 直接诊断证据HBsAHBsAg g抗抗-HBsHBsHBeAgHBeAg抗抗-HBeHBe抗抗-HBcHBc+急、慢乙肝，急、慢乙肝，高传高传+急、慢乙肝、慢性表急、慢乙肝、慢性表抗携带者抗携带者+急趋慢或恢复急趋慢或恢复,弱传弱传+恢复期、曾感，有免恢复期、曾感，有免疫力疫力+康复期，康复期，弱传弱传+急急“窗口期窗口期”或曾感或曾感+疫苗接种后或康复疫苗接种后或康复+康复开始产免疫力康复开始产免疫力