实验7动物染色体标本的制备课件.ppt

1、实验实验 7 7 动物染色体的制备动物染色体的制备 -牛蛙骨髓细胞染色体标本的制备、观察牛蛙骨髓细胞染色体标本的制备、观察一、实验目的一、实验目的1.1.了解制备中期染色体标本的原理。了解制备中期染色体标本的原理。2.2.熟悉并初步掌握制备骨髓染色体的操作方法。熟悉并初步掌握制备骨髓染色体的操作方法。2022-11-221 染色体是生物遗传基因的载体。在物种进化、作物育种、染色体是生物遗传基因的载体。在物种进化、作物育种、性别鉴定、基因定位以及癌症和遗传性疾病的诊断中，有时性别鉴定、基因定位以及癌症和遗传性疾病的诊断中，有时需要制备染色体标本。动物的骨髓中存在大量活跃的进行有需要制备染色体标本

2、。动物的骨髓中存在大量活跃的进行有丝分裂的细胞，是染色体制备的理想材料。给动物注射了特丝分裂的细胞，是染色体制备的理想材料。给动物注射了特异作用于微管系统的秋水仙素后，可以抑制纺锤体的形成，异作用于微管系统的秋水仙素后，可以抑制纺锤体的形成，使分裂细胞阻断于有丝分裂中期。收集骨髓细胞，低渗处理，使分裂细胞阻断于有丝分裂中期。收集骨髓细胞，低渗处理，使细胞质膜破裂，以利染色体的分散。细胞经固定后，于预使细胞质膜破裂，以利染色体的分散。细胞经固定后，于预冷的载玻片上滴片，使染色体散开，再用姬姆萨染色，便可冷的载玻片上滴片，使染色体散开，再用姬姆萨染色，便可以制成染色体标本。以制成染色体标本。202

3、2-11-222二、实验原理二、实验原理2022-11-223人外周血淋巴细胞染色体（Giemse 染色）2022-11-2242022-11-225三、实验用品三、实验用品 试剂：试剂：0.650.65生理盐水，甲醇生理盐水，甲醇冰醋酸冰醋酸(3:1)(3:1)固固定液定液,蒸馏水，蒸馏水，GiemsaGiemsa染液。染液。器材：显微镜，离心机，搪瓷盘，剪刀，骨剪，器材：显微镜，离心机，搪瓷盘，剪刀，骨剪，离心管，注射器，染色缸。离心管，注射器，染色缸。材料：肉用成体牛蛙材料：肉用成体牛蛙2022-11-226动物的药物处理（课前已经完成）动物的药物处理（课前已经完成）牛蛙称重，按每克体重

4、牛蛙称重，按每克体重2 2 gg的剂量腹腔注射的剂量腹腔注射秋水仙碱溶液秋水仙碱溶液(用用0 06565生理盐水配制生理盐水配制)。注射。注射后后3.5-43.5-4小时，双毁髓法处死牛蛙。小时，双毁髓法处死牛蛙。2022-11-227四、实验步骤四、实验步骤 1 1每组同学取前肢、后肢各一，取出肱骨、股骨和胫每组同学取前肢、后肢各一，取出肱骨、股骨和胫腓骨等长骨。腓骨等长骨。剪去骨两端膨大部的半透明软骨，程度以刚刚剪去骨两端膨大部的半透明软骨，程度以刚刚露出骨髓组织为宜。每组保证有露出骨髓组织为宜。每组保证有1 1根后肢长骨，或者根后肢长骨，或者2 2根前肢根前肢长骨。长骨。2 2在小烧杯中

5、加入在小烧杯中加入3 ml3 ml的的0.65生理盐水，取带针头生理盐水，取带针头的注射器，吸入的注射器，吸入1 ml 1 ml 0.65生理盐水，将针头沿骨的长轴生理盐水，将针头沿骨的长轴方向从骨的一端刺入骨中，缓慢推动注射器活塞，将骨髓细方向从骨的一端刺入骨中，缓慢推动注射器活塞，将骨髓细胞冲洗到胞冲洗到10ml10ml离心管中。注意：冲洗时动作要徐缓，以免溶离心管中。注意：冲洗时动作要徐缓，以免溶液喷出，损失骨髓细胞。此液喷出，损失骨髓细胞。此3ml3ml的生理盐水要反复使用，直的生理盐水要反复使用，直到把所有材料中的骨髓冲出为止。将骨髓冲出物中大块白色到把所有材料中的骨髓冲出为止。将骨

6、髓冲出物中大块白色脂肪组织用针头挑出弃去。脂肪组织用针头挑出弃去。2022-11-228四、实验步骤四、实验步骤2022-11-229四、实验步骤四、实验步骤取后肢：剪开牛蛙后肢与躯干接合部的肌肉，可看到膨大的关节部。取后肢：剪开牛蛙后肢与躯干接合部的肌肉，可看到膨大的关节部。2022-11-2210四、实验步骤四、实验步骤取后肢取后肢2：用剪刀顺着关节外围剪开。：用剪刀顺着关节外围剪开。2022-11-2211四、实验步骤四、实验步骤取后肢取后肢3：剪开后的后腿关节。：剪开后的后腿关节。2022-11-2212四、实验步骤四、实验步骤取前肢取前肢1：找到关节所在。：找到关节所在。2022-1

7、1-2213四、实验步骤四、实验步骤取前肢取前肢2：剪开肌肉，顺着关节外围剪开。：剪开肌肉，顺着关节外围剪开。2022-11-2214四、实验步骤四、实验步骤2022-11-2215四、实验步骤四、实验步骤3.3.在载玻片上滴在载玻片上滴1 1滴蒸馏水，然后滴加滴蒸馏水，然后滴加2 2滴第滴第2 2步获得的骨髓细胞悬液。轻步获得的骨髓细胞悬液。轻轻晃动载玻片，使液体混匀，并在载玻片上铺展开。轻晃动载玻片，使液体混匀，并在载玻片上铺展开。18-2018-20下静置，下静置，低渗处理低渗处理20-3020-30分钟。注意防止水分蒸发。分钟。注意防止水分蒸发。4.4.在培养皿中放入两根竹签，将滴有骨

8、髓细胞在培养皿中放入两根竹签，将滴有骨髓细胞的载玻片放在竹签上，缓慢向培养皿中加入的载玻片放在竹签上，缓慢向培养皿中加入固定液固定液I I（无水乙醇（无水乙醇:冰醋酸冰醋酸:蒸馏水蒸馏水=1:2:3=1:2:3）室温下利用挥发的蒸汽固定室温下利用挥发的蒸汽固定100-120min100-120min。5.5.吸走固定液，换入无水乙醇，蒸汽固定吸走固定液，换入无水乙醇，蒸汽固定10-2010-20分钟。分钟。6.6.取出载玻片，缓缓倒去低渗液，用吸管将取出载玻片，缓缓倒去低渗液，用吸管将固定液固定液II(II(无水乙醇无水乙醇:冰醋酸冰醋酸=1:2)=1:2)自载玻片自载玻片的一端缓慢滴下形成水

9、幕，固定的一端缓慢滴下形成水幕，固定3-43-4次，直次，直立载玻片空气干燥。立载玻片空气干燥。注意，每组做注意，每组做2片片452022-11-2216蒸汽固定法蒸汽固定法四、实验步骤四、实验步骤7.7.在干净的培养皿中放入两垛盖玻片（每垛在干净的培养皿中放入两垛盖玻片（每垛3 3片），将固定并充片），将固定并充分干燥的载玻片有细胞的一面向下，放置于盖玻片上，将分干燥的载玻片有细胞的一面向下，放置于盖玻片上，将GiemsaGiemsa染料用吸管注入载玻片和培养皿底的间隙中，扣染染料用吸管注入载玻片和培养皿底的间隙中，扣染20-20-3030分钟。分钟。8.8.用蒸馏水稍洗使脱去浮色，吸水纸吸

10、干载玻片底面和周围的用蒸馏水稍洗使脱去浮色，吸水纸吸干载玻片底面和周围的水分，空气干燥后在显微镜下观察。不使用油镜的情况下不水分，空气干燥后在显微镜下观察。不使用油镜的情况下不需要盖玻片。需要盖玻片。Giemsa染色染色改良苯酚品红染色改良苯酚品红染色2022-11-2217蒸汽固定法蒸汽固定法四、实验步骤四、实验步骤注意事项注意事项 1.骨髓染色体标本的制备成败决定于取材，骨髓染色体标本的制备成败决定于取材，若抽取的骨髓太少或太稀，细胞数目过少，若抽取的骨髓太少或太稀，细胞数目过少，不易获得较多的中期分裂相。不易获得较多的中期分裂相。2.2.低渗处理极为重要，低渗不够，则染低渗处理极为重要，低渗不够，则染色体聚在一起，分散不好。太过，则造成细色体聚在一起，分散不好。太过，则造成细胞破碎，染色体丢失。胞破碎，染色体丢失。2022-11-2218五、实验结果五、实验结果1找出最好的几个分裂相，数出染色体条数找出最好的几个分裂相，数出染色体条数.2.画出两个好的分裂相的显微图。画图里用铅笔，画出两个好的分裂相的显微图。画图里用铅笔，对照着显微镜视野来画，不要画对照着显微镜视野来画，不要画“想象图想象图”。3.取骨髓前，为什么要给牛蛙注射秋水仙素？取骨髓前，为什么要给牛蛙注射秋水仙素？2022-11-2219牛蛙染色体，2n=26五、实验结果五、实验结果2022-11-2220