爱乙梅实验室快速检测-课件.ppt

1、预防艾滋病、梅毒、乙肝母婴阻断实验室检测1.乙肝五项实验室快速检测。2.HIV实验室快速检测。3.梅毒螺旋体抗体非特异性反应检测（TRUST）。4.梅毒螺旋体抗体检测(ELISA法)。5.乙肝人免疫球蛋白。试剂名称试剂名称：乙型肝炎病毒表面抗原、表面抗体、e抗原、e抗体、核心抗体检测试剂盒（胶体金法）检测原理检测原理：HBsAg,HBeAg检测试纸条采用双抗体夹心法，试纸条含有被事先固定于膜上测试区(T)的多克隆抗体和控制区(C)的相应抗体。HBsAb检测试纸条采用双抗原夹心法，试纸条含有被事先固定于膜上测试区(T)的乙肝表面抗原和控制区(C)的相应抗体。测试时，血清/血浆标本滴入试剂板加样处

2、，随之标本在毛细效应下向上层析。如标本中含有相应的待测物质，在测试区内（T）出现一条红色条带,则是阳性结果。如标本中不含有相应的待测物质，则测试区内（T）将没有红色条带，则是阴性结果。无论相应的待测物质是否存在于标本中，一条红色条带都会出现在质控区内（C）。质控区内（C）所显现的红色条带是判定是否有足够标本，层析过程是否正常的标准，同时也作为试剂的内控标准。HBeAb,HBcAb检测试纸条采用竞争抑制法，试纸条含有被事先固定于膜上测试区(T)的单克隆抗体和控制区(C)的相应抗体。测试时，血清/血浆标本滴入试剂板加样处，随之标本在毛细效应下向上层析。如标本中含有相应的抗体，则同膜上测试区(T)的

3、单克隆抗体竞争与预包被在乳胶颗粒上的相应抗原反应。如标本中没有相应的抗体，预包被在乳胶颗粒上的相应抗原则同膜上测试区(T)的单克隆抗体全部结合。强阳性标本，测试区内（T）将没有红色条带，弱阳性标本，测试区内（T）将有一条非常弱的红色条带，阴性标本，测试区内（T）将会出现明显的红色条带。无论相应的抗体是否存在于标本中，一条红色条带都会出现在质控区内（C）。质控区内（C）所显现的红色条带是判定是否有足够标本，层析过程是否正常的标准，同时也作为试剂的内控标准。标本收集标本收集：标本收集后应尽快分离出血清或血浆以避免溶血。检测时应尽量使用新鲜的标本。标本若不能及时送检，可在2-8冷藏3天。长期保存需冷

4、冻于-20，忌反复冻融。操作步骤操作步骤：在进行测试前必须先完整阅读使用说明书，使用前将试剂板和血样标本恢复至室温（20-30）。1.从原包装铝箔袋中取出试剂板，在小时内应尽快地使用。2.用吸管吸取血清/血浆标本，逐滴（每孔2-3滴）加入试剂板的五个加样孔中。3.等待红色条带的出现，测试结果应在15分钟时读取。20分钟后判定无效。检验结果判定：阳性（+）：两条红色条带出现，一条位于测试区（T）内，另一条位于质控区（C）。阳性结果表明：标本中含有待测物质。阴性（-）：仅质控区（C）出现一条红色条带，在测试区（T）内无红色条带出现。阴性结果表明：标本中检测不出待测物质。无效：质控区（C）未出现红色

5、条带，表明不正确的操作过程或试纸条已变质损坏。在任何情况下，应重新测试。如果问题仍然存在，应立即停止使用此批号产品，并与当地供应商联系。注意：测试区（T）内的红色条带可显现出颜色深浅的现象。但是，在规定的观察时间内，不论该色带颜色深浅，即使只有非常弱的色带也应判为阳性结果。强阳性（+）：仅质控区（C）出现一条红色条带，在测试区（T）内无红色条带出现。阳性结果表明：标本中含有待测抗体。弱阳性（+）：质控区（C）出现一条红色条带，在测试区（T）内有非常弱的红色条带出现。弱阳性结果表明：标本中含有少量待测抗体。阴性（-）：两条红色条带出现，一条位于测试区（T）内，另一条位于质控区（C）。阴性结果表明

6、：标本中检测不出待测抗体。无效：质控区（C）未出现红色条带，表明不正确的操作过程或试纸条已变质损坏。在任何情况下，应重新测试。如果问题仍然存在，应立即停止使用此批号产品，并与当地供应商联系。注意事项：1.乙肝两对半血清/血浆检测试剂板适用于测试血清/血浆标本。2.由于在技术上和操作上可能出现的失误，同时也由于标本中存在干扰物,试剂结果有可能错误。对可疑结果应作相应的进一步检测。3.乙肝两对半血清/血浆检测试剂板只是定性的筛选乙肝病毒血清标志物的存在，但不能确定其在标本中的含量。4.测试结果应在15分钟时读取，20分钟后判定无效。HIV实验室快速检测试剂名称：试剂名称：艾滋病毒1/2 型抗体快速

7、检测（胶体金法）检测原理：检测原理：HIV1/2 试剂盒采用高度特异性的抗体抗原反应及免疫层析分析技术来定性检测血液中是否含有HIV1/2抗体，试剂盒中含有被事先固定于膜上测试区(T)的重组HIV 抗原和质控区(C)的相应抗体。测试时，血标本滴入试剂盒加样孔（S）内，血标本中的HIV1/2抗体与预包被在膜上的重组抗原-乳胶结合物反应。然后，混合物随之在毛细效应下向上层析，在测试区（T）与固定在膜上的重组HIV抗原反应。如果血液中含有抗HIV-1或HIV-2抗体，在测试区内（T）会出现一条红色条带，表明是阳性结果。如果在测试区内（T）没有出现红色条带，则血液中不含有抗HIV1/2 抗体，表明是阴

8、性结果。无论抗-HIV1/2抗体是否存在于血液中，混合物都会继续向上层析至质控区（C），质控区的相应抗体与乳胶结合物反应出现一条红色条带。质控区内（C）所显现的红色条带是判定层析过程是否正常的标准，同时也作为试剂的内控标准。结果判定：结果判定：阳性（+）：两条红色条带出现。一条位于测试区内（T），另一条位于质控区内（C）。阴性（-）：仅质控区（C）出现一条红色条带，在测试区内（T）无红色条带出现。无效：质控区（C）未出现红色条带，表明不正确的操作过程或试剂盒已变质损坏。在任何情况下，应重新测试。如果问题仍然存在，应立即停止使用此批号产品，并与当地供应商联系。注意：由于样本中抗-HIV 抗体滴度

9、的不同，测试区（T）内的红色条带会显现出不同深浅的颜色。但是，本试剂盒的测试结果不能做为判定样本中抗体滴度高低的依据。标本收集标本收集：血标本的采集：指尖、耳垂末梢或静脉标本采集后应尽可能立即使用，抗凝血应在24小时内使用以避免融血。血清/血浆标本的收集：血清/血浆标本由静脉采血后离心获得，标本在2-8可保存一周。如长期保存需冷冻。避免反复冻融。操作步骤：操作步骤：在进行任何测试前必须先完整阅读使用说明，使用前将检测试剂盒和全血/血清/血浆标本恢复至室温（20-30），取出反应缓冲液并放置20分钟使其恢复至室温。1从原包装铝箔袋中取出试剂盒（注意：在打开铝箔袋前应先恢复至室温）。在1小时内应尽

10、快地使用，特别是在室温高于30 或是在高度潮湿的环境中应尽快地使用。在一小时内测试将会得到最佳效果。2将试剂盒置于干净平坦的台面上，用吸管吸取指尖血或静脉血后滴入1滴全血/血清/血浆（约25ul）于加样孔S中，随后加入1 滴缓冲液于加样孔S 中。切勿将指尖血直接滴入加样孔内。3等待红色条带的出现，在15分钟左右读取测试结果。关键要注意，在红色条带出现以前，背景要清晰，特别当样本中含有低滴度的抗-HIV1/2抗体，会导致出现的T线颜色很淡，此时更需注意背景要清晰。在20分钟后读取的结果无效。注意事项：注意事项：HIV1/2乳胶层析法检测试剂盒仅用于体外诊断，并适用于检测全血/血清/血浆样本中的抗

11、-HIV1/2抗体。这项测试仅表示样本中抗-HIV1/2 抗体的存在，而不能作为机体感染HIV-1或HIV-2的标准。为了确保结果的准确性，可对样本用ELISA 或WesternBlot 作进一步的分析。同所有的诊断试剂一样，检测结果必须结合内科医生得出的其它临床症状进行诊断。如果测试结果呈阴性并有临床症状存在，可建议使用其他临床方法进行测试。阴性结果并不能排除感染HIV-1或HIV-2的可能性。梅毒螺旋体抗体非特异性反应检测梅毒螺旋体抗体非特异性反应检测（TRUST）检测方法：检测方法：甲苯胺红不加热血清学试验（TRUST）实验原理实验原理：采用性病研究所实验室玻片试验（VDRL）抗原重悬于

12、含有特制的甲苯胺红溶液中制成。将可溶性抗原先吸附于适当大小的颗粒性载体的表面，然后与相应抗体作用，在适当的电解质存在的条件下，出现凝集现象，既可定性检测，又能半定量测定。该方法简便，敏感度较高，在临床检验中被广泛应用。标本收集：标本收集：用无抗凝管抽取静脉血2-3ml，离心（1500-3000转/分）分离出血清。不能立即测定的标本应保存于 2-8的冰箱，于3内检测，超过3天应分离出血清于2-8的冰箱，一周内检测完毕。操作步骤：操作步骤：1 分别吸取50ul梅毒阳性对照和阴性对照均匀铺加在纸片的两个圆圈中。2 取待检血清50ul（不需灭活）置于纸片的另一圆圈中。3 用专用滴管和吸头垂直分别滴加T

13、RUST试剂1滴于上述血清中。4 按每分钟100转摇动8分钟，肉眼观察结果。结果判定：结果判定：1 阳性反应（+）：可见中等或较大的红色凝集物。2 弱阳性反应（+）：可见较小的红色凝集物。3 阴性反应（）：可见均匀的红色抗原颗粒而无凝集物。注意事项注意事项：1.操作前请仔细阅读操作规程。2.试剂盒存放于2-8摄氏度环境中；使用前将试剂盒置于室温下平衡，试验应在室温23-29条件下进行。3.批号不同的试剂盒不能混用。4.待测标本必须符合要求，溶血标本不能进行检测。5.如做半定量试验，可将待检血清用生理盐水作倍比稀释，然后按上述定性方法进行试验，以呈现明显凝集反应的最高稀释度作为该血清的凝集效价。

14、6.本试验系非特异性反应需结合临床进行综合分析，必要时作特异性密螺旋体试验进行确认。7.使用后所有物品，应按传染源处理。8.TRUST抗原在使用前必须充分摇匀。检测方法：检测方法：酶联免疫吸附试验（ELISA）实验原理：实验原理：双抗原夹心法 用精制的基因工程表达的酶毒螺旋体特异性抗原色被酶粒板及标记辣根过氧化酶，同时加入待测血清或血浆与酶标记抗原以TMB显色。本方法适用于献血员筛选，婚检和临床诊断梅毒螺旋体感染。标本收集：标本收集：用肝素锂抗凝管抽取静脉血23ml，离心（15003000转分）15分钟分离出血浆，不能立即测定的标本应保存于28于3日内检测，超过3天应分离出血浆于28的冰箱内保

15、存，一周内检测完毕。梅毒螺旋体抗体检测梅毒螺旋体抗体检测(ELISA法)操作步骤：操作步骤：1取出酶标板条固定于板架上，按顺序编号，室温平衡18-25备用。2加样：分别在相应孔中加入100ul阴、阳性对照血清和待测样本。3温育：覆上封板模，置37温育60分钟。4洗涤：小心将封板膜揭掉，使用冼板机吸干孔内液体，用洗涤液充分洗涤6遍，最后一次尽量扣干。5加酶：分别在每孔中加入酶标记抗原100ul。6温育：覆上封板模，置37温育30分钟。7显色：每孔加显色剂A、B各50ul，轻拍混匀37避光显色30分钟。8测定：每孔加终止液50ml，混匀，于450nm处，用空白孔调零的测定各孔OD值。结果判定：结果

16、判定：样本OD值S/C.o.1者为梅毒螺旋体抗体反应阳性。样本OD值S/C.o.1者为梅毒螺旋体抗体反应阴性。阴性对照OD均值0.1或阳性对照OD均值0.5时，实验无效，应重新试验。注意事项：注意事项：1 加样 应将所加物加在板孔底部，避免加在孔壁上部，并注意不可溅出，不可产生气泡.2 保温 抗原抗体反应的完成需要一定温度和时间。一般采用37使抗原抗体经扩散达到反应的终点。3 洗涤时间 是为避免洗涤不净而引起的假阳性或洗涤过度而引起的假阴性，所以应按照洗板方法严格洗板.4 比色与结果判定 显色后在规定时间内比色，判读结果不能仅用目测，一定要用酶标仪测定，上酶标仪要注意板孔中比色液体积的一致。乙

17、型肝炎人免疫球蛋白 成份：成份：乙型肝炎人免疫球蛋白，来源于健康人血浆。主要辅料：葡萄糖，2050g/L。性状：性状：应为无色或淡黄色澄清液体，可带有乳光，不应有异物、浑浊、或摇不散的沉淀。贮藏贮藏：2-8避光保存和运输，严禁冰冻。注意事项：注意事项：1.本品应为无色或淡黄色澄清液体，可带有乳光。久存可能出现微量沉淀，但一经摇动应立即消散，如有摇不散的沉淀或异物不可使用；2.瓶子破裂、过期失效不可使用；3.本品开启后，应一次注射完毕，不得分次使用或给第二个人使用；4.本品只限肌内注射，不得用于静脉输注；5.若制品出现颜色异常，严禁使用。6.本品为人血液制品，尽管经过筛检及病毒灭活处理，仍不能完全排除含有病毒等未知病原体而引起的血源性疾病传播的可能，使用乙型肝炎人免疫球蛋白时，应查验和记录所用产品的生产企业和批号。谢谢大家！