食品微生物检验：志贺氏菌、弧菌课件.ppt

1、l 志贺氏菌属志贺氏菌属(ShigellaShigella)的细菌通称为的细菌通称为痢疾杆菌痢疾杆菌，是细菌性痢疾的病原菌。是细菌性痢疾的病原菌。l 临床上能引起痢疾症状的病原微生物很多，如临床上能引起痢疾症状的病原微生物很多，如志志贺氏菌属、沙门氏菌属、变形杆菌属、艾希氏菌属贺氏菌属、沙门氏菌属、变形杆菌属、艾希氏菌属等，还有阿米巴原虫、鞭毛虫及病毒等均可引起人等，还有阿米巴原虫、鞭毛虫及病毒等均可引起人类痢疾，其中类痢疾，其中以志贺氏菌引起的细菌性痢疾最为常以志贺氏菌引起的细菌性痢疾最为常见见。l 人类对志贺氏菌的易感性较高，所以在食物人类对志贺氏菌的易感性较高，所以在食物和饮用水的卫生检

2、验时，常以是否含有志贺和饮用水的卫生检验时，常以是否含有志贺氏菌作为指标。氏菌作为指标。l 志贺氏菌属是由四个亚群组成，即志贺氏菌属是由四个亚群组成，即A A、B B、C C、D D四个亚群四个亚群。l A A群群:痢疾志贺氏菌痢疾志贺氏菌，有，有1010个抗原组成各不个抗原组成各不相同的血清型，其中包括最知名的相同的血清型，其中包括最知名的志贺氏杆志贺氏杆菌菌(1(1型痢疾志贺氏菌型痢疾志贺氏菌)和舒密次杆菌和舒密次杆菌(2(2型痢疾型痢疾志贺氏菌志贺氏菌)。l B B群群:福氏志贺氏菌福氏志贺氏菌，有，有6 6个血清型，其中的个血清型，其中的1 15 5又可分为两个亚型，还有又可分为两个亚

3、型，还有x x、y y两个变种，两个变种，这些型、亚型和变种之间通过大量的共同抗这些型、亚型和变种之间通过大量的共同抗原联系在一起。原联系在一起。l C C群群:鲍氏志贺氏菌鲍氏志贺氏菌，有，有1515个血清型，其中个血清型，其中有的血清型有甘露醇阴性的变种。有的血清型有甘露醇阴性的变种。l D D群群:宋内氏志贺氏菌宋内氏志贺氏菌，只有一个种，只有一个种(血清血清型型)，它具有，它具有I I相相(光滑型光滑型)和和相相(粗糙型粗糙型)的的变异。变异。(一一)形态与染色形态与染色l 志贺氏菌属的形态，与肠杆菌科细菌的形态相似。志贺氏菌属的形态，与肠杆菌科细菌的形态相似。为为革兰氏阴性短杆菌革兰

4、氏阴性短杆菌，两侧平行、末端钝圆，长约，两侧平行、末端钝圆，长约2 2mm3 3mm，宽约，宽约0.50.5mm0.70.7mm。l 无荚膜、无鞭毛、不形成芽胞，无动力，是与沙无荚膜、无鞭毛、不形成芽胞，无动力，是与沙门氏菌不同之处。门氏菌不同之处。l 福氏志贺氏菌的福氏志贺氏菌的1a1a、2a2a、2b2b、3 3、4a4a、5 5、x x、y y血血清型有清型有I I型菌毛，容易附着在肠粘膜上皮细胞上。型菌毛，容易附着在肠粘膜上皮细胞上。l 本菌为兼性厌氧菌，但厌氧培养时，生长较不本菌为兼性厌氧菌，但厌氧培养时，生长较不旺盛。旺盛。l 营养要求不高，在普通培养基上易于生长。营养要求不高，在

5、普通培养基上易于生长。l 最适温度为最适温度为3737左右，但在左右，但在10104040范围内范围内亦可生长，最适亦可生长，最适pHpH约为约为7.27.2。l 在固体培养基上经培养在固体培养基上经培养18h18h24h24h后，菌落后，菌落圆形、透明、隆起并微凸、直径约圆形、透明、隆起并微凸、直径约2mm2mm3mm3mm、表面光滑、湿润、边缘整齐。表面光滑、湿润、边缘整齐。l 在普通琼脂培养基上无色。在普通琼脂培养基上无色。志贺氏菌菌落形态志贺氏菌菌落形态l 志贺氏菌在志贺氏菌在SSSS和和MacMac上形成较小上形成较小的，无色半透明不发酵乳糖的菌落的，无色半透明不发酵乳糖的菌落l 在

6、在HEHE上形成不发酵乳糖的深绿上形成不发酵乳糖的深绿色菌落色菌落HEHE上不发酵乳糖的肠道菌，上不发酵乳糖的肠道菌，可能就是志贺氏菌可能就是志贺氏菌 SS（Salmonella-Shigella Mediun）上无黑色中心很可）上无黑色中心很可能是志贺氏菌了能是志贺氏菌了Mac Mac（麦康凯培养基）（麦康凯培养基）l选择性培养基上可呈现不同的颜色，例如，选择性培养基上可呈现不同的颜色，例如，宋内氏志贺氏菌在宋内氏志贺氏菌在SSSS琼脂平板上生长出边缘琼脂平板上生长出边缘较整齐，因能迟缓发酵乳糖而呈玫瑰红色的较整齐，因能迟缓发酵乳糖而呈玫瑰红色的菌落，应注意勿当大肠杆菌处理。菌落，应注意勿当

7、大肠杆菌处理。(三三)生化特性生化特性l 志贺氏菌属的细菌发酵糖类和醇类的能志贺氏菌属的细菌发酵糖类和醇类的能力远比艾希氏菌属弱，但力远比艾希氏菌属弱，但都能发酵葡萄糖都能发酵葡萄糖，对侧金盏花醇、肌醇和水杨苷均不发酵对侧金盏花醇、肌醇和水杨苷均不发酵，对其他糖类多为少数发酵：对其他糖类多为少数发酵：l 如宋内氏志贺氏菌对乳糖能迟缓发酵，如宋内氏志贺氏菌对乳糖能迟缓发酵，鲍氏志贺氏菌鲍氏志贺氏菌9 9型的一些培养物能发酵，痢型的一些培养物能发酵，痢疾志贺氏菌疾志贺氏菌I I型少数培养物能迟缓发酵。型少数培养物能迟缓发酵。(四四)抗原结构抗原结构 志贺氏杆菌有志贺氏杆菌有O O抗原和抗原和K K

8、抗原抗原。1、O抗原抗原l 脂多糖，耐热，稳定。脂多糖，耐热，稳定。l 不同的志贺氏菌不同的志贺氏菌O抗原不同。抗原不同。l 每群志贺氏菌中不同的每群志贺氏菌中不同的O抗原用罗马数字表示抗原用罗马数字表示、l 同一群志贺氏菌中不同菌型所带的同一群志贺氏菌中不同菌型所带的O抗原也不抗原也不同。同。2 2、K K抗原抗原l K K抗原包绕于某些新分离的痢疾杆菌表面，抗原包绕于某些新分离的痢疾杆菌表面，不耐热，加热不耐热，加热1001h1001h即被破坏。即被破坏。l 此抗原可以阻止菌体抗原与相应免疫血清此抗原可以阻止菌体抗原与相应免疫血清发生凝集。发生凝集。(五五)抵抗力抵抗力l 志贺氏菌属的细菌

9、与沙门氏菌属及其他肠道志贺氏菌属的细菌与沙门氏菌属及其他肠道杆菌相比，对理化因素抵抗力较低。杆菌相比，对理化因素抵抗力较低。l 对酸较敏感对酸较敏感，必须使用含有缓冲剂的培养基。必须使用含有缓冲剂的培养基。l 在外界环境中的生存力，宋内氏志贺氏菌在外界环境中的生存力，宋内氏志贺氏菌最强、福氏志贺氏菌次之，而痢疾志贺氏菌最强、福氏志贺氏菌次之，而痢疾志贺氏菌最弱。最弱。l 一般潮湿的土壤中能生存一般潮湿的土壤中能生存34d34d，3737的水中的水中存活存活20d20d，而在冰块中可存活，而在冰块中可存活3 3个月，粪便中个月，粪便中的细菌在室温情况下的细菌在室温情况下(20(20左右左右)可存

10、活可存活11d11d。含有高浓度胆汁的培养基能抑制某些志贺氏含有高浓度胆汁的培养基能抑制某些志贺氏菌株的生长。菌株的生长。l 日光直射日光直射30min30min可杀死，可杀死，565660 60 只只需需19min19min可杀死，可杀死，1 1石炭酸中石炭酸中15min15min30min30min可杀死。可杀死。l 对磺胺、链霉素和氯霉素敏感但很容易对磺胺、链霉素和氯霉素敏感但很容易产生耐药性。产生耐药性。(六六)变异性变异性 1 1S SR R型变异型变异l 菌落由光滑型变为粗糙型时，常伴有生化反应，菌落由光滑型变为粗糙型时，常伴有生化反应，抗原结构和致病性的变异。抗原结构和致病性的变

11、异。l 在机体内，尤其是慢性患者和恢复期患者，痢疾在机体内，尤其是慢性患者和恢复期患者，痢疾志贺氏菌可发生变异而失去原来的生化和抗原特性，志贺氏菌可发生变异而失去原来的生化和抗原特性，成为不典型菌株。其中部分不典型菌株，可通过成为不典型菌株。其中部分不典型菌株，可通过1010胆汁肉汤等又转变为典型菌株。胆汁肉汤等又转变为典型菌株。2 2、耐药性变异、耐药性变异l 自从广泛使用抗菌素以来，志贺氏菌属的耐药菌自从广泛使用抗菌素以来，志贺氏菌属的耐药菌株不断增加，给防治工作带来许多因难。株不断增加，给防治工作带来许多因难。l 国内部分地区报告，志贺氏菌对四环素的耐药率国内部分地区报告，志贺氏菌对四环

12、素的耐药率达达7474、氯霉素、氯霉素73.673.69797、链霉素、链霉素84849898、金霉素金霉素7575100100、磺胺类、磺胺类9797100100，可见对，可见对国内常用几种抗菌素的耐药率相当高。国内常用几种抗菌素的耐药率相当高。(七七)致病性致病性l 志贺氏菌的致病作用，主要是志贺氏菌的致病作用，主要是侵袭力侵袭力和和菌体菌体内毒素内毒素，个别菌株能产生外毒素，常使人得痢，个别菌株能产生外毒素，常使人得痢疾及食物中毒。疾及食物中毒。1 1、侵袭力、侵袭力l 志贺氏菌进入大肠后，由于菌毛的作志贺氏菌进入大肠后，由于菌毛的作用，粘附在大肠和回肠末端肠粘膜的上用，粘附在大肠和回肠

13、末端肠粘膜的上皮细胞上，继而在上皮层繁殖，扩散至皮细胞上，继而在上皮层繁殖，扩散至邻近细胞及上皮下层。邻近细胞及上皮下层。l 由于毒素的作用，上皮细胞死亡，粘由于毒素的作用，上皮细胞死亡，粘膜下发炎，并有毛细血管血栓形成，以膜下发炎，并有毛细血管血栓形成，以致坏死、脱落、形成溃疡，志贺氏菌一致坏死、脱落、形成溃疡，志贺氏菌一般不侵犯其他组织，偶尔可引起败血症。般不侵犯其他组织，偶尔可引起败血症。l 目前认为不论是产生外毒素的还是只产目前认为不论是产生外毒素的还是只产生内毒素的志贺氏菌，必须侵入肠壁才能生内毒素的志贺氏菌，必须侵入肠壁才能致病，非侵袭性痢疾杆菌突变菌株不能引致病，非侵袭性痢疾杆菌

14、突变菌株不能引起疾病。起疾病。l 因此，对因此，对粘膜组织的侵袭力是决定致病粘膜组织的侵袭力是决定致病力的主要因素。力的主要因素。2 2、内毒素、内毒素l 志贺氏菌属中各菌株都有强烈的志贺氏菌属中各菌株都有强烈的内毒素内毒素。作用于肠壁，。作用于肠壁，使通透性增高，从而促进毒素的吸收，引起一系列使通透性增高，从而促进毒素的吸收，引起一系列毒血毒血症症状症症状，如发热、神志障碍、甚至中毒性休克。，如发热、神志障碍、甚至中毒性休克。l 毒素破坏粘膜形成炎症、溃疡，呈现典型的毒素破坏粘膜形成炎症、溃疡，呈现典型的痢疾脓血痢疾脓血粘液便粘液便。l 毒素作用于肠壁植物神经，使肠功能紊乱，肠蠕动共毒素作用

15、于肠壁植物神经，使肠功能紊乱，肠蠕动共济失调和痉挛，尤其直肠括约肌最明显，因而发生腹痛、济失调和痉挛，尤其直肠括约肌最明显，因而发生腹痛、里急、后重等症状。里急、后重等症状。3 3肠毒素肠毒素l 痢疾志贺氏菌痢疾志贺氏菌I I型和型和IIII型能产生肠毒素，肠毒型能产生肠毒素，肠毒素的活性主要在素的活性主要在小肠小肠发生，而菌痢的病变主要发生，而菌痢的病变主要在大肠。在大肠。l 痢疾志贺氏菌痢疾志贺氏菌I I型突变菌株不产肠毒素但仍有型突变菌株不产肠毒素但仍有侵袭力。侵袭力。1 1、流行病学、流行病学l 志贺氏菌食物中毒常称作志贺氏菌食物中毒常称作志贺氏菌痢疾志贺氏菌痢疾，传染是传染是从人到人

16、，无动物宿主从人到人，无动物宿主。l 传染源是病人和带菌者，主要通过消化道传染源是病人和带菌者，主要通过消化道传播。传播。l 人类对志贺氏菌的易感性极高，大约人类对志贺氏菌的易感性极高，大约1010个个200200个细菌即可使个细菌即可使10105050受攻击的人受攻击的人致病。致病。l 病后有一定的免疫力，但是免疫期短，也病后有一定的免疫力，但是免疫期短，也不稳固。不稳固。可能因细菌菌型多，各型细菌之间可能因细菌菌型多，各型细菌之间无交叉免疫性之故无交叉免疫性之故。2 2、临床症状、临床症状l 志贺氏菌食物中毒引起的细菌性痢疾可志贺氏菌食物中毒引起的细菌性痢疾可分为急性和慢性两大类、分为急性

17、和慢性两大类、6 6个不同的型。个不同的型。（1 1）急性细菌性痢疾）急性细菌性痢疾l 急性细菌性痢疾又分为急性细菌性痢疾又分为急性典型、急性非急性典型、急性非典型和急性中毒性菌痢典型和急性中毒性菌痢三型。三型。l 急性典型痢疾症状典型，有急性典型痢疾症状典型，有腹痛、腹泻、腹痛、腹泻、脓血粘液便、里急、后重、发热脓血粘液便、里急、后重、发热等，经治疗等，经治疗预后良好。如治疗不彻底可转为慢性。预后良好。如治疗不彻底可转为慢性。l 急性非典型痢疾症状不典型，易诊断错误，急性非典型痢疾症状不典型，易诊断错误，延误治疗，常导致带菌或慢性。延误治疗，常导致带菌或慢性。l 急性中毒性菌痢常见于小儿，各

18、菌型都可发生，急性中毒性菌痢常见于小儿，各菌型都可发生，常常无明显的消化道症状，而是以全身中毒性症状常常无明显的消化道症状，而是以全身中毒性症状为主。为主。l 中毒性菌痢一系列的病理生理变化，主要是内毒中毒性菌痢一系列的病理生理变化，主要是内毒素造成机体微循环障碍的结果，导致内脏淤血、周素造成机体微循环障碍的结果，导致内脏淤血、周围循环衰竭，主要功能器官灌注不足，引起心力衰围循环衰竭，主要功能器官灌注不足，引起心力衰竭、腹水肿、急性肾功能衰竭，严重微循环障碍，竭、腹水肿、急性肾功能衰竭，严重微循环障碍，再加上内毒素损伤血管内上皮细胞、激活凝血因子再加上内毒素损伤血管内上皮细胞、激活凝血因子等，

19、而发生弥散性血管内凝血。等，而发生弥散性血管内凝血。（2 2）慢性细菌性痢疾）慢性细菌性痢疾l 慢性菌痢又分为迁延型、慢性隐伏型和急性慢性菌痢又分为迁延型、慢性隐伏型和急性发作型。发作型。l 常因急性期治疗不彻底或人体防御机能低下、常因急性期治疗不彻底或人体防御机能低下、营养不良或合并其他慢性病，例如低酸性或无营养不良或合并其他慢性病，例如低酸性或无酸性胃炎、胆囊炎、肠道寄生虫病等等，酸性胃炎、胆囊炎、肠道寄生虫病等等，一般一般认为福氏志贺氏菌感染的慢性者较多认为福氏志贺氏菌感染的慢性者较多。l 细菌性痢疾的带菌者有三种类型，即恢复期细菌性痢疾的带菌者有三种类型，即恢复期带菌者、慢性带菌者和健

20、康带菌者。带菌者、慢性带菌者和健康带菌者。l 健康带菌者是指临床上无肠道症状而又能排健康带菌者是指临床上无肠道症状而又能排出志贺氏菌者。这种带菌者是主要的传染源，出志贺氏菌者。这种带菌者是主要的传染源，特别是在饮食上，炊事员和保育员中的带菌者特别是在饮食上，炊事员和保育员中的带菌者危险性更大。危险性更大。(九九)防治措施防治措施l 志贺氏菌随粪便排出体外，通过食物、水志贺氏菌随粪便排出体外，通过食物、水和手经口传染给健康人。但只要我们切实地和手经口传染给健康人。但只要我们切实地把好把好“病从口入病从口入”这一关，志贺氏菌痢是可这一关，志贺氏菌痢是可以预防的。以预防的。1 1加强饮水卫生加强饮水

21、卫生l 要保护水源，便桶不下河洗涤，新粪不下要保护水源，便桶不下河洗涤，新粪不下田，菌痢病人的衣裤、病儿的尿裤不下河洗田，菌痢病人的衣裤、病儿的尿裤不下河洗涤。搞好饮水消毒，严格做到不喝生水。涤。搞好饮水消毒，严格做到不喝生水。2 2注意饮食卫生注意饮食卫生l 严格执行严格执行食品卫生法食品卫生法的各项规定。饭莱现烧现的各项规定。饭莱现烧现吃，隔顿隔夜的菜肴要回锅。吃，隔顿隔夜的菜肴要回锅。l集体食堂和饮食店还要做到饭莱烧熟烧透，生熟分开，集体食堂和饮食店还要做到饭莱烧熟烧透，生熟分开，严格消毒食具。严格消毒食具。l要自觉做到四不吃，即不吃生冷蔬菜、不吃不洁瓜果、要自觉做到四不吃，即不吃生冷蔬

22、菜、不吃不洁瓜果、不吃腐败变质食物、不吃未经回锅煮透的剩菜剩饭。不吃腐败变质食物、不吃未经回锅煮透的剩菜剩饭。3 3自觉养成卫生习惯自觉养成卫生习惯l 工作后、学习后、外出回家后要洗手，特别是食前、工作后、学习后、外出回家后要洗手，特别是食前、便后要洗手，勤剪指甲。便后要洗手，勤剪指甲。4 4早期发现病人早期隔离治疗早期发现病人早期隔离治疗l 如发现有大便性状改变，次数频多等情况应及时就如发现有大便性状改变，次数频多等情况应及时就诊。特别是托儿所、幼儿园要加强入托前的检查，午诊。特别是托儿所、幼儿园要加强入托前的检查，午间检查和全日观察，发现可疑病儿要立即送医院诊治，间检查和全日观察，发现可疑

23、病儿要立即送医院诊治，确诊后严格隔离，还应及时进行消毒处理。确诊后严格隔离，还应及时进行消毒处理。l急性病例应一直到症状消失，大便培养二次阴性为急性病例应一直到症状消失，大便培养二次阴性为止。止。（十）检验原理：（十）检验原理：1 1、增菌、增菌l 志贺氏菌国标用志贺氏菌国标用GNGN增菌液增菌液。l 目前志贺氏菌增菌液都不理想，关键是抑菌效目前志贺氏菌增菌液都不理想，关键是抑菌效果差，果差，GNGN相对来说是较好的，但也存在着同样的相对来说是较好的，但也存在着同样的问题，因此用其增菌时间不宜过长，一般为问题，因此用其增菌时间不宜过长，一般为6 68h8h，时间过长，其他杂菌就会大量繁殖。时间

24、过长，其他杂菌就会大量繁殖。2 2、选择性鉴别培养基分离志贺氏菌、选择性鉴别培养基分离志贺氏菌l 志贺氏菌常用的志贺氏菌常用的选择性琼脂平板选择性琼脂平板HEHE、SSSS、麦、麦康凯（康凯（MCMC）、伊红美蓝）、伊红美蓝，这些平板中都含有乳，这些平板中都含有乳糖。糖。l 由于志贺氏菌由于志贺氏菌不发酵乳糖或迟缓发酵乳糖不发酵乳糖或迟缓发酵乳糖(24h(24h内不发酵乳糖，内不发酵乳糖，24h24h后才发酵乳糖后才发酵乳糖)，硫化硫化氢阴性氢阴性，所以在这些平板上呈现出，所以在这些平板上呈现出无色半透明无色半透明不发酵乳糖的菌落不发酵乳糖的菌落。l HE HE、SSSS相对于志贺氏菌来说选择

25、性较强，相对于志贺氏菌来说选择性较强，麦康凯、伊红美蓝麦康凯、伊红美蓝相对于志贺氏菌来说选择相对于志贺氏菌来说选择性较弱，同时用两种平板分离志贺氏菌，可性较弱，同时用两种平板分离志贺氏菌，可互补提高检出率，防止漏检。互补提高检出率，防止漏检。3 3、初步生化试验、血清学分型和进一步生、初步生化试验、血清学分型和进一步生化试验化试验l 首先用三糖铁培养基（首先用三糖铁培养基（TSITSI）做初步生化试）做初步生化试验，用半固体培养基做动力试验。验，用半固体培养基做动力试验。l 志贺氏菌在三糖铁培养基上的反应为：志贺氏菌在三糖铁培养基上的反应为：斜斜面产碱面产碱(红色红色)，底层产酸底层产酸(黄色

26、黄色)，不产气不产气(福福氏志贺氏菌氏志贺氏菌6 6型可微量产气型可微量产气)，硫化氢试验为硫化氢试验为阴性阴性，无动力无动力(不能运动）不能运动）福氏志贺氏菌各型和亚型的型抗原和福氏志贺氏菌各型和亚型的型抗原和群抗原群抗原 型和亚型和亚型型型抗型抗原原群抗原群抗原1a1a1 1、2 2、4 4、5 5、9 91b1b1 1、2 2、4 4、5 5、6 6、9 92a2a1 1、3 3、4 42b2b1 1、7 7、8 8、9 93a3a1 1、6 6、7 7、8 8、9 93b3b1 1、4 4、6 6、（、（7 7、8 8、9 9）3c3c1 1、6 64a4a1 1、（、（3 3）4b4

27、b1 1、6 65a5a1 1、4 45b5b1 1、5 5、7 7、9 96 61 1、2 2、（、（4 4）x x-1 1、7 7、8 8、9 9y y-1 1、3 3、4 44种志贺氏菌种志贺氏菌多价血清多价血清A1、A2群群多价血清多价血清B群血清群血清D群血清群血清群和型群和型因子血清因子血清志贺氏菌检验流程志贺氏菌检验流程葡萄糖半固体葡萄糖半固体（无动力）（无动力）（十二）检验注意事项（十二）检验注意事项1 1、检验报告、检验报告l 凡是与志贺氏菌多价血清之一发生凝集反凡是与志贺氏菌多价血清之一发生凝集反应的革兰氏阴性杆菌，生化反应符合志贺氏应的革兰氏阴性杆菌，生化反应符合志贺氏菌

28、特性，即报告菌特性，即报告“发现志贺氏菌发现志贺氏菌”l 不与任何一种志贺氏菌多价血清发生凝集反不与任何一种志贺氏菌多价血清发生凝集反应者，判定为非志贺氏菌，即报告应者，判定为非志贺氏菌，即报告“未发现未发现志贺氏菌志贺氏菌”。l 生化反应判定为志贺氏菌，而血清学实验未生化反应判定为志贺氏菌，而血清学实验未能确定的，报告为能确定的，报告为“发现可疑志贺氏菌，待发现可疑志贺氏菌，待定定”，并送有条件的实验室做进一步鉴定。，并送有条件的实验室做进一步鉴定。2 2、志贺氏菌在常温下存活期较短，因此，志贺氏菌在常温下存活期较短，因此，采样后应尽快进行检验。采样后应尽快进行检验。l 如果在如果在2424

29、小时内检验，样品可保存在冰箱内；小时内检验，样品可保存在冰箱内；如果要保存时间比较长，必须放在低温冰箱里。如果要保存时间比较长，必须放在低温冰箱里。3 3、增加鉴别培养基的数目，可以增加志贺、增加鉴别培养基的数目，可以增加志贺氏菌阳性检出率。用于分离的鉴别培养基氏菌阳性检出率。用于分离的鉴别培养基一般不少于两个。一般不少于两个。第五节第五节 其他致病菌的检验其他致病菌的检验一、副溶血性弧菌的检验一、副溶血性弧菌的检验 副溶血性弧菌系分布在海洋及盐湖极为广泛的一种副溶血性弧菌系分布在海洋及盐湖极为广泛的一种致病性嗜致病性嗜盐菌盐菌。引起人的食物中毒是近引起人的食物中毒是近2020年才被发现和重视

30、的，尤其在年才被发现和重视的，尤其在夏秋夏秋季节的沿海地区季节的沿海地区，经常由于，经常由于食用含有大量副溶血性弧菌的海产食用含有大量副溶血性弧菌的海产品品而引起爆发性食物中毒；而引起爆发性食物中毒；在非沿海地区，食用被此菌污染的在非沿海地区，食用被此菌污染的盐渍食品亦常有中毒发生盐渍食品亦常有中毒发生。一般冬季不易检出此菌一般冬季不易检出此菌。二、生物学特性二、生物学特性（一）形态与染色（一）形态与染色 革兰氏阴性无芽胞多形态杆菌，单端鞭毛、两端浓染。革兰氏阴性无芽胞多形态杆菌，单端鞭毛、两端浓染。杆状、棒状、甚至球状、丝状等杆状、棒状、甚至球状、丝状等.SS SS琼脂琼脂上：菌体呈卵圆形，

31、两端浓染，中间淡或不着色，少上：菌体呈卵圆形，两端浓染，中间淡或不着色，少数成杆状。数成杆状。血琼脂血琼脂上：菌体多为卵圆形，少数为球杆状，也有成丝状。上：菌体多为卵圆形，少数为球杆状，也有成丝状。嗜盐琼脂嗜盐琼脂上：主要为两头小、中间稍胖的球杆菌。上：主要为两头小、中间稍胖的球杆菌。罗氏双糖罗氏双糖培养基上：培养基上：24h24h培养后菌体基本形似，培养后菌体基本形似，48h48h后菌体形后菌体形态变化很大，有球状、丝状、杆状、弧状、逗点状等，其大小态变化很大，有球状、丝状、杆状、弧状、逗点状等，其大小形态的差异也很大。形态的差异也很大。副溶血弧菌的多形性与球状体是它与气单胞菌属在形态学上副

32、溶血弧菌的多形性与球状体是它与气单胞菌属在形态学上的主要鉴别特征。的主要鉴别特征。（二）培养特性：（二）培养特性：1 1、需氧或兼性厌氧：生长最好、需氧或兼性厌氧：生长最好2 2、在、在2-3%NaCL2-3%NaCL培养基中生长最好，无盐培养基中生长最好，无盐或食盐或食盐10%10%不能生长。不能生长。3 3、最适温度、最适温度3636，PH7.5-7.8PH7.5-7.8（7.77.7）4 4、在专用选择性平板上，菌落呈圆形凸、在专用选择性平板上，菌落呈圆形凸起，混浊不透明，表面光滑，较湿润，起，混浊不透明，表面光滑，较湿润，边缘不整齐。边缘不整齐。5 5、血平板：可见溶血环。、血平板：可

33、见溶血环。副溶血性弧菌生长特性副溶血性弧菌生长特性在在TCBSTCBS平板上分解蔗糖平板上分解蔗糖产酸的菌落为黄色。副产酸的菌落为黄色。副溶血性弧菌等不分解蔗溶血性弧菌等不分解蔗糖为蓝绿色菌落。糖为蓝绿色菌落。TSI-NaClTSI-NaCl副溶血弧菌分解副溶血弧菌分解葡萄糖产酸，所以底部为葡萄糖产酸，所以底部为黄色，不产硫化氢，而分黄色，不产硫化氢，而分解蛋白胨产生的碱使斜面解蛋白胨产生的碱使斜面变红。变红。（四）抗原结构（四）抗原结构已明确本菌有三种抗原成分，即已明确本菌有三种抗原成分，即O O抗原、抗原、K K抗原及抗原及H H抗原。抗原。本菌的本菌的O O抗原有耐热性，抗原有耐热性，1

34、002h1002h仍保持抗原性；仍保持抗原性；K K抗原存在于菌体表面，不耐热，能阻止菌体与抗原存在于菌体表面，不耐热，能阻止菌体与O O抗血清凝集；抗血清凝集；H H抗原不耐热，抗原不耐热，100 30min100 30min即破坏，特异性低，无助于分即破坏，特异性低，无助于分类，副溶血性弧菌所有的菌株具有共同的类，副溶血性弧菌所有的菌株具有共同的H H抗原。抗原。目前，至少有目前，至少有1313个个O O抗原，抗原，6565个个K K抗原。根据抗原。根据O O、K K抗原可以进抗原可以进行血清学分型。肠道致病性血清有行血清学分型。肠道致病性血清有O1:K38O1:K38、O1:K56O1:

35、K56、O2:K1.O2:K1.等。等。（六）致病性（六）致病性 此菌能引起人的此菌能引起人的急性胃肠炎急性胃肠炎，摄入致病菌达，摄入致病菌达10106 6个即可发个即可发病，潜伏期病，潜伏期1h-26h1h-26h不等，主要症状为不等，主要症状为腹痛、腹泻、恶心、腹痛、腹泻、恶心、呕吐、发热等呕吐、发热等，粪便多呈水样，常混有粘液或脓血，一般，粪便多呈水样，常混有粘液或脓血，一般病程病程1d-7d1d-7d。呕吐、腹泻严重，失水过多者可引起虚脱并伴。呕吐、腹泻严重，失水过多者可引起虚脱并伴有血压下降。有血压下降。大部分病人发病后大部分病人发病后2-32-3天恢复正常，少数严重病人由于休天恢复

36、正常，少数严重病人由于休克、昏迷而死亡。病后一周血清抗体效价可达克、昏迷而死亡。病后一周血清抗体效价可达1:801:80，二周，二周后下降到后下降到1:101:10。(七七)检验原理检验原理1 1、增菌、增菌 根据副溶血性弧菌具有嗜盐特性利用根据副溶血性弧菌具有嗜盐特性利用氯化钠氯化钠结晶紫增菌液结晶紫增菌液（氯化钠浓度为（氯化钠浓度为4%4%）进行增菌。）进行增菌。3 3、选择性培养、选择性培养 3.5%3.5%氯化钠三糖铁斜面氯化钠三糖铁斜面3737培养培养2424小时。小时。可疑菌株的现象是：可疑菌株的现象是：三糖铁培养基底层变黄，三糖铁培养基底层变黄，葡萄糖产酸不产气，斜面不变色，乳糖、蔗糖葡萄糖产酸不产气，斜面不变色，乳糖、蔗糖不分解，有动力，不产生硫化氢。不分解，有动力，不产生硫化氢。4 4、涂片镜检、涂片镜检 可疑菌株进行涂片可疑菌株进行涂片革兰氏镜检革兰氏镜检形态。形态。副溶血性弧菌为副溶血性弧菌为不产芽孢的革兰氏阴性多不产芽孢的革兰氏阴性多形态杆菌。形态杆菌。（八）检验程序（八）检验程序GB 4789.7-2013GB 4789.7-20133.培养养基和试剂试剂4.检验检验程序5.操作步骤骤