1、试管植物的两个核心步骤：一是愈伤组织的形成，二是愈伤组织的分化愈伤组织的形成愈伤组织的分化 培养基的主要成分：水 无机成分：无机大量元素 氮：铵盐、硝酸盐混合 磷：磷酸盐 钾：钾盐 钙、硫、镁 无机微量元素 主要有：铁、硼、锰、锌、铜、钼、钴、氯 有机成分（碳源）：糖、维生素、肌醇、氨基酸及有机附加物。植物生长调节物质：生长素类：NAA、IAA、IBA、2,4-D 细胞分裂素类：BAP,KT，TDz，ZT pH值（5.8）琼脂 优势：优势：便于运输和储藏；提高生产效率；便于运输和储藏；提高生产效率；保存珍贵品种保存珍贵品种人工种子人工种子适宜于得到的细胞适宜于得到的细胞数目少，细胞比较数目少，
2、细胞比较珍贵的情况下使用珍贵的情况下使用固体平板培养图示：固体平板培养图示：优点:可以定点观察 分离细胞容易 缺点:(1)培养细胞气体交换不畅，湿度不够。定义定义:指用一块活跃生长的愈伤组织来看指用一块活跃生长的愈伤组织来看护单个细胞，并使其生长和增殖的方法。护单个细胞，并使其生长和增殖的方法。基本技术基本技术:（1）在一个培养瓶中加入一定量厚的固）在一个培养瓶中加入一定量厚的固体培养基，灭菌后备用。体培养基，灭菌后备用。（2）在无菌条件下，将一小块活跃生长）在无菌条件下，将一小块活跃生长的愈伤组织接种到培养基上，再在愈伤组的愈伤组织接种到培养基上，再在愈伤组织块上放一片已灭菌的滤纸，放置一晚
3、上。织块上放一片已灭菌的滤纸，放置一晚上。（3）将分离的单细胞接种到培养基的滤）将分离的单细胞接种到培养基的滤纸上。纸上。（4）恒温培养）恒温培养1-3月。月。看护培养特点：看护培养特点：红色的细胞为饲养层细胞；红色的细胞为饲养层细胞；蓝色的为靶细胞蓝色的为靶细胞悬浮培养悬浮培养研究组织和器官发育机制；研究组织和器官发育机制；可以进行有关遗传操作；可以进行有关遗传操作；研究植物细胞的生理功能；研究植物细胞的生理功能；诱导融合形成杂种细胞。诱导融合形成杂种细胞。原材料准备原材料准备预处理与酶解预处理与酶解原生质体收集与纯化原生质体收集与纯化原生质体活力检测原生质体活力检测 两个来源：两个来源：各
4、种组织的叶各种组织的叶片，根尖等片，根尖等愈伤组织愈伤组织 荧光染色法：在活细胞内，荧光染色法：在活细胞内，FDA（二乙酸（二乙酸荧光素）荧光素）被酯酶裂解即发荧光（荧光素）被酯酶裂解即发荧光（荧光素）活力测定活力测定液体浅层培养；固液双层培养，液体浅层培养；固液双层培养，固体平板培养，琼脂糖珠培养，固体平板培养，琼脂糖珠培养，看护培养，饲养层培养。看护培养，饲养层培养。植物中含有数量极为可观的次代谢物质。这些次植物中含有数量极为可观的次代谢物质。这些次级代谢产物对人类有巨大的利用价值，如紫草细胞中级代谢产物对人类有巨大的利用价值，如紫草细胞中的紫草宁可用于治疗创伤，烧伤；人参是治疗与保健的紫
5、草宁可用于治疗创伤，烧伤；人参是治疗与保健的名贵药材。的名贵药材。依靠传统从植物中分离提取已很难满足需求，工依靠传统从植物中分离提取已很难满足需求，工业化生产植物产品是一条有效的途径。业化生产植物产品是一条有效的途径。1）搅拌式生物反应器特点：剪切力大；但混合效果好2）非搅拌式生物反应器（依靠气流使细胞流动）特点：产生剪切力小；高密度培养时提高通气量容易产生大量气泡3）细胞固定化大规模培养：细胞的固定化：指将游离的细胞包埋或固体的支持物中，培养液呈流动状态进行无菌培养的一门技术。固定化细胞的制作：海藻酸盐固定化；卡拉胶固定化；琼脂糖固定化 流化床生物反应器：流化床生物反应器：特点：包埋细胞的颗粒小，传质效率高，适宜体外分泌特点：包埋细胞的颗粒小，传质效率高，适宜体外分泌产物的细胞培养。产物的细胞培养。
