医学课件-局部毒性试验教学课件.ppt

1、2022-12-7 1 局部毒性试验局部毒性试验 Partial toxicity test 2022-12-7 2局部毒性试验局部毒性试验 是是为研究为研究局部用药后引起的毒性反应局部用药后引起的毒性反应而设计的试验而设计的试验。主要指。主要指用药用药，同时同时也包括局部作用于也包括局部作用于的制剂。的制剂。研究的内容研究的内容：皮肤毒性试验皮肤毒性试验，刺激试验刺激试验，致敏试验致敏试验。局部毒性局部毒性是是指指局部用药后引起的毒性反应局部用药后引起的毒性反应2022-12-7皮肤急性毒性试验皮肤急性毒性试验滴鼻剂和吸入剂的急性毒性试验滴鼻剂和吸入剂的急性毒性试验应用于直肠、阴道制剂的急性

2、毒性试验应用于直肠、阴道制剂的急性毒性试验皮肤长期毒性试验皮肤长期毒性试验局部封闭涂皮法局部封闭涂皮法皮内致敏法皮内致敏法皮内和涂皮相结合的方法皮内和涂皮相结合的方法皮肤刺激试验皮肤刺激试验眼刺激试验眼刺激试验滴鼻剂和吸入剂刺激试验滴鼻剂和吸入剂刺激试验应用于直肠、阴道制剂刺激试验应用于直肠、阴道制剂刺激试验肌肉注射剂的局部刺激试验肌肉注射剂的局部刺激试验静脉注射剂的血管刺激试验静脉注射剂的血管刺激试验一次给药一次给药多次给药多次给药3任立群2022-12-7 4第一节第一节 皮肤用药的毒性研究皮肤用药的毒性研究第二节第二节 眼用药刺激性试验眼用药刺激性试验第三节第三节 肌内注射用药局部刺激性

3、试验肌内注射用药局部刺激性试验第四节第四节 静脉给药局部刺激性试验静脉给药局部刺激性试验第五节第五节 滴鼻剂和吸入剂的毒性试验滴鼻剂和吸入剂的毒性试验第六节第六节 应用于直肠、阴道制剂的毒性试验应用于直肠、阴道制剂的毒性试验娄宜嘉第二版娄宜嘉第二版药物毒理学药物毒理学局部毒性试验局部毒性试验皮肤用药的急性毒性试验皮肤用药的急性毒性试验皮肤用药的长期毒性试验皮肤用药的长期毒性试验皮肤用药的刺激试验皮肤用药的刺激试验皮肤吸收试验皮肤吸收试验皮肤光敏试验皮肤光敏试验皮肤过敏试验皮肤过敏试验滴鼻剂和吸入剂急性毒性试验滴鼻剂和吸入剂急性毒性试验滴鼻剂和吸入剂刺激试验滴鼻剂和吸入剂刺激试验直肠、阴道用药的

4、急性毒性试验直肠、阴道用药的急性毒性试验直肠、阴道用药的长期毒性试验直肠、阴道用药的长期毒性试验直肠、阴道用药刺激试验直肠、阴道用药刺激试验2022-12-7 5第一节第一节 皮肤毒性试验皮肤毒性试验第二节第二节 刺激试验刺激试验第三节第三节 皮肤致敏试验皮肤致敏试验周立国周立国药物毒理学药物毒理学第二版第二版局部毒性试验局部毒性试验皮肤急性毒性试验皮肤急性毒性试验滴鼻剂和吸入剂的急性毒性试验滴鼻剂和吸入剂的急性毒性试验应用于直肠、阴道制剂的急性毒性试验应用于直肠、阴道制剂的急性毒性试验皮肤长期毒性试验皮肤长期毒性试验皮肤刺激试验皮肤刺激试验眼刺激试验眼刺激试验肌肉注射剂的局部刺激试验肌肉注射

5、剂的局部刺激试验静脉注射剂的血管刺激试验静脉注射剂的血管刺激试验滴鼻剂和吸入剂刺激试验滴鼻剂和吸入剂刺激试验局部封闭涂皮法局部封闭涂皮法皮内致敏法皮内致敏法皮内和涂皮相结合的方法皮内和涂皮相结合的方法皮肤致敏试验皮肤致敏试验注射给药致敏性试验注射给药致敏性试验2022-12-7 6局部毒性试验局部毒性试验 是是为研究为研究局部用药后引起的毒性反应局部用药后引起的毒性反应而设计的试验而设计的试验。主要指。主要指用药用药，同时同时也包括局部作用于也包括局部作用于的制剂。的制剂。研究的内容研究的内容：皮肤毒性试验皮肤毒性试验，刺激试验刺激试验，致敏试验致敏试验。局部毒性局部毒性是是指指局部用药后引起

6、的毒性反应局部用药后引起的毒性反应栓剂、软膏剂、滴剂、洗剂、搽剂、透皮贴剂、喷雾剂、栓剂、软膏剂、滴剂、洗剂、搽剂、透皮贴剂、喷雾剂、粉剂（外用）等剂型都必须进行药物的局部毒性试验。粉剂（外用）等剂型都必须进行药物的局部毒性试验。2022-12-7 72022-12-7 8表皮层表皮层真皮乳头层真皮乳头层真皮网织层真皮网织层真皮层真皮层第一节第一节 皮肤毒性试验皮肤毒性试验2022-12-7 9人类不同部位皮肤角化层的差别很大，人类不同部位皮肤角化层的差别很大，这些差别影响药物的经皮吸收。这些差别影响药物的经皮吸收。足底和手掌的角化层坚硬而厚，约足底和手掌的角化层坚硬而厚，约 400600m位

7、于臂、背、腿和腹部的皮肤仅位于臂、背、腿和腹部的皮肤仅 815m阴囊皮肤最薄阴囊皮肤最薄第一节第一节 皮肤毒性试验皮肤毒性试验表皮角化层的差别表皮角化层的差别2022-12-7 10人类不同部位皮肤角化层的差别很大，人类不同部位皮肤角化层的差别很大，这些差别影响药物的经皮吸收。这些差别影响药物的经皮吸收。足底和手掌的角化层坚硬而厚，约足底和手掌的角化层坚硬而厚，约 400600m位于臂、位于臂、背背、腿和、腿和腹腹部的皮肤仅部的皮肤仅 815m阴囊皮肤最薄阴囊皮肤最薄第一节第一节 皮肤毒性试验皮肤毒性试验表皮角化层的差别表皮角化层的差别2022-12-7 11药物药物经表皮吸收时经表皮吸收时角

8、质层角质层棘棘 层层透明层透明层基底层基底层颗粒层颗粒层基基 膜膜 真皮层内毛细血管真皮层内毛细血管第一节第一节 皮肤毒性试验皮肤毒性试验 药物经皮肤吸收药物经皮肤吸收的的两条途径两条途径(1)(1)通过通过表皮表皮屏障而被吸收屏障而被吸收表皮屏障表皮屏障2022-12-7 12第一节第一节 皮肤毒性试验皮肤毒性试验 药物经皮肤吸收药物经皮肤吸收的的两条途径两条途径(1)(1)通过通过表皮表皮屏障而被吸收屏障而被吸收(2)(2)通过汗腺、皮脂腺和毛囊等皮肤附属器吸收通过汗腺、皮脂腺和毛囊等皮肤附属器吸收2022-12-7 13第一节第一节 皮肤毒性试验皮肤毒性试验 药物经皮肤吸收药物经皮肤吸收

9、的的两条途径两条途径(1)(1)通过通过表皮表皮屏障而被吸收屏障而被吸收(2)(2)通过汗腺、皮脂腺和毛囊等皮肤附属器吸收通过汗腺、皮脂腺和毛囊等皮肤附属器吸收2022-12-7 1412药物透过表皮进入真皮药物透过表皮进入真皮 药物由真皮进入乳头层毛细血管药物由真皮进入乳头层毛细血管第一阶段第一阶段渗透相渗透相症状症状第一节第一节 皮肤毒性试验皮肤毒性试验第第二二阶段阶段吸收吸收相相药物经表皮屏障吸收包括两相药物经表皮屏障吸收包括两相2022-12-7 15进行皮肤毒性试验时进行皮肤毒性试验时，尽量选择皮肤解剖尽量选择皮肤解剖及及生理与人生理与人类较近似的动物类较近似的动物，目前多选用家兔、

10、豚鼠或大鼠。目前多选用家兔、豚鼠或大鼠。第一节第一节 皮肤毒性试验皮肤毒性试验只有同时在脂、水中易于溶解的药物只有同时在脂、水中易于溶解的药物，才易通过皮肤才易通过皮肤进入血液。进入血液。2022-12-7 16 皮肤毒性试验皮肤毒性试验是通过外用药物作用于皮肤是通过外用药物作用于皮肤，观观察皮肤的吸收程度察皮肤的吸收程度，来定性和定量地判断药物的毒性来定性和定量地判断药物的毒性大小大小的试验的试验。第一节第一节 皮肤毒性试验皮肤毒性试验皮肤急性毒性试验皮肤急性毒性试验滴鼻剂和吸入剂的急性毒性试验滴鼻剂和吸入剂的急性毒性试验应用于直肠、阴道制剂的急性毒性试验应用于直肠、阴道制剂的急性毒性试验皮

11、肤长期毒性试验皮肤长期毒性试验2022-12-7 17观察完整皮肤及破损皮肤观察完整皮肤及破损皮肤在在一次接触一次接触 外用药物短期内所产生的毒性反应。外用药物短期内所产生的毒性反应。家兔家兔 2.03.0kg，每剂量组，每剂量组 4只只 豚鼠豚鼠 350450g，每剂量组，每剂量组 10 只只 雌雄各半雌雄各半 大鼠大鼠 200300g，每剂量组，每剂量组 10 只只膏剂、液体或固体粉末。膏剂、液体或固体粉末。第一节第一节 皮肤毒性试验皮肤毒性试验一一2022-12-7 18一一第一节第一节 皮肤毒性试验皮肤毒性试验脱毛剂配方：脱毛剂配方：（1 1）硫化硫化钡钡与滑石粉与滑石粉以以 4:1

12、4:1 混合混合，加水加水调成糊状调成糊状.（2 2）硫化硫化钠钠与滑石粉与滑石粉以以 3:1 3:1 混合混合，加水加水调成糊状调成糊状.时间：给药前时间：给药前24h;24h;部位：背部脊柱两侧；部位：背部脊柱两侧；范围：体表面积的范围：体表面积的10%10%家兔家兔50cm50cm2 2豚鼠、大鼠豚鼠、大鼠20cm20cm2 22022-12-7 19一一第一节第一节 皮肤毒性试验皮肤毒性试验（1 1）用无菌手术刀片的尖端做）用无菌手术刀片的尖端做“井井”字划痕；字划痕；（2 2）砂纸打薄）砂纸打薄 以渗血为度以渗血为度2022-12-7 20第一节第一节 皮肤毒性试验皮肤毒性试验一一2

13、022-12-7 21药物是膏剂或液体一般不稀释，药物是膏剂或液体一般不稀释，可直接试验，若药物是固体粉末则需用适当水或适可直接试验，若药物是固体粉末则需用适当水或适宜赋形剂（宜赋形剂（如羊毛脂、凡士林、橄榄油等）混匀，如羊毛脂、凡士林、橄榄油等）混匀，以保证药物与皮肤良好的接触。以保证药物与皮肤良好的接触。试验时，将药物均匀地涂敷于动物背部去毛试验时，将药物均匀地涂敷于动物背部去毛区，并用无刺激性纱布、胶布加以固定。敷药物区，并用无刺激性纱布、胶布加以固定。敷药物 24h后，可用温水或适当溶剂消除残留的药物或赋后，可用温水或适当溶剂消除残留的药物或赋形剂，形剂，每日观察，连续每日观察，连续

14、714 天。天。一一第一节第一节 皮肤毒性试验皮肤毒性试验2022-12-7 22给药后要注意动物全身中毒表现和死亡情况，给药后要注意动物全身中毒表现和死亡情况，包括动物体重、皮肤、毛发、眼睛和粘膜的变化，包括动物体重、皮肤、毛发、眼睛和粘膜的变化，呼吸、循环、中枢神经系统、四肢活动等变化。若呼吸、循环、中枢神经系统、四肢活动等变化。若遇有死亡动物则需进行尸检和肉眼观察，当有肉眼遇有死亡动物则需进行尸检和肉眼观察，当有肉眼可见病变时，则需进行病理学检查。可见病变时，则需进行病理学检查。第一节第一节 皮肤毒性试验皮肤毒性试验一一2022-12-7 23 实验结束时，将数据综合成表格形式，说明实验

15、结束时，将数据综合成表格形式，说明实验开始时各组的动物数，不同剂量组中各个体动实验开始时各组的动物数，不同剂量组中各个体动物死亡的时间，出现其它毒性症状的动物数，毒性物死亡的时间，出现其它毒性症状的动物数，毒性反应的描述和尸检所见。最后根据观察各组动物死反应的描述和尸检所见。最后根据观察各组动物死亡的累积数，用相应的统计学方法计算亡的累积数，用相应的统计学方法计算 LD50。第一节第一节 皮肤毒性试验皮肤毒性试验一一2022-12-7 24观察受试动物一次滴入或吸入给予观察受试动物一次滴入或吸入给予 药物后所产生的毒性反应和死亡情况。药物后所产生的毒性反应和死亡情况。健康家兔健康家兔 2.5k

16、g，每剂量组，每剂量组 4 只只 豚鼠豚鼠250300g，每剂量组，每剂量组 10 只只 雌雄各半雌雄各半 大鼠大鼠250300g，每剂量组，每剂量组 10 只只液体或粉末剂。液体或粉末剂。第一节第一节 皮肤毒性试验皮肤毒性试验二二2022-12-7 25 一般设三个剂量组一般设三个剂量组,组间距一般以组间距一般以 0.650.85 为宜为宜，设赋形剂或空白对照组。设赋形剂或空白对照组。若在大剂量组若在大剂量组(超过预计临床用量的超过预计临床用量的50倍以上倍以上)未出现死亡情况未出现死亡情况,则只须设一个高剂量组。则只须设一个高剂量组。滴入或吸入不同浓度的药物。滴入或吸入不同浓度的药物。至少

17、接触至少接触 4 小时。给药物后即刻观察小时。给药物后即刻观察 714 天。天。二二第一节第一节 皮肤毒性试验皮肤毒性试验2022-12-7 26动物全身状况动物全身状况，体重、呼吸、循环、中枢神经系体重、呼吸、循环、中枢神经系统、四肢活动等变化统、四肢活动等变化，若出现死亡则应做病理组织学若出现死亡则应做病理组织学检查。检查。试验结果与对照组比较进行判断试验结果与对照组比较进行判断，如果能测出如果能测出 LD50 值值，应按应按“小鼠、大鼠急性毒性试验要求小鼠、大鼠急性毒性试验要求”计算。计算。二二第一节第一节 皮肤毒性试验皮肤毒性试验2022-12-7 27观察动物直肠或阴道一次接触药物观

18、察动物直肠或阴道一次接触药物后后，由于吸附所产生的毒性反应和死亡情况。由于吸附所产生的毒性反应和死亡情况。健康家兔体重健康家兔体重为为2.5kg左右左右，每组每组 4只只；大鼠体重大鼠体重为为250g 左右左右，每组每组 10 只只；雌雄各半。雌雄各半。栓剂、液体或膏剂。栓剂、液体或膏剂。三三第一节第一节 皮肤毒性试验皮肤毒性试验2022-12-7 28 设三个剂量组设三个剂量组，组组间距一般以间距一般以 0.650.85 为宜为宜，设赋形剂或空白对照组。设赋形剂或空白对照组。大剂量组大剂量组(超过预计临床用量的超过预计临床用量的50 倍以上倍以上)未出现死未出现死亡情况时亡情况时，则只须设一

19、个高剂量组。则只须设一个高剂量组。将药物轻轻置入动物直肠或阴道将药物轻轻置入动物直肠或阴道 内内,与其粘膜至少接触与其粘膜至少接触 4 小时。给药物后即刻观察及小时。给药物后即刻观察及 714 天天。三三第一节第一节 皮肤毒性试验皮肤毒性试验2022-12-7 29观察动物全身状况观察动物全身状况，体重、呼吸、循环、中枢神体重、呼吸、循环、中枢神经系统、四肢活动等变化。若出现死亡时应做动物病经系统、四肢活动等变化。若出现死亡时应做动物病理组织学检查。理组织学检查。试验结果与对照组比较进行判断试验结果与对照组比较进行判断，如果能测出如果能测出 LD50 值值，应按应按“小鼠、大鼠急性毒性试验要求

20、小鼠、大鼠急性毒性试验要求”计算。计算。三三第一节第一节 皮肤毒性试验皮肤毒性试验2022-12-7 30观察动物观察动物皮肤长期接触受试药物经皮肤长期接触受试药物经皮肤渗透或吸收后对机体产生的异常反应及其可逆程皮肤渗透或吸收后对机体产生的异常反应及其可逆程度度。健康家兔健康家兔2.03.0kg，每组每组 6 只只 大鼠大鼠200300g，每组每组10 只只 雌雄各半雌雄各半 豚豚鼠鼠350450g，每组每组10 只只膏剂膏剂、液体或、液体或粉末粉末。粉末需用赋形粉末需用赋形剂（羊毛脂、凡士林等）混匀。剂（羊毛脂、凡士林等）混匀。第一节第一节 皮肤毒性试验皮肤毒性试验四四2022-12-7 3

21、1 第一节第一节 皮肤毒性试验皮肤毒性试验四四2022-12-7 32 将药物均匀地涂敷于动物背部约占将药物均匀地涂敷于动物背部约占 10%的表面的表面积上积上，对于毒性高的药物对于毒性高的药物，覆盖面积可少一些覆盖面积可少一些，但要但要以尽可能均匀的薄层覆盖在体表面上以尽可能均匀的薄层覆盖在体表面上，并在涂敷后用并在涂敷后用纱布、胶布等加以固定纱布、胶布等加以固定，每日一次每日一次，每次至少接触每次至少接触 6 小时。按临床用药疗程的小时。按临床用药疗程的 3 倍以上时间连续给药。倍以上时间连续给药。第一节第一节 皮肤毒性试验皮肤毒性试验四四2022-12-7 33 如果受试动物涂抹后产生了

22、严重的皮肤刺激如果受试动物涂抹后产生了严重的皮肤刺激毒性反应毒性反应，应该中止试验应该中止试验，重新设计试验方案重新设计试验方案，以较低剂量进行一次新的试验。以较低剂量进行一次新的试验。第一节第一节 皮肤毒性试验皮肤毒性试验四四2022-12-7 34观察指标观察指标 在整个试验期间应该认真记录所观察到的毒性反在整个试验期间应该认真记录所观察到的毒性反应应，包括其出现时间、程度、持续时间。笼旁观察反包括其出现时间、程度、持续时间。笼旁观察反应包括皮肤、毛、眼睛和粘膜的变化、呼吸、循环和应包括皮肤、毛、眼睛和粘膜的变化、呼吸、循环和中枢神经系统中枢神经系统，四肢活动和行为方式等的变化。但不四肢活

23、动和行为方式等的变化。但不局限于此局限于此，要每周测量进食量和动物体重。实验结束要每周测量进食量和动物体重。实验结束时时，检查项目均同大鼠长期毒性试验的要求。检查项目均同大鼠长期毒性试验的要求。第一节第一节 皮肤毒性试验皮肤毒性试验四四2022-12-7 35报报 告告应写明安全剂量、中毒剂量、中毒表现、应写明安全剂量、中毒剂量、中毒表现、中毒的靶器官及中毒的可逆程度等。中毒的靶器官及中毒的可逆程度等。第一节第一节 皮肤毒性试验皮肤毒性试验四四2022-12-7 36 第二节第二节刺刺 激激 试试 验验2022-12-7 37 刺激试验是指刺激试验是指观察观察皮肤皮肤、结膜及粘膜等、结膜及粘膜

24、等接触接触受试受试药物药物后所后所产生的产生的刺激反应情况。分刺激反应情况。分1次给药的刺激试次给药的刺激试验和多次给药的刺激试验。验和多次给药的刺激试验。第二节第二节 刺激试验刺激试验皮肤刺激试验皮肤刺激试验眼刺激试验眼刺激试验滴鼻剂和吸入剂刺激试验滴鼻剂和吸入剂刺激试验肌肉注射剂的局部刺激试验肌肉注射剂的局部刺激试验静脉注射剂的血管刺激试验静脉注射剂的血管刺激试验一次给药一次给药多次给药多次给药2022-12-7 38 皮肤刺激试验是指皮肤接触药物是否产生可逆性皮肤刺激试验是指皮肤接触药物是否产生可逆性炎性症状的试验炎性症状的试验。目前多选用家兔和豚鼠目前多选用家兔和豚鼠。对于对于强刺激或

25、无刺激作强刺激或无刺激作用的药物用家兔检测效果好用的药物用家兔检测效果好，但对作用缓和的刺激药但对作用缓和的刺激药物用豚鼠实验结果较准确物用豚鼠实验结果较准确。第二节第二节 刺激试验刺激试验一一2022-12-7 39 试验目的试验目的 观察观察皮肤皮肤在在接触药物接触药物后后是否产生是否产生可逆性炎性症状可逆性炎性症状。试验动物及试验药物试验动物及试验药物 第二节第二节 刺激试验刺激试验一一2022-12-7 40 试验方法试验方法 至少选用至少选用3 3只家兔或只家兔或5 5只豚鼠。只豚鼠。脱毛后脱毛后，将药物将药物 1m1(液体液体)或或 1.0g(固体固体)涂于涂于药物区药物区和和破损

26、皮肤区破损皮肤区，每区，每区均为均为体表面积的体表面积的3%5%，各区之间留有适当距离。，各区之间留有适当距离。赋赋形剂则涂于形剂则涂于对照区对照区，用适宜方法固定。用适宜方法固定。24 小时后用温小时后用温水或无刺激性溶剂去除残留药物及赋形剂。去除药物水或无刺激性溶剂去除残留药物及赋形剂。去除药物后后1、24、48 小时和小时和 72 小时观察涂抹部位有无红斑和小时观察涂抹部位有无红斑和水肿等情况水肿等情况，以及上述变化的恢复情况和时间。以及上述变化的恢复情况和时间。第二节第二节 刺激试验刺激试验一一2022-12-7 41 试验方法试验方法 至少选用至少选用 3 只家兔或只家兔或 5 只豚

27、鼠。只豚鼠。多次给药实验则一般每多次给药实验则一般每日涂抹一次日涂抹一次,连续一周连续一周,其余均与一次给药物的方法和其余均与一次给药物的方法和要求一致。要求一致。第二节第二节 刺激试验刺激试验一一 结果判断与评价结果判断与评价 每只动物实验结果按每只动物实验结果按下下表进行刺激反应评分表进行刺激反应评分。皮肤刺激反应评分标准皮肤刺激反应评分标准 无红斑无红斑 0 0 无水肿无水肿 0 0 勉强可见勉强可见 1 1 勉强可见勉强可见 1 1 中度红斑中度红斑 2 2 明显可见明显可见 2 2 严重红斑严重红斑 3 3 皮肤隆起轮廓清楚皮肤隆起轮廓清楚 3 3 紫红色红斑并有紫红色红斑并有 4

28、4 皮肤隆起约皮肤隆起约1mm1mm并并 4 4 焦痂形成焦痂形成 范围扩大范围扩大 总总分分 8 8 第二节第二节 刺激试验刺激试验42任立群2022-12-7 43 皮肤刺激强度评价皮肤刺激强度评价 刺激反应刺激反应 分值分值 无刺激性无刺激性 0.5 (0-0.4)0.5 (0-0.4)轻度刺激性轻度刺激性 2.0 (0.5-1.9)2.0 (0.5-1.9)3.03.0 中度刺激性中度刺激性 6.0 (2.0-5.9)6.0 (2.0-5.9)强刺激性强刺激性 6.0 (6.0-8.0)6.0 (6.0-8.0)计算出平均分值按计算出平均分值按下下表进行刺激强度评价表进行刺激强度评价:

29、第二节第二节 刺激试验刺激试验2022-12-7 44直接接触引起的刺激作用直接接触引起的刺激作用第二节第二节 刺激试验刺激试验二二药物作用于眼的方式药物作用于眼的方式2022-12-7 45 通过全身给药通过全身给药也也能影响角膜能影响角膜,如氯如氯喹喹、氯普马、氯普马嗪嗪等。等。Potts 等曾观察到这些药物对角膜有损伤等曾观察到这些药物对角膜有损伤，其作用可能其作用可能是通过泪管或通过血是通过泪管或通过血房水屏障房水屏障，这些作用对人来说这些作用对人来说仅在较大剂量情况下才发生仅在较大剂量情况下才发生。全身给药是否会引起角膜的损伤全身给药是否会引起角膜的损伤第二节第二节 刺激试验刺激试验

30、二二直接接触引起的刺激作用直接接触引起的刺激作用药物作用于眼的方式药物作用于眼的方式2022-12-7 46直接接触引起的刺激作用直接接触引起的刺激作用第二节第二节 刺激试验刺激试验二二药物作用于眼的方式药物作用于眼的方式全身给药引起角膜损伤全身给药引起角膜损伤2022-12-7 47 由药物直接接触角膜所引起的刺激作用由药物直接接触角膜所引起的刺激作用，表现为炎表现为炎症。症。如果短时间接触刺激性较强的药物如果短时间接触刺激性较强的药物，引起角膜结膜引起角膜结膜炎、角膜表层水肿、上皮脱落炎、角膜表层水肿、上皮脱落；结膜充血、水肿、发生结膜充血、水肿、发生灼痛、流泪、畏光等。灼痛、流泪、畏光等

31、。如果长时间接触刺激性较弱的药物如果长时间接触刺激性较弱的药物，可引起慢性结可引起慢性结膜炎或膜炎或睑睑腺炎腺炎,表现出充血、分泌物增多等。表现出充血、分泌物增多等。第二节第二节 刺激试验刺激试验二二接触刺激物后角膜的表接触刺激物后角膜的表现现2022-12-7 48 1.兔和猴兔和猴：对猴眼有中等刺激对猴眼有中等刺激(主要是表层的改变主要是表层的改变 和水肿以及轻微的表层改变和水肿以及轻微的表层改变)的物质的物质，可引可引 起兔眼的严重反应起兔眼的严重反应，包括不同程度的角膜混包括不同程度的角膜混 浊浊、血管血管翳翳形成以及结膜炎形成以及结膜炎。第二节第二节 刺激试验刺激试验二二不同物种之间

32、眼对刺激反应的差不同物种之间眼对刺激反应的差异异2022-12-7 49 2.兔与人兔与人：（1）对各种物质刺激后流泪的量不一样对各种物质刺激后流泪的量不一样；（2）兔眨眼次数较人少兔眨眼次数较人少（20 次次/5 分钟分钟）；）；（3）兔泪水与人和其它动物泪水兔泪水与人和其它动物泪水 pH 值不一样值不一样 （兔兔，8.2；人人，7.17.3；猴猴，7.4）；）；第二节第二节 刺激试验刺激试验二二不同物种之间眼对刺激反应的差不同物种之间眼对刺激反应的差异异2022-12-7 50 （4）兔角膜损伤后兔角膜损伤后，因因其其眼腺有丰富的血管丛眼腺有丰富的血管丛，对损伤的反应快而强烈对损伤的反应快

33、而强烈，又因角膜基质松弛又因角膜基质松弛，因此易有因此易有新生血管和血管新生血管和血管翳翳形成形成，且，且形成迅速形成迅速(比人比人和和猴快猴快)，通通常在常在 47 天形成，天形成，如果角膜损伤较大时如果角膜损伤较大时，在在 14 天内天内翳翳将将包裹整个角膜。一般情况下包裹整个角膜。一般情况下,虽可消退一点虽可消退一点,但不会完全但不会完全消失消失,而终生残留下来。当人眼有而终生残留下来。当人眼有翳翳反应时反应时,一般都伴有一般都伴有慢性疾病慢性疾病,而不是急性刺激作用而不是急性刺激作用,在治疗后在治疗后，翳，翳可能消可能消退退。（5）兔眼瞬膜大兔眼瞬膜大，而人则已消退而人则已消退。第二节

34、第二节 刺激试验刺激试验二二不同物种之间眼对刺激反应的差不同物种之间眼对刺激反应的差异异2022-12-7 51 3.不同种属眼的各个部位反应是不同的。不同种属眼的各个部位反应是不同的。如如 兔眼虹膜和结膜反应强兔眼虹膜和结膜反应强；角膜反应狗眼强角膜反应狗眼强，猴猴眼眼反应轻反应轻 猴的虹膜有色素猴的虹膜有色素，对虹膜血管充血改变不便观对虹膜血管充血改变不便观察察。第二节第二节 刺激试验刺激试验二二不同物种之间眼对刺激反应的差不同物种之间眼对刺激反应的差异异2022-12-7 52 因此因此，目前仍首选目前仍首选白白兔来作眼刺激试验兔来作眼刺激试验。第二节第二节 刺激试验刺激试验二二 也可使

35、用狗和灵长类。也可使用狗和灵长类。如果是研究药物对晶状体、视网膜和眼神经的如果是研究药物对晶状体、视网膜和眼神经的作用，可选用大鼠和猫。作用，可选用大鼠和猫。2022-12-7 53 试验目的试验目的 用于评价药物的眼刺激作用。特别是眼科用药用于评价药物的眼刺激作用。特别是眼科用药，必必须进行动物的眼刺激试验须进行动物的眼刺激试验，以保证临床用药的安全性。以保证临床用药的安全性。第二节第二节 刺激试验刺激试验二二2022-12-7 54 试验动物试验动物 首选白色家兔首选白色家兔，至少，至少4只，体重只，体重23kg。第二节第二节 刺激试验刺激试验二二 试验药物试验药物 液体或膏剂。液体或膏剂

36、。2022-12-7 55 家兔来源广家兔来源广，较驯服较驯服，便于操作便于操作，价格相对价格相对 便宜便宜，并且易饲养并且易饲养；白兔的眼球大白兔的眼球大，角膜表面积和球结膜范围都角膜表面积和球结膜范围都 大大，易于观察易于观察；虹膜无色素虹膜无色素，便于对虹膜血管的改变进行观便于对虹膜血管的改变进行观 测和摄像。测和摄像。第二节第二节 刺激试验刺激试验二二选用白色家兔作眼刺激试验的优越性选用白色家兔作眼刺激试验的优越性2022-12-7 56 试验方法试验方法 将液态或软膏将液态或软膏0.1ml 或或 0.1g 直接直接滴入或涂入实验动物一侧结膜囊内滴入或涂入实验动物一侧结膜囊内，另一侧眼

37、作为对照。另一侧眼作为对照。滴药后使眼被动闭合滴药后使眼被动闭合510 秒秒，记录滴药后记录滴药后6、24、48小时和小时和72小时对眼的局部反应小时对眼的局部反应，第第 4、7天观察恢复情况天观察恢复情况，观察时应观察时应用荧光素用荧光素钠钠检查角膜损害检查角膜损害，用裂隙灯检查角膜透明度、虹膜用裂隙灯检查角膜透明度、虹膜纹理改变。纹理改变。如果药物明显引起眼刺激反应如果药物明显引起眼刺激反应，可再选用可再选用 6 只动物只动物，将药物滴入一侧结膜囊内将药物滴入一侧结膜囊内，接触接触4秒或秒或30秒后用生理盐水冲秒后用生理盐水冲洗干净洗干净，再观察眼的刺激反应。再观察眼的刺激反应。第二节第二

38、节 刺激试验刺激试验二二2022-12-7 57 实验方法实验方法 凡临床用药时间长凡临床用药时间长（超过（超过1周）周）的药物要进行多次性的眼刺激试验的药物要进行多次性的眼刺激试验,一般一般连续连续给药给药1周以上。实验结束后周以上。实验结束后,继续观察继续观察 714 天。天。第二节第二节 刺激试验刺激试验二二2022-12-7 58 结果判断与评价结果判断与评价 按要求按要求,将每只动物的眼角膜、虹膜和结膜的刺激将每只动物的眼角膜、虹膜和结膜的刺激反应的分值相加反应的分值相加,即是一只受试动物眼刺激反应的总积分。即是一只受试动物眼刺激反应的总积分。把每个受试动物的刺激反应积分的总和除以动

39、物数把每个受试动物的刺激反应积分的总和除以动物数,就是就是该受试物对眼刺激性的最后分值。该受试物对眼刺激性的最后分值。第二节第二节 刺激试验刺激试验二二2022-12-7 59观察药物一次或多次滴入或吸入给予后所产观察药物一次或多次滴入或吸入给予后所产生的刺激反应情况生的刺激反应情况。同同滴鼻剂和吸入剂的急性毒性试验。滴鼻剂和吸入剂的急性毒性试验。第二节第二节 刺激试验刺激试验三三2022-12-7 60试试验验方法方法 实验时将药物滴入或喷雾于动物实验时将药物滴入或喷雾于动物，使药物与使药物与其粘膜接触至少其粘膜接触至少 4 小时。然后于小时。然后于24 小时处死动物小时处死动物，取出局部粘

40、膜组织取出局部粘膜组织，观察有无充血、红肿等现象。观察有无充血、红肿等现象。若有变化则须进行病理组织学检查。若有变化则须进行病理组织学检查。第二节第二节 刺激试验刺激试验三三2022-12-7 61试试验验方法方法l多次给药物实验多次给药物实验：一般每日滴入或吸入一次一般每日滴入或吸入一次，连续一周连续一周，于末于末次给药次给药 24 小时后处死动物。其它均与一次给药小时后处死动物。其它均与一次给药的方法和要求一致。的方法和要求一致。第二节第二节 刺激试验刺激试验三三 结果判断结果判断 实验结果与对照组比较进行判断。实验结果与对照组比较进行判断。2022-12-7 62实验目的实验目的观察药物

41、观察药物肌内注射后是否产生局部刺激作用。肌内注射后是否产生局部刺激作用。方方 法法 家兔家兔6只。只。一侧股四头肌肌内注射受试药一侧股四头肌肌内注射受试药12ml/只，另一侧只，另一侧注射等量生理盐水作对照。注射等量生理盐水作对照。48h后放血处死家兔，取后放血处死家兔，取股四头肌纵向剖开，观察注射部位肌肉的刺激反应。股四头肌纵向剖开，观察注射部位肌肉的刺激反应。也可做病理学检查。也可做病理学检查。第二节第二节 刺激试验刺激试验四四2022-12-7 63第二节第二节 刺激试验刺激试验四四反应级数反应级数刺激反应刺激反应0给药部位无明显反应给药部位无明显反应1给药部位轻度充血，直径在给药部位轻

42、度充血，直径在0.5cm以下以下2给药部位中度充血，直径在给药部位中度充血，直径在1.0cm以下以下3给药部位轻度充血、红肿，肌肉有变性给药部位轻度充血、红肿，肌肉有变性4出现肌肉褐色变性、坏死，直径在出现肌肉褐色变性、坏死，直径在0.5cm以下以下5肌肉严重变性，出现大片坏死肌肉严重变性，出现大片坏死肌肉注射剂刺激反应评分标准肌肉注射剂刺激反应评分标准2022-12-7 64第二节第二节 刺激试验刺激试验四四 结果判定结果判定3只家兔的平均反应值在只家兔的平均反应值在2分以下者，可认为符分以下者，可认为符合规定；如平均反应分值在合规定；如平均反应分值在23分，应分取分，应分取5只家兔复只家兔

43、复试，结果判定标准同上；如超过试，结果判定标准同上；如超过2例认为不符合规定，例认为不符合规定，不可供肌内注射用。或通过病理组织学检查判定是否不可供肌内注射用。或通过病理组织学检查判定是否具有明显刺激作用。具有明显刺激作用。2022-12-7 65第二节第二节 刺激试验刺激试验五五实验目的实验目的观察观察受试静脉注射剂经多次静脉注射后对血管刺激受试静脉注射剂经多次静脉注射后对血管刺激反应情况。反应情况。方方 法法 家兔家兔6只。随机分成受试物和对照只。随机分成受试物和对照2组，每组组，每组3只。只。耳缘静脉注射受试药及生理盐水，每天耳缘静脉注射受试药及生理盐水，每天1次，连续次，连续3天。天。

44、每天给药前及最后一次给药后每天给药前及最后一次给药后4896h对动物和注射对动物和注射部位进行肉眼观察，确定是否出现明显的肿胀、充血和部位进行肉眼观察，确定是否出现明显的肿胀、充血和坏死等刺激症状。在最后一次给药后坏死等刺激症状。在最后一次给药后4896h取家兔耳注取家兔耳注射部位和向前射部位和向前5cm部位的血管组织制作病理切片检查。部位的血管组织制作病理切片检查。2022-12-7 66第二节第二节 刺激试验刺激试验血管刺激试验血管刺激试验体外溶血试验体外溶血试验过敏试验过敏试验热原试验热原试验2022-12-7 67第二节第二节 刺激试验刺激试验血管刺激试验血管刺激试验体外溶血试验体外溶

45、血试验过敏试验过敏试验热原试验热原试验常规的体外试管法常规的体外试管法改进的体外溶血性试验改进的体外溶血性试验体外红细胞计数体外红细胞计数体内溶血试验体内溶血试验2022-12-7 68第二节第二节 刺激试验刺激试验血管刺激试验血管刺激试验体外溶血试验体外溶血试验过敏试验过敏试验热原试验热原试验全身主动过敏试验（全身主动过敏试验（ASA）被动皮肤过敏试验（被动皮肤过敏试验（PCA）豚鼠最大化试验和豚鼠最大化试验和Buehler试验（试验（BT）2022-12-7 69第二节第二节 刺激试验刺激试验血管刺激试验血管刺激试验体外溶血试验体外溶血试验过敏试验过敏试验热原试验热原试验 给家兔静脉注射一

46、定剂量的受试药，观察家兔给家兔静脉注射一定剂量的受试药，观察家兔体温升高情况，以判定受试物是否有致热原作用。体温升高情况，以判定受试物是否有致热原作用。取家兔取家兔3只，测定正常体温，于只，测定正常体温，于15分钟内耳缘分钟内耳缘静脉缓慢注入温热至静脉缓慢注入温热至38的受试物。然后每隔的受试物。然后每隔1小小时测定体温时测定体温1次。共测次。共测3次，以次，以3次体温中最高一次次体温中最高一次减去正常体温，即为该家兔体温升高度数。减去正常体温，即为该家兔体温升高度数。如如3只家兔中有一只体温升高只家兔中有一只体温升高0.6以上，或以上，或3只只家兔体温升高量均低于家兔体温升高量均低于0.6

47、，但升高的总数达，但升高的总数达1.4 以上时，应另取以上时，应另取5只家兔受试，检查方法同上。只家兔受试，检查方法同上。复试的复试的5只家兔中，体温升高只家兔中，体温升高0.6或以上的家或以上的家兔不超过一只，并且初试复试合并兔不超过一只，并且初试复试合并8只家兔体温升只家兔体温升高总数不超过高总数不超过3.5时，可以认为受试物符合热原检时，可以认为受试物符合热原检查规定；否则认为不符合热原检查规定。查规定；否则认为不符合热原检查规定。致致 敏敏 作作 用用（反应反应）70 当皮肤接触某些药物时当皮肤接触某些药物时，可表现出极小的反应可表现出极小的反应 或没有任何反应。但是当随后再接触该药物

48、时或没有任何反应。但是当随后再接触该药物时，可可 发生一种更严重的发生一种更严重的特异性免疫反应，特异性免疫反应，即致敏作用。即致敏作用。几天到几年几天到几年。常见于局部涂敷药物常见于局部涂敷药物处处。71任立群 过敏反应过敏反应是一种不同于药物的一般毒性作用是一种不同于药物的一般毒性作用的特殊效应。药物过敏性反应的表现是多的特殊效应。药物过敏性反应的表现是多种多样种多样的的，可累及各器官系统可累及各器官系统，表现为皮炎表现为皮炎，血管性水肿血管性水肿，严重严重者可致过敏性休克。者可致过敏性休克。过敏性皮炎过敏性皮炎为为皮肤出现大片红色丘皮肤出现大片红色丘疹，疹，局部局部痒、灼热有时伴有发烧、

49、烦躁不安、胸闷、恶心、痒、灼热有时伴有发烧、烦躁不安、胸闷、恶心、严重者可致心律失常、溶血反应严重者可致心律失常、溶血反应，甚至致死。甚至致死。72任立群 大多数药物可能属于半抗原大多数药物可能属于半抗原，它们及其代谢产它们及其代谢产物在体内与蛋白质结合而形成完全抗原。物在体内与蛋白质结合而形成完全抗原。具有致敏作用的药物称为具有致敏作用的药物称为药物致敏原或药物致敏物。药物致敏原或药物致敏物。在皮肤中除了血浆蛋白之外在皮肤中除了血浆蛋白之外,还有还有1515种不同类种不同类型的抗原蛋白型的抗原蛋白,这些蛋白可以与半抗原结合。这些蛋白可以与半抗原结合。在人类在人类，由药物引起的过敏反应由药物引

50、起的过敏反应，就大多数药就大多数药物而言物而言，通常不超过所接触者的百分之几。但是通常不超过所接触者的百分之几。但是，某些药物却几乎可使多数人接触致敏。某些药物却几乎可使多数人接触致敏。73任立群 1.1.病理变化不同于该药物引起的一般中毒性病理变化不同于该药物引起的一般中毒性改变改变，而是免疫性反应症。而是免疫性反应症。2.2.不容易找到药物毒理学中的一般毒性的剂不容易找到药物毒理学中的一般毒性的剂量一效应规律。量一效应规律。3.3.经一定潜伏期后经一定潜伏期后，再次接触药物才能激发再次接触药物才能激发出特定症状。出特定症状。74任立群 1.1.致敏原致敏原 2 2.致敏条件致敏条件 3 3