1、动物肝组织中DNA的提取及含量测定,【目的要求】,掌握肝中DNA分离纯化的原理和方法 掌握DNA定量技术,【实验原理】-背景,细胞内核酸多以核蛋白的形式（DNP或RNP）存在 脱氧核糖核蛋白（DNP），主要存在于细胞核中；核糖核蛋白（RNP),主要存在于细胞质内； DNA极不稳定，易降解，因此在制备时应防止过酸、过碱及其它引起核酸降解的因素作用。常见措施：低温操作、加入柠檬酸钠抑制水解,【实验原理】-DNP的分离,脱氧核糖核蛋白DNP及核糖核蛋白RNP在NaCl溶液中的溶解度存在显著差异： DNP可溶于1mol/L的NaCl溶液，但在0.14mol/LNaCl溶液中溶解度极低； RNP则在0.
2、14mol/LNaCl中溶解度最大 利用0.14mol/LNaCl处理细胞匀浆可分离DNP（沉淀相）及RNP（溶解相）。,【实验原理】-DNA的分离,将DNP沉淀重悬于生理盐水，加入去污剂十二烷基硫酸钠（SDS)溶液，使蛋白质变性解聚并与DNA分离； 加入氯仿使蛋白沉淀，离心除蛋白，DNA溶解于水相； 加入冰冷的95乙醇沉淀DNA，即得粗DNA，重复操作得较纯DNA.,【实验原理】-DNA的定量,DNA浓度C = A260/KL n（g/ml）； （A为吸光度；K为摩尔消光系数；L=光程；n为稀释倍数）,1. 双链DNA(dsDNA)，K= 0.02; C（dsDNA） = A26050/L
3、n（稀释倍数）（g/ml） 标准条件下，L=1,n=1,若A260=1时，C（dsDNA）=50g/ml；,纯DNA：A260/A280: 1.6 -1.8; 偏离该值，样品存在杂质。 若 1.8 可能有RNA污染、或DNA变性降解； 若 1.6 可能蛋白质污染。,【实验原理】-DNA的纯度,操作流程图,【实验结果及分析】,计算所得DNA样品的浓度 双链DNA(dsDNA)，K= 0.02; C（dsDNA） = A26050/L n（稀释倍数）（g/ml） 标准条件下，L=1,n=1,若A260=1时，C（dsDNA）=50g/ml； 2. 计算A260/A280比值，评估样品的纯度,【实验报告】,1、实验原理（清晰，全面） 2、实验步骤（简化步骤） 3、实验结果计算（数据带入的过程） 4、实验讨论（讨论实验成败的原因，实验可改良的地方等）,
