激光扫描共聚焦显微镜技术讲座课件.ppt

1、激光扫描共聚焦显微镜技术讲座激光扫描共聚焦显微镜技术讲座激光扫描共聚焦显微镜技术讲座、型号的共聚焦显微镜。随着技术的不断发展和完善，产品的性能也不断改进和更新，应用的范围也越来越广泛。激光扫描共聚焦显微镜技术讲座Hippocampus neurons expressing GFP激光扫描共聚焦显微镜技术讲座激光扫描共聚焦显微镜技术讲座激光扫描共聚焦显微镜技术讲座激光扫描共聚焦显微镜技术讲座激光扫描共聚焦显微镜技术讲座激光扫描共聚焦显微镜技术讲座激光扫描共聚焦显微镜技术讲座荧光显微镜LSCM激光扫描共聚焦显微镜技术讲座激光扫描共聚焦显微镜技术讲座激光扫描共聚焦显微镜技术讲座激光扫描共聚焦显微镜技

2、术讲座激光扫描共聚焦显微镜技术讲座2 2、球差：、球差：由主轴上某一物点向光学系由主轴上某一物点向光学系统发出的单色圆锥形光束，经该统发出的单色圆锥形光束，经该光学系列折射后，光学系列折射后，不能聚焦成不能聚焦成一点一点,使成像模糊不清使成像模糊不清,形成一弥形成一弥散光斑散光斑(俗称模糊圈俗称模糊圈)，则此光学，则此光学系统的成像误差称为球差。系统的成像误差称为球差。激光扫描共聚焦显微镜技术讲座3、色差：色差：由白色物点向光学系统发出一束由白色物点向光学系统发出一束白光，经该光学系列折射后，组成该白光，经该光学系列折射后，组成该束白光的红、橙、黄、绿、青、蓝、束白光的红、橙、黄、绿、青、蓝、

3、紫等各色光，不能会聚于同一点，即紫等各色光，不能会聚于同一点，即白色物点不能结成白色像点，而结成白色物点不能结成白色像点，而结成一彩色像斑的成像误差，称为色差。一彩色像斑的成像误差，称为色差。激光扫描共聚焦显微镜技术讲座激光扫描共聚焦显微镜技术讲座激光扫描共聚焦显微镜技术讲座激光扫描共聚焦显微镜技术讲座NoImage激光扫描共聚焦显微镜荧光显微镜激光扫描共聚焦显微镜技术讲座激光扫描共聚焦显微镜中常见的激光器激光扫描共聚焦显微镜中常见的激光器 Ar Ar激光器激光器:458nm,476nm,488nm,514nm:458nm,476nm,488nm,514nm HeNe:543nm,633nmH

4、eNe:543nm,633nm 固体固体激光器激光器(UV):405nmUV):405nm激光器的特点激光器的特点:1)1)方向性好方向性好:激光基本延直线传播激光基本延直线传播 2)2)单色性好单色性好:=10-8nm=10-8nm 3)3)高亮度高亮度:激光方向性好激光方向性好,其在空间上的能量分布其在空间上的能量分布是高是高 度集中的。度集中的。4)4)偏振性偏振性:激光为平面偏振光激光为平面偏振光,光纤耦合光纤耦合激光扫描共聚焦显微镜技术讲座Leica DM IRBE 倒置荧光显微镜激光扫描共聚焦显微镜技术讲座激光扫描共聚焦显微镜技术讲座LSCM物镜的重要参数 NA激光扫描共聚焦显微镜

5、技术讲座激光扫描共聚焦显微镜技术讲座激光扫描共聚焦显微镜技术讲座 4x 20 x 10 x 40 x 60 x 100 x 激光扫描共聚焦显微镜技术讲座激光扫描共聚焦显微镜技术讲座激光扫描共聚焦显微镜技术讲座分析软件控制软件+激光扫描共聚焦显微镜技术讲座激光扫描共聚焦显微镜技术讲座激光扫描共聚焦显微镜技术讲座激光扫描共聚焦显微镜技术讲座激光扫描共聚焦显微镜技术讲座图1.共聚焦显微镜简化原理图 用于激发荧光的激光束用于激发荧光的激光束(Laser)(Laser)透过入射小孔透过入射小孔(light source pinhole)(light source pinhole)被二向被二向色镜色镜(D

6、ichroic mirror)(Dichroic mirror)反射，通过显微物镜反射，通过显微物镜(Objective lens)(Objective lens)汇聚后入射于待观汇聚后入射于待观察的标本察的标本(specimen)(specimen)内部焦点内部焦点(focal point)(focal point)处。激光照射所产生的荧光处。激光照射所产生的荧光(fluorescence light)(fluorescence light)和少量反射激光一起，被物镜重新收集后送往二向色镜。其和少量反射激光一起，被物镜重新收集后送往二向色镜。其中携带图像信息的荧光由于波长比较长，直接通过二向

7、色镜并透过出射小孔中携带图像信息的荧光由于波长比较长，直接通过二向色镜并透过出射小孔(Detection pinhole)(Detection pinhole)到达光电探测器到达光电探测器(Detector)(Detector)（通常是光电倍增管（通常是光电倍增管（PMTPMT）或是）或是雪崩光电二极管（雪崩光电二极管（APDAPD），变成电信号后送入计算机。而由于二向色镜的分光作），变成电信号后送入计算机。而由于二向色镜的分光作用，残余的激光则被二向色镜反射，不会被探测到。用，残余的激光则被二向色镜反射，不会被探测到。激光扫描共聚焦显微镜技术讲座共轭激光扫描共聚焦显微镜技术讲座激光扫描共聚焦

8、显微镜技术讲座普通光学显微镜与激光共聚焦显微镜的区别普通光学显微镜与激光共聚焦显微镜的区别激光扫描共聚焦显微镜技术讲座ZXYXY平面激光扫描共聚焦显微镜技术讲座Optical sections collected simultaneously at three different excitation wavelengths(488,568,and 647 nanometers).The specimen is the fruit fly third instar wing imaginal disk.XYXY平面激光扫描共聚焦显微镜技术讲座XYXY平面timeTime-lapse imagi

9、ng of a living fruit fly embryo injected with calcium green is presented in Figure 2.The series of images shows the change in distribution of the fluorescent probe over time.0 s10 s20 s30 s激光扫描共聚焦显微镜技术讲座Peripheral nervous system of a fruit fly embryo ZXYXY平面激光扫描共聚焦显微镜技术讲座激光扫描共聚焦显微镜技术讲座激光扫描共聚焦显微镜技术讲座

10、激光扫描共聚焦显微镜技术讲座激光扫描共聚焦显微镜技术讲座激光扫描共聚焦显微镜技术讲座激光扫描共聚焦显微镜技术讲座激光扫描共聚焦显微镜技术讲座激光扫描共聚焦显微镜技术讲座激光扫描共聚焦显微镜技术讲座激光扫描共聚焦显微镜技术讲座激光扫描共聚焦显微镜技术讲座激光扫描共聚焦显微镜技术讲座激光扫描共聚焦显微镜技术讲座激光扫描共聚焦显微镜技术讲座激光扫描共聚焦显微镜技术讲座激光扫描共聚焦显微镜技术讲座激光扫描共聚焦显微镜技术讲座激光扫描共聚焦显微镜技术讲座激光扫描共聚焦显微镜技术讲座激光扫描共聚焦显微镜技术讲座激光扫描共聚焦显微镜技术讲座激光扫描共聚焦显微镜技术讲座激光扫描共聚焦显微镜技术讲座激光扫描共聚

11、焦显微镜技术讲座激光扫描共聚焦显微镜技术讲座激光扫描共聚焦显微镜技术讲座激光扫描共聚焦显微镜技术讲座Xenopus oocytes激光扫描共聚焦显微镜技术讲座Calcium green用细胞内液稀释Calcium green导入微注射器以20nL/oocyte注射卵母细胞18C避光放置40分钟共聚焦显微镜观察激光扫描共聚焦显微镜技术讲座激光扫描共聚焦显微镜技术讲座激光扫描共聚焦显微镜技术讲座HEK293 cells expressing PLC-PH-GFPPLC-PH-GFP+H1 receptor LipofactAMINE2000 混合20分钟混合物孵育细胞 4-6小时洗掉转染液，加入正常培养液，培养24hLSCM观察激光扫描共聚焦显微镜技术讲座NoImageControlHistaminewashoutHEK293 cells expressing PLC-PH-GFPA激光扫描共聚焦显微镜技术讲座激光扫描共聚焦显微镜技术讲座