自身抗体检测及应用-华西医院课件.ppt

1、自身抗体检测及应用自身抗体检测及应用彭 晓 东自身免疫(autoimmunity)机体免疫系统针对自身成分发生免疫应答反应，出现自身抗体或致敏淋巴细胞的现象。自身抗体(autoantibody)针对自身组织器官、细胞及细胞内成分的抗体。概概 念念自身免疫性疾病自身免疫性疾病(autoimmune disease，AID)因自身免疫反应导致组织器官损伤或功能障碍所致疾病。自身抗体的特性自身抗体的特性自身免疫性疾病的重要标志高滴度存在于自身免疫性疾病患者与疾病的活动性相关参与免疫病理性损伤检测自身抗体常用的方法检测自身抗体常用的方法间接免疫荧光法（IIF）ELISA免疫印迹法（Western-bl

2、ot）酶免疫斑点法常检测的自身抗体常检测的自身抗体类风湿因子（RF）抗核抗体（ANA）抗可提取性核抗原抗体（ENA）抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCA）抗角蛋白抗体（AKA）抗心磷脂抗体（ACA）类风湿因子类风湿因子（rheumatoid factor,RF）抗变性IgG Fc的自身抗体，主要类型是IgM型致病机理：RF与体内变性IgG结合形成免疫复合物，激活补体或被吞噬细胞吞噬，产生炎性介质导致组织炎性损伤，使患者发生骨关节炎及血管炎。检测方法：1.胶乳颗粒凝集实验定性、半定量，敏感性和特异性不高，测定IgM-RF2.速率散射比浊法（ARRAY、IMAGE）定量、准确、快速，测定IgM-RF3.

3、ELISA定量、准确，可测定不同类型的RF临床应用：（1）RF在RA、SLE、PSS等多种自身免疫性疾病患者中均可被检出。疾病阳性率%RA79SLE30SS95Sclerosis80PM80MCTD25（2）RF滴度与RA患者临床表现呈正相关，IgM-RF效价80IU/ml并伴有严重关节功能障碍时通常提示患者预后不良。（3）IgG-RF 与RA患者的滑膜炎、血管炎和关节症状密切相关，常伴随IgM-RF 同时出现，在正常人及非RA患者中很难检出。（4）IgA-RF与RA患者关节症状的严重程度及骨质破坏有显著相关性。临床应用：抗核抗体抗核抗体（antinuclear antibody，ANA）以真

4、核细胞（如HEp-2 细胞、肝细胞）的各种细胞核成分为靶抗原所检测的自身抗体的总称。分类和命名分类和命名1.以首先检出该抗体的患者名字命名，如抗Sm、抗Sa 抗体等；2.以相关疾病命名，如抗Scl-70、抗SS-A、抗SS-B 抗体等；3.以抗原的部位命名，如抗核仁抗体、抗线粒体抗体、抗核膜抗体、抗细胞浆抗体等；4.以抗原的化学性质进行分类命名，如抗 DNA、抗RNP、抗组蛋白抗体等。抗核抗体检测方法抗核抗体检测方法间接免疫荧光法（indirect immunofluorescence,IIF）酶免疫斑点法ELISA 免疫印迹法（Western-blot）间接免疫荧光法间接免疫荧光法HEp-2

5、细胞肝组织切片荧光标记抗体病人血清（待检抗体）细胞核细胞浆细胞骨架细胞周期均质型核糖体型肌蛋白型中心体型斑点型线粒体型波形纤维蛋白型纺缍体型核仁型高尔基体型细胞角蛋白型纺缍丝型着丝点型溶酶体型原肌球蛋白型中间体型周边型颗粒型纽带蛋白型PCNA型核点型(dots)结蛋白(桥粒)型IIFIIF检测ANAANA荧光染色模型斑点型（斑点型（nRNP/SmnRNP/Sm）高滴度的抗U1-nRNP 为MCTD的特征。抗Sm抗体对SLE具有高度特异性。斑点型（斑点型（SSA/SSB）抗SSA最常出现于SS及新生儿红斑狼疮（100%）。抗SSB抗体几乎仅见于女性，可出现于SS和SLE。均质型均质型抗dsDNA

6、抗体抗组蛋白抗体(histone)抗ssDNA抗体抗核小体抗体(nucleosome)抗dsDNA抗体SLE特异性抗体，与病情活动度相关。周边型可见于胶原病、PBC、CAH等患者核点型（DOTS）见于SLE、SS、PBC、风湿病。抗着丝点型PSS局限型标志抗体。抗原纤维蛋白型抗原纤维蛋白型仅见于5%-10%的PSS，男性高于女性。抗抗RNARNA多聚酶多聚酶型抗体型抗体仅见于硬皮病患者，阳性率为4%。抗抗PM-Scl（PM-1）抗体）抗体见于重叠综合征（多发性肌炎 PM/皮肌炎 DM/弥漫性PSS）抗抗Scl-70Scl-70型型PSS 弥漫型的标志抗体。增殖细胞核抗原增殖细胞核抗原型型（PC

7、NA）SLE特异性抗体，与发生弥漫性增殖性肾小球肾炎相关。抗核糖体抗核糖体P P蛋白蛋白（rib-P）抗体抗体抗线粒体抗体抗线粒体抗体（AMA）SLE标志抗体原发性胆汁性肝硬化标志抗体抗Jo-1抗体抗高尔基体抗体多发性肌炎（PM）标志抗体偶见于SLE和SS抗肌动蛋白抗体抗肌动蛋白抗体见于自身免疫性慢性活动型肝炎见于自身免疫性慢性活动型肝炎抗抗ENAENA抗体谱抗体谱ENA(extractable nuclear antigen)：可提取核抗原的总称临床常检测的抗ENA抗体谱主要包括：抗Sm抗U1-RNP抗SSA抗SSB抗Jo-1抗Scl-70抗rib-P 蛋白检测方法检测方法双向免疫扩散（ID

8、）对流免疫电泳（CIE）免疫印迹法（Western-blot）ELISA酶免疫斑点法免疫印迹法SDS-PAGE电泳转移电泳酶免疫检测是一组以人中性粒细胞胞浆成分为靶抗原，与临床多种小血管炎性疾病密切相关的自身抗体，对系统性血管炎、炎症性肠病等疾病的诊断与鉴别诊断具有重要意义。抗中性粒细胞胞浆抗体抗中性粒细胞胞浆抗体（anti-neutrophil cytoplasmic autoantibodies,ANCA）荧光染色型靶抗原胞浆型(cANCA)蛋白酶3（PR3）杀菌/通透性增高蛋白（BPI）核周型(pANCA)髓过氧化物酶（MPO）组织蛋白酶G（Cath-G）乳铁蛋白（LF）白细胞弹性蛋白酶

9、（HLE）非典型型(aANCA)兼有两种特性ANCAANCA荧光染色型与靶抗原荧光染色型与靶抗原周边型抗中性粒细胞胞浆抗体周边型抗中性粒细胞胞浆抗体（pANCA）主要见于炎症性肠病（溃疡性结肠炎和克罗恩病）主要见于炎症性肠病（溃疡性结肠炎和克罗恩病）胞浆型抗中性粒细胞胞浆抗体胞浆型抗中性粒细胞胞浆抗体(cANCA)(cANCA)主要见于Wegeners 肉芽肿及微小多动脉炎ANCAANCA临床应用临床应用髓过氧化物酶（MPO）与显微镜下多血管炎、坏死性新月体型肾小球肾炎、过敏性肉芽肿性血管炎相关、杀菌/通透性增高蛋白（BPI）主要见于肺部炎症性疾病并与长 期慢性绿脓杆菌感染有一定关系蛋白酶3（

10、PR3）与Wegeners 肉芽肿（WG）密切相关。仅cANCA诊断WG的特异性大于90%，联合PR3可超过95%，活动期几乎100%阳性。?组织蛋白酶G(Cath-G)白细胞弹性蛋白酶(HLE)乳铁蛋白(LF)?可见于SLE、IBD、PBC、PSC等AKA主要见于RA，阳性率36%59%，特异性95%99%，其出现可以先于临床表现；高滴度可预示较严重的RA类型。抗角蛋白抗体抗角蛋白抗体（AKA）主要见于溃疡性结肠炎，部分克罗恩病患者也可检出。与ANCA同时检测，对溃疡性结肠炎诊断的准确性可达72%。抗小肠杯状细胞抗体抗小肠杯状细胞抗体（AGCA）新患1型糖尿病时，该抗体的发生率在90%以上。

11、2型糖尿病患者若出现该抗体，则以后可能会发生1型糖尿病。抗胰岛细胞抗体抗胰岛细胞抗体（AICA）ASMA为自身免疫性肝炎型的血清学标志抗体，阳性率大于90%，高滴度对疾病诊断特异性几乎达到100%。抗平滑肌抗体抗平滑肌抗体（ASMA）LKM-1 是自身免疫性肝炎型的血清学标志抗肝肾微粒体抗体抗肝肾微粒体抗体（LKM）自身免疫性肝炎型的血清标志抗体，大约有25%的自身免疫性肝炎仅该项抗体阳性。抗可溶性肝抗原抗体抗可溶性肝抗原抗体（SLA）一组针对含有磷脂结构抗原物质的自身抗体，主要包括 抗心磷脂抗体、抗磷脂酸抗体和抗磷脂酰丝氨酸抗体。靶抗原：血浆中的磷脂结合蛋白，最常见的有 2糖蛋白、凝血酶原或

12、这些蛋白与心磷脂的复合物，特点是都含有磷脂基团。抗磷脂抗体抗磷脂抗体（anti-phospholipid antibody,APLA）致病机理：抗磷脂抗体与内皮细胞或血小板膜上的磷脂结合，可破坏细胞功能，使前列环素释放减少、血小板粘附凝集功能增强，构成血液的高凝状态、引起血栓形成；与红细胞膜上的磷脂结合，在补体参与下，可致红细胞膜破裂，发生溶血性贫血。类型：IgG、A、M型，IgG型最常见，其次是IgM型，IgA型与自身免疫性疾病的关系较小。抗磷脂抗体抗磷脂抗体（APLA）抗心磷脂抗体抗心磷脂抗体（ACLA）检测方法：常用ELISA临床应用：在SLE中总阳性检出率达 70%80%，与病情活动显

13、著相关；ACA阳性者发生血管炎、溶血性贫血、心脏及中枢神经精神系统损伤的几率明显。在RA患者阳性率为33%49%。ACA阳性是脑出血及脑梗塞的危险因素。与反复自然流产和胎儿发育迟缓有一定的相关性部分自身免疫性疾病中部分自身免疫性疾病中自身抗体的检出率自身抗体的检出率自身免疫性疾病ANA阳性率（%）SLE80100MCTD95100RA2040PSS8595PM/DM3050SS7080溃疡性结肠炎26慢性活动性肝炎3040其它风湿病2050ANAANA在自身免疫性疾病中的检出率在自身免疫性疾病中的检出率疾病类型抗原类型阳性率%SLEdsDNA3090U1-nRNP1540Sm530SSA206

14、0SSB1020PCNA3核糖体（rib）520心磷脂2040新生儿LESSA100药物诱导LE组蛋白95单链DNA80系统性红斑狼疮系统性红斑狼疮(SLE)抗原类型阳性率（%)U1-nRNP95100单链DNA2050混合性结缔组织病（混合性结缔组织病（MCTDMCTD）抗原类型阳性率（%）IgM-RF6590抗角蛋白抗体（AKA）3659单链DNA8组蛋白少见类风湿性关节炎类风湿性关节炎（RA）抗原类型阳性率（%）SSA4095SSB4095ssDNA3060唾液腺流出道4060RF6080原发性干燥综合征（原发性干燥综合征（SSSS）PSS类型相对应的抗原阳性率（%）弥漫型原纤维蛋白51

15、0PM-Scl（PM-1）3Scl-702575RNA多聚酶4局限型着丝点8095进行性系统性硬化症进行性系统性硬化症（PSS）抗原类型抗原类型阳性率（%）PM-Scl（PM-1）8Jo-12535Mi-110Mi-25Ku（重叠综合征）3055单链DNA4050PL-74PL-123多发性肌炎多发性肌炎/皮肌炎皮肌炎(PM/DM)自身免疫性慢性活动性肝炎自身免疫性慢性活动性肝炎(AIH)抗原类型阳性率（%）肌动蛋白（Actin）4090ANA(板层素，SSA等)3040肝肾微粒体（LKM-1）7可溶性肝抗原（SLA）100线粒体2型（AMA-M2）510线粒体9型（AMA-M9）10原发性胆

16、汁性肝硬化原发性胆汁性肝硬化(PBC)抗原类型阳性率（%）线粒体2型（M2）95线粒体4型（M4）55线粒体8型（M8）55线粒体9型（M9）3585核点30板层素2怀疑SLE，怎么办？问题问题常规检测程序常规检测程序ANA筛选ENA抗体谱抗胞浆型抗体鉴定其它自身抗体免疫球蛋白、补体等检测+（）95%99%可排除SLESLE治疗缓解病情特重（大量IC沉积消耗抗体）（）低滴度常见于RA等其它自身免疫性疾病高滴度可作为诊断SLE的依据ENA抗体谱检测（）不能排除抗dsDNA、Sm、rib抗体（）可帮助诊断ANA初筛标志抗体相关疾病dsDNASLESmSLESSBSS着丝点抗体PSS（局限型）Scl-70抗体PSS（弥漫型）AKARAJo-1抗体PM/DM高滴度RNP抗体MCTD肝肾微粒体抗体（LKM-1）型自身免疫性肝炎平滑肌抗体（SMA）型自身免疫性肝炎AMA（M2）PBC常见自身免疫性疾病的标志抗体常见自身免疫性疾病的标志抗体