苯丙酮尿症筛查(细菌抑制法)课件.ppt

1、 新生儿疾病筛查是在非选择新生儿群体中，新生儿疾病筛查是在非选择新生儿群体中，用快速、简便、敏感的检验方法对某些危害严重用快速、简便、敏感的检验方法对某些危害严重的先天性，的先天性，代谢缺陷性疾病筛查代谢缺陷性疾病筛查，从而对那些阳，从而对那些阳性病儿在症状出现之前，能够及时给以治疗，避性病儿在症状出现之前，能够及时给以治疗，避免痴呆儿等严重后果的发生，保障儿童正常的体免痴呆儿等严重后果的发生，保障儿童正常的体格和智能发育的系统服务。格和智能发育的系统服务。19821982年，第二届国际新生儿疾病筛查大会提年，第二届国际新生儿疾病筛查大会提出适合大规模筛查的四种疾病：甲状腺功能减低出适合大规模

2、筛查的四种疾病：甲状腺功能减低症（）、症（）、苯丙酮尿症（）、苯丙酮尿症（）、半乳糖血半乳糖血症和先天性肾上腺皮质增生症。症和先天性肾上腺皮质增生症。一、目的一、目的 掌握新生儿血样品中苯丙氨酸含量测定的临床掌握新生儿血样品中苯丙氨酸含量测定的临床意义。意义。了解新生儿苯丙酮尿症（了解新生儿苯丙酮尿症（PKU）筛查德常用）筛查德常用方法和原理。方法和原理。二、原理二、原理 苯丙酮尿症（简称苯丙酮尿症（简称PKU）是一种较常）是一种较常见的常染色体隐性遗传性氨基酸代谢病，见的常染色体隐性遗传性氨基酸代谢病，发病率约发病率约1/10,000。本病可因苯丙氨酸羟。本病可因苯丙氨酸羟化酶缺乏引起，也可

3、因辅酶因子化酶缺乏引起，也可因辅酶因子FH4缺陷引缺陷引起。起。由于本病的早期发现早期治疗，对患由于本病的早期发现早期治疗，对患儿的生长发育、智力发育不受影响，因此儿的生长发育、智力发育不受影响，因此被我国列为新生儿疾病筛查项目之一。被我国列为新生儿疾病筛查项目之一。检测方法还有荧光法、酶法等。检测方法还有荧光法、酶法等。枯草杆菌在含有抑制剂的培养基中生长受到枯草杆菌在含有抑制剂的培养基中生长受到抑制，而当外界提供苯丙氨酸环境时，抑制作用抑制，而当外界提供苯丙氨酸环境时，抑制作用解除，枯草杆菌即可恢复生长且细菌生长环的直解除，枯草杆菌即可恢复生长且细菌生长环的直径与苯丙氨酸的含量呈正比。径与苯

4、丙氨酸的含量呈正比。所以在制备好的培养基上，放上滤纸干血片，所以在制备好的培养基上，放上滤纸干血片，血中的苯丙氨酸会扩散到周围培养基中，被抑制血中的苯丙氨酸会扩散到周围培养基中，被抑制的枯草杆菌即可恢复生长。用被检样品的菌环直的枯草杆菌即可恢复生长。用被检样品的菌环直径与标准品的菌环直径相比，得出样品中苯丙氨径与标准品的菌环直径相比，得出样品中苯丙氨酸的含量。酸的含量。三、试剂三、试剂 北京协和洛克生物技术研究开发中心研发的苯丙氨酸筛查试剂盒北京协和洛克生物技术研究开发中心研发的苯丙氨酸筛查试剂盒（细菌抑制法）包含以下试剂：（细菌抑制法）包含以下试剂：四、操作四、操作1.琼脂液配制：将琼脂糖倒

5、入三角烧瓶中，加入琼脂液配制：将琼脂糖倒入三角烧瓶中，加入100ml双蒸水（双蒸水（7日内）加热煮沸（建议沸腾三日内）加热煮沸（建议沸腾三次）至完全溶解，（烧瓶中放入一支温度计监控次）至完全溶解，（烧瓶中放入一支温度计监控温度）温度）2.混合液配制：将青霉素酶、抑制剂、菌株孢子混合液配制：将青霉素酶、抑制剂、菌株孢子悬液加入到营养液瓶中，充分混匀备用悬液加入到营养液瓶中，充分混匀备用3.当琼脂糖液的温度降至当琼脂糖液的温度降至5560时，将混合时，将混合液全部倒入琼脂糖液中，充分混匀后（避免产生液全部倒入琼脂糖液中，充分混匀后（避免产生气泡）快速倒入一次性培养皿中，使其成为厚薄气泡）快速倒入一

6、次性培养皿中，使其成为厚薄均匀、平整光洁的薄层（厚度约均匀、平整光洁的薄层（厚度约mm），待冷），待冷却后备用却后备用4.用直径用直径3mm打孔器分别打取标准血片、质控血打孔器分别打取标准血片、质控血片和待检血片，按照加样模板所示排列在培养片和待检血片，按照加样模板所示排列在培养皿上，将培养皿倒置放入皿上，将培养皿倒置放入370.5恒温箱中恒温箱中培养培养16-18小时小时5.菌环量取：在菌环最致密处分别量取标准血片、菌环量取：在菌环最致密处分别量取标准血片、质控血片和待检血片细菌生长环的直径，将待质控血片和待检血片细菌生长环的直径，将待检血片的细菌生长环直径与标准品相比较，可检血片的细菌生长

7、环直径与标准品相比较，可得出待检血片的苯丙氨酸含量。得出待检血片的苯丙氨酸含量。五、结果五、结果六、计算六、计算标准品菌环范围：标准品菌环范围：2 mg/dl时菌环直径为时菌环直径为 0.75-1.05cm；4 mg/dl时菌环直径为时菌环直径为 1.25-.155cm；8 mg/dl时菌环直径为时菌环直径为 1.55-1.85cm；20 mg/dl时菌环直径为时菌环直径为2.05-2.35cm；质控品菌环范围：质控品菌环范围：阴性质控菌环直径应阴性质控菌环直径应 2mg/dl浓度点的直径；浓度点的直径；阳性质控菌环直径应阳性质控菌环直径应 4mg/dl浓度点的直径。浓度点的直径。待检样本浓度

8、：待检样本浓度：【参考值（参考范围）【参考值（参考范围）】4mg/dl七、分析七、分析1.苯丙氨酸含量苯丙氨酸含量4mg/dl为可疑阳性，为可疑阳性，原血原血片复查片复查，苯丙氨酸含量仍，苯丙氨酸含量仍4mg/dl，即召即召回复查回复查2.检测结果本身不能成为治疗的惟一因素。检测结果本身不能成为治疗的惟一因素。必须与其他的临床观察和诊断试验相结合必须与其他的临床观察和诊断试验相结合3.质控品的结果必须控制在试剂盒要求范围质控品的结果必须控制在试剂盒要求范围之内，否则实验结果可视为无效之内，否则实验结果可视为无效八、注意事项八、注意事项1.采血时间为出生后采血时间为出生后72小时，并充分哺乳小时

9、，并充分哺乳6次以上，否则会导致假阴性结果。次以上，否则会导致假阴性结果。2.所有试剂、样本应视为有潜在的传染源，所有试剂、样本应视为有潜在的传染源，实验结束应采用高压或消毒液浸泡处理。实验结束应采用高压或消毒液浸泡处理。九、思考题九、思考题 为什么采血时间为出生后为什么采血时间为出生后72小时，并小时，并充分哺乳充分哺乳6次以上？次以上？多种 肺炎肺炎细菌均可引起大叶性肺炎，但绝大多数为肺炎链球菌，其中以型致病力最强。肺炎链球菌为革兰阳性球菌，有荚膜，其致病力是由于高分子多糖体的荚膜对组织的侵袭作用。少数为肺炎杆菌、金黄*色葡萄球菌、溶血性链球菌、流感嗜血杆菌等。肺炎链球菌为口腔及鼻咽部的正

10、常寄生菌群，若呼吸道的排菌自净功能及机体的抵抗力正常时，不引发肺炎。当机体受寒、过度疲劳、醉酒、感冒、糖尿病、免疫功能低下等使呼吸道防御功能被削弱，细菌侵入肺泡通过变态反应使肺泡壁毛细血管通透性增强，浆液及纤维素渗出，富含蛋白的渗出物中细菌迅速繁殖，并通过肺泡间孔或呼吸细支气管向邻近肺组织蔓延，波及一个肺段或整个肺叶。大叶间的蔓延系带菌的渗出液经叶支气管播散所致。编辑本段编辑本段临床表现临床表现多数起病急骤，常有受凉淋雨、劳累、病毒感染等诱因，约1/3患病前有上呼吸道感染。病程710天。（一）寒战、高热：典型病例以突然寒战起病，继之高热，体温可高达3940，呈稽留热型，常伴有头痛、全身肌肉酸痛，食量减少。抗生素使用后热型可不典型，年老体弱者可仅有低热或不发热。精品PPT课件 浏览免费 下载后可以编辑修改。http:/