菌种选育、保藏与复壮2课件.ppt

1、食品发酵与酿造工艺学食品发酵与酿造工艺学第二章第二章五、原生质体融合定义：定义：通过通过酶解酶解作用将两个亲株的细胞壁去除，在高渗条件作用将两个亲株的细胞壁去除，在高渗条件下释放出只有原生质膜包被着的球状原生质体。下释放出只有原生质膜包被着的球状原生质体。然后将两亲株的原生质体在高渗条件下混合，加入然后将两亲株的原生质体在高渗条件下混合，加入融合促进剂融合促进剂聚乙二醇、仙台病毒或电融合等助融，聚乙二醇、仙台病毒或电融合等助融，使它们相互凝集。通过细胞质融合，促使两套基因使它们相互凝集。通过细胞质融合，促使两套基因组之间的接触、交换、遗传重组，在适宜条件下使组之间的接触、交换、遗传重组，在适宜

2、条件下使细胞壁再生，在再生的细胞中获得重组体。细胞壁再生，在再生的细胞中获得重组体。食品发酵与酿造工艺学食品发酵与酿造工艺学第二章第二章(1)(1)(2)(3)(4)原生质体的融原生质体的融细胞杂交细胞杂交食品发酵与酿造工艺学食品发酵与酿造工艺学第二章第二章原生质体融合回本章目录食品发酵与酿造工艺学食品发酵与酿造工艺学第二章第二章（一）原生质体融合技术的特点1 1、重组频率较高、重组频率较高2 2、受接合型或致育性的限制较小、受接合型或致育性的限制较小3 3、重组体种类较多、重组体种类较多4 4、遗传物质的传递更为完整、遗传物质的传递更为完整5 5、采用温度、药物或紫外线照射等处理钝化一方、采

3、用温度、药物或紫外线照射等处理钝化一方亲株的原生质体，然后再与另一亲株的原生质体亲株的原生质体，然后再与另一亲株的原生质体融合，可去除一方亲株，提高筛选效率融合，可去除一方亲株，提高筛选效率6 6、与其他育种方法结合，提高筛选效率、与其他育种方法结合，提高筛选效率食品发酵与酿造工艺学食品发酵与酿造工艺学第二章第二章（二）原生质体融合的主要骤（二）原生质体融合的主要骤标记菌株的筛选标记菌株的筛选原生质体的制备原生质体的制备原生质体再生试验原生质体再生试验原生质体的融合原生质体的融合筛选稳定的融合子筛选稳定的融合子优良菌株的筛选优良菌株的筛选食品发酵与酿造工艺学食品发酵与酿造工艺学第二章第二章 1

4、 1、标记、标记菌株的筛选菌株的筛选 选择遗传性状稳定且具有优势互补的两个亲株选择遗传性状稳定且具有优势互补的两个亲株 为了能明确检测到融合子，参与融合的亲株一为了能明确检测到融合子，参与融合的亲株一般都需要带有可以识别的遗传标记，如营养缺般都需要带有可以识别的遗传标记，如营养缺陷型或抗药性、菌落特征、细胞形态等陷型或抗药性、菌落特征、细胞形态等.抗青霉素，抗青霉素，菌落小菌落小对青霉素敏感，对青霉素敏感，菌落大菌落大抗青霉素抗青霉素菌落大菌落大食品发酵与酿造工艺学食品发酵与酿造工艺学第二章第二章 革兰氏阳性菌的细胞壁主要由肽聚糖组成革兰氏阳性菌的细胞壁主要由肽聚糖组成 溶菌酶溶菌酶 微球菌、

5、枯草杆菌、巨大芽孢杆菌、黄色八叠球菌微球菌、枯草杆菌、巨大芽孢杆菌、黄色八叠球菌 革兰氏阴性菌不能直接溶壁，只有当乙二胺四乙酸革兰氏阴性菌不能直接溶壁，只有当乙二胺四乙酸（EDTAEDTA）存在时，某些革兰氏阴性菌的细胞壁才能够）存在时，某些革兰氏阴性菌的细胞壁才能够被溶菌酶溶解。被溶菌酶溶解。2 2、原生质体制备、原生质体制备 食品发酵与酿造工艺学食品发酵与酿造工艺学第二章第二章放线菌的细胞壁结构类似于革兰氏阳性菌也可采用溶菌酶放线菌的细胞壁结构类似于革兰氏阳性菌也可采用溶菌酶真菌细胞壁主要由纤维素、几丁质和葡聚糖等组成真菌细胞壁主要由纤维素、几丁质和葡聚糖等组成 青霉菌多用纤维素酶和青霉菌

6、多用纤维素酶和-1,3-1,3-糖苷酶等溶壁糖苷酶等溶壁曲霉用曲霉用-1,3-1,3-糖苷酶和糖苷酶和-1,4-1,4-糖苷酶等糖苷酶等酵母菌细胞壁中的葡聚糖和几丁质酵母菌细胞壁中的葡聚糖和几丁质 蜗牛酶蜗牛酶 食品发酵与酿造工艺学食品发酵与酿造工艺学第二章第二章食品发酵与酿造工艺学食品发酵与酿造工艺学第二章第二章菌体的前处理菌体的前处理在菌体生理状态在菌体生理状态酶的浓度酶的浓度菌龄：对数生长中期细胞的细胞壁中肽聚糖菌龄：对数生长中期细胞的细胞壁中肽聚糖含量很低，对溶菌酶敏感。含量很低，对溶菌酶敏感。酶解温度酶解温度影响原生质体制备的因素影响原生质体制备的因素酶解时间酶解时间渗透压渗透压细菌

7、中加入细菌中加入EDTA,EDTA,甘氨酸、青霉素等，放线菌甘氨酸、青霉素等，放线菌加入甘氨酸，可直接影响细胞壁正常合成加入甘氨酸，可直接影响细胞壁正常合成以原生质体形成率和再生率之积达到最大的以原生质体形成率和再生率之积达到最大的酶浓度为最适酶浓度。酶浓度为最适酶浓度。常用酶解范围为常用酶解范围为20204040，具体情况具体分析，具体情况具体分析通过实验选择适宜酶解时间通过实验选择适宜酶解时间保持稳定的等渗透压至关重要，可采用渗透压保持稳定的等渗透压至关重要，可采用渗透压稳定剂：细菌用蔗糖、氯化钠；霉菌用氯化钾、稳定剂：细菌用蔗糖、氯化钠；霉菌用氯化钾、氯化钠等。氯化钠等。食品发酵与酿造工

8、艺学食品发酵与酿造工艺学第二章第二章原生质体形成率原生质体形成率=破壁前菌数破壁前菌数-低渗处理后剩余菌数低渗处理后剩余菌数破壁前菌数破壁前菌数100%100%食品发酵与酿造工艺学食品发酵与酿造工艺学第二章第二章3.3.原生质体再生试验原生质体再生试验 使原生质体重新长出细胞壁使原生质体重新长出细胞壁 ，恢复完整的细胞形态结构，恢复完整的细胞形态结构酶解除去细胞壁后的原生质体应具有酶解除去细胞壁后的原生质体应具有再生能力再生能力，即能重新长成胞壁，恢复细胞形态，并能正常生即能重新长成胞壁，恢复细胞形态，并能正常生长繁殖，这是原生质体融合的必要条件长繁殖，这是原生质体融合的必要条件.原生质体再生

9、率原生质体再生率=再生平板计数再生平板计数低渗剩余菌数低渗剩余菌数破壁前菌数破壁前菌数低渗剩余菌数低渗剩余菌数100%100%食品发酵与酿造工艺学食品发酵与酿造工艺学第二章第二章再生率再生率 细菌为细菌为3-10%3-10%真菌在真菌在20-80%20-80%不同微生物的原生质体的最适再生条件不同，最重要的一不同微生物的原生质体的最适再生条件不同，最重要的一个共同点是都需要高渗透压个共同点是都需要高渗透压 食品发酵与酿造工艺学食品发酵与酿造工艺学第二章第二章4.4.原生质体融合原生质体融合 聚乙二醇（聚乙二醇（PEGPEG）能有效地促进原生质体融合）能有效地促进原生质体融合一般一般PEGPEG

10、的使用浓度范围在的使用浓度范围在25-25-6060%采用电融合仪：在高频电场下，用直流电穿孔来进行融合采用电融合仪：在高频电场下，用直流电穿孔来进行融合 影响原生质体融合的因素有：促融剂的浓度、作用时间、影响原生质体融合的因素有：促融剂的浓度、作用时间、阳离子浓度和阳离子浓度和pHpH等。当然更重要的是亲株本身特性的选择，等。当然更重要的是亲株本身特性的选择，以及尽可能制备具有活力的原生质体以及尽可能制备具有活力的原生质体。食品发酵与酿造工艺学食品发酵与酿造工艺学第二章第二章微生物原生质体融合的一般原理和过程微生物原生质体融合的一般原理和过程 食品发酵与酿造工艺学食品发酵与酿造工艺学第二章第

11、二章原生质体经过融合得到的融合细胞出现两种情况，原生质体经过融合得到的融合细胞出现两种情况，一种是真正的融合，产生杂合二倍体一种是真正的融合，产生杂合二倍体(融合后的二融合后的二倍体细胞分裂而不分离，分裂后的细胞仍保持二倍倍体细胞分裂而不分离，分裂后的细胞仍保持二倍体状态体状态)或单倍重组体；或单倍重组体；第二种情况是暂时的融合，形成异核体。第二种情况是暂时的融合，形成异核体。5 5融合子的选择一融合子的遗传分析融合子的选择一融合子的遗传分析 食品发酵与酿造工艺学食品发酵与酿造工艺学第二章第二章重组子的检出方法有两种：重组子的检出方法有两种：直接法直接法 将融合液涂布在补充亲株生长需要的生长因

12、子的高渗将融合液涂布在补充亲株生长需要的生长因子的高渗再生培养基平板上，直接筛选出原养型重组子再生培养基平板上，直接筛选出原养型重组子 。间接法间接法 把融合液涂布在营养丰富的高渗再生平板上，使亲株和把融合液涂布在营养丰富的高渗再生平板上，使亲株和重组子都再生成菌落重组子都再生成菌落 ，然后用影印法将它们复制到选择，然后用影印法将它们复制到选择培养基上检出重组子。培养基上检出重组子。食品发酵与酿造工艺学食品发酵与酿造工艺学第二章第二章6.6.优良优良菌株菌株的筛选的筛选 通过两亲株遗传标记的互补而得以识别通过两亲株遗传标记的互补而得以识别 两亲株的遗传标记分别为营养缺陷型两亲株的遗传标记分别为

13、营养缺陷型A+B-A+B-和和A-B+A-B+，融合重组子应是融合重组子应是A+B+A+B+或或A-B-A-B-。食品发酵与酿造工艺学食品发酵与酿造工艺学第二章第二章六、基因工程技术 基因工程是现代生物工程技术的重要基因工程是现代生物工程技术的重要组成部分。基因工程又称为遗传工程、组成部分。基因工程又称为遗传工程、DNADNA重组技术、基因克隆。基因工程的出重组技术、基因克隆。基因工程的出现使遗传学实现了一个巨大的飞跃，使遗现使遗传学实现了一个巨大的飞跃，使遗传学及育种研究可以按照人们的愿望有计传学及育种研究可以按照人们的愿望有计划地实施和控制。划地实施和控制。食品发酵与酿造工艺学食品发酵与酿

14、造工艺学第二章第二章六、基因工程技术1 1、含目的基因含目的基因DNADNA片断的制备。片断的制备。2 2、选择合适的载体。、选择合适的载体。3 3、带有目的基因的、带有目的基因的DNADNA片断与载体连接。片断与载体连接。4 4、将重组的、将重组的DNADNA分子导入受体细胞，分子导入受体细胞，在受体细胞内扩增。在受体细胞内扩增。5 5、筛选和鉴定出带有重组、筛选和鉴定出带有重组DNADNA的转化细胞。的转化细胞。6 6、表达、鉴定外源基因的表达产物。、表达、鉴定外源基因的表达产物。食品发酵与酿造工艺学食品发酵与酿造工艺学第二章第二章 体外重组DNA技术食品发酵与酿造工艺学食品发酵与酿造工艺

15、学第二章第二章基因重组基因重组转化食品发酵与酿造工艺学食品发酵与酿造工艺学第二章第二章4.基因工程 回本章目录食品发酵与酿造工艺学食品发酵与酿造工艺学第二章第二章（二）DNA重组的操作1 1、含目的基因、含目的基因DNADNA片断的制备片断的制备(1 1）限制性内切酶）限制性内切酶 (2)(2)目的基因目的基因DNADNA片段的获得片段的获得 由两个主要途径获得：由两个主要途径获得：一是从具有此基因片段的生物体染色体中分离一是从具有此基因片段的生物体染色体中分离二是根据已知的氨基酸顺序或已有的互补二是根据已知的氨基酸顺序或已有的互补RNARNA进进行合成行合成。食品发酵与酿造工艺学食品发酵与酿

16、造工艺学第二章第二章2 2、基因工程常用的载体 载体载体是指在克隆其他是指在克隆其他DNADNA片断时使用的运载体，片断时使用的运载体，与外源与外源DNADNA片段连接后也能在受体细胞中复制。片段连接后也能在受体细胞中复制。食品发酵与酿造工艺学食品发酵与酿造工艺学第二章第二章(1)(1)载体的种类：用于基因工程的载体有三类：载体的种类：用于基因工程的载体有三类：质粒载体；质粒载体；噬菌体载体；噬菌体载体；根据特殊要求构建的载体根据特殊要求构建的载体 (2)(2)质粒的制备质粒的制备 质粒制备分三步进行：质粒制备分三步进行：细菌培养和质粒扩增；细菌细胞收集和裂解；细菌培养和质粒扩增；细菌细胞收集

17、和裂解；质粒质粒DNADNA提取。提取。食品发酵与酿造工艺学食品发酵与酿造工艺学第二章第二章1）质粒（plasmid）质粒是能自主复制的双链环状质粒是能自主复制的双链环状DNADNA分子，在细分子，在细菌中独立于染色体之外而存在，存在普遍，几乎所菌中独立于染色体之外而存在，存在普遍，几乎所有细菌株系都含有质粒。有细菌株系都含有质粒。高拷贝数质粒：质粒在宿主中有高拷贝数质粒：质粒在宿主中有1010010100个拷贝个拷贝低拷贝数质粒低拷贝数质粒:质粒在宿主中只有质粒在宿主中只有1414个拷贝个拷贝 质粒的特点质粒的特点食品发酵与酿造工艺学食品发酵与酿造工艺学第二章第二章1）质粒（plasmid）

18、质粒的特点质粒的特点食品发酵与酿造工艺学食品发酵与酿造工艺学第二章第二章质粒回本章目录食品发酵与酿造工艺学食品发酵与酿造工艺学第二章第二章基因工程对质粒的要求构建一种质粒载体构建一种质粒载体,对质粒通常有以下几个方面对质粒通常有以下几个方面的要求的要求:质粒载体的相对分子质量应尽可能小。实验证明，质粒载体的相对分子质量应尽可能小。实验证明，质粒大于质粒大于15kb15kb时，其将外源时，其将外源DNADNA转入大肠杆菌的几转入大肠杆菌的几率就会大大降低；率就会大大降低；在宿主细胞中能自主复制和稳定地遗传在宿主细胞中能自主复制和稳定地遗传应该有用来克隆外源应该有用来克隆外源DNADNA的单一的限

19、制性内切酶识的单一的限制性内切酶识别位点别位点具有明显的筛选标记具有明显的筛选标记能转化比较广的宿主细胞能转化比较广的宿主细胞食品发酵与酿造工艺学食品发酵与酿造工艺学第二章第二章3 3目的基因与载体的连接目的基因与载体的连接 得到目的基因与得到目的基因与载体后，把它们相互连接即进行体外人工重载体后，把它们相互连接即进行体外人工重组，其连接有组，其连接有4 4种方式。种方式。(1)(1)黏性末端连接黏性末端连接 (2)(2)平头连接平头连接(平齐末端连接平齐末端连接)(3)(3)同聚末端连接同聚末端连接加接头加接头 (4)(4)人工接头人工接头(人工黏性末端人工黏性末端)食品发酵与酿造工艺学食品

20、发酵与酿造工艺学第二章第二章4 4重组重组DNADNA引入宿主细胞引入宿主细胞 重组重组DNADNA只有只有进入受体细胞才能进一步实现扩增和表达。进入受体细胞才能进一步实现扩增和表达。5 5重组体的筛选和表达产物的鉴定重组体的筛选和表达产物的鉴定 (1)(1)重组体的筛选重组体的筛选 (2)(2)表达产物的鉴定表达产物的鉴定 食品发酵与酿造工艺学食品发酵与酿造工艺学第二章第二章（三）微生物基因工程的应用（三）微生物基因工程的应用1 1、常规发酵工业、常规发酵工业 可通过基因工程获得工程菌。可通过基因工程获得工程菌。2 2、提高菌种产量、提高菌种产量3 3、生产重要药物中间体的工程菌、生产重要药

21、物中间体的工程菌4 4、基因工程药物开发、基因工程药物开发5 5、环保、生物固氮等。、环保、生物固氮等。食品发酵与酿造工艺学食品发酵与酿造工艺学第二章第二章第二节第二节 菌种保藏与复壮菌种保藏与复壮菌种保藏：菌种保藏：(1)(1)目的：目的：存活，不丢失，不污染存活，不丢失，不污染 防止优良性状丧失防止优良性状丧失 随时为生产、科研提供优良菌种随时为生产、科研提供优良菌种(2)(2)原理：选用优良的纯种，（最好是休眠体，如分生孢子、芽胞等），原理：选用优良的纯种，（最好是休眠体，如分生孢子、芽胞等），创造降低微生物代谢活动强度，生长繁殖受抑制，难以发生突变的环境创造降低微生物代谢活动强度，生长

22、繁殖受抑制，难以发生突变的环境条件。（其环境要素是干燥、低温、缺氧、缺乏营养条件。（其环境要素是干燥、低温、缺氧、缺乏营养 以及添加保护剂等）以及添加保护剂等）食品发酵与酿造工艺学食品发酵与酿造工艺学第二章第二章食品发酵与酿造工艺学食品发酵与酿造工艺学第二章第二章食品发酵与酿造工艺学食品发酵与酿造工艺学第二章第二章二二.菌种的复壮菌种的复壮 rejuvenationrejuvenation 在菌种已发生衰退的情在菌种已发生衰退的情况下，通过纯种分离和测定况下，通过纯种分离和测定典型性状、生产性能等指标，典型性状、生产性能等指标，从已衰退的群体中筛选出少从已衰退的群体中筛选出少数尚未退化的个体，

23、以达到数尚未退化的个体，以达到恢复原菌株固有性状的相应恢复原菌株固有性状的相应措施；措施；在菌种的典型特征或生在菌种的典型特征或生产性状尚未衰退前，就经产性状尚未衰退前，就经常有意识地采取纯种分离常有意识地采取纯种分离和生产性状的测定工作，和生产性状的测定工作，以期菌种的生产性能逐步以期菌种的生产性能逐步提高。实际上是利用自发提高。实际上是利用自发突变（正变）不断地从生突变（正变）不断地从生产中选种，也称产中选种，也称生产育种。生产育种。菌种的复壮（菌种的复壮（rejuvenationrejuvenation）：使衰退的菌种恢复）：使衰退的菌种恢复原来优良性状。原来优良性状。食品发酵与酿造工艺

24、学食品发酵与酿造工艺学第二章第二章 菌种的复壮措施：菌种的复壮措施：纯种分离：（平板划线法、涂布法、倾注纯种分离：（平板划线法、涂布法、倾注法、单细胞挑取法等）。法、单细胞挑取法等）。通过寄主体内生长进行复壮（如通过寄主体内生长进行复壮（如BtBt、白僵、白僵菌、多角体病毒等的复壮）菌、多角体病毒等的复壮）；淘汰已衰退的个体（采用比较激烈的理化淘汰已衰退的个体（采用比较激烈的理化条件进行处理，以杀死生命力较差的已衰退条件进行处理，以杀死生命力较差的已衰退个体）。个体）。采用有效的菌种保藏方法。采用有效的菌种保藏方法。食品发酵与酿造工艺学食品发酵与酿造工艺学第二章第二章（1 1）划线法：简单、快

25、捷。）划线法：简单、快捷。（2 2）稀释法：菌落单一均匀。）稀释法：菌落单一均匀。纯种分离方法纯种分离方法食品发酵与酿造工艺学食品发酵与酿造工艺学第二章第二章一、固体培养基四一、固体培养基四区划法接种法区划法接种法食品发酵与酿造工艺学食品发酵与酿造工艺学第二章第二章接种针先以火焰灭菌法灭菌接种针先以火焰灭菌法灭菌 步骤一食品发酵与酿造工艺学食品发酵与酿造工艺学第二章第二章轻触营养平板上无菌的琼脂处冷却轻触营养平板上无菌的琼脂处冷却 步骤二食品发酵与酿造工艺学食品发酵与酿造工艺学第二章第二章以接种针轻触菌落，使接种针上沾有细菌。以接种针轻触菌落，使接种针上沾有细菌。步骤三食品发酵与酿造工艺学食品

26、发酵与酿造工艺学第二章第二章更换一个新的无菌营养平板更换一个新的无菌营养平板 步骤四食品发酵与酿造工艺学食品发酵与酿造工艺学第二章第二章将接种针上的细菌划于一个新的营养平板将接种针上的细菌划于一个新的营养平板上。此为第一菌区上。此为第一菌区 。步骤五食品发酵与酿造工艺学食品发酵与酿造工艺学第二章第二章重复第一步骤，将接种针以火焰灭菌法重复第一步骤，将接种针以火焰灭菌法灭菌，然后轻触琼脂无菌处冷却。灭菌，然后轻触琼脂无菌处冷却。步骤六食品发酵与酿造工艺学食品发酵与酿造工艺学第二章第二章由第五步骤的第一区中划出第二由第五步骤的第一区中划出第二区，如右上图。区，如右上图。步骤七食品发酵与酿造工艺学食

27、品发酵与酿造工艺学第二章第二章重复第六以及第七步骤，由第七步骤的重复第六以及第七步骤，由第七步骤的第二区中划出第三区，如右上图。第二区中划出第三区，如右上图。步骤八步骤八食品发酵与酿造工艺学食品发酵与酿造工艺学第二章第二章重复第六以及第七步骤，由第八步骤的第三重复第六以及第七步骤，由第八步骤的第三区中划出第四区，划满剩下的空间。完成后区中划出第四区，划满剩下的空间。完成后的营养平板，如右上图。的营养平板，如右上图。步骤九步骤九食品发酵与酿造工艺学食品发酵与酿造工艺学第二章第二章 在营养平板上贴好标签，标示好在营养平板上贴好标签，标示好接种日期、操作者姓名、菌种学接种日期、操作者姓名、菌种学名以

28、及培养基名称。名以及培养基名称。步骤十步骤十食品发酵与酿造工艺学食品发酵与酿造工艺学第二章第二章固体培养基的稀固体培养基的稀释涂抹接种法释涂抹接种法食品发酵与酿造工艺学食品发酵与酿造工艺学第二章第二章需要使用的仪器需要使用的仪器震荡机震荡机 食品发酵与酿造工艺学食品发酵与酿造工艺学第二章第二章吸取准备好欲稀释的菌液吸取准备好欲稀释的菌液食品发酵与酿造工艺学食品发酵与酿造工艺学第二章第二章取含有取含有 9mL9mL无菌水之试管，将试管口过火灭菌。无菌水之试管，将试管口过火灭菌。将菌液置入，此时试管须做记号为第一次稀释。将菌液置入，此时试管须做记号为第一次稀释。食品发酵与酿造工艺学食品发酵与酿造工

29、艺学第二章第二章将试管于震荡机上，使菌液混合均匀将试管于震荡机上，使菌液混合均匀 食品发酵与酿造工艺学食品发酵与酿造工艺学第二章第二章取出试管中的第一次十倍稀释菌液取出试管中的第一次十倍稀释菌液1mL1mL，加入另一个新的含加入另一个新的含9mL9mL无菌水的试管中。无菌水的试管中。重复此步骤直至所需要的稀释浓度。重复此步骤直至所需要的稀释浓度。食品发酵与酿造工艺学食品发酵与酿造工艺学第二章第二章从最后稀释菌液中吸取从最后稀释菌液中吸取 0.1mL0.1mL菌液，菌液，置入准备好的无菌琼脂内。置入准备好的无菌琼脂内。食品发酵与酿造工艺学食品发酵与酿造工艺学第二章第二章将三角玻璃棒浸于酒精中将三

30、角玻璃棒浸于酒精中 食品发酵与酿造工艺学食品发酵与酿造工艺学第二章第二章 将三角玻璃棒在火焰上燃烧将三角玻璃棒在火焰上燃烧（须注意勿使燃烧中的酒精滴入酒精瓶中，引起燃烧）（须注意勿使燃烧中的酒精滴入酒精瓶中，引起燃烧）食品发酵与酿造工艺学食品发酵与酿造工艺学第二章第二章 使用玻璃棒将菌液均匀涂布开来，将培养皿置于使用玻璃棒将菌液均匀涂布开来，将培养皿置于恒温培养箱中隔天观察菌落数目，再依照稀释倍数恒温培养箱中隔天观察菌落数目，再依照稀释倍数推算出菌液浓度。推算出菌液浓度。食品发酵与酿造工艺学食品发酵与酿造工艺学第二章第二章食品发酵与酿造工艺学食品发酵与酿造工艺学第二章第二章4.4.生产性能的测

31、定生产性能的测定 一般采用两步法：一般采用两步法：初筛：以量为主初筛：以量为主 复筛：以质为主复筛：以质为主食品发酵与酿造工艺学食品发酵与酿造工艺学第二章第二章：广泛收集科研和生产菌种、广泛收集科研和生产菌种、菌株，并加以妥善保管，使之达到不死、不衰、不乱以及菌株，并加以妥善保管，使之达到不死、不衰、不乱以及便于研究、交换和使用的目的。便于研究、交换和使用的目的。：中国微生物菌种保藏委员会中国微生物菌种保藏委员会(CCCCM)(CCCCM)美国的典型菌种保藏中心美国的典型菌种保藏中心(ATCC)(ATCC)英国国家典型菌种保藏所（英国国家典型菌种保藏所（NCTCNCTC）国内外菌种保藏机构：国

32、内外菌种保藏机构：第三节第三节 国内外主要的国内外主要的菌种保藏机构菌种保藏机构食品发酵与酿造工艺学食品发酵与酿造工艺学第二章第二章中国微生物菌种保藏管理委员会中国微生物菌种保藏管理委员会CCCCMCCCCM 普通微生物菌种保藏管理中心普通微生物菌种保藏管理中心 中国科学院微生物研究所（中国科学院微生物研究所（ASAS）：真菌、细菌）：真菌、细菌 武汉病毒所（武汉病毒所（AS-IVAS-IV）：病毒）：病毒 农业微生物菌种保藏管理中心农业微生物菌种保藏管理中心 农科院土壤肥料研究所（农科院土壤肥料研究所（ISFISF）工业微生物菌种保藏管理中心工业微生物菌种保藏管理中心 中国食品发酵工业科学研究所（中国食品发酵工业科学研究所（IFFIIFFI）抗生素菌种保藏管理中心抗生素菌种保藏管理中心 中国医学科学院抗生素研究所（中国医学科学院抗生素研究所（IAIA）四川抗生素工业研究所（四川抗生素工业研究所（SIASIA）：新抗菌种）：新抗菌种