血小板免疫和血小板输注无效-Gian-Paolo-Visentin课件.ppt

1、血小板免疫和血小板输注无效Gian Paolo Visentin教授纽约州立大学布法罗分校人类血小板血小板浓缩液血小板血小板与炎症出现炎症反应后，储存的血小板活化，激活免疫和非免疫细胞，传递炎症信息，进步活化血小板。血小板免疫失调 药物诱发的血小板减少症-DITP 自身免疫引起的血小板减少症-ITP,AITP 新生儿同种免疫血小板减少症-NATP HLA 和HPA 输血后紫癜-PTP 血小板输注无效 HLA和HPA粒细胞抗体-TRALI HNA血小板免疫失调 药物诱发的血小板减少症-DITP 自身免疫引起的血小板减少症-ITP,AITP 新生儿同种免疫血小板减少症-NATP HLA 和HPA

2、输血后紫癜-PTP 血小板输注无效 HLA和HPADTIP的病原学机制免疫复合体药物和PF4反应，与肝素形成免 疫 复合体，引发一系列免疫反应，结合Fc受体激活血小板。肝素诱发的血小板减少症（HIT)HIT伴有或不伴有血栓，发病率和死亡率都很高 抗体相关的HIT与肝素和PF4复合体相关 抗体相关的HIT在肝素存在的情况下可以诱导血小板活化HIT病原学机制肝素依赖抗体的检测 聚合血小板 14C-胺释放试验（SRA)肝素介导血小板凝集反应 肝素/PF4 ELISA 流式细胞检测DITP试验药物加样，孵育洗板，除去未结合和Ig与抗-人Ig，孵育阳性=血小板结合药物 Ig 无结合血小板血清血小板免疫失

3、调 药物诱发的血小板减少症-DITP 自身免疫引起的血小板减少症-ITP,AITP 新生儿同种免疫血小板减少症-NATP HLA 和HPA 输血后紫癜-PTP 血小板输注无效 HLA和HPA粒细胞抗体-TRALI HNA血小板同种抗原（HPA）血小板膜糖蛋白具有多态性 蛋白的构象改变，对功能没有影响，但是在血小板输注和怀孕时，这些改变可能成为抗体的结合点 同种免疫反应有时很严重血小板表面GP糖蛋白的多态性HPA相关的免疫性血小板减少HPA系统HPA系统HPA系统HPA 等位基因频率人类GP III基因早期变异血小板免疫失调 药物诱发的血小板减少症-DITP 自身免疫引起的血小板减少症-ITP,

4、AITP 新生儿同种免疫血小板减少症-NATP HLA 和HPA 输血后紫癜-PTP 血小板输注无效 HLA和HPA粒细胞抗体-TRALI HNA严重的NATPNATP的病因学HPA基因多态性频率表CD36（GPIV)糖蛋白 88KD 在单核细胞，血管内皮细胞，有核红细胞，脂肪细胞和血小板上有表达 受体:I&IV型胶原，疟疾感染红细胞，血小板反应素，氧化LDL，长链脂肪酸 同种抗原NaKa-1989CD36缺乏 血小板：亚洲人：3-11%美国-非洲人：2.5%沙哈拉非洲人：7.8%高加索人种：0.06%第一类：血小板和单核细胞缺失，导致输血或怀孕产生抗CD36的反应第二类：仅仅是血小板缺失CD

5、36基因 32kb,15外显子 染色体：7q11.12 日本:CD36缺失出现4个变异 T478C 在外显子4上的变异最常见 Pro90Ser,81Kb阻止变异 非洲:CD36缺失出现7个变异 T1264G在外显子10变异最常见 终止密码子NATP的诊断常用诊断NATP的方法比较 单克隆ACE 28/32 免疫荧光 21/32（主要是流式细胞技术）GTI 或其它公司ELISA 14/32 全部基因型 12 部分基因型 5很多实验室联合应用多种方法血小板抗体ELISA检测流式细胞仪（免疫荧光）流式细胞仪的应用流体学原理FC放散光路FC分离细胞群荧光柱状图血小板多态性Luminex 100/200

6、 磁珠法检测Luminex检测 血清和磁珠孵育 洗涤 抗-人IgG孵育 调整体积 收集数据 分析数据商品化的血小板抗体检测试剂 GTI:PAK-PlusTM,PAK-AutoTM,PAK-LX,MACE-1TM,PF4-enhanced IMMUCOR:Capture-PTM,MCPTM,Capture-P Ready Screen TM STAGO:HITTM DiaMed:ID-HAT Biotest:Thrombomatch HPA-1a Typing HPA-1a Typing血小板抗原基因型检测PCR-SSPReal-time PCR检测基因型血小板免疫失调 药物诱发的血小板减少症-

7、DITP 自身免疫引起的血小板减少症-ITP,AITP 新生儿同种免疫血小板减少症-NATP HLA 和HPA 输血后紫癜-PTP 血小板输注无效 HLA和HPA粒细胞抗体-TRALI HNA血小板输注无效诊断血小板配型 HLA-AB相合 提供无相关HLA-抗体的血小板 如果无相合的血小板，可以提供血清学配型阴性的血小板输注 HLA-C是否相合，影响不大 一些HLA-B抗云不相合（HLA-B45,44)在血小板上表达弱，可以不予考虑 如果血清学配型的血小板输注无效，应寻找HLA相合的供者 ABO血型在血小板上表达，ABO同型输注十分重要血小板形态血小板同种抗体 HLA的分子结构导致抗体产生不同

8、 同种免疫反应有不可预知性 由于HLA抗原的多态性（CREGs),同一种HLA分子可以产生多种抗体，HLA抗体检测方法 补体依赖 固相检测 CDC -ELISA -流式PRA AHG-CDC -Luminex 检测 -敏感度低 -敏感度高-补体依赖的抗体 -补体依赖、不依赖抗体均可HLA抗体检测方法比较 敏感度通量自动化费用/样本配 置 设备A H G-CDC低低不低显微镜ELISA中-低高是12美金读板机F l o w-PRA高中-高是？30美金细 胞 计数仪（3色）Luminex高高是10美金Luminex相对敏感度的比较 Flow ELISA AHG-Augmented CDC CDCF

9、low ELISA AHG-Augmented CDC CDC流式细胞仪检测 敏感 不需要补体 IgG特异性 HLA抗原特异性流式-PRA 32种不同的磁珠包被HLA-I和II类抗原 判断主观 HLA特异性需进一步检测什么是PRA？群体反应性抗体检测 抗体检测是通过HLA特异性细胞完成 器官移植，用来判断抗HLA的程度 抗原的范围不确定，一般是常见的抗原流式方法检测PRA流式方法检测PRA输血后HLA-I抗体的表达Luminex方法检测HLA抗体 高通量 多元化检测 敏感、准确，可以判定HLA抗体的特异性 反应易观察双色，100个磁珠判定准确结果Luminex方法的抗体检测实验 13种不同的L

10、uminex磁珠 分别代表HLA-I,II抗原 每个磁珠包被6种HLA-I细胞和8种HLA-II细胞Luminex检测系统Luminex抗体检测REAL血小板免疫失调 药物诱发的血小板减少症-DITP 自身免疫引起的血小板减少症-ITP,AITP 新生儿同种免疫血小板减少症-NATP HLA 和HPA 输血后紫癜-PTP 血小板输注无效 HLA和HPA粒细胞抗体-TRALI HNA输血相关急性肺损伤 TRALI定义：急性肺损伤（ALI)发生在输血后6h以内，并且以前无急性肺损伤病史，无其它相关的急性肺损伤的危险因素。可能TRALI：ALI发生在输血后6h以内，以前无急性肺损伤病史，存在一个以上相关的急性肺损伤的危险因素 ALI定义：SpO2 90%or Pa02/Fi02 300 mm Hg 血氧偏低 X线有渗出性病变输血相关急性肺损伤 急性肺损伤的危险因素直接肺损伤 间接肺损伤呼吸 脓毒症肺 休克吸入性中毒 外伤肺挫伤 烧伤溺水 急性胰腺炎 心肺搭桥 药物中毒不同血液制品TRALI的发生率TRALI反应模式图人粒细胞抗原系统（HNA）人粒细胞抗原系统（HNA）粒细胞特异性抗体的临床应用 非溶血性发热反应 TRALI 新生儿粒细胞减少症 自身免疫性粒细胞减少症 骨髓移植后持续性粒细胞减少下一步HLAHPA供者库的建立