12.临床免疫学检查2（8年制临床）.ppt

1、临床免疫学检查 Clinical Immunology Examination,Clinical Laboratory Department Cui Liyan,主诉：女性，21岁，头晕、乏力、尿色黄半月，加重1周。 半月前突然头晕、乏力，尿色深黄，进食减少，肝功能正常，体温37.8，无咳嗽、咽痛，1周来加重，胸透未见异常，血常规示 Hb 85g/L, RET 7%。睡眠、大便正常，体重无明显变化。半年来关节疼痛，有时口腔溃疡，无光过敏，月经正常。 查体：T37.6,贫血貌，巩膜可疑黄染，颊粘膜有一溃疡，腹平软，肝肋下0.5cm，质软无压痛，脾侧位可及，双膝关节轻压痛，无红肿，双下肢不肿。 辅

2、助检查：Hb 82g/L,RBC 2.701012/L, RET 7.5%, WBC 3.8109/L, 分类：中性分叶68%，嗜酸4%，PLT 124109/L，尿蛋白(+)，RBC 3-8/HP，尿BIL(-)，尿胆原阳性，尿隐血(-)，尿Rous试验(-)，大便常规(-)，血TBIL 36umol/L, DBIL 4umol/L，Coombs试验阳性，X线胸片(-),掌握内容,了解内容,ANA、抗dsDNA、抗ENA、ANCA测定及其临床意义,冷球蛋白测定的临床意义,RF、AFA、ASMA、AMA测定及其临床意义,熟悉内容,自身免疫病 （Autoimmune disease,AID）,机

3、体免疫系统产生了针对自身成分的自身抗体或自身反应性淋巴细胞（又称致敏T淋巴细胞），自身抗体或自身反应性淋巴细胞能与相应的自身成分产生免疫应答。由自身免疫应答引起的疾病称为自身免疫病,Autoimmune Disease： Anti-nuclear antibodies (ANA) Anti-dsDNA antibody (ds-DNA) Anti-ENA antibodies (ENA) Anti-neutrophil cytoplasmic antibodies (ANCA) RF、AFA、SMA、AMA et al,抗核抗体 Anti-nuclear antibodies, ANA,指抗细

4、胞核（或整个细胞）的核酸和核蛋白抗体的总称。细胞核内抗原包括DNA、RNA、蛋白质、脂类、酶类或这些物质的分子复合物。,抗核抗体,检测方法 临床意义(重点/难点) 影响因素,检测方法,间接免疫荧光法（IIF） 酶联免疫吸附法（ELISA） 免疫印迹法（IB） 金标法 比浊法,间接免疫荧光法（IIF）,猴肝组织,Hep-2细胞,+,基质片（Ag）,血清（Ab）,荧光二抗,原理,临床意义,筛选试验 高滴度阳性标志着自身免疫病的可能，5%-10%正常人会出现低滴度阳性 结果报告方式 核型+滴度 如：斑点型1:640,均质型（Homogeneous pattern, H）,药物性狼疮 90% Drug

5、 Lupus Erythematosus，DLE 系统性红斑狼疮 30%-80% Systemic Lupus Erythematosus，SLE 类风湿性关节炎 15%-75% Rheumatoid arthritis，RA 原发性胆汁性肝硬化40-60% Primary biliary cirrhosis ，PBC 干燥综合征10% Primary Sjgrens syndrome，SS,斑点型（Speckled pattern, S）/核颗粒型,混合性结缔组织病（95%） Mixed Connective Tissue Disease，MCTD 干燥综合征（40%-95%） Primar

6、y Sjgrens syndrome，SS 系统性红斑狼疮（20%-60%） Systemic Lupus Erythematosus，SLE,核仁型（Nucleolar pattern, N） 系统性硬皮病20-40% Systemic Scleroderma, SSc,核膜型（Membranous pattern, M）原发性胆汁性肝硬化（40%） Primary biliary cirrhosis，PBC,散点型（Discrete speckled pattern）,CREST综合征 80% CREST syndrome 原发性胆汁性肝硬化 10%-20% Primary biliary

7、 cirrhosis，PBC,胞浆型（Cytoplasmic pattern）,PBC,Autoimmune Hepatitis, AIH,影响因素,缺乏敏感性和特异性 与实验操作者的经验有关 不同的血清稀释度核型可能会发生变化 如果几种抗体同时存在时，一种核型可能会掩盖其他核型,抗双链DNA抗体,抗天然DNA抗体。间接免疫荧光法检测 抗dsDNA抗体 SLE(40%-70%), 高滴度时为标记抗体，狼疮活动的标志。 抗ssDNA抗体 SLE（70%）,药物引起的LE（80%）。,ENA是ANA中一类蛋白的总称，因不含组蛋白，因此能溶于生理盐水和磷酸缓冲液，故被称为可提取核抗原。,抗核糖核蛋白

8、抗体（nRNP） 抗Sm抗体 抗SSA抗体 抗SSB抗体 Jo-1抗体 Scl-70抗体 rRNP抗体,临床意义,抗核糖核蛋白抗体（nRNP） 高滴度的抗U1-RNP抗体是混合性结缔组织病（MCTD）的标志 阳性率为95-100 抗体滴度与疾病的活动性相关 抗U1-RNP抗体也可见于30-40的系统性红斑狼疮患者中,抗Sm抗体,系统性红斑狼疮的特异性抗体 与抗dsDNA抗体一起，是系统性红斑狼疮的诊断指标，但仅见于20-40病人中。,抗SS-A抗体与各类自身免疫病相关，常见于干燥综合征（40-80），也见于系统性红斑狼疮（30-40），原发性胆汁性肝硬化（20），偶见于慢性活动性肝炎。 抗SS

9、-B抗体几乎仅见于干燥综合征（40-80）和系统性红斑狼疮（10-20）的女性患者。,抗Scl-70抗体见于25-75的进行性系统性硬化症（播散性）患者 抗Jo-1抗体在多肌炎中的阳性率为25-35，常与合并肺间质纤维化相关。,抗rRNP抗体阳性时SLE患者发生中枢神经系统病变的可能性较高。抗体阳性率10%-20% 。 应注意与dsDNA抗体的区别：病情好转后可以持续1-2年阳性。而dsDNA抗体在病情稳定时即转阴。,抗中性粒细胞胞浆抗体 Anti-neutrophil cytoplasmic autoantibodies，ANCA,1982年发现 部分原发性小血管炎的特异性血清学诊断工具 W

10、egeners Granulomatosis（WG） Microscopic Polyangiitis（MPA） Churg-Srauss syndrome（CSS）,ANCA相关性小血管炎发生率,西方国家最常见的自身免疫性疾病 英国：发病率仅次于RA 我国：不少见 北京大学肾脏病研究所近几年共新诊断超过400例,ANCA检测方法,间接免疫荧光法(IIF)、ELISA、RIA、免疫印迹法、免疫沉淀法、斑点杂交法和流式细胞术等 IIF法作为筛选试验，ELISA法作为特异性ANCA靶抗原确定试验,IIF法,核周型ANCA（pANCA）,胞浆型ANCA（cANCA）,C-ANCA,Is seen i

11、n 85% (range 30-90%) of patients with Wegeners Granulomatosis(WG). Highly specific for WG (98%) Titer correlates with disease activity (in 60% of cases) and severity.,Other disorders associated with c-ANCA,Microscopic Polyangiitis，MPA (15-45%) Idiopathic Crescentic Glomerulonephritis, ICGN (25%) Chu

12、rg-Strauss Syndrome,CSS (10%) Polyarteritis Nodosa ,PAN (5%),P-ANCA,Vasculitidies associated with P-ANCA include: Microscopic Polyangiitis，MPA (45-80%) Idiopathic Crescentic GN,ICGN (65%) Churg Strauss Syndrome,CSS(60%) Polyarteritis Nodosa,PAN (15%) P-ANCA can also be due to medications: PTU, hydra

13、lazine, minocycline, D-penicillamine.,1. Cytoplasmic ANCA (C-ANCA) anti-proteinase -3 2. Perinuclear ANCA (p-ANCA) anti- myeloperoxidase (MPO), but also elastase and other proteins in the neutrophil granules 3. Atypical Patterns Ab to elastase, cathepsin G, lactoferrin, etc.,ELISA,已知ANCA靶抗原在中性粒细胞胞浆分

14、布,ANCA检测存在的问题,仅用IIF方法检测 仅用ELISA方法检测 IIF法未能严格排除抗核抗体（ANA）干扰，出现假阳性,ANCA常规检测注意事项,方法的合理选择 排除ANA的干扰 定量的检测,ANA对检测ANCA的影响 1. 中华风湿病学杂志，2002，6:123124. SLE 阳性率 64.5%（111/172），pANCA94例 cANCA 13例 检测方法： ELISA法（总抗原） 中山大学附一院肾内科 2.中华皮肤科杂志，1999，32:259260. SLE 阳性率 41.3%（26/63），pANCA15例 aANCA 11例 检测方法： IIF法（乙醇固定片） 301医

15、院风湿科 3. 上海医学， 1996 ，19:380-383. SLE 阳性率 68.5%（24/35），pANCA 检测方法： IIF法（乙醇固定片） 上海第二医科大学仁济医院,类风湿因子（Rheumatoid Factor,RF）,抗人或动物的IgG的FC片段抗体。 测定方法：凝集法、速率散射比浊法、ELISA 临床意义： IgM: 反映RA的活动性，高滴度阳性预后较差。 IgG: 硬皮病、Felty综合征、SLE等 正常人2%阳性，老年人可达5%阳性,抗丝集蛋白抗体 （Anti-filaggrin antibody, AFA）,也称为抗角蛋白抗体（AKA） 测定方法：间接免疫荧光法 临床

16、意义： 类风湿性关节炎相关抗体,抗平滑肌抗体 Anti-Smooth Muscle Antibodies,SMA,I型AIH ANA SMA (抗平滑肌抗体) II 型 抗LKM1 (抗肝肾微粒体抗体1) III型 抗SLA (可溶性肝脏抗原),抗线粒体抗体 Anti-Mitochondrial Antibody , AMA,主要与原发性胆汁性肝硬化(PBC)有关，特异性强 不同亚型与疾病的相关性,冷球蛋白检测 冷球蛋白是指37 以下时发生可逆性沉淀的免疫球蛋白。 定性测定：在接受抗凝治疗的患者中，冷球蛋白的过筛试验可能呈假阳性反应。 定量测定： 280nm比色法 冷球蛋白血症的鉴定：免疫固定

17、电泳、双向电泳、免疫印迹法等,冷凝集试验原理,抗原决定簇隐含，不能与抗体结合,混 合,暴露的抗原决定簇与抗体结合,混 合,37,4,37,抗2糖蛋白1抗体 抗心磷脂抗体 抗环胍氨酸肽抗体 抗胞衬蛋白抗体 抗肝肾微粒体抗体 ,其它,Summary,ANA Homogeneous pattern Speckled pattern Nucleolar pattern Membranous pattern Discrete speckled pattern Cytoplasmic pattern Anti-dsDNA ANCA,ENA nRNP Sm SSA SSB Scl-70 Jo-1 rRNP

18、RF、AFA、ASMA、AMA et al,主诉：女性，21岁，头晕、乏力、尿色黄半月，加重1周。 半月前突然头晕、乏力，尿色深黄，进食减少，肝功能正常，体温37.8，无咳嗽、咽痛，1周来加重，胸透未见异常，血常规示 Hb 85g/L, RET 7%。睡眠、大便正常，体重无明显变化。半年来关节疼痛，有时口腔溃疡，无光过敏，月经正常。 查体：T37.6,贫血貌，巩膜可疑黄染，颊粘膜有一溃疡，腹平软，肝肋下0.5cm，质软无压痛，脾侧位可及，双膝关节轻压痛，无红肿，双下肢不肿。 辅助检查：Hb 82g/L,RBC 2.701012/L, RET 7.5%, WBC 3.8109/L, 分类：中性分

19、叶68%，嗜酸4%，PLT 124109/L，尿蛋白(+)，RBC 3-8/HP，尿BIL(-)，尿胆原阳性，尿隐血(-)，尿Rous试验(-)，大便常规(-)，血TBIL 36umol/L, DBIL 4umol/L，Coombs试验阳性，X线胸片(-),主诉：女性，21岁，头晕、乏力、尿色黄半月，加重1周。 半月前突然头晕、乏力，尿色深黄，进食减少，肝功能正常，体温37.8，无咳嗽、咽痛，1周来加重，胸透未见异常，血常规示 Hb 85g/L, RET 7%。睡眠、大便正常，体重无明显变化。半年来关节疼痛，有时口腔溃疡，无光过敏，月经正常。 查体：T37.6,贫血貌，巩膜可疑黄染，颊粘膜有一

20、溃疡，腹平软，肝肋下0.5cm，质软无压痛，脾侧位可及，双膝关节轻压痛，无红肿，双下肢不肿。 辅助检查：Hb 82g/L,RBC 2.701012/L, RET 7.5%, WBC 3.8109/L, 分类：中性分叶68%，嗜酸4%，PLT 124109/L，尿蛋白(+)，RBC 3-8/HP，尿BIL(-)，尿胆原阳性，尿隐血(-)，尿Rous试验(-)，大便常规(-)，血TBIL 36umol/L, DBIL 4umol/L，Coombs试验阳性，X线胸片(-),Hb降低，头晕、乏力可能为贫血症状 尿色深黄，体检巩膜可疑黄染，DBIL增高，Coombs试验阳性 脾大 RET增高,年轻女性，

21、低热，关节痛，有时口腔溃疡 查体：低热，口腔粘膜溃疡，脾肿大 有温抗体型自身免疫性溶血性贫血 肾脏病变,自身免疫性溶血性贫血（温抗体型，继发性）,系统性红斑狼疮（SLE）,主诉：女性，21岁，头晕、乏力、尿色黄半月，加重1周。 半月前突然头晕、乏力，尿色深黄，进食减少，肝功能正常，体温37.8，无咳嗽、咽痛，1周来加重，胸透未见异常，血常规示 Hb 85g/L, RET 7%。睡眠、大便正常，体重无明显变化。半年来关节疼痛，有时口腔溃疡，无光过敏，月经正常。 查体：T37.6,贫血貌，巩膜可疑黄染，颊粘膜有一溃疡，腹平软，肝肋下0.5cm，质软无压痛，脾侧位可及，双膝关节轻压痛，无红肿，双下肢

22、不肿。 辅助检查：Hb 82g/L,RBC 2.701012/L, RET 7.5%, WBC 3.8109/L, 分类：中性分叶68%，嗜酸4%，PLT 124109/L，尿蛋白(+)，RBC 3-8/HP，尿BIL(-)，尿胆原阳性，尿隐血(-)，尿Rous试验(-)，大便常规(-)，血TBIL 36umol/L, DBIL 4umol/L，Coombs试验阳性，X线胸片(-),鉴别诊断 原发性免疫性溶血性贫血 药物性及其他免疫性溶血性贫血 急性黄疸性肝炎,主诉：女性，21岁，头晕、乏力、尿色黄半月，加重1周。 半月前突然头晕、乏力，尿色深黄，进食减少，肝功能正常，体温37.8，无咳嗽、咽

23、痛，1周来加重，胸透未见异常，血常规示 Hb 85g/L, RET 7%。睡眠、大便正常，体重无明显变化。半年来关节疼痛，有时口腔溃疡，无光过敏，月经正常。 查体：T37.6,贫血貌，巩膜可疑黄染，颊粘膜有一溃疡，腹平软，肝肋下0.5cm，质软无压痛，脾侧位可及，双膝关节轻压痛，无红肿，双下肢不肿。 辅助检查：Hb 82g/L,RBC 2.701012/L, RET 7.5%, WBC 3.8109/L, 分类：中性分叶68%，嗜酸4%，PLT 124109/L，尿蛋白(+)，RBC 3-8/HP，尿BIL(-)，尿胆原阳性，尿隐血(-)，尿Rous试验(-)，大便常规(-)，血TBIL 36

24、umol/L, DBIL 4umol/L，Coombs试验阳性，X线胸片(-),进一步检查 骨髓穿刺检查 血清结合珠蛋白等其他有关溶血性贫血的检查 ANA谱及其他免疫抗体检查 血清免疫球蛋白、补体检查 肝肾功能、腹部B超等检查,主诉：女性，21岁，头晕、乏力、尿色黄半月，加重1周。 半月前突然头晕、乏力，尿色深黄，进食减少，肝功能正常，体温37.8，无咳嗽、咽痛，1周来加重，胸透未见异常，血常规示 Hb 85g/L, RET 7%。睡眠、大便正常，体重无明显变化。半年来关节疼痛，有时口腔溃疡，无光过敏，月经正常。 查体：T37.6,贫血貌，巩膜可疑黄染，颊粘膜有一溃疡，腹平软，肝肋下0.5cm

25、，质软无压痛，脾侧位可及，双膝关节轻压痛，无红肿，双下肢不肿。 辅助检查：Hb 82g/L,RBC 2.701012/L, RET 7.5%, WBC 3.8109/L, 分类：中性分叶68%，嗜酸4%，PLT 124109/L，尿蛋白(+)，RBC 3-8/HP，尿BIL(-)，尿胆原阳性，尿隐血(-)，尿Rous试验(-)，大便常规(-)，血TBIL 36umol/L, DBIL 4umol/L，Coombs试验阳性，X线胸片(-),治疗原则 糖皮质激素 其他免疫抑制剂 对症治疗等,思考题,1. 什么是抗核抗体？ 2. 系统性红斑狼疮的标志性抗体和病情活动 的标志是什么？ 3. ANCA阳性都见于哪些疾病？,参考资料,1. 实验诊断学 主编 朱立华 北京医科大学出版社 2. Clinical immunology. Rich, Robert R. St. Louis, Mo:Mosby/Elsevier, c2008. 3. Autoantibodies(2nd edition) Edited by Yehuda Shoenfeld et al, printed in Italy. 联系方式：cliyan 院内电话：38671,Thank You !,