细菌生化反应课件.ppt

1、2022-12-241临床微生物检验临床微生物检验教研室教研室吴爱武吴爱武2022-12-2422022-12-243单项选择题利用生化反应鉴定细菌主要依据A细菌酶活性的差异B细菌毒素活性差异C细菌酶含量差异D细菌毒素种类的差异E细菌分解代谢产物的差异2022-12-2452022-12-2462022-12-248指示剂：溴甲酚紫指示剂：溴甲酚紫 酸性：酸性：黄色黄色 碱性：紫色碱性：紫色指示剂：酚红指示剂：酚红酸性：酸性：黄色黄色碱性：碱性：红色红色结果：2022-12-249溴麝香草酚蓝在酸碱环境中的颜色变化溴麝香草酚蓝在酸碱环境中的颜色变化 酸性酸性 中间过渡中间过渡 碱性碱性2022

2、-12-2410 甲基红：酸pH4.4红色 碱pH6.2黄色 中性红：酸性pH6.8红色，碱性黄色2022-12-24112022-12-24122022-12-2413指示剂为指示剂为溴甲酚紫溴甲酚紫或或溴麝香草酚兰溴麝香草酚兰2022-12-24142022-12-24152022-12-2416细菌正常利用乳糖一般需要两个酶：促使乳糖进入细菌的半乳糖苷透过酶(galactoside permease)和催化乳糖分解第一步的-半乳糖苷酶(-galactosidase)。2022-12-24ONPG(+)(-)ONPG(+)(-)-+七叶苷七叶苷pH7pH7-D-D-葡萄糖葡萄糖七叶素七叶素

3、黑色黑色沉淀沉淀(柠檬酸柠檬酸铁铁)应用：D群链球菌和肠球菌的鉴定。2022-12-2419MRMR试验试验 （）（）（）（）葡萄糖葡萄糖甲基红试剂甲基红试剂丙酮酸丙酮酸甲酸，乙酸等甲酸，乙酸等大量混合酸大量混合酸pH降至降至4.5以下以下培养基培养基变红变红甲基红试验甲基红试验 Methyl RedVPVP试验试验（）（）（）（）葡萄糖葡萄糖二乙酰二乙酰V-PV-P试剂试剂 (KOH+-(KOH+-萘酚萘酚)脱羧脱羧丙酮酸丙酮酸乙酰甲基甲醇乙酰甲基甲醇培养基培养基变红变红V PV P试验试验 Voges-Proskauer Test 2022-12-2422色氨酸酶色氨酸酶色氨酸色氨酸对二甲

4、基氨基苯甲醛对二甲基氨基苯甲醛靛基质靛基质（吲哚）（吲哚）玫瑰吲哚（红色）玫瑰吲哚（红色）吲哚吲哚 (-)(-)(+)(+)吲哚吲哚(靛基质靛基质)试验试验(Indole test)Indole test)原理原理2.2.硫化氢试验原理硫化氢试验原理-+-+含硫氨基酸含硫氨基酸(胱氨酸等胱氨酸等)硫化氢硫化氢黑色沉淀黑色沉淀分解分解FeFe2+2+/Pb/Pb2+2+2022-12-2425-+尿素尿素尿素酶尿素酶氨氨+CO2培养基变培养基变红色红色pH酚红酚红2022-12-2427尿素分解试验（指示剂为酚红）（）（）4.4.苯丙氨酸脱氨酶试验苯丙氨酸脱氨酶试验（phenylalanine

5、phenylalanine deaminasedeaminase test test）主要用于肠杆菌科细菌的鉴定。主要用于肠杆菌科细菌的鉴定。变形杆菌属、变形杆菌属、普罗菲登斯菌属和摩根菌属细菌均为阳性普罗菲登斯菌属和摩根菌属细菌均为阳性，肠杆菌科中其他细菌均为阴性。肠杆菌科中其他细菌均为阴性。苯丙氨酸苯丙氨酸苯丙氨酸脱氨酶苯丙氨酸脱氨酶苯丙酮酸苯丙酮酸1010三氯化铁三氯化铁绿色化合物绿色化合物氨基酸脱羧酶试验氨基酸脱羧酶试验(amino acid amino acid decarboxylationdecarboxylation test test)氨基酸氨基酸(鸟氨酸，赖氨酸，精氨酸鸟氨

6、酸，赖氨酸，精氨酸）pH（）脱羧酶）脱羧酶胺胺（腐腐胺，胺，尸尸胺，精胺）胺，精胺）+COCO2 2培养基培养基变紫或红色变紫或红色溴甲酚紫或酚红溴甲酚紫或酚红2022-12-24302022-12-24312022-12-2432（）（）（）（）枸橼酸盐利用试验枸橼酸盐利用试验（）（）（）（）细胞色素氧化酶参与的细菌呼吸途径中电子传递细胞色素氧化酶参与的细菌呼吸途径中电子传递（四）呼吸酶类试验（四）呼吸酶类试验细胞色素细胞色素C C细胞色素氧化酶细胞色素氧化酶氧化的细胞色素氧化的细胞色素C C二甲基对苯二胺二甲基对苯二胺（还原）（还原）四甲基对苯二胺（还原）四甲基对苯二胺（还原）无色无色无色

7、无色二甲基对苯二胺二甲基对苯二胺（氧化）（氧化）四甲基对苯二胺四甲基对苯二胺（氧化）（氧化）红色红色蓝色蓝色应用：主要用于应用：主要用于肠杆菌科细菌肠杆菌科细菌与与假单胞菌假单胞菌的鉴别的鉴别。间接法间接法直接法直接法氧化酶试验（Cytochrome oxidase testCytochrome oxidase test）结果结果试管法试管法玻片法玻片法2.过氧化氢酶（触酶）试验CatalaseCatalase test test)应用：用于革兰阳性球菌的初步分群。应用：用于革兰阳性球菌的初步分群。触酶触酶H H2 2O O2 2H H2 2O O出现气泡出现气泡+O+O2 2对氨基苯对氨基苯

8、磺酸磺酸-萘胺萘胺-萘胺偶氮苯萘胺偶氮苯磺酸磺酸亚硝酸亚硝酸2022-12-2437l原理：有些菌可还原硝酸盐为亚硝酸盐或氨和氮等，前者与醋酸反应生成亚硝酸，亚硝酸可与-萘胺和对氨基苯磺酸反应，生成红色偶氮化合物。硝酸盐还原试验就是测定还原过程中所产生的亚硝酸盐。l结果：加试剂后立即出现红色为阳性；若没有红色出现，结果可能为：真正阴性，可加锌粉于阴性反应物中，变成红色，为真正阴性；假阴性（真阳性），加锌粉不变色，因生成的亚硝酸盐被进一步还原成NH3、N2 等。锌硝酸盐 亚硝酸盐硝酸盐没有被还原硝酸盐没有被还原硝酸盐还原试验(几种结果演示几种结果演示)硝酸盐培养基（接种细菌并培养）硝酸盐培养基（

9、接种细菌并培养）变红变红不变红色不变红色硝酸盐硝酸盐亚硝酸盐亚硝酸盐硝酸盐硝酸盐氨氨+氮氮+试剂试剂（对氨基苯磺酸、对氨基苯磺酸、-萘胺、醋酸）萘胺、醋酸）ZnZn变红变红不变红色（不变红色（）硝酸盐硝酸盐 亚硝酸盐亚硝酸盐ZnZn本试验在细菌鉴定中广泛应用。本试验在细菌鉴定中广泛应用。肠杆菌科细菌均能还原硝酸盐肠杆菌科细菌均能还原硝酸盐为亚硝酸盐为亚硝酸盐；铜绿假单胞菌、嗜麦芽假单胞菌等非发酵菌可还；铜绿假单胞菌、嗜麦芽假单胞菌等非发酵菌可还原硝酸盐产生氮气。原硝酸盐产生氮气。+-2022-12-24392022-12-2440试剂：试剂：1%盐酸盐酸2.2.血浆凝固酶试验血浆凝固酶试验作为

10、作为鉴定葡萄球菌致病性鉴定葡萄球菌致病性的重要指标，也是葡萄球菌鉴别时常的重要指标，也是葡萄球菌鉴别时常用的一个试验。用的一个试验。致病性葡萄球菌具有两种凝固酶致病性葡萄球菌具有两种凝固酶:结合凝固酶（结合在金黄色葡萄球菌细胞壁上）结合凝固酶（结合在金黄色葡萄球菌细胞壁上）游离凝固酶（作用类似凝血酶原，激活后可使血浆凝固）游离凝固酶（作用类似凝血酶原，激活后可使血浆凝固）纤维蛋白原纤维蛋白原纤维蛋白纤维蛋白凝固酶凝固酶血浆血浆液态液态凝固凝固（）（）（）（）（）（）（）（）（Coagulase testCoagulase test）玻片法试管法2022-12-2442金黄色葡萄球菌4.4.胆汁

11、溶菌试验胆汁溶菌试验原理：原理：某些细菌能产生自溶酶使细菌溶解，而胆汁某些细菌能产生自溶酶使细菌溶解，而胆汁能激活自溶酶加快细菌溶解。能激活自溶酶加快细菌溶解。应用：肺炎链球菌的鉴定应用：肺炎链球菌的鉴定5.5.卵磷脂酶试验卵磷脂酶试验原理：原理：有的细菌产生有的细菌产生卵磷脂酶卵磷脂酶(-(-毒素毒素)，在钙离子存在时，在钙离子存在时，此酶可迅速分解卵磷脂，生成此酶可迅速分解卵磷脂，生成浑浊沉淀状的甘油酯浑浊沉淀状的甘油酯和水溶性和水溶性磷酸胆碱磷酸胆碱 应用：主要用于厌氧菌鉴定。应用：主要用于厌氧菌鉴定。被检菌划线接种或点种于卵黄琼脂平板上，于35培养3-6h 2022-12-2445肺炎

12、链球菌对肺炎链球菌对optochinoptochin敏感敏感 （抑菌圈（抑菌圈14mm)14mm)A A群链球菌对杆菌肽敏感群链球菌对杆菌肽敏感 （抑菌圈（抑菌圈10mm)10mm)2022-12-244748克氏双糖铁培养基克氏双糖铁培养基分解葡萄糖分解葡萄糖+乳糖乳糖 产酸产酸(乳糖多，产酸多）乳糖多，产酸多）斜面和底层均变黄斜面和底层均变黄 (Kligler Iron Agar,KIA)组成：无糖培养基组成：无糖培养基+1份葡萄糖份葡萄糖+10份乳糖份乳糖+铁盐铁盐+酚红酚红 营养营养 底物底物 底物底物 底物底物 指示剂指示剂原理：原理：只分解葡萄糖只分解葡萄糖 产酸（葡萄糖少，产酸量

13、少）产酸（葡萄糖少，产酸量少）斜面斜面产生的酸被产生的酸被氧化、挥氧化、挥发、中和发、中和后，呈红色后，呈红色底层缺氧，不氧化，黄色底层缺氧，不氧化，黄色产生硫化氢产生硫化氢+铁盐铁盐 FeS 黑色沉淀黑色沉淀 应用：检测应用：检测肠杆菌科细菌肠杆菌科细菌对乳糖、葡萄糖的分解和产对乳糖、葡萄糖的分解和产H2S能力能力。2022-12-2449细菌在KIA上分解乳糖或葡萄糖结果示意图乳（）乳（）葡（）葡（）H H2 2S(-)S(-)乳（乳（+）葡（葡（+）H H2 2S(-)S(-)乳（乳（-）葡（葡（+）H H2 2S(+)S(+)动力动力(-)(-)Indol(-)Indol(-)脲酶脲酶(-)(-)动力动力(-)(-)Indol(+)Indol(+)脲酶脲酶(+)(+)对照对照(2)(2)动力动力/吲哚吲哚/尿素酶试验尿素酶试验（MIU）（MIU）（MIU）2022-12-2453