感染的实验诊断课件.ppt

1、感染的实验诊断基质基质 衣壳衣壳 核衣壳核衣壳 表面糖蛋白表面糖蛋白 跨膜糖蛋白跨膜糖蛋白蛋白酶蛋白酶 反转录酶反转录酶 整合酶整合酶HIV结构基因,有3个env(核苷酸5781-8360)编码包膜蛋白p160、120、41等。gag(核苷酸310-1860)编码病毒核心/衣壳蛋白p55、24、15、17；pol(核苷酸1629-4673)编码逆转录酶(RT)、p66、51、32、11等；HIV调节基因,有6个tat:上调mRNA,促病毒复制-启动rev:调节病毒mRNA-开关vif:增强出芽,释放新病毒颗粒-感染因子nef:下调mRNA,抑病毒复制-制动vpu:仅见于HIV-1,功能不详；v

2、px:仅见于HIV-2,功能不详。5days脑部：巨嗜细胞和胶质细胞脑部：巨嗜细胞和胶质细胞淋巴系统淋巴系统:胸腺胸腺淋巴结淋巴结脾脏脾脏肠道：嗜铬细胞肠道：嗜铬细胞前列腺精液前列腺精液阴道黏液阴道黏液骨髓骨髓肺胞巨嗜细胞肺胞巨嗜细胞血液血液 Image from:Kahn and Walker,M.D.NEJM 1998,Volume 339:33-39 July 2 HIV RNA浓度浓度急性期潜伏期艾滋病期检出线小于18个月婴儿在10000拷贝/毫升应做HIV感染处理。pol(核苷酸1629-4673)编码逆转录酶(RT)、p66、51、32、11等；第五代：HIV抗体和P24抗原实现分

3、别检测，真正实现早期诊断。诊断HIV感染在早期可检测抗原，而在感染后的大多数时间，可用血清学方法诊断。Image from:Kahn and Walker,M.阴性不排除感染，因敏感性低：3080。自身免疫病，高丙种球蛋白血症（全身性红斑狼疮）此时ELISA往往已显示阳性反应染个体所占比例。两周后出现病毒血症，可用P24抗原检测方法或测逆转录酶活性。1000人受检：50份真阳性（已感染），950份真阴性（未感染），第四代：双抗原（抗体）夹心法，将HIV P24抗体和HIV抗原同时包被，再加入待检血清，最后加入酶标记的HIV抗原和HIV P24单克隆抗体，同时检测血清中的HIV P24抗原和HI

4、V抗体。注：公式中真阳性和真阴性指试验数目。或假阴性），是灵敏度和特异性的综合指标，反映了该试验的25例随访到的对象中，18例样本平均17 天后条带有明显进展，可以判定为HIV抗体阳转。阳性预测值=100%阴性预测值（NPV）：定义为在所有阴性结果人群中未感特异性不够强，有时会造成一些假阳性结果，故在初筛试快速:4-5 y:(2%)缓慢/长期不进展:10 y:(2%)HIV RNAHIV p24 antigenHIV antibodies窗口期血浆RNAP24前病毒 DNAHIV抗体:ELISAHIV抗体:WBHIV感染者的三种临床转归感染者的三种临床转归VirusCD4CD8 a aHIVC

5、D4CD4CD8CD8 a aHIVVirusVirus典型典型 810 y快速快速:4-5 y:(2%)缓慢缓慢/长期不进展长期不进展:10 y:(2%)FourthGenerationThirdGenerationSecondGenerationIgMIgG（二）、检测试剂的质量指标灵敏度诊断试验的灵敏度有两个不同意义：1代表一个试验能检测最少量被分析物（如抗体）的能力。通常可对阳性血清进行稀释以确认哪个试验更敏感。2指某试验检出阳性的能力（无假阴性）。一个试验有可能检出很少量的某抗体，但也可因试验中缺少适当的抗原而漏掉一些阳性样品。2特异性指某试验正确鉴定所有阴性的能力（无假阳性）。大部

6、分HIV筛查试验不是100%特异，可用公式计算 真阴性 特异度=100%真阴性+假阳性注：公式中真阴性指试验中所能检测的真阴性数。如100份血清，5份真阳性，95份真阴性，与参考试验比较，某试验检出6份阳性（一份假阳性），则 特异性=94/(94+1)100%=98.9%3试验效率指某试验正确鉴定所有阳性和阴性的总体能力（无假阳性或假阴性），是灵敏度和特异性的综合指标，反映了该试验的总的效率。真阳性+真阴性试验效率=100%真阳性+假阳性+真阴性+假阴性注:公式中真阳性和真阴性指试验数目。在以上例子中，检测100份血清，5份真阳性，95份真阴性，1份假阳性，1份假阴性，因此 4+94 试验效率

7、=100%=98%4+1+94+14预测值预测值与以上的参数不同，它描述的是考虑了被检人群中感染的流行因素后的试验评价。阳性预测值（PPV）：定义为在所有阳性结果人群中感染 个体所占比例。阴性预测值（NPV）：定义为在所有阴性结果人群中未感 染个体所占比例。真阳性阳性预测值=100%真阳性+假阳性 真阴性阴性预测值=100%真阴性+假阴性注：公式中真阳性和真阴性指试验数目。在感染流行率较高（5%）的人群中1000人受检：50份真阳性（已感染），950份真阴性（未感染），5份假阳性（试验结果），5份假阴性（试验结果），计算 PPV=45/(45+5)100%=90%NPV=945/(945+5)

8、100%=99.5%在另一人群有相同的结果（即相同数量的假阳性和假阴性）在感染流行率较低的人群（0.7%）中 1000人受检：7份真阳性（已感染），993份真阴性（未感染），5份假阳性（试验结果），5份假阴性（试验结果），计算 PPV=2/2+5=28.6%NPV=988/988+5=99.5%5艾滋病病原诊断中的几个问题明确不同实验方法的意义和适应范围：HIV血清学检测方法可分初筛和确证两类。HIV初筛试验特异性不够强，有时会造成一些假阳性结果，故在初筛试验出现阳性结果时，应再重复试验，若仍为阳性再用确证试验（West Blot）去证实。但一些非感染者的血液也会对某些抗原显示反应（出现的条

9、带不够判为阳性的标准），在正常的非感染者人群中发生比例15%，所以如果用WB来测ELISA阴性者的血清，有些标本被视为不确定。出现不确定结果时，可能是HIV早期感染或是非特异反应，应在1-6个月后复查，并结合个体的临床表现、感染因素、WB带型等综合分析后做出结论。针对HIV感染不同时期选用不同的检测手段：HIV感染后两周内，无法查到抗体。两周后出现病毒血症，可用P24抗原检测方法或测逆转录酶活性。6-8周后抗体产生时，进行抗体检测。诊断HIV感染在早期可检测抗原，而在感染后的大多数时间，可用血清学方法诊断。2、免疫标志物：CD4/CD8,CTL,微球蛋白和Neopterin等。25例随访到的对

10、象中，18例样本平均17 天后条带有明显进展，可以判定为HIV抗体阳转。HIV antibodies注：公式中真阳性和真阴性指试验数目。2、低度为S/CO1,中度为1S/CO6。特异度=100%两周后出现病毒血症，可用P24抗原检测方法或测逆转录酶活性。5105102如有必要，可用辅助诊断方法对不确定样本进行实验诊断。表1 ELISA法HIV1抗体测定的预示值PPV=2/2+5=28.NPV=945/(945+5)100%=99.ELISA试剂为HIV1/2型，包括M和O组，N组不包括但很少。自身免疫病，高丙种球蛋白血症（全身性红斑狼疮）诊断HIV感染在早期可检测抗原，而在感染后的大多数时间，

11、可用血清学方法诊断。HIV antibodies3、核酸定性：DNAPCR或 RT-PCR，阳性不能单独用于感染的诊断，阴性不排除感染。感染HIV后的血清学变化真阳性+真阴性5份假阳性（试验结果），5份假阴性（试验结果），计算自身免疫病，高丙种球蛋白血症（全身性红斑狼疮）HIV抗体检测反应强度与HIV感染的概率：ELISA法可根据光密度（OD）值的强度直接确定。反应越强的血清，含有HIV抗体的可能性就越大。表2中正常献血员（感染率30/10万），中等强度反应时，HIV抗体阳性概率仅为1%，高强度反应时，则为86.1%。见表2。不仅要看阴阳结果，还要看反应强度或S/CO比值。但一些非感染者的血液

12、也会对某些抗原显示反应（出现的条 带不够判为阳性的标准），在正常的非感染者人群中发生比例 10 y:(2%)HIV antibodies2、低度为S/CO1,中度为1S/CO6。窗口期：几周到6个月，与当地HIV流行率有关25例随访到的对象中，18例样本平均17 天后条带有明显进展，可以判定为HIV抗体阳转。HIV antibodies特异度=100%HIV亚型，M/N/O组间差异诊断HIV感染在早期可检测抗原，而在感染后的大多数时间，可用血清学方法诊断。验出现阳性结果时，应再重复试验，若仍为阳性再用确证如有必要，可用辅助诊断方法对不确定样本进行实验诊断。NPV=988/988+5=99.HI

13、V antibodiesELISA试剂为HIV1/2型，包括M和O组，N组不包括但很少。（二）、检测试剂的质量指标pol(核苷酸1629-4673)编码逆转录酶(RT)、p66、51、32、11等；PPV=45/(45+5)100%=90%98%，而在非高危人群中，阳性预测值仅为18.一个试验有可能检出很少量的某抗体，但也可因试验中缺少适当的抗原而漏掉一些阳性样品。小于18个月婴儿在10000拷贝/毫升应做HIV感染处理。特异性不够强，有时会造成一些假阳性结果，故在初筛试（优选）感染的实验诊断此时ELISA往往已显示阳性反应注：公式中真阳性和真阴性指试验数目。5艾滋病病原诊断中的几个问题6-8周后抗体产生时，进行抗体检测。1、数字表示相应强度反应的血清中含有HIV抗体的概率感染HIV后的血清学变化预测值与以上的参数不同，它描述的是考虑了被检人群 三四五代酶联试剂的差异和使用策略：缓慢/长期不进展:10 y:(2%)在感染流行率较低的人群（0.pol(核苷酸1629-4673)编码逆转录酶(RT)、p66、51、32、11等；此时ELISA往往已显示阳性反应带型发生进展，符合HIV抗体阳性判断标准，则诊断为HIV抗体阳性。