染色体核型分析课件.ppt

1、染色体核型分析染色体核型分析一、名词解释一、名词解释 二、染色体标本制备二、染色体标本制备三、染色体核型分析三、染色体核型分析实验耗材前期处理实验步骤玻片标本质量评价计数标准、合格指标染色体核型排列核型检测的可重复性一、名词解释核型核型分裂相分裂相一个体细胞中的全部染色体，按其大小、形态特征顺序排列所构成的图像。小鼠：40，XY 、40，XX人类：46，XY 、46，XX细胞分裂过程中每个时期的细胞形态特征，包括细胞的总体形状和遗传物质的变化。一、名词解释数量变异（性染色体丢失/增加、近端着丝粒染色体三体）（中期）分裂相（中期）分裂相 核型核型结构变异（缺失、重复、倒位、易位）二、染色体标本制

2、备实验耗材实验耗材仪器设备：超净工作台、恒温培养箱、恒温水浴箱、离心机、光学显微镜、刻度离心管、乳头吸管、棕色试剂瓶、载玻片、吹风机、玻片架、染色缸主要试剂：秋水仙素、低渗液、卡诺氏固定液、吉姆萨染液、胰酶、1N HCl、1N NaOH、MEF培养基、PBS二、染色体标本制备前期处理前期处理 样品要求：对数期生长，状态良好，紧密度高，折光性好，细胞量T25/60 mm平皿差速贴壁法去除MEF（KSR培养体系除外）终止培养前12小时，加入秋水仙素秋水仙素（100ug/ml），最终浓度为0.10.2ug/ml。作用：破坏纺锤体防护：有剧毒、无挥发性因素：时间、浓度二、染色体标本制备固定固定细胞收获

3、细胞收获制片制片预固定预固定低渗处理低渗处理实验步骤实验步骤二、染色体标本制备细胞收获细胞收获制片制片固定固定预固定预固定低渗处理低渗处理消化并收集细胞至离心管，吹打成单细胞悬液，250 g，5 min离心，弃上清实验步骤实验步骤二、染色体标本制备细胞收获细胞收获制片制片固定固定预固定预固定低渗处理低渗处理加入37预热的低渗液（低渗液（0.075 mol/L）5 ml，吹打至均匀，37水浴15-20 min。实验步骤实验步骤二、染色体标本制备细胞收获细胞收获制片制片固定固定预固定预固定低渗处理低渗处理加入37预热的低渗液低渗液（0.075 mol/L）5 ml，吹打至均匀，37水浴15-20

4、min。实验步骤实验步骤配制：0.075 mol/L KCl溶液作用：低渗作用因素：时间、温度、浓度二、染色体标本制备细胞收获细胞收获制片制片固定固定预固定预固定低渗处理低渗处理实验步骤实验步骤离心弃上清，将细胞沉淀震荡悬浮或气泡吹打法轻柔地重悬细胞。沿管壁缓慢加入固定液固定液0.5-1.0 mL，边滴加边震荡均匀，静置5 min后离心弃上清。二、染色体标本制备细胞收获细胞收获制片制片固定固定预固定预固定低渗处理低渗处理实验步骤实验步骤离心弃上清，将细胞沉淀震荡悬浮或气泡吹打法轻柔地重悬细胞。沿管壁缓慢加入固定液固定液0.5-1.0 mL，边滴加边震荡均匀，静置5 min后离心弃上清。配制：甲

5、醇：冰乙酸=3：1，现用现配。作用：固定并维持染色体结构的完整性防护：甲醇毒性，冰乙酸刺激性和腐蚀性二、染色体标本制备细胞收获细胞收获制片制片固定固定预固定预固定低渗处理低渗处理实验步骤实验步骤（1）加入3ml固定液固定液，静置30min，离心弃上清；（2）再次加入3ml固定液固定液，吹打均匀并静置30min二、染色体标本制备细胞收获细胞收获制片制片固定固定预固定预固定低渗处理低渗处理实验步骤实验步骤离心弃上清液，根据细胞数量情况，加入12 mL固定液，吹打细胞制成悬液，悬液呈微白色时为最佳。二、染色体标本制备细胞收获细胞收获制片制片固定固定预固定预固定低渗处理低渗处理实验内容实验内容用滴管吸

6、取细胞悬液，高空滴在冰冻玻片冰冻玻片上，立即在酒精灯的火焰下过火几次，置80烤箱中烤片2h。二、染色体标本制备细胞收获细胞收获制片制片固定固定预固定预固定低渗处理低渗处理实验步骤实验步骤用滴管吸取细胞悬液，高空滴在冰冻玻片冰冻玻片上，立即在酒精灯的火焰下过火几次，置80烤箱中烤片2h。要求：洁净、冰冻处理：逐片清洗（洗洁精超声波自来水纯水），95%乙醇浸泡24 h，纯水逐片刷洗，放置于装有纯水的器皿中，4 保存。二、染色体标本制备细胞收获细胞收获制片制片固定固定预固定预固定低渗处理低渗处理实验步骤实验步骤预热胰蛋白酶胰蛋白酶消化25-30s，Giemsa染色10min。清水冲洗染液，用吹风机吹

7、干。二、染色体标本制备细胞收获细胞收获制片制片固定固定预固定预固定低渗处理低渗处理实验步骤实验步骤预热胰蛋白酶胰蛋白酶消化25-30s，Giemsa染色10min。清水冲洗染液，用吹风机吹干。要求：0.25%，pH6.87.2作用：去除染色体上的蛋白质，便于染色。配制：Giemsa原液：磷酸缓冲液（pH 7.4）=1：9，现用现配。三、染色体核型分析玻片标本质量评价玻片标本质量评价玻片颜色蓝紫色 玫红色 着色浅解决方案配制新的染液；适当提高胰酶消化玻片的时间。三、染色体核型分析玻片标本质量评价玻片标本质量评价细胞密度过密 适中 过稀解决方案制备玻片时，对每一个样品都先进行试片，并在镜下观察细胞

8、密度，从而调整悬液密度。三、染色体核型分析玻片标本质量评价玻片标本质量评价分裂相密度足够 稀少解决方案适当提高固定液中冰醋酸比例；制备较多的玻片三、染色体核型分析玻片标本质量评价玻片标本质量评价分裂相形态-紧密度过密 适中 过散解决方案过密：适当提高固定液中冰醋酸比例；过散：适当降低固定液中冰醋酸比例。三、染色体核型分析玻片标本质量评价玻片标本质量评价分裂相形态过密 适中 过散解决方案过密：适当提高固定液中冰醋酸比例，增加滴片高度；过散：适当降低固定液中冰醋酸比例，减小滴片高度。三、染色体核型分析玻片标本质量评价玻片标本质量评价分裂相形态解决方案尽量将细胞吹打成单细胞悬液；滴片时勿重复滴加同一

9、区域。重叠三、染色体核型分析玻片标本质量评价玻片标本质量评价染色体形态适中 短小 过长 扭曲交联 消化过度三、染色体核型分析计数标准计数标准合格指标合格指标分裂相需完整独立，染色体不过于松散，周围无其他距离很近的分裂相。染色体形态适中，不过度短小或纤长，染色体彼此间无交联缠绕或者交联的染色体能明确的区分。染色体G显带普遍较清晰，质检人员能够精确的判断核型位置。计数30个分裂相，正常比例50%数量是否异常暂不涉及核型排列 结构是否异常三、染色体核型分析染色体核型排列染色体核型排列三、染色体核型分析染色体核型排列染色体核型排列三、染色体核型分析染色体核型排列染色体核型排列三、染色体核型分析染色体核型排列染色体核型排列三、染色体核型分析核型检测的可重复性核型检测的可重复性染色体标本制备及核型分析染色体标本制备及核型分析人有了知识，就会具备各种分析能力，明辨是非的能力。所以我们要勤恳读书，广泛阅读，古人说“书中自有黄金屋。”通过阅读科技书籍，我们能丰富知识，培养逻辑思维能力；通过阅读文学作品，我们能提高文学鉴赏水平，培养文学情趣；通过阅读报刊，我们能增长见识，扩大自己的知识面。有许多书籍还能培养我们的道德情操，给我们巨大的精神力量，鼓舞我们前进。