4人教版生物选修一 专题二微生物的培养与应用课题一微生物的实验室培养 （共31张PPT）.ppt

1、到目前为止，几十项到目前为止，几十项NobelNobel生理学和医学生理学和医学 奖，化学奖都与微生物学有关奖，化学奖都与微生物学有关 微生物的类群微生物的类群 原生生物原生生物 原核生物原核生物 真菌真菌 病毒病毒 微生物包含了除微生物包含了除植物界植物界和和动物界动物界以外的所有生物以外的所有生物 无细胞结构无细胞结构 真核细胞真核细胞 原核细胞原核细胞 有些细菌（多为杆菌）在一定条件下，细胞质高有些细菌（多为杆菌）在一定条件下，细胞质高 度浓缩脱水所形成的一种抗逆性很强的球形或椭度浓缩脱水所形成的一种抗逆性很强的球形或椭 圆形的休眠体。每一细胞仅形成一个芽孢，圆形的休眠体。每一细胞仅形成

2、一个芽孢，所以所以 其没有繁殖功能。其没有繁殖功能。 1.1.芽孢芽孢 脱离亲本后能直接或间接发育成新个体的脱离亲本后能直接或间接发育成新个体的生殖细生殖细 胞胞。它是有丝分裂或减数分裂的产物；。它是有丝分裂或减数分裂的产物； 2.2. 孢子孢子 专题专题2 :2 :微生物的培养与应用微生物的培养与应用 一一. .培养基：培养基： 微生物的直接生存环境包含了：微生物的直接生存环境包含了： 1.1.基本成分：基本成分： 碳源、氮源、水、无机盐碳源、氮源、水、无机盐 碳源碳源 无机碳源：无机碳源： 有机碳源：有机碳源： COCO2 2、COCO3 32 2- -、HCOHCO3 3- - 牛肉膏、

3、蛋白胨等牛肉膏、蛋白胨等 自养微自养微 生物生物 异养微异养微 生物生物 氮源氮源 无机氮源：无机氮源： 有机氮源：有机氮源： NHNH4 4 、 、NONO3 3- - 牛肉膏、蛋白胨、牛肉膏、蛋白胨、 酵母膏、尿素等酵母膏、尿素等 注：含注：含CHONCHON的的有机物有机物是是异异养型微生物的养型微生物的碳源碳源、 氮源氮源、能源能源 2.2.特殊营养：特殊营养： 维生素、碱基等维生素、碱基等 3.pH3.pH、氧气的需求：、氧气的需求： 4.4.种类种类： 固体培养基固体培养基 液体培养基液体培养基 有有无无 凝固剂琼脂凝固剂琼脂 分离分离 鉴定鉴定 工业工业 生产生产 化学成分：化学

4、成分： 天然培养基天然培养基 合成培养基合成培养基 细菌偏碱，真菌偏酸细菌偏碱，真菌偏酸 液体培养基：液体培养基： 表面生长表面生长 均匀混浊生长均匀混浊生长 沉淀生长沉淀生长 固体培养基：菌落，菌苔固体培养基：菌落，菌苔 半固体培养基：半固体培养基： 无动力无动力 有动力有动力( (弥散弥散) ) ( (是否运动是否运动) ) 接种环接种环 接种针接种针 鉴别鉴别 选择选择 选择培养基选择培养基 1.1.加入青霉素的培养基加入青霉素的培养基: : 分离酵母菌、霉菌等真菌分离酵母菌、霉菌等真菌 2.2.加入高浓度食盐的培养基加入高浓度食盐的培养基: : 分离金黄色葡萄球菌分离金黄色葡萄球菌 3

5、.3.无氮培养基无氮培养基: : 分离固氮菌分离固氮菌 4.4.不加含碳有机物的无碳培养基不加含碳有机物的无碳培养基: : 分离自养型微生物分离自养型微生物 5.5.加入四环素等抗生素的培养基加入四环素等抗生素的培养基: : 分离导入了目的基因的受体细胞分离导入了目的基因的受体细胞 C C 2. 1.1.下列可以作为自养微生物氮源的是下列可以作为自养微生物氮源的是 A.NA.N2 2、尿素、尿素 B.B.牛肉膏、蛋白胨牛肉膏、蛋白胨 C.C.尿素、酵母粉尿素、酵母粉 D.D.铵盐、硝酸盐铵盐、硝酸盐 D D 11.11.下列关于细菌的叙述中下列关于细菌的叙述中, ,正确的是正确的是 A.A.不

6、同种类细菌的生长均需要相同碳源不同种类细菌的生长均需要相同碳源 B.B.常用液体培养基分离获得细菌单菌落常用液体培养基分离获得细菌单菌落 C.C.在加入青霉素的培养基中在加入青霉素的培养基中, ,细菌仍可大量繁殖细菌仍可大量繁殖 D.D.培养基中含有高浓度培养基中含有高浓度NaClNaCl有利于金黄色葡有利于金黄色葡 萄球菌的筛选萄球菌的筛选 D D 耐高温需保持干燥的耐高温需保持干燥的 物品，物品，160170 12小时小时 接种环、接种针等接种环、接种针等 金属用具金属用具 7075、30min 80、15min 100、56min 消毒消毒 灭菌灭菌 定义定义 方法方法 较为较为温和温和

7、理化方法，理化方法， 杀死杀死部分有害菌体部分有害菌体 （不不包括芽孢、孢子）包括芽孢、孢子） 强烈强烈的理化方法，的理化方法， 杀死杀死所有微生物所有微生物 （包括（包括芽孢、孢子芽孢、孢子） 煮沸消毒法煮沸消毒法 巴氏消毒法巴氏消毒法 化学药剂化学药剂 紫外线紫外线 灼烧灭菌灼烧灭菌 干热灭菌干热灭菌 酒精、氯气、石炭酸等酒精、氯气、石炭酸等 高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌 培养基，培养基， 100KPa、 121、1530min 二二. .无菌技术：无菌技术： 防止外来杂菌的污染防止外来杂菌的污染 1.1.消毒与灭菌：消毒与灭菌： 请你判断以下材料或用具是否需要消毒或请你判断以下材料或用具是否

8、需要消毒或 灭菌。如果需要，请选择合适的方法。灭菌。如果需要，请选择合适的方法。 （1 1） 培养细菌用的培养基与培养皿培养细菌用的培养基与培养皿 （2 2） 玻棒、试管、烧瓶和吸管玻棒、试管、烧瓶和吸管 （3 3） 实验操作者的双手实验操作者的双手 2.2.无菌范围：无菌范围： 实验操作空间消毒实验操作空间消毒 操作者的手、衣着消毒操作者的手、衣着消毒 实验用具灭菌实验用具灭菌 实验操作过程实验操作过程 酒精灯旁操作酒精灯旁操作 超净工作台超净工作台 单个单个 或少数菌体或少数菌体 2.2.特征：特征： 大小、形状、光泽度、大小、形状、光泽度、 颜色、透明度等。颜色、透明度等。 3.3.功能

9、：功能： 1.1.定义：定义： 三三. .菌落菌落 鉴定菌种鉴定菌种的重要依据的重要依据 固体固体培养基上培养基上 大量繁殖大量繁殖 子细胞群体子细胞群体 四四. .大肠杆菌的纯化培养：大肠杆菌的纯化培养： （一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 1.1.计算：计算： 2.2.称量：称量： 3.3.溶化：溶化： 4.4.调调pHpH、分装、封口：、分装、封口： 5.5.灭菌：灭菌： 6.6.倒平板：倒平板： 培养基用量培养基用量 依配方计算各成分的用量依配方计算各成分的用量 牛肉膏黏稠，用称量纸称取牛肉膏黏稠，用称量纸称取 牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加盖牛肉膏、蛋白

10、胨易吸潮，要快、加盖 牛肉膏、称量纸牛肉膏、称量纸 、少量水加热溶解、少量水加热溶解 取纸取纸 蛋白胨、蛋白胨、NaClNaCl 琼脂琼脂 补水定容补水定容 培养基、培养皿培养基、培养皿 分散成单个细胞分散成单个细胞, , 形成单个菌落形成单个菌落 倒平板倒平板 约约50 防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染 灼烧灭菌，灼烧灭菌， 防止瓶口的微生物污染培养基防止瓶口的微生物污染培养基 二二. .大肠杆菌的纯化培养：大肠杆菌的纯化培养： 制备牛肉膏蛋白胨固体培养基制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 纯化大肠杆菌：纯化大肠杆菌： 平板划线法：平板划线法： 菌种菌种 划划

11、3 3个平板个平板 1 1个不划线个不划线 1.1.接种：接种： 接种环接种环 防止划破培养基防止划破培养基 （重复实验）（重复实验） （空白对照）（空白对照） 目的目的 第一次灼烧第一次灼烧 每次划线之前灼烧每次划线之前灼烧 划线结束灼烧划线结束灼烧 避免污染避免污染 杀死上次划线结束后杀死上次划线结束后 接种环上残留的菌种，接种环上残留的菌种， 使每次划线的菌种来使每次划线的菌种来 自上次划线末端自上次划线末端 杀死残留菌种，杀死残留菌种， 避免污染环境、避免污染环境、 感染操作者感染操作者 6 6支试管，分别加入支试管，分别加入9ml9ml无菌水无菌水 1ml 101 1ml 102 1

12、ml 103 1ml 104 1ml 105 1ml 106 稀释涂布平板法：稀释涂布平板法： a.a.梯度稀释菌液：梯度稀释菌液： 菌液菌液 微量微量 移液器移液器 稀释涂布平板法：稀释涂布平板法： a.a.梯度稀释菌液：梯度稀释菌液： b.b.涂布平板：涂布平板： 不超过不超过0.1ml0.1ml 各梯度分别涂布各梯度分别涂布3个平板个平板 1 1个不涂布作空白对照个不涂布作空白对照 滴滴 灼灼 试试 涂涂 稀稀 释释 10103 3 倍倍 稀稀 释释 10104 4 倍倍 稀稀 释释 10105 5 倍倍 平板划线法：平板划线法： 二二. .大肠杆菌的纯化培养：大肠杆菌的纯化培养： 制备牛肉膏蛋白胨固体培养基制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 纯化大肠杆菌：纯化大肠杆菌： 1.1.接种：接种： 稀释涂布平板法：稀释涂布平板法： 2.2.培养：培养： 将将接种后接种后的培养基和一个的培养基和一个未接种未接种的培的培 养基养基 放入放入3737恒温箱中培养恒温箱中培养12h12h24h24h后，后， 分别观察并记录分别观察并记录 三三. .菌种的保藏：菌种的保藏： 1.1.临时保藏：临时保藏： 试管固体斜面培养基上试管固体斜面培养基上 44 2.2.长期保存：长期保存： 菌种易被污染、变异菌种易被污染、变异 甘油管藏甘油管藏 1ml1ml甘油甘油1ml1ml菌液菌液 2020