腹泻病毒联合检测意义课件.ppt

1、一一腹泻病概述和腹泻病毒检测意义腹泻病概述和腹泻病毒检测意义二二荧光免疫法及优势荧光免疫法及优势腹泻病概述腹泻病发病趋势病毒等其他感染性腹泻现状病毒性腹泻诊断临床意义腹泻病概述 腹泻病为多种病原、多种因素引起的以大便次数增多和大便性状改变为特点的一组疾病，是儿童患病和死亡的主要原因，也是营养不良的重要原因1。我国每年有8.36亿人次患腹泻，其中5岁以下小儿占3亿次。2005年中国小儿因急性腹泻死亡人数为160万1。1儿童腹泻病诊治专家共识中华医学会儿科分会消化学组、中华医学会儿科分会感染学组、中华儿科杂志通讯作者：陈洁浙江大学医学院儿童医院（杭州310003）病名病名20152015年年201

2、2013 3年年2012012 2年年2012011 1年年2012010 0年年发病数死亡死亡率率发病数发病数死亡死亡率率发病数发病数死亡死亡率率发病数发病数死亡死亡数数发病数发病数死死亡亡数数霍乱霍乱1305317502401570细菌细菌性和性和阿米阿米巴性巴性痢疾痢疾138917718866913207429132379302425224836伤寒伤寒和副和副伤寒伤寒116371141363119983117981140413其它其它感染感染性腹性腹泻病泻病93761619101258920885678178365912374655143腹泻病发病趋势2全国法定传染病（腹泻类）发病数据

3、（数据来源：卫计委网站）病毒等其他感染性腹泻现状病毒等其他感染性腹泻现状 2006年中国共报告其他感染性腹泻病例741809例，报告发病率为56.73/0万。既往调查农村地区人群腹泻发病率为1220/10万-3360/10万，就诊率为6.3%-50%，日本，2005年3046家儿科定点监测的感染性腹泻病例就达941572例，分析：中国其他感染性腹泻的报告病例数与实际发病水平相差甚大4。4中国感染性腹泻监测策略的思考与建议 作者单位：中国疾病预防控制中心疾控处应急办肠道传染病防制办 公室，作者：张静，副研究员，主要从事传 染病监测与控制工作 病毒等其他感染性腹泻现状 结果2011年共报告其他感染

4、性腹泻患者836591例，发病率为62.39/10万。病例发病年龄主要集中在0-5岁组，发病率为447.0610万（436098例），占总数的52.3（436098836591），报告病例发病有2个高峰，夏季（第23-35周），占34.33（287231/836591）；冬季（第43-52周），占23.54（196939836591）。报告的30起疫情中，5起有明确病原学诊断结果，其中，4起为诺如病毒引起。2011年其他感染性腹泻确诊病例占报告病例数的716（59929836591），其中，病毒感染56687例，细菌感染3242例52011年中国其他感染性腹泻监测现状分析中华预防医学杂志 CA

5、S CSCD 2013年第4期 328-332页,共5页病毒性腹泻诊断临床意义 目前最常见的腹泻病毒有4种，其中以轮状病毒、肠道腺病毒最为常见。病毒性腹泻中40%-60%由轮状病毒感染引起，其次是肠道腺病毒、诺如病毒、星状病毒感染6。6病毒性腹泻的研究进展雷炳钧，华西医科大学；临床内科杂志1998年第4期；病毒性腹泻诊断临床意义 腹泻病临床症状相仿，病毒性腹泻的治疗方案与细菌等引起的腹泻有很大不同。有报道发现双重病毒或多重病毒感染的腹泻，其症状更严重，病情进展快，导致的死亡率更高。由于肠道传染病的临床表现和常用的辅助检查缺乏明显的特异性，因此存在着疾病早期病原体诊断不明确的危险因素，从而存在着

6、疾病早期滥用抗生素、生病期延长而增加患者痛苦和经济负担的客观因素。因此，针对轮状病毒、肠道腺病毒研制快速准确的诊断技术，对指导临床对症治疗和避免滥用抗生素有重要意义，特别是对婴幼儿腹泻诊断上更有意义。6病毒性腹泻的研究进展雷炳钧，华西医科大学；临床内科杂志1998年第4期；病毒性腹泻诊断临床意义1、为疾病诊断和鉴别诊断、临床疗效观察和预后提供依据u符合循证医学原则，提升医疗诊治科学性。症状学诊治转变为病因学诊治客观上降低抗生素滥用、缩短不必要的病程减少不必要的病患痛苦、降低不必要的经济负担u不同的病因，不同的自然病史，不同的临床相，不同的预后转归判断病毒性腹泻诊断临床意义轮状病毒轮状病毒l最常

7、见的致腹泻病毒，常温稳定，在环境表面存活数日，粪便中可存活数月，55摄氏度30分钟灭活l粪口途径传染，l秋冬季高发，l起病急，潜伏期12天，症状期38天，l发热呕吐腹痛，喷射性水样腹泻，易导致脱水l病程自限，多数预后良好，婴幼儿较重，少数脱水死亡l首次感染可减少再次感染几率，并减轻再次感染的严重性，各型无交叉免疫，可多次感染病毒性腹泻诊断临床意义轮状病毒轮状病毒轮状病毒（Rotavirus，简称RV）是一种双链核糖核酸病毒，属于呼肠孤病毒科。它是婴儿与幼儿腹泻的单一主因，几乎世界上每个大约五岁的小孩都曾感染过轮状病毒至少一次。然而，每一次感染后人体免疫力会逐渐增强，后续感染的影响就会减轻，因而

8、成人就很少受到其影响。轮状病毒总共有七个种，以英文字母编号为A、B、C、D、E、F与G。其中，A种是最为常见的一种，而人类轮状病毒感染超过90%的案例也都是该种造成的。病毒性腹泻诊断临床意义轮状病毒轮状病毒轮状病毒是借由粪口途径传染的。它会感染与小肠连结的肠黏膜细胞（enterocyte）并且产生肠毒素（enterotoxin），肠毒素会引起肠胃炎，导致严重的腹泻，有时候甚至会因为脱水而导致死亡。虽然轮状病毒于1973年就被由澳洲的露丝毕夏普（Ruth Bishop）所发现，而且造成婴儿与幼儿总计超过50%以上因为严重腹泻而住院治疗的案例，但是在公共卫生社群中它仍然没有被广泛地重视，特别是在发

9、展中国家更是如此。除了对人类健康的影响之外，轮状病毒也会感染动物，是家畜的病原体之一。病毒性腹泻诊断临床意义肠道腺病毒肠道腺病毒l对温度敏感，对含氯剂和脂溶剂不敏感，抗紫外线，认真洗手l粪口途径传染l终年可发病，冬春多发，l病程长，多超过一周，l腹泻呕吐，可多器官受累，心肌炎，CNSl自限，预后良好，腺病毒是肠套叠的重要原因，40%的肠套叠与腺病毒有关l感染后可获得持久免疫力，很少二次感染病毒性腹泻诊断临床意义肠道腺病毒肠道腺病毒腺病毒(adenovirus)是一种没有包膜的直径为7090 nm的颗粒，由252个壳粒呈廿面体排列构成。每个壳粒的直径为79 nm。衣壳里是线状双链DNA分子，约含

10、35 000 bp，两端各有长约100 bp的反向重复序列。由于每条DNA链的5端同相对分子质量为55X103Da的蛋白质分子共价结合，可以出现双链DNA的环状结构。病毒性腹泻诊断临床意义肠道腺病毒肠道腺病毒腺病毒对呼吸道、胃肠道、尿道和膀胱、眼、肝脏等均可感染，人腺病毒约1/3的已知血清型通常与人类疾病相关，但一种血清型可引起不同的临床疾患；相反，不同血清型也可引起同一种疾患。病毒性腹泻诊断临床意义肠道腺病毒肠道腺病毒胃肠炎许多腺病毒在肠道细胞中复制，随粪便排出，但大多血清型与胃肠道疾病无关。而40型和41型腺病毒可引起婴幼儿与年少（4岁以下）儿童的胃肠炎，致腹痛、腹泻。C组腺病毒能引起某些

11、婴幼儿肠套叠。病毒性腹泻诊断临床意义肠道腺病毒肠道腺病毒引起其他疾患腺病毒11、12型能引起儿童急性出血性膀胱炎，尿中出现病毒。37型可引起女性宫颈炎和男性尿道炎，常由性传播感染。在免疫功能低下者可引起偶发或严重的病毒感染，尤其在器官移植病人中发生严重呼吸道感染和病毒性肝炎，多由1、5和7型腺病毒引起。艾滋病患者可感染多种血清型腺病毒，并能出现抗原性介于中间的杂合型毒株，而且常为致死性腺病毒感染。主要原因是腺病毒的E1A蛋白可反式激活HIV的转录，加速HIV的复制。临床发现37%的艾滋病患者病毒性腹泻是由腺病毒所致。病毒性腹泻诊断临床意义肠道腺病毒肠道腺病毒腺病毒感染后可获得对同型的持久免疫力

12、与绝大多数呼吸道感染的病原相比，机体对腺病毒的再感染能产生有效的免疫。起保护作用的是体内产生的循环中和抗体。正常的健康成人一般也具有多型的抗体。约40%60%的615岁的人具有1、2和5型中和抗体，但3、4和7型抗体很少。母亲的抗体能保护婴儿免除严重的腺病毒呼吸道感染。病毒性腹泻诊断临床意义诺如病毒诺如病毒诺如病毒，又称诺瓦克病毒（Norwalk Viruses，NV）是人类杯状病毒科(Human Calicivirus，HuCV)中诺如病毒（Norovirus,NV）属的原型代表株。它是一组形态相似、抗原性略有不同的病毒颗粒。病毒性腹泻诊断临床意义诺如病毒诺如病毒l粪口途径传染，水源、食物污

13、染易导致爆发流行l潜伏期12天，症状持续12天，l恶心呕吐腹部痉挛性腹泻，普遍感到病情严重，一日内多次剧烈呕吐l预后良好l抗体没有免疫作用，可反复感染病毒性腹泻诊断临床意义诺如病毒诺如病毒诺如病毒最早是从1968年在美国诺瓦克市暴发的一次急性腹泻患者粪便中分离的病原。2002年8月第八届国际病毒命名委员会批准名称为诺如病毒，它与在日本发现的札幌样病毒，合称为人类杯状病毒。诺如病毒感染性腹泻在全世界范围内均有流行，全年均可发生感染，感染对象主要是成人和学龄儿童，寒冷季节呈现高发。美国每年在所有的非细菌性腹泻暴发中，60-90%是由诺如病毒引起。荷兰、英国、日本、澳大利亚等发达国家也都有类似结果。

14、在中国5岁以下腹泻儿童中，诺如病毒检出率为15%左右，血清抗体水平调查表明中国人群中诺如病毒的感染亦十分普遍。病毒性腹泻诊断临床意义诺如病毒诺如病毒“诺如病毒”感染性腹泻属于自限性疾病，没有疫苗和特效药物，公众搞好个人卫生、食品卫生和饮水卫生是预防本病的关键，要养成勤洗手、不喝生水、生熟食物分开，避免交叉污染等健康生活习惯。病毒性腹泻诊断临床意义诺如病毒诺如病毒诺如病毒遗传高度变异，在同一时期和同一社区内可能存在遗传特性不同的毒株流行。诺如病毒抗体没有显著的保护作用，尤其是没有长期免疫保护作用，极易造成反复感染。诺如病毒有许多共同特征：直径约为2635nm，无包膜，表面粗糙，球形，呈二十面体对

15、称；从急性胃肠炎病人的粪便中分离，不能在细胞或组织中培养，也没有合适的动物模型；基因组为单股正链RNA；在氯化铯密度梯度中的浮力密度为1.361.41g/cm3；电镜下缺乏显著的形态学特征，负染色电镜照片显示，NV是具有典型的羽状外缘，表面有凹痕的小圆状结构病毒。病毒性腹泻诊断临床意义诺如病毒诺如病毒诺如病毒基因组全长约7.7kb，包含3个开放阅读框（Openreaddingframes，ORFs）。ORF1编码非结构蛋白，包括RNA聚合酶（RNA-dependent RNA polymerase，RdRp）；ORF2和ORF3分别编码主要（VP1）和次要（VP2）衣壳蛋白。VP1蛋白结构上可

16、分为S和P区两个相邻的区域，其中S区形成内壳，构成VP1的底座；P区形成拱样结构突出于内壳外。P区可进一步分为P1和P2两个亚区，后者位于VP1的最外层，高度变异，目前认为是免疫识别和受体结合的关键部位。ORF1/ORF2的重组及P2区的变异大大丰富了NV的遗传多样性。根据VP1序列的同源性，诺如病毒可分为GIGV五个基因群（Genogroup），其中引起人类感染的主要是GI和GII群，基因群可进一步分为不同的基因型（Genotype）。自19951996年诺如病毒首次导致世界性大流行以来，GII群中的第4基因型GII.4，一直在世界范围内的流行中占据主导地位，且几乎每隔两、三年，GII.4便

17、会引发一次大范围流行，同时出现一种新的变异株。病毒性腹泻诊断临床意义诺如病毒诺如病毒传播途径诺如病毒感染性强，以肠道传播为主，可通过污染的水源、食物、物品、空气等传播，常在社区、学校、餐馆、医院、托儿所、孤老院及军队等处引起集体暴发。疾控专家称，病程为自限性，一般23天即可恢复。病毒性腹泻诊断临床意义诺如病毒诺如病毒感染者粪便和呕吐物中可以发现诺如病毒，可以通过几种方式感染诺如病毒：1、食用诺如病毒污染的食物或饮用诺如病毒污染的饮料；因为病毒很小，而且摄入不到100个病毒就能使人发病。接触诺如病毒污染的物体或表面，然后手接触到口。2、直接接触感染者，如照顾病人、与病人共餐或使用相同的餐具也可引

18、起传播。直接接触到感染者(如照顾病人，与病人同餐或使用相同的餐具)。3、食物可以被污染的手、呕吐物或粪便污染的物体表面直接污染，或者通过附近呕吐物细小飞沫污染。尽管病毒在人体外很难繁殖，但是一旦存在食品或水中，就能引起疾病。5 4、有些食品在送至饭店或商店前可能被污染。一些暴发是由于食用从污染的水中捕获的牡蛎。其它产品如色拉和冰冻水果也可能在来源地被污染。病毒性腹泻诊断临床意义诺如病毒诺如病毒“诺如病毒”感染性腹泻是一种急性肠道传染病，由“诺如病毒”引发，具有发病急、传播速度快、涉及范围广等特点，症状多表现为呕吐、腹泻。潜伏期多在2448h，最短12h，最长72h。感染者发病突然，主要症状为恶

19、心、呕吐、发热、腹痛和腹泻。儿童患者呕吐普遍，成人患者腹泻为多，24h内腹泻48次，粪便为稀水便或水样便，无黏液脓血。大便常规镜检WBC15，未见RBC。原发感染患者的呕吐症状明显多于续发感染者，有些感染者仅表现出呕吐症状。此外，也可见头痛、寒颤和肌肉痛等症状，严重者可出现脱水症状。病毒性腹泻诊断临床意义病毒性腹泻诊断临床意义 病毒性腹泻诊断临床意义星状病毒星状病毒l人星状病毒于1975年从腹泻婴儿粪便中分离得到，球形，直径28-35nm，无包膜，电镜下表面结构呈星形，有56个角。核酸为单正链RNA，7.0kb，两端为非编码区，中间有三个重叠的开放读码框架病毒性腹泻诊断临床意义星状病毒星状病毒

20、该病毒呈世界性分布，粪-口传播，是引起婴幼儿、老年人及免疫功能低下者急性病毒性肠炎的重要病原之一，其致病性已日益受到重视，人类感染腺病毒主要症状是严重腹泻，伴随发热、恶心、呕吐。本病为自愈性疾病，大部分患者在出现症状2-3天时，症状会逐渐减轻，但也有极少数症状加重，造成脱水。病毒性腹泻诊断临床意义预防目前使用的疫苗仅有用于预防鸡星状病毒疾病，为灭活苗。人类星状病毒疾病的疫苗至今没有研制成功。但加强锻炼有利于抵抗该类疾病。病毒性腹泻诊断临床意义星状病毒星状病毒l冬季多发l潜伏期34天，症状期35天l症状轻，少见脱水l与迁延性腹泻有关病毒性腹泻诊断临床意义为流行病学监测积累资料u在人群中的传播规律

21、，u为临床医生提供相对可靠的病原体感染谱，为经验性诊断和治疗提供科学依据u制定针对性的公共卫生应对策略：隔离传染源：切断传播途径：环境卫生，个人卫生，认真洗手等等 保护易感人群：疫苗 明确病因学诊断可以消除不必要的恐慌：尤其是暴发疫情病毒性腹泻诊断临床意义为科学研究提供可靠数据u科研需要大量的基础数据的支持，u临床和流行病学资料的积累，促进研究工作的深入开展u为提高医疗单位、相关科室的科研水平提供工具、方法学保证A.临床常见的病原学检测方法方法学方法学特点特点病毒分离培养技术特异性强、时间长、成本、技术要求高、敏感性不强电镜检测结果直观、准确，设备昂贵、专业性强、人员要求高、病毒滴度要求高不符

22、合常规临床检测 免疫学方法敏度高;特异性强;应用面广易于普及,试验结果显而易见;试验条个体要求低,缺点:操作步骤繁锁、自动化水平不高分子生物学方法灵敏度、准确性高，时间长设备和操作人员专业要求高、成本昂贵免疫学方法，因检测准确、速度快、应用面广得到临床门诊青睐！临床常见的病原学检测方法 免疫学方法分很多种，包括：酶联免疫检测、胶体金法、荧光免疫法。临床常见的病原学检测方法临床常见的病原学检测方法酶联免疫检测方法酶联免疫检测方法技术特点技术特点 技术特点是用酶来标记特定的抗体，在检测过程中，如果样本中有相应的病毒，带有酶标记的抗体就会与其结合，利用酶的催化作用，就可以检测出病毒。优缺点优缺点 酶

23、联免疫检测方法具有非常好的优点，灵敏度高，检测准确；缺点是操作相对复杂，一种试剂只能检测一种病毒，检测时间较长；尤其是对腹泻病毒的检测具有很大的缺点，因为，酶联免疫检测试剂一般一个检测板上有96个试剂位，而这96个试剂位不能独立使用，医院为了降低检测成本，一般都会积累样本到一定数量才进行项目检测，而对于腹泻病人来说，需要快速进行检测，因此，该方法不能够适应腹泻病毒快速检测的要求。临床常见的病原学检测方法胶体金方法胶体金方法技术特点技术特点：基于免疫金染色法技术开发的试剂盒技术特点是用特定直径的胶体金颗粒来标记病毒抗体，在检测过程中分，如果样本中有病毒，就会与金标记的抗体进行结合，使其分子大小和

24、分子量发生改变，同时颜色也会发生相应的变化，可以用肉眼观察来判断病毒类型。优缺点：优缺点：优点是简便，迅速；胶体金的技术缺点是自动化水平低，灵敏度相对较低，主要是肉眼判别检测结果，因此检测结果容易受到人为因素干扰，特别是低浓度样本更容易产生误判，同时结果稳定时间过短，假阳性率高。临床常见的病原学检测方法荧光免疫法荧光免疫法技术特点技术特点 ：利用免疫层析技术，采用双抗体夹心法检测腹泻病毒的抗原。当待测样本加入测试卡加样孔后，待测样本中病毒抗原与荧光标记的抗体形成反应复合物，在层析作用下，反应复合物沿硝酸纤维膜向前移动，分别被硝酸纤维膜检测区上预先包被的单克隆抗体捕获，在检测区上形成反应带，使用荧光免疫分析仪检测出反应线上的荧光值，当荧光值等于或高于检出限时，显示为阳性，当荧光值低于检出限时显示为阴性，从而实现检测病毒的目的。优缺点：优缺点：优点是半自动，简单、快速、多病毒联合检测；检测结果半定量，避免人为肉眼主观误读，稳定时间比胶体金多一倍；方便连接医院LIS、HIS系统。检测原理-双抗体夹心法荧光免疫法（双抗体夹心法）荧光免疫法（双抗体夹心法）临床常见的病原学检测方法 综合各种因素考虑，荧光免疫是目前临床快速诊断最佳技术。原因：多病毒联合检测、性价比最高，病因学覆盖面最广，结果准确，客观，避免肉眼主观读数，可以连接医院信息系统，极大方便医院信息共享。