PCR检验质量控制课件.ppt

1、PCR检验质量控制检验质量控制主讲人：姜锐主讲人：姜锐四个区域（试剂准备区、标本制备区、扩增区、产物分析区）必四个区域（试剂准备区、标本制备区、扩增区、产物分析区）必须是互相独立的须是互相独立的各区间不能直通，应有缓冲间各区间不能直通，应有缓冲间应有充分合理的空间、良好的照明、通风和空调设备应有充分合理的空间、良好的照明、通风和空调设备(不能使用不能使用中央空调中央空调)标本制备区有生物安全柜、冲眼器标本制备区有生物安全柜、冲眼器除移动紫外灯外，各工作区域内应有固定于房顶的紫外灯除移动紫外灯外，各工作区域内应有固定于房顶的紫外灯传递窗传递窗传递窗传递窗进入和使用实验室各区域应有明确的限制和控制

2、，防进入和使用实验室各区域应有明确的限制和控制，防止患者和其他非相关人员的随意进出止患者和其他非相关人员的随意进出 不同工作区域内的设备、物品不得混用不同工作区域内的设备、物品不得混用分析前分析前患者准备、标本（采集、运送、验收、保存）、医患者准备、标本（采集、运送、验收、保存）、医生报告单申请生报告单申请分析中分析中样本分样、仪器、核酸提取、核酸扩增、产物分析、样本分样、仪器、核酸提取、核酸扩增、产物分析、检测的有效性判断检测的有效性判断分析后分析后试验报告、报告传递、结果的接收、结果的审核、试验报告、报告传递、结果的接收、结果的审核、结果解释结果解释标本采集时间对扩增检测结果的影响标本采集

3、时间对扩增检测结果的影响标本的类型和采集量标本的类型和采集量采样及运输容器采样及运输容器采样质量的评价采样质量的评价标本采集中的防污染标本采集中的防污染1 1、血清（浆）血清（浆）：无特殊要求无特殊要求2、如用泌尿生殖道分泌物做、如用泌尿生殖道分泌物做CTCT项目：应在抗生素应用前或停药两项目：应在抗生素应用前或停药两周后采集标本，如不能停用抗生素，应于下次抗生素应用前采周后采集标本，如不能停用抗生素，应于下次抗生素应用前采集集3 3、如用、如用痰痰做做TBTB：应在抗结核药物应用前或停药两周后采集标本，：应在抗结核药物应用前或停药两周后采集标本，如不能停用抗结核药物，应于下次抗结核药物应用前

4、采集。如不能停用抗结核药物，应于下次抗结核药物应用前采集。标本的类型和采集量应根据所测病原体而定。标本的类型和采集量应根据所测病原体而定。血浆：血浆：HBV,HCVHBV,HCV全血：全血：EBEB生殖道分泌物：生殖道分泌物：CTCT痰液，肺泡灌洗液：痰液，肺泡灌洗液：TBTB采样所用的抗凝剂及相关试剂材料不应对核酸扩增及采样所用的抗凝剂及相关试剂材料不应对核酸扩增及检测过程造成干扰。如全血、骨髓和血浆标本，用检测过程造成干扰。如全血、骨髓和血浆标本，用EDTAEDTA抗凝，不使用肝素，因其是抗凝，不使用肝素，因其是 TaqTaq酶的强抑制剂，酶的强抑制剂，且在核酸提取过程中很难完全去除。且在

5、核酸提取过程中很难完全去除。使用玻璃器皿，必须为密闭的、必须经高压灭菌，使用玻璃器皿，必须为密闭的、必须经高压灭菌，以使可能存在的以使可能存在的RNaseRNase永久性失活。永久性失活。血液标本：溶血、严重脂血等应拒收血液标本：溶血、严重脂血等应拒收泌尿生殖道分泌物：镜下观察到上皮细胞存在。泌尿生殖道分泌物：镜下观察到上皮细胞存在。痰液：镜下观察上皮细胞很少，一般痰液：镜下观察上皮细胞很少，一般102525个。个。实验室应根据待测靶核酸的特性，对各种临床标本的运送条件实验室应根据待测靶核酸的特性，对各种临床标本的运送条件（温度、时间）作出相应规定。（温度、时间）作出相应规定。靶核酸为靶核酸为

6、DNADNA的标本，如在无菌条件下，则可以在室温下运送，的标本，如在无菌条件下，则可以在室温下运送，建议采集后建议采集后8h8h之内送至实验室；之内送至实验室；靶核酸为靶核酸为RNARNA的标本，如在无菌条件下，可在室温下运送，如为的标本，如在无菌条件下，可在室温下运送，如为较长时间，则应在加冰条件下运送，建议采集后较长时间，则应在加冰条件下运送，建议采集后4h4h之内送至实验之内送至实验室；室；所有标本采集后送至实验室之前，所有临床标本在采集后送至所有标本采集后送至实验室之前，所有临床标本在采集后送至实验室前，均应放实验室前，均应放2 288临时保存。临时保存。淋病奈瑟菌有自溶的特性，标本采

7、集后应立即送检。淋病奈瑟菌有自溶的特性，标本采集后应立即送检。靶核酸靶核酸(尤其是尤其是RNA)RNA)易受核酸酶的作用而迅速降解，因此标本易受核酸酶的作用而迅速降解，因此标本的保存对于核酸扩增测定的有效性极为重要（避免反复冻融）的保存对于核酸扩增测定的有效性极为重要（避免反复冻融）靶核酸为靶核酸为DNADNA的标本的标本2-82-8保存保存1-31-3天，天，靶核酸为靶核酸为R RNANA的标本应的标本应2020下保存下保存2020下保存下保存1 1个月个月7070以下可长期保存以下可长期保存如为提取核酸后用于如为提取核酸后用于DNADNA扩增分析的样本，可于扩增分析的样本，可于TETE缓冲

8、液缓冲液2-2-88下保存。下保存。用于用于RNARNA扩增分析的样本，则应于上述扩增分析的样本，则应于上述 TETE缓冲液中缓冲液中-70-70保存。保存。标本接收建议在三个测定区之外标本接收建议在三个测定区之外接收的标本应收集在原始容器中，不能接受从接收的标本应收集在原始容器中，不能接受从其他检测如生化、免疫检验等分出来的标本，其他检测如生化、免疫检验等分出来的标本，因其有较大的发生标本间污染的可能性因其有较大的发生标本间污染的可能性 血清（浆）：血清（浆）：应应1 1小时内分离血清，抗凝后小时内分离血清，抗凝后4 4小时内分离血浆，然后转移至小时内分离血浆，然后转移至1.5ml1.5ml

9、灭菌离心灭菌离心管中保存。若血清分离不充分，可管中保存。若血清分离不充分，可1500rpm1500rpm离心离心5min 5min。如甘油三酯含量超过如甘油三酯含量超过6mmol/L6mmol/L或肉眼可见血清或肉眼可见血清/血浆呈白色浑浊状的标本，应血浆呈白色浑浊状的标本，应413 000rpm413 000rpm离心离心15min,15min,吸取下层清亮血清或血浆转移至吸取下层清亮血清或血浆转移至1.5ml1.5ml灭菌离心管灭菌离心管中保存中保存 泌尿生殖道分泌物泌尿生殖道分泌物一次性采样管（含保养液）一次性采样管（含保养液）配套棉拭子（不含保养液）配套棉拭子（不含保养液）痰液痰液结核

10、分枝杆菌结核分枝杆菌DNADNA检测标本：用检测标本：用4%NaOH4%NaOH摇匀，室温下放置摇匀，室温下放置3030分钟左右液化，分钟左右液化，转移至转移至1.5ml1.5ml灭菌离心管，离心，去上清，留沉淀用于核酸提取。需注意的灭菌离心管，离心，去上清，留沉淀用于核酸提取。需注意的是液化时不能加热，液化时间不能过长。是液化时不能加热，液化时间不能过长。非结核分枝杆菌非结核分枝杆菌DNADNA检测标本：痰标本在室温悬浮于灭菌生理盐水中，充分检测标本：痰标本在室温悬浮于灭菌生理盐水中，充分震荡混匀，促使大块黏状物下沉，取上清离心，去上清，留沉淀用于核酸提震荡混匀，促使大块黏状物下沉，取上清离

11、心，去上清，留沉淀用于核酸提取。取。切记不能用切记不能用NaOHNaOH液化痰标本液化痰标本。分册建立仪器档案分册建立仪器档案定期维护保养定期维护保养定期校准或检定（校准周期、校准单位、校准定期校准或检定（校准周期、校准单位、校准参数、合格的校准报告）参数、合格的校准报告）使用前后清洁：使用前后清洁：75%75%乙醇擦拭乙醇擦拭,不得用次氯酸钠不得用次氯酸钠溶液清洁，使用前后紫外线照射溶液清洁，使用前后紫外线照射耗材耗材 ：带滤芯或者高压灭菌吸头，带滤芯或者高压灭菌吸头，EPEP管管试剂盒的质检：试剂盒的质检：包括外观质检和性能质检包括外观质检和性能质检 选择或更换试剂品牌：试剂性能评估选择或

12、更换试剂品牌：试剂性能评估 更换试剂批号：评价核酸提取效率和扩增效率更换试剂批号：评价核酸提取效率和扩增效率设置空白对照、阴性对照、低值阳性对照设置空白对照、阴性对照、低值阳性对照试剂不合格试剂不合格 1)1)低值阳性对照和标准品均未检出，或低值阳性对照未检出而标低值阳性对照和标准品均未检出，或低值阳性对照未检出而标准品检出率大幅下降，表示试剂失效或检测灵敏度大幅下降。准品检出率大幅下降，表示试剂失效或检测灵敏度大幅下降。2)2)低值阳性对照未检出，标准品检测正常，提示样品提取液存在低值阳性对照未检出，标准品检测正常，提示样品提取液存在问题。重复新旧提取液阳性对照实验，确定提取液失效问题。问题

13、。重复新旧提取液阳性对照实验，确定提取液失效问题。3)3)阴性对照有扩增，排除其他污染可能性后，提取液存在污染阴性对照有扩增，排除其他污染可能性后，提取液存在污染可能。可能。4)4)低值阳性对照检出，标准品未检出或扩增曲线明显系统性低值阳性对照检出，标准品未检出或扩增曲线明显系统性CTCT值值偏大偏大5 5个循环以上，提示阳性标准品存在问题。个循环以上，提示阳性标准品存在问题。试剂合格试剂合格 阴性对照无扩增、低值阳性质控品检出阴性对照无扩增、低值阳性质控品检出来源来源:第三方、试剂盒自带、自备第三方、试剂盒自带、自备使用使用:1)1)冻干质控品复溶时，要确保所用溶剂的质量；当溶冻干质控品复溶

14、时，要确保所用溶剂的质量；当溶剂为焦碳酸二乙酯（剂为焦碳酸二乙酯（DEPCDEPC）水时，在操作中应尽量在）水时，在操作中应尽量在通风的条件下进行，并避免接触皮肤。因通风的条件下进行，并避免接触皮肤。因DEPCDEPC是一种是一种潜在的致癌物质潜在的致癌物质.它可灭活各种蛋白质，是它可灭活各种蛋白质，是RNARNA酶的强酶的强抑制物。抑制物。2)2)冻干质控品复溶时，所加溶剂的量要准确冻干质控品复溶时，所加溶剂的量要准确 3)3)冻干质控品复溶时应轻轻摇匀，切忌剧烈振摇冻干质控品复溶时应轻轻摇匀，切忌剧烈振摇 定性检测定性检测已知弱阳性质控样本（基质与待测标本相同）：至少带已知弱阳性质控样本（

15、基质与待测标本相同）：至少带1 1份，监测核酸提取和份，监测核酸提取和扩增检测的有效性扩增检测的有效性已知阴性质控样本（基质与待测标本相同）：至少带已知阴性质控样本（基质与待测标本相同）：至少带1 1份，判断核酸提取过程份，判断核酸提取过程中是否发生污染中是否发生污染(实验室的以前扩增产物的污染、标本间的交叉污染、强阳性实验室的以前扩增产物的污染、标本间的交叉污染、强阳性标本气溶胶经加样器导致污染、强阳性标本经操作者手导致污染标本气溶胶经加样器导致污染、强阳性标本经操作者手导致污染 翻盖离心管翻盖离心管在较高温度温育时盖子崩开、扩增反应试剂的污染在较高温度温育时盖子崩开、扩增反应试剂的污染 定

16、量检测定量检测已知高、中、低质控品（基质与待测标本相同）已知高、中、低质控品（基质与待测标本相同）已知阴性质控样本（基质与待测标本相同）已知阴性质控样本（基质与待测标本相同）室内质控品在扩增仪中的排列顺序：不宜固定位置室内质控品在扩增仪中的排列顺序：不宜固定位置,尽尽可能监测每一个孔扩增有效性可能监测每一个孔扩增有效性板上杂交和膜上斑点印迹杂交的质控：在板上杂交和板上杂交和膜上斑点印迹杂交的质控：在板上杂交和斑点杂交时，阳性和阴性质控应该在同一板或膜上与斑点杂交时，阳性和阴性质控应该在同一板或膜上与病人标本平行进行分析，这可排除不同反应中因使用病人标本平行进行分析，这可排除不同反应中因使用不同

17、杂交条件所致的对结果的错误解释。不同杂交条件所致的对结果的错误解释。暂定均值的建立：暂定均值的建立：20d20d内得到内得到2020个数值，或至少在个数值，或至少在5d5d内，每天作内，每天作不少于不少于4 4次重复检测获得次重复检测获得2020个数值。对数据进行离群值检验（剔个数值。对数据进行离群值检验（剔除超过除超过3s3s外的数据），计算出均值，作为暂定均值。外的数据），计算出均值，作为暂定均值。若使用定值质控品，均值必须在实验室内使用自己现行的测定若使用定值质控品，均值必须在实验室内使用自己现行的测定方法进行确定，质控品说明书上的原有标定值只能作参考。方法进行确定，质控品说明书上的原有

18、标定值只能作参考。常规均值的建立：以最初常规均值的建立：以最初2020个数据和三至五个月在控数据汇集个数据和三至五个月在控数据汇集的所有数据计算的累积平均数作为质控品有效期内的常规均值，的所有数据计算的累积平均数作为质控品有效期内的常规均值，并以此作为以后室内质控图的均值。并以此作为以后室内质控图的均值。符符 号号 定定 义义1 12S2S 一个质控测定值超出一个质控测定值超出2s2s控制限。控制限。1 13S3S 一个质控测定值超出一个质控测定值超出3s3s控制限。控制限。2 22S2S 两个连续的质控测定值同时超出两个连续的质控测定值同时超出+2s+2s或或2s2s控制限。控制限。R R4

19、S4S 同一批测定中，两个不同浓度质控物的测定值之间同一批测定中，两个不同浓度质控物的测定值之间 的差值超出的差值超出4s4s控制限。控制限。4 41S1S 四个连续的质控测定值同时超出四个连续的质控测定值同时超出+1s+1s或或1s1s控制限。控制限。1010X X 十个连续的质控测定值同时处于均值的同一侧。十个连续的质控测定值同时处于均值的同一侧。Levey-JenningsLevey-Jennings质控图方法质控图方法 Levey-JenningsLevey-Jennings质控图结合质控图结合WestgardWestgard多规则质控方法多规则质控方法 根据常规条件下的变异（根据常规

20、条件下的变异（RCVRCV）计算中的平均值和）计算中的平均值和SDSD确确定质控线，一般以定质控线，一般以X X2S2S为告警限，为告警限，X X3S3S为失控限，将为失控限，将所得质控结果标在一张质控图上，简单明了。但如果以所得质控结果标在一张质控图上，简单明了。但如果以X X2S2S为失控限，假失控概率太高，通常不能接受；以为失控限，假失控概率太高，通常不能接受；以X X3S3S为失控限假失控概率低，但误差检出能力不强。为失控限假失控概率低，但误差检出能力不强。x l l 。XXX10X10核酸提取中的随机误差。如核酸提取中的丢失、有机溶剂核酸提取中的随机误差。如核酸提取中的丢失、有机溶剂

21、的去除不彻底、标本中扩增抑制物的残留等。的去除不彻底、标本中扩增抑制物的残留等。仪器的问题。如扩增仪孔间温度的不均一性、孔内温度与仪器的问题。如扩增仪孔间温度的不均一性、孔内温度与所示温度的不一致性等。所示温度的不一致性等。试剂的问题。如试剂的问题。如TaqTaq酶和酶和/或逆转录酶的失活、探针的纯度或逆转录酶的失活、探针的纯度及标记效率和核酸提取试剂的效率等。及标记效率和核酸提取试剂的效率等。扩增产物的扩增产物的“污染污染”临床标本的核酸提取过程中发生的标本间的交叉临床标本的核酸提取过程中发生的标本间的交叉 “污染污染”.严格的实验室分区严格的实验室分区使用带使用带“滤芯滤芯”的吸头的吸头设

22、立设立“阴性阴性”质控（与标本同时处理）质控（与标本同时处理）使用防使用防“污染污染”（含（含UNGUNG）的）的PCRPCR试剂试剂临床临床“假阳性假阳性”问题：病原微生物如结核杆菌经药物治疗问题：病原微生物如结核杆菌经药物治疗后已死亡，但后已死亡，但PCRPCR仍可为阳性，故治疗结束后至少两周内不仍可为阳性，故治疗结束后至少两周内不宜做宜做PCRPCR检测。检测。避免由于来自于标本的血红蛋白、肝素、某些激素或来避免由于来自于标本的血红蛋白、肝素、某些激素或来自标本处理中的去垢剂、有机溶剂的抑制作用的措施：自标本处理中的去垢剂、有机溶剂的抑制作用的措施：纯化核酸；标本重复双份测定；稀释标本纯

23、化核酸；标本重复双份测定；稀释标本定期对扩增仪的温度控制和加热模块中热传导的一致性定期对扩增仪的温度控制和加热模块中热传导的一致性进行检查和校准进行检查和校准在在PCRPCR试剂准备区配置反应混合液试剂准备区配置反应混合液配制反应体系时，应注意移液器的使用方法，所有的液体都要缓慢加至管底，配制反应体系时，应注意移液器的使用方法，所有的液体都要缓慢加至管底，不要加至管壁，所有液体的混匀要用振荡器进行，不能用移液器吹打，反应不要加至管壁，所有液体的混匀要用振荡器进行，不能用移液器吹打，反应体系配制完毕后低速离心数秒，避免产生气泡体系配制完毕后低速离心数秒，避免产生气泡分装的试剂注意冷藏，防止酶试剂

24、失活及有机大分子降解分装的试剂注意冷藏，防止酶试剂失活及有机大分子降解优先选择含优先选择含UNGUNG的试剂盒的试剂盒试剂经充分溶解后混匀，离心后再开盖，保持试剂均匀性试剂经充分溶解后混匀，离心后再开盖，保持试剂均匀性扩增管、样品处理管及吸头等实验用品，均需高压灭菌扩增管、样品处理管及吸头等实验用品，均需高压灭菌标本处理应在标本制备区指定的生物安全柜内进行，实验前应打开风机标本处理应在标本制备区指定的生物安全柜内进行，实验前应打开风机5-5-10min10min，待柜内空气净化并气流稳定后再进行实验操作，待柜内空气净化并气流稳定后再进行实验操作为防止标本间交叉污染，在打开离心管前宜短暂离心为防

25、止标本间交叉污染，在打开离心管前宜短暂离心如遇吸弃上清步骤的提取方法，离心时应注意离心管的方向，吸弃上清如遇吸弃上清步骤的提取方法，离心时应注意离心管的方向，吸弃上清时不要碰到沉淀部分，以免造成提取效率降低。时不要碰到沉淀部分，以免造成提取效率降低。标本处理严格按照试剂说明书进行操作，应做到处理时间充分，保证标标本处理严格按照试剂说明书进行操作，应做到处理时间充分，保证标本中的本中的DNADNA或或RNARNA完全释放；完全释放；将提取的核酸加到反应体系中后，应将纯化好的剩余核酸样本冻存，以将提取的核酸加到反应体系中后，应将纯化好的剩余核酸样本冻存，以免在扩增检测时出现意外需要重新检测。在结果

26、确定后再将这些样本按免在扩增检测时出现意外需要重新检测。在结果确定后再将这些样本按生物污染废弃物进行处理。生物污染废弃物进行处理。扩增条件一致的不同检测项目同时扩增时不得使用同一套标准品。扩增条件一致的不同检测项目同时扩增时不得使用同一套标准品。扩增后的扩增管不能在扩增及产物分析区打开处理，应用一次性手套包扩增后的扩增管不能在扩增及产物分析区打开处理，应用一次性手套包好远离好远离PCRPCR实验室的洗涤间消毒处理；实验室的洗涤间消毒处理；工作结束后，必须立即对各工作区进行清洁工作结束后，必须立即对各工作区进行清洁在判断结果时，应先对扩增的荧光信号作出定性判断，然后再在判断结果时，应先对扩增的荧

27、光信号作出定性判断，然后再进行定量分析，避免一些非特异荧光信号对结果分析的干扰。进行定量分析，避免一些非特异荧光信号对结果分析的干扰。基线值（阈值）设定：遵从厂商规定基线值（阈值）设定：遵从厂商规定在阴性对照线上在阴性对照线上 与所有扩增曲线相交与所有扩增曲线相交相交点在曲线的平滑区相交点在曲线的平滑区 标准曲线平滑均匀，斜率、截距和相关系数等参数的数值标准曲线平滑均匀，斜率、截距和相关系数等参数的数值允许变化范围均应在试剂制造商推荐的范围内。允许变化范围均应在试剂制造商推荐的范围内。阴、阳室内质控检测结果均处于在控状态。阴、阳室内质控检测结果均处于在控状态。以上几项标准均达到要求后，当日实验

28、有效，可以发以上几项标准均达到要求后，当日实验有效，可以发放报告。否则，本次实验无效，全部标本应重新检测。放报告。否则，本次实验无效，全部标本应重新检测。定性测定中处于实验灰区的标本应重复检测一次，定性测定中处于实验灰区的标本应重复检测一次，灰区范围的确定及结果报告应遵从各试剂制造商灰区范围的确定及结果报告应遵从各试剂制造商推荐的要求。推荐的要求。CTCT：38Ct38Ct值值4040为检测灰区，建议重复检测为检测灰区，建议重复检测2 2次。如果检次。如果检测结果至少测结果至少1 1次为次为Ct40Ct40判断为阳性，否则判为阴性。判断为阳性，否则判为阴性。定性检测定性检测 定性检测的结果报定

29、性检测的结果报“阴性阴性”或或“阳性阳性”。但由于目。但由于目前国内商品试剂盒的灵敏度多为前国内商品试剂盒的灵敏度多为500-1000IU/ml500-1000IU/ml，在报告结果，在报告结果时应告知临床医生方法的局限性。时应告知临床医生方法的局限性。定量检测定量检测 1 1）结果在检测范围内，则按检测的结果直接发报告。）结果在检测范围内，则按检测的结果直接发报告。2 2）样本未出现扩增曲线，则报告为）样本未出现扩增曲线，则报告为“低于检测下限低于检测下限”，不能，不能报告为报告为“0 0”或或“阴性阴性”。如果低于检测下限，但又有扩增曲。如果低于检测下限，但又有扩增曲线，则应重新检测，仍低

30、于检测下限，则报告为线，则应重新检测，仍低于检测下限，则报告为“低于检测低于检测下限下限”。3 3）结果高于检测上限，则报告）结果高于检测上限，则报告“高于检测上限高于检测上限”，如果需要，如果需要精确定量结果，则应用阴性血清（浆）将样本进行精确定量结果，则应用阴性血清（浆）将样本进行100-1000100-1000倍稀释后再重新进行检测，结果乘上稀释倍数；或将提取后倍稀释后再重新进行检测，结果乘上稀释倍数；或将提取后的样品稀释至线性范围内再检测。的样品稀释至线性范围内再检测。临床可以肺结核患者痰涂片阴性，而临床可以肺结核患者痰涂片阴性，而TBTB菌菌PCRPCR阳性或时阴时阳，阳性或时阴时阳

31、，可能患者为初起病间断排菌且排菌量不大所致；或经抗结核可能患者为初起病间断排菌且排菌量不大所致；或经抗结核治疗后，常有矛盾报告治疗后，常有矛盾报告 培养（培养（-）、）、PCRPCR（+）较多）较多，因为只，因为只要有要有TBTB靶片段存在，靶片段存在，PCRPCR即可阳性，而测得阳性，不一定有活即可阳性，而测得阳性，不一定有活菌，加之病情与菌量不一定成正比。菌，加之病情与菌量不一定成正比。HBVHBV（及（及HCVHCV）感染在抗病毒治疗过程中，可出现）感染在抗病毒治疗过程中，可出现HBV-DNA(HBV-DNA(及及HCV-RNA)HCV-RNA)阴转情况，有时停药后又转阳。药物是否能彻底清阴转情况，有时停药后又转阳。药物是否能彻底清除病毒还要根据肝脏酶学、病毒血清学标志物及核酸结果综除病毒还要根据肝脏酶学、病毒血清学标志物及核酸结果综合考虑，仅有核酸阴转而其他指标不改变并不能证明临床痊合考虑，仅有核酸阴转而其他指标不改变并不能证明临床痊愈。愈。另外，另外，PCRPCR检测结果阴性并不能排除样本含有病原体，只能说检测结果阴性并不能排除样本含有病原体，只能说明含有的病原体浓度低于本试剂的检测下限明含有的病原体浓度低于本试剂的检测下限