结核病实验室检测诊断技术课件.pptx

1、阳性检出率阳性检出率标本及性状标本及性状液基法直涂法直涂法754份痰标本份痰标本23.50%16.80%脓性痰脓性痰47.50%40.90%非脓性痰非脓性痰13.50%4.66%即时痰即时痰20.48%15.06%夜间痰夜间痰25.6%17.01%杂交杂交PCRDNA提取提取MIX制备制备痰液前处理痰液前处理HAIN和目前常规药敏方法比较但是每年一次的仪器校准对于基层实验室是个挑战，不过已经大量开展能否在基层实验室应用的验证了。试剂加入去污处理的痰标本中。MTB/RIF优点：简单、安全荧光染色液有致癌作用，推荐自动染色机。寿命长（15-20,000小时）适合县、乡级基层实验室使用。室温下手工晃

2、动密闭痰盒，15分钟内2次，然后取2ml灭活后的物质加入检测盒(其内含相当于0.Kat基因、inhA基因突变位点有：2个、4个以培养方法作金标准，该方法可以检测出97%以上的肺结核患者，包括90%的涂阴病人。标本处理简单，操作方便，检测全自动，2小时内出结果，机器判读，结果精确，减少核酸污染。通过特定的仪器比如激光共聚焦扫描或电荷偶联摄影像机（CCD）对杂交信号的强度进行快速、并行、高效地检测分析，从而判断样品中靶分子的数量。MTB/RIF优点：简单、安全MTB/RIF检测系统直接输出电子结果。尽管基金会试图通过谈判降低价格和低检测费用，但仍会比显微镜价格要高，但比培养和药敏检测仪器要便宜。丙

3、烯酰胺凝胶、尼龙膜等载体）的表面，组成密集二rpoB基因突变位点有：4个4、目前，利福平（rpoB基因）、异烟肼（Kat基因、inhA基因）耐药的诊断寿命长（15-20,000小时）试剂分别按2:1和3:1加入未经处理的痰标本和去污处理的痰标本中。比较项目比较项目HAIN常规药敏方法常规药敏方法时间时间1-2天天2-3个月个月生物安全级别要求生物安全级别要求较低较低二级实验室二级实验室人员培训人员培训2-3天天2-3个月个月操作简易程度操作简易程度简单简单复杂复杂仪器设备仪器设备性价比较高性价比较高-对环境洁净度要求对环境洁净度要求较高，易出现较高，易出现假阳性假阳性较高较高基因芯片n将核酸片

4、段有序地固化于支持物（如玻片、硅片、聚n丙烯酰胺凝胶、尼龙膜等载体）的表面，组成密集二n维分子排列。n采用光导原位合成或微量点样等方法。n然后与已标记的待测生物样品中靶分子杂交。n通过特定的仪器比如激光共聚焦扫描或电荷偶联摄影像机（CCD）对杂交信号的强度进行快速、并行、高效地检测分析，从而判断样品中靶分子的数量。n，耐药检测基因芯片基因芯片是基于特定基因位点突变与耐药性的相关性，通过PCR扩增和核酸杂交技术，检测荧光信号的有无，判断特定位点的突变情况和细菌耐药性的检测方法。rpoB/katG/inhA的基因突变，快速检测分离株或者痰样本中结核杆菌耐药性（利福平、异烟肼）。nrpoB基因突变位

5、点：13个位点。nkatG基因突变位点：2个位点。n/inhA基因突变位点：2个突变位点。耐药分子诊断的基本原理视野比普通的显微镜大大2-4倍基因芯片是基于特定基因位点突变与耐药性的相关性，通过PCR扩增和核酸杂交技术，检测荧光信号的有无，判断特定位点的突变情况和细菌耐药性的检测方法。MTB/RIF检测系统直接输出电子结果。将核酸片段有序地固化于支持物（如玻片、硅片、聚基因芯片是基于特定基因位点突变与耐药性的相关性，通过PCR扩增和核酸杂交技术，检测荧光信号的有无，判断特定位点的突变情况和细菌耐药性的检测方法。不需要加热玻片，步骤简单发光二极管荧光显微镜（LED）尽管基金会试图通过谈判降低价格

6、和低检测费用，但仍会比显微镜价格要高，但比培养和药敏检测仪器要便宜。四、GENECHIP基因芯片耐多药检测技术采用光导原位合成或微量点样等方法。结核分枝杆菌耐药检测基因芯片基于rpoB/katG/inhA的基因突变，快速检测分离株或者痰样本中结核杆菌耐药性（利福平、异烟肼）。3、二线抗结核药物耐药的诊断视野比普通的显微镜大大2-4倍寿命长（15-20,000小时）原理：基于分子生物学扩增技术。rpoB基因突变位点：13个位点。rpoB基因突变位点：13个位点。将核酸片段有序地固化于支持物（如玻片、硅片、聚发光二极管荧光显微镜（LED）rpoB基因突变位点有：4个处理后痰标本沉淀 ：95C孵育-

7、超声裂解-取上清液用于PCR扩增。3、二线抗结核药物耐药的诊断室温下手工晃动密闭痰盒，15分钟内2次，然后取2ml灭活后的物质加入检测盒(其内含相当于0.通过特定的仪器比如激光共聚焦扫描或电荷偶联摄影像机（CCD）对杂交信号的强度进行快速、并行、高效地检测分析，从而判断样品中靶分子的数量。然后与已标记的待测生物样品中靶分子杂交。去污染前处理液：氢氧化钠+柠檬酸三钠+N-乙酰半胱氨酸。耐药分子诊断的基本原理rpoB基因突变位点：13个位点。需加强操作人员的培训和质量控制。基因芯片是基于特定基因位点突变与耐药性的相关性，通过PCR扩增和核酸杂交技术，检测荧光信号的有无，判断特定位点的突变情况和细菌

8、耐药性的检测方法。3、利福平和异烟肼耐药检测。所需仪器设备：普通的抗酸染色液、彭氏杯（专利）、涂片机、KP21型快速干片机、抗酸杆菌自动阅片计算机报告系统。一、发光二极管荧光显微镜（LED）方法采用光导原位合成或微量点样等方法。室温下手工晃动密闭痰盒，15分钟内2次，然后取2ml灭活后的物质加入检测盒(其内含相当于0.适合县、乡级基层实验室使用。katG基因突变位点：2个位点。3、二线抗结核药物耐药的诊断成本低廉，价格低于现有的光学显微镜。处理后痰标本沉淀 ：95C孵育-超声裂解-取上清液用于PCR扩增。灵敏度特异度培阳97.60%-涂阳培阳99.80%-涂阴培阳90.20%-检测一份标本72

9、.50%99.20%检测两份标本85.10%98.60%检测三份标本90.20%98.10%检测HIV合并感染93.90%-检测HIVTB98.40%-与HAIN比较无差异无差异与PCR比较高无差异灵敏度特异度211例利福平耐药99.10%506例利福平敏感100%基因芯片n将核酸片段有序地固化于支持物（如玻片、硅片、聚n丙烯酰胺凝胶、尼龙膜等载体）的表面，组成密集二n维分子排列。n采用光导原位合成或微量点样等方法。n然后与已标记的待测生物样品中靶分子杂交。n通过特定的仪器比如激光共聚焦扫描或电荷偶联摄影像机（CCD）对杂交信号的强度进行快速、并行、高效地检测分析，从而判断样品中靶分子的数量。

10、n，耐药检测基因芯片基因芯片是基于特定基因位点突变与耐药性的相关性，通过PCR扩增和核酸杂交技术，检测荧光信号的有无，判断特定位点的突变情况和细菌耐药性的检测方法。rpoB/katG/inhA的基因突变，快速检测分离株或者痰样本中结核杆菌耐药性（利福平、异烟肼）。nrpoB基因突变位点：13个位点。nkatG基因突变位点：2个位点。n/inhA基因突变位点：2个突变位点。发光二极管荧光显微镜（LED）耐药分子诊断的基本原理3、利福平和异烟肼耐药检测。MTB/RIF优点：简单、安全重大专项：泰兴、江阴地区部分实验结果比较4、目前，利福平（rpoB基因）、异烟肼（Kat基因、inhA基因）耐药的诊

11、断MTB/RIF优点：简单、安全基因芯片是基于特定基因位点突变与耐药性的相关性，通过PCR扩增和核酸杂交技术，检测荧光信号的有无，判断特定位点的突变情况和细菌耐药性的检测方法。处理后痰标本沉淀 ：95C孵育-超声裂解-取上清液用于PCR扩增。需加强操作人员的培训和质量控制。三、线性探针耐多药检测方法（HAIN）需加强操作人员的培训和质量控制。寿命长（15-20,000小时）HAIN和目前常规药敏方法比较技术尖端，生产费用较高。4、目前，利福平（rpoB基因）、异烟肼（Kat基因、inhA基因）耐药的诊断重大专项：泰兴、江阴地区部分实验结果比较痰标本的前处理：同前方法。处理后痰标本沉淀 ：95C

12、孵育-超声裂解-取上清液用于PCR扩增。寿命长（15-20,000小时）通过特定的仪器比如激光共聚焦扫描或电荷偶联摄影像机（CCD）对杂交信号的强度进行快速、并行、高效地检测分析，从而判断样品中靶分子的数量。试剂分别按2:1和3:1加入未经处理的痰标本和去污处理的痰标本中。需加强操作人员的培训和质量控制。以培养方法作金标准，该方法可以检测出97%以上的肺结核患者，包括90%的涂阴病人。MTB/RIF检测系统直接输出电子结果。7ml未处理痰液或0.原理：多重PCR扩增和反向杂交来识别。去污染前处理液：氢氧化钠+柠檬酸三钠+N-乙酰半胱氨酸。丙烯酰胺凝胶、尼龙膜等载体）的表面，组成密集二基因芯片是

13、基于特定基因位点突变与耐药性的相关性，通过PCR扩增和核酸杂交技术，检测荧光信号的有无，判断特定位点的突变情况和细菌耐药性的检测方法。MTB/RIF优点：简单、安全需加强操作人员的培训和质量控制。基因芯片耐多药检测试剂已获得欧盟体外诊断试剂证书（CE-IVD）。发光二极管荧光显微镜（LED）3、二线抗结核药物耐药的诊断试剂加入去污处理的痰标本中。尽管基金会试图通过谈判降低价格和低检测费用，但仍会比显微镜价格要高，但比培养和药敏检测仪器要便宜。视野比普通的显微镜大大2-4倍rpoB基因突变位点：13个位点。寿命长（15-20,000小时）4、目前，利福平（rpoB基因）、异烟肼（Kat基因、in

14、hA基因）耐药的诊断重大专项：泰兴、江阴地区部分实验结果比较将核酸片段有序地固化于支持物（如玻片、硅片、聚采用光导原位合成或微量点样等方法。阳性培养物经MPT64抗原检测以确定其是否属于结核分枝杆菌菌属。原理：基于分子生物学扩增技术。发光二极管荧光显微镜（LED）痰标本消化灭活 基片的夹层杯基因芯片是基于特定基因位点突变与耐药性的相关性，通过PCR扩增和核酸杂交技术，检测荧光信号的有无，判断特定位点的突变情况和细菌耐药性的检测方法。基因芯片耐多药检测试剂已获得欧盟体外诊断试剂证书（CE-IVD）。寿命长（15-20,000小时）寿命长（15-20,000小时）将核酸片段有序地固化于支持物（如玻

15、片、硅片、聚视野比普通的显微镜大大2-4倍处理后痰标本沉淀 ：95C孵育-超声裂解-取上清液用于PCR扩增。试剂加入去污处理的痰标本中。视野比普通的显微镜大大2-4倍所需仪器设备：生安柜、超声振荡仪、PCR扩增仪、可调温振荡仪原理：多重PCR扩增和反向杂交来识别。重大专项：泰兴、江阴地区部分实验结果比较基因芯片耐多药检测试剂已获得欧盟体外诊断试剂证书（CE-IVD）。寿命长（15-20,000小时）基层实验室人员培训、温度控制、电力保障、是否到位。痰标本的前处理：同前方法。处理后痰标本沉淀 ：95C孵育-超声裂解-取上清液用于PCR扩增。适合县、乡级基层实验室使用。镜检 自动阅片计算机报告系统

16、。采用光导原位合成或微量点样等方法。适合县、乡级基层实验室使用。HAIN和目前常规药敏方法比较尽管基金会试图通过谈判降低价格和低检测费用，但仍会比显微镜价格要高，但比培养和药敏检测仪器要便宜。需加强操作人员的培训和质量控制。HAIN和目前常规药敏方法比较痰标本的前处理：同前方法。可以在2小时出报告结果。痰标本的前处理：同前方法。丙烯酰胺凝胶、尼龙膜等载体）的表面，组成密集二试剂分别按2:1和3:1加入未经处理的痰标本和去污处理的痰标本中。通过特定的仪器比如激光共聚焦扫描或电荷偶联摄影像机（CCD）对杂交信号的强度进行快速、并行、高效地检测分析，从而判断样品中靶分子的数量。寿命长（15-20,000小时）处理后痰标本沉淀 ：95C孵育-超声裂解-取上清液用于PCR扩增。然后与已标记的待测生物样品中靶分子杂交。室温下手工晃动密闭痰盒，15分钟内2次，然后取2ml灭活后的物质加入检测盒(其内含相当于0.灵敏度特异度211例利福平耐药99.10%506例利福平敏感100%