便潜血的临床应用2王大光课件.ppt

1、血红蛋白与转铁蛋白检测消化道出血的临床应用卫生部北京医院检验科王大光消化道简介 从食管到直肠称为人体的消化道。以十二指肠和空肠的交点为界，上面为上消化道，下面为下消化道。大肠为最常见肿瘤发生部位。大肠癌可以预防的杀手 世界上最普通的癌症之一(National Cancer Institute)美国：所有癌症中发病率占第四位 （仅次于肺癌、前列腺癌和乳腺癌）在所有癌症导致死亡率中占第二位 （仅次于肺癌）大肠癌可以预防的杀手 美国美国 2011:新增病例 101340（结肠癌)39870(直肠癌)死亡病例 49380（直结肠癌）2001：新增病例 130000（直结肠癌)死亡病例 56500（直结

2、肠癌）大肠癌可以预防的杀手 大肠癌是我国高发恶性肿瘤之一。早期阶段检出并予以干预治疗，将可大大减少该病的发病率和病死率。Who is at risk of developing colorectal cancer?u年龄u息肉u个人病史u家族直结肠癌史u溃疡性结肠炎u饮食习惯u生活习惯u吸烟便潜血检测：便潜血检测：化学法单克隆金标免疫法最常用的方法：最常用的方法：金标试纸条快速检测便潜血的检测最有效的筛查指标便潜血的检测化学法化学法化学法(愈创木脂法、匹拉米洞法等）可以粗略估算出血量（+），判断疗效。检测便潜血灵敏度低、特异性差，且受饮食影响。便潜血的检测金标法1.将特异性的抗原或抗体以条带状

3、固定在膜上，胶体金标记抗体吸附在样本垫上。2.当待检样本加到试纸条一端的样本垫上后，通过毛细作用向前移动，溶解结合垫上的胶体金标记试剂后相互反应。3.再移动至固定的抗原或抗体的区域时，待检物与金标试剂的结合物又与之发生特异性结合而被截留，聚集在检测带上，可通过肉眼观察到显色结果。便潜血的检测金标法便潜血的检测金标法 包括:血红蛋白血红蛋白单克隆免疫法 转铁蛋白转铁蛋白单克隆免疫法 免疫法免疫法灵敏度高、特异性强大肠癌可以预防的杀手 101例健康者例健康者为我院体检各项指标均正常者 182例例经内窥镜检查证实有消化道出血患者消化道出血患者 上消化道出血62例 胃癌15例 下消化道溃疡86例 直、

4、结肠肿瘤19例 大肠癌可以预防的杀手 血红蛋白检测采用“血红蛋白”便潜血试剂盒（批号20100911)转铁蛋白检测采用“转铁蛋白”便潜血试剂盒（批号2010082220100822）以上两种试剂盒均由以上两种试剂盒均由万华普曼提供提供 两种方法联合检测时，其中任何一种检测阳性即为阳性。健康者与各种原因消化道出血患者粪便血健康者与各种原因消化道出血患者粪便血红蛋白和转铁蛋白免疫法检测法结果比较红蛋白和转铁蛋白免疫法检测法结果比较粪便来源粪便来源例数例数血红蛋白免疫法血红蛋白免疫法转铁蛋白免疫法转铁蛋白免疫法两法联合两法联合例数例数 率（率（%）例数例数 率（率（%）例数例数 率率（%）健康者健康

5、者101101 2 2.0 2 2.0 1 1.0 1 1.0 2 2.0 2 2.0上消化道出血上消化道出血6262 27 43.5 27 43.5 41 66.1 41 66.1 50 80.6 50 80.6胃部肿瘤胃部肿瘤1515 10 66.7 10 66.7 13 86.7 13 86.7 14 93.3 14 93.3下消化道出血下消化道出血8686 27 31.3 27 31.3 39 45.3 39 45.3 49 56.9 49 56.9直、结肠肿瘤直、结肠肿瘤1919 15 78.9 15 78.9 16 84.2 16 84.2 18 94.7 18 94.7大肠癌可以

6、预防的杀手 健康人每日胃肠道生理性失血为0.6ml。服用一些刺激胃肠道的药物 免疫方法的高敏感性 血红蛋白的检测范围0.2ug/ml 转铁蛋白的检测范围40ng/ml健康者粪便血红蛋白和转铁蛋白免疫法检健康者粪便血红蛋白和转铁蛋白免疫法检测法结果比较测法结果比较粪便来源粪便来源例数例数血红蛋白免疫法血红蛋白免疫法转铁蛋白免疫法转铁蛋白免疫法两法联合两法联合例数例数 率（率（%）例数例数 率（率（%）例数例数 率（率（%）健康者健康者101101 2 2.0 2 2.0 1 1.0 1 1.0 2 2.0 2 2.0 血红蛋白法特异性：98.0%转铁蛋白法特异性：99.0%联合检测特异性 ：98

7、.0%上消化道出血 食管、胃、十二指肠以及胰腺、胆道的出血，统称为上消化道出血。其中溃疡病约占半数，食管、胃底静脉曲张占25%。上消化道出血以呕血和柏油便为主。黑便、柏油便 黑便的原因很多，食物、西药（铁剂、铋剂）、中药等都可造成黑便，而愈创木脂等化学方法测上述标本时可能得出假阳性结果。单克隆方法检测柏油便假阴性黑便、柏油便处理方法 稀释样本 化学法与单克隆免疫法联合使用上消化道出血患者粪便血红蛋白和转铁蛋白免上消化道出血患者粪便血红蛋白和转铁蛋白免疫法检测法结果比较疫法检测法结果比较粪便来源粪便来源例数例数血红蛋白免疫法血红蛋白免疫法转铁蛋白免疫法转铁蛋白免疫法两法联合两法联合例数例数 率（

8、率（%）例数例数 率（率（%）例数例数 率（率（%）上消化道出血上消化道出血6262 27 43.5 27 43.5 41 66.1 41 66.1 50 80.6 50 80.6 血红蛋白法敏感性：43.5%转铁蛋白法敏感性：66.1%联合检测敏感性 ：80.6%上消化道出血不能用血红蛋白法检出原因 大约40%50%的上消化道出血患者不能用血红蛋白免疫法检出。1 血红蛋白经消化酶降解或消化，已不具有原来的免疫原性。2 大量出血导致反应体系中抗原过剩，减弱或抑制抗原抗体反应。3 单克隆抗体位点与血红蛋白不匹配。血红蛋白 四个亚基构成，22 亚基141个氨基酸 亚基146个氨基酸 结合4个Fe2

9、+抗体位点N-13、C-12 N-端易糖基化血红蛋白结构改变酵母细胞表面人源化单链抗体酵母细胞表面人源化单链抗体文库文库转铁蛋白可以有效弥补血红蛋白检测上消化道出血的不足 679个氨基酸 结合两个Fe3+抗体结合位点 N端或C端 空间位相稳定转铁蛋白可以有效弥补血红蛋白检测上消化道出血的不足 血浆中主要的含铁蛋白 在胃肠道中有效抵抗细菌降解、消化酶分解，稳定性高于血红蛋白十倍。检测水平是ng级的转铁蛋白可以有效弥补血红蛋白检测上消化道出血的不足 研究表明：转铁蛋白与粪便混悬液在37摄氏度孵育4小时后，其抗原性无明显变化。而血红蛋白抗原活性已丧失65%。下消化道溃疡 下消化道溃疡者两种方法阳性率

10、均较低 受肠内细菌作用，血红 蛋白被分解 间断性出血 两种方法联合检测提高阳性检出率下消化道出血患者粪便血红蛋白和转铁蛋下消化道出血患者粪便血红蛋白和转铁蛋白免疫法检测法结果比较白免疫法检测法结果比较粪便来源粪便来源例数例数血红蛋白免疫法血红蛋白免疫法转铁蛋白免疫法转铁蛋白免疫法两法联合两法联合例数例数 率（率（%）例数例数 率（率（%）例数例数 率（率（%）下消化道出血下消化道出血8686 27 31.3 27 31.3 39 45.3 39 45.3 49 56.9 49 56.9 血红蛋白法敏感性：31.3%转铁蛋白法敏感性：45.3%联合检测敏感性 ：56.9%消化道肿瘤的检测 胃部肿

11、瘤及直、结肠肿瘤者，两种方法阳性检出率都很高 患者处于中晚期，肿瘤部位持续出血 血红蛋白法阴性的9例标本转铁蛋白法4例阳性，提高了检出率胃、直结肠肿瘤患者粪便血红蛋白和胃、直结肠肿瘤患者粪便血红蛋白和转铁蛋白免疫法检测法结果比较转铁蛋白免疫法检测法结果比较粪便来源粪便来源例数例数血红蛋白免疫法血红蛋白免疫法转铁蛋白免疫法转铁蛋白免疫法两法联合两法联合例数例数 率（率（%）例数例数 率（率（%）例数例数 率率（%）胃部肿瘤胃部肿瘤1515 10 66.7 10 66.7 13 86.7 13 86.7 14 93.3 14 93.3直、结肠肿瘤直、结肠肿瘤1919 15 78.9 15 78.9

12、 16 84.2 16 84.2 18 94.7 18 94.7HB、TF检测结果判定血红蛋白转铁蛋白出血位置阳性阳性整个消化道阳性阴性下消化道阴性阳性上消化道阴性阴性没有出血HB、TF双联板 操作简单，5-10分钟出结果 结果容易判断 可以准确反映消化道出血 高特异性 针对人的单克隆抗体，与动物蛋白没有交叉反应 提高了消化道癌症的筛查概率转铁蛋白低下 胃部肿瘤组及直、结肠肿瘤组各有1份标本转铁蛋白阴性，而血红蛋白阳性。符合约10%的患者呈现转铁蛋白值较低的现象。遗传性无转铁蛋白血症、各种恶性疾病、炎症为主的多种疾病均可导致转铁蛋白低下。关爱自己，远离大肠癌 50岁以上，每年一次便潜血检测，降低15%-33%直结肠癌的死亡率。肠镜检测 钡餐 CEA检测展望 最新报告可从粪便中检测大肠癌细胞甲基化ITGA4(integrin,alpha 4)基因，75%结肠腺瘤、92%结肠癌存在这一基因。灵敏度 7pg（定量荧光）特异性 79%。