吕毅临床使用微柱凝胶卡产品注意事项课件.ppt

1、临床使用微柱凝胶卡产品注意事项卫生部抗体技术重点实验室稀有血型诊断试剂（江阴）研发中心凝胶卡类产品ABO/RhDABO/RhD血型定型检测试剂卡血型定型检测试剂卡ABOABO、RhDRhD血型抗原检测卡（微柱凝胶）血型抗原检测卡（微柱凝胶）抗人球蛋白交叉配血卡（抗抗人球蛋白交叉配血卡（抗IgGIgG）广谱抗人球蛋白卡（抗广谱抗人球蛋白卡（抗IgG+C3dIgG+C3d）直接抗人球蛋白试剂卡直接抗人球蛋白试剂卡ABOABO亚型检测卡亚型检测卡RhRh血型分型卡血型分型卡新生儿溶血病检测卡新生儿溶血病检测卡 配套仪器配套仪器。实验前注意事项 使用凝胶卡前应先离心后应用；检查凝胶卡，若封口开裂、孔中

2、凝胶干 涸或有气泡时，则不可使用；撕开凝胶卡的封口膜时，不能用力过猛，以免造成凝胶微孔间的交叉污染。血液样本处理 血浆标本必须充分离心去除纤维蛋白，否则会在微柱凝胶中阻止红细胞沉淀呈现假阳性反应。EDTA抗凝样本，通过离心（3000rpm，1分钟）观察血浆的透明度。如浑浊或存在不溶物，需将血浆再次离心，确保血浆中不存在不溶物。实验细胞浓度 红细胞悬液的浓度为0.81%，浓度过高或过低会影响检测结果。红细胞悬液的制备：将待检者的血液样本离心（3000rpm、1min），用加样枪在压积红细胞中层量取10l压积红细胞加入至1ml 生理盐水中，配制成0.81%浓度的红细胞悬液。可将24%的红细胞用Li

3、ss液进行1:31:4稀释。加样操作要求 用定量加液器，先取50ul红细胞（0.81%）呈45度角沿微柱凝胶管的样品槽内壁加入；然后再加入25ul血清或血浆；细胞和血浆加入样品槽后要混匀，并保证样品液面水平。加样注意事项 严格按照上述50ul（0.81%浓度）的红细胞加25ul血清或血浆的比例；微柱凝胶法50ul（0.81%）红细胞（换算成24%的红细胞则是50/4=12.5ul）和25ul血浆或血清，微柱凝胶法与试管法是同样的红细胞和血清比例。孵育时间要求 凡抗人球蛋白卡、抗筛、交叉配血卡所用的红细胞均必须用Liss液悬浮，这样才能在孵育器中孵育15分钟。凡直接抗人球卡、血型定型卡（ABO/

4、RhD血型、Rh分型）可以用生理盐水悬浮红细胞。但盐水悬浮的红细胞则必须将37孵育时间延长到3060分钟。凝胶卡配套用离心机 凝胶卡的离心参数为900r/min2分钟后自动转档提至1500r/min3分钟。本公司离心机设置的是固定转速，不需要调节，避免用户非正常离心转速进行试验。结果判读影响结果因素 阴性结果拖尾（细胞浓度，离心机转速）阴性结果时凝胶上层有很少细胞残留（血液样本有破碎的红细胞，样本时间长自身有凝块）假阴性（加样是否正确）整管都是红色（血液样本溶血）双向反应（凝胶顶层和底部都有细胞）影响结果因素 有些血液病患者，由于幼稚红细胞（有核）多，容易导致假阳性。某些药物、疾病可导致正定型

5、结果呈弱阳性反应或正反定型不相符；溶血性疾病、巨球蛋白血症、输注大分子血浆扩容剂如右旋糖酐等可能会影响实验结果。影响结果因素 如在微柱凝胶管中出现溶血现象，强烈提示为红细胞抗原抗体阳性反应；但不排除其他原因所致溶血，一定要认真分析并向上级主管技术人员报告并讨论。细胞类产品细胞类产品注意事项注意事项ABO血型定型红细胞试剂血型定型红细胞试剂（人红细胞）（人红细胞）产品如出现颜色改变、有凝集或异物、溶血，则不能使用。试剂使用后于28储存。若细胞颜色变暗、细胞自发性聚集成块或产生明显溶血现象，则试剂红细胞不能使用。保存期内出现轻微溶血时，可在使用前用LISS液或生理盐水将红细胞洗涤后使用。不规则抗体

6、筛选红细胞试剂不规则抗体筛选红细胞试剂 若细胞颜色变暗、细胞自发性聚集成块或产生明显溶血现象，则试剂红细胞不能使用。在保存期内，红细胞可能会发生轻微溶血，如有此现象，可在使用前用LISS液或生理盐水将红细胞洗涤并制成悬浮液后使用。不规则抗体筛选红细胞试剂不规则抗体筛选红细胞试剂 红细胞试剂长时间放置，红细胞会自然沉降，形成压积红细胞，导致红细胞保存液起不到保存的效果，最终会导致细胞发黑，或者形成凝块。红细胞试剂使用前需轻摇混匀，如长期不使用，需定期轻摇混匀（34天）。不规则抗体筛选红细胞试剂不规则抗体筛选红细胞试剂导致假阳性或假阴性结果的因素：导致假阳性或假阴性结果的因素：样本被细菌或化学试剂

7、污染、孵育时间或温度不合适、离心速度不当 不正确的血浆和细胞比例，抗体浓度太低、细胞洗涤不充分、样本储存不当、试验管中漏加入被检者血浆或抗人球蛋白试剂微柱凝胶卡法微柱凝胶卡法检测新生儿溶血病检测新生儿溶血病操作指南操作指南 HDN 原原 理理 新生儿溶血病（）是由母婴血型不合引起的，常见于ABO及Rh血型系统。胎儿或新生儿红细胞被来自于母体的IgG抗体包被，使红细胞破坏，引起新生儿溶血病。轻则影响胎儿的脏器及智力发育，重则引起胎儿在子宫内死亡。因此，新生儿溶血病的化验检查对于临床准确诊断及治疗具有非常重要的意义。检验前血液样本的处理 采集EDTA抗凝的母亲血样5 ml、新生儿血样2 ml；90

8、0-1000g离心1分钟）分离出母血浆、子血浆。（离心获得的血清应透明无不溶物，如不符合需再次离心直至血浆为透明为止。）鉴定母子ABO血型，母Rh(D)血型。用生理盐水分别洗涤母、子红细胞1次后得到压积红细胞，用生理盐水配制成0.8-1%的红细胞悬液。所需仪器设备 血型血清学离心机（用于离心分离血浆、洗涤红细胞）微柱凝胶卡离心机 微柱凝胶卡孵育器 微量移液枪及吸头所需试验耗材所需试验耗材 微柱凝胶卡 （1）直接抗人球蛋白卡 （2）抗-IgG抗人球蛋白卡 （3）ABD血型定型卡 红细胞：(1）ABO反定型试剂红细胞 （2）不规则抗体筛查红细胞 0.01M DTT Liss液（低离子液）试管（70

9、100mm）试试 验验 操操 作作（一）母血浆中（一）母血浆中IgM抗体的灭活抗体的灭活 在一试管中将4滴（0.2 ml）母体血浆与等量的0.01M的二硫苏糖醇液（DTT）混合后于37水浴中孵育30分钟。（二）子红细胞直接抗人球蛋白试验（二）子红细胞直接抗人球蛋白试验 1、操作步骤：取直接抗人球蛋白卡一片，检查外观，确保没有任何凝胶管的凝胶上层存在液面，凝胶不会干枯。将符合要求的卡进行标记，按照试验需要撕开前三孔封口膜；用微量移液枪向每孔的样品槽中沿样品槽内壁呈45角缓慢加入50微升0.8-1%浓度的新生儿红细胞。在台面交替轻叩卡左下角和右下角，确保所加入的红细胞在样品槽中呈水平状态，避免偏向

10、一侧或出现空气柱；将加入新生儿红细胞的卡放入微柱凝胶卡离心机离心判读结果。2、结果判读抗抗IgG抗抗C3d自身对照自身对照结果解释结果解释+00新生儿溶血0+0非新生儿溶血，但新生儿红细胞上有C3d补体存在+0新生儿溶血，同时新生儿红细胞上有C3d补体存在000非新生儿溶血+试验失败，充分洗涤新生儿红细胞后再次试验注：注：“+”表示红细胞悬浮在凝胶表面或凝胶中；表示红细胞悬浮在凝胶表面或凝胶中；“0”表示红细胞全部沉降在微管底部。表示红细胞全部沉降在微管底部。（三）母、子ABO、RhD血型鉴定1、母亲ABO、RhD血型鉴定 注：母亲ABO血型鉴定必须正、反定型（1）ABO反定型试剂红细胞的准备

11、 取2-4%浓度的ABO反定型试剂红细胞200 微升，加入1ml生理盐水洗涤后弃上清，加入600-800ulLiss液（也可用盐水悬浮）即可得到0.8-1%浓度的悬浮的红细胞。（2）取ABO、RhD血型正反定型卡1张，检查外观，确保没有任何凝胶管的凝胶上层存在液面，凝胶不会干涸。将卡进行标记，按照试验需要撕开封口膜；用移液枪向1-3孔及第6孔沿样品槽内壁呈45角缓慢加入50微升0.8-1%浓度的母亲红细胞，向第4、5孔按照标记分别缓慢加入50微升0.8-1%浓度的反定型A红细胞、B型红细胞。在台面交替轻叩卡左下角和右下角，确保所加入的红细胞在样品槽中呈水平状态，避免偏向一侧或产生空气柱；将加入

12、新生儿红细胞的卡放入微柱凝胶卡离心机离心判读结果。2、子、子ABO、RhD血型鉴定血型鉴定 注意：子ABO定型只做正定型，不做反定型，因为子血浆中的抗体不由自己产生，而是来自母体。取ABO、RhD血型正反定型卡1片，注意检查外观，确保没有任何凝胶管的凝胶上层存在液面，凝胶不会干涸；将卡进行标记，按照试验需要撕开封口膜，用微量移液枪向1-3孔及第6孔沿内壁呈45角缓慢加入50微升0.8-1%浓度的子红细胞；在台面交替轻叩卡左下角和右下角，确保所加入的红细胞在样品槽中呈水平状态，避免偏向一侧或有空气柱；将加入新生儿红细胞的卡放入微柱凝胶卡离心机离心判读结果。（四）子血浆中游离抗体试验 检测游离抗体

13、的目的是确认新生儿血浆中是否还有没结合到新生儿红细胞上的抗体；如果存在游离抗体，这部分抗体还要继续结合到新生儿红细胞上，继续破坏新生儿红细胞，使得新生儿溶血病情继续加重。1、试剂红细胞的准备（子血浆中游离抗体试验）取2-4%浓度的试剂红细胞200微升，加入1ml生理盐水洗涤后弃去上清液；在压积红细胞中加入600-800微升Liss液；混匀，即可得到0.8-1%浓度的Liss液悬浮的红细胞。子血浆中游离抗体试验 2、取抗IgG抗人球蛋白卡1张，检查外观符合要求。将卡进行标记，按照试验需要量撕开封口膜；用微量移液枪向样品槽中沿样品槽内壁呈45角缓慢加入50微升0.8-1%浓度的Liss液悬浮的试剂

14、红细胞（试剂红细胞的选择见下表）；然后加入25微升新生儿血浆；在台面交替轻叩卡左下角和右下角来混合红细胞和血浆，混合均匀，避免偏向一侧或产生空气柱；将卡放入微柱凝胶卡孵育器中孵育15分钟后用微柱凝胶卡离心机离心判读结果。子血浆中游离抗体试验试剂红细胞血型选择母血型母血型OOAB子血型ABB，ABA，AB检测游离抗体所用检测游离抗体所用试剂红细胞血型试剂红细胞血型ABBA3、结果判读、结果判读 见表见表（五）母亲血浆中的IgG不规则抗体筛选1、不规则抗体筛选试剂红细胞的准备 取2-4%浓度的不规则抗体筛选试剂红细胞 I、II、III各200微升、分别加入1ml生理盐水洗涤后弃上清液、向压积红细胞

15、中各加入600-800ulLiss液，混匀即可得到0.8-1%浓度的Liss液悬浮 红细胞。2、取抗IgG抗人球蛋白卡一片，检查外观；将符合要求的卡进行标记，按照试验需要的3孔撕开封口膜；按照标记，用移液枪沿样品槽壁呈45角分别缓慢加入50ul0.8-1%不规则抗体筛选I、II、III 试剂红细胞；向已加入红细胞的微管样品槽中加入已经灭活IgM抗体的25ul母血浆；在台面交替轻叩卡左下角和右下角进行混合；确保所加入的红细胞及血浆混合均匀呈水平状，避免偏向一侧或形成空气柱；将卡放入微柱凝胶卡孵育器中孵育15分钟后用微柱凝胶卡离心机离心判读结果。结果判读项项 目目反反 应应 结结 果果子血浆中游离

16、抗体+0母血浆中IgG性质不规则抗体0+0 解 释子血浆中存在与子红细胞抗原不合的ABO系统IgG抗体子血浆中可能同时存在与子红细胞抗原不合的ABO系统及ABO系统以外的不规则IgG性质抗体子血浆中不存在可检测的与子红细胞不合的IgG性质抗体是否发生新生儿溶血 是是可能，需要根据子红细胞直接抗人球蛋白试验结果来判定 特殊说明由于存在ABO以外不规则IgG性质抗体，最好进行抗体鉴定，以备及时给新生儿进行下一步治疗五、综合结果判断1、当子红细胞的直接抗人球蛋白试验阳性，或子血清中游离抗体为阳性时，肯定发生新生儿溶血病。2、当母血浆中存在ABO以外的IgG抗体时，需对不规则抗体进行抗体进行进一步鉴定

17、。新生儿溶血病产后检测结果报告 母姓名：住院号：母ABO型：母Rh（D）型：子ABO型 子红细胞直接抗人球蛋白试验：性 子 血清中游离抗体试验与A细胞 性，与B细胞 性 母血清中ABO以外IgG性质抗体 性。江阴力博医药生物技术有限公司江阴力博医药生物技术有限公司江阴力博医药生物技术有限公司 力博公司注册成立于2007年，注册资金2700万、实际资产1.5亿元人民币 她坐落于江阴国家高新区扬子江生物医药加速器基地内，拥有四万平方米的研发、生产和办公场所。是一家主要从事血型检测试剂、血型筛查配套仪器设备、肿瘤生物治疗等产品的研发、生产和销售的科技型企业。公公 司司 理理 念念 视质量、诚信为公司之生命视质量、诚信为公司之生命 以创新、发展作永恒的追以创新、发展作永恒的追求求谢谢 谢！谢！