健脾祛痰化瘀方药调脂抗动脉粥样硬化的临床及其作用机制的研究课件.ppt

1、 沥水调脂胶囊是从辨证论治的整体观和高脂血症沥水调脂胶囊是从辨证论治的整体观和高脂血症及及AsAs的中医病因病机的观点出发，按照健脾祛痰化瘀的中医病因病机的观点出发，按照健脾祛痰化瘀治法成功开发出的具有明显调脂、清除自由基、保护治法成功开发出的具有明显调脂、清除自由基、保护血管内皮功能和抗血管内皮功能和抗AsAs作用的新中药，已于作用的新中药，已于20012001年批准年批准生产。本文综合了健脾祛痰化瘀方药在整体和细胞水生产。本文综合了健脾祛痰化瘀方药在整体和细胞水平及临床观察方面抗平及临床观察方面抗AsAs的作用，现归纳如下：的作用，现归纳如下：前前 言言 经临床经临床409例（其中对照例（

2、其中对照102例）采用随机双盲、例）采用随机双盲、平行对照的方法，分别在山东、江苏等地五家临床医平行对照的方法，分别在山东、江苏等地五家临床医院进行观察，发现该药降脂总有效率为院进行观察，发现该药降脂总有效率为89.34%、控显、控显率为率为67.51%，明显优于对照组。其中，明显优于对照组。其中TC总有效率双盲总有效率双盲治疗组为治疗组为78.29%，高密度脂蛋白升高的总有效率双盲，高密度脂蛋白升高的总有效率双盲治疗组为治疗组为77.67%，均优于对照组。治疗组疗前疗后降，均优于对照组。治疗组疗前疗后降低低TC、TG、LDL水平，升高水平，升高HDL和和apoAI有明显差有明显差异，优于对照

3、中药，但对异，优于对照中药，但对apoB下降不明显。在改善血下降不明显。在改善血液流变学指标方面也有显著意义。液流变学指标方面也有显著意义。n保护血管内皮功能保护血管内皮功能n对内皮细胞结构的影响对内皮细胞结构的影响n显著降低高脂状态下的血管内皮通透性。显著降低高脂状态下的血管内皮通透性。n维护维护NO的正常水平。的正常水平。n并能降低血浆及红细胞过氧化脂质含量，保护血浆并能降低血浆及红细胞过氧化脂质含量，保护血浆6-Keto-PGF1/TXB2的平衡。的平衡。表表1 对血管内皮通透性的影响对血管内皮通透性的影响 通透深度通透深度 通透量通透量 （占内中膜厚度（占内中膜厚度%）（ng/g主动脉

4、）主动脉）对照组对照组 15.005.48*6.033.62*高脂组高脂组 56.6713.66 54.917.70 祛痰化瘀组祛痰化瘀组 31.677.53*40.744.68*鱼油组鱼油组 26.678.16*37.167.38*注：注：与高脂组相比与高脂组相比 *p0.01 -表表2 对舒张因子（对舒张因子（NO）的影响）的影响 血浆亚硝酸盐浓度（血浆亚硝酸盐浓度（umol/L)对对 照照 组组 6.923.04*高高 脂脂 组组 1.521.25 祛痰化瘀组祛痰化瘀组 6.331.64*鱼鱼 油油 组组 5.182.45*与高脂组相比与高脂组相比 *p0.01 -表表3 对对MDA、T

5、XB2、6-keto-PGF12的影响的影响 血浆血浆MDA RBC膜膜MDA 6-keto-PGF1a TXB2 6-keto-PGF12/TXB2 （mmol/L）（nmol/mg蛋白）（蛋白）（pg/ml）（pg/ml）对照组对照组 3.320.27*0.890.06*#1332.45289.27*725.1142.73 1.820.38*高脂组高脂组 4.530.39 1.520.19 921.94278.71 676.9747.18 1.350.36 祛痰化瘀组祛痰化瘀组 3.780.60*0.920.21*#1213.26294.87*688.8255.72 1.750.35*鱼油

6、组鱼油组 3.840.38*1.170.22*925.14392.24 591.4940.30 1.600.79 与高脂组相比，与高脂组相比，*p0.01;与鱼油组相比，与鱼油组相比，#p0.01。-n保护血管内皮功能保护血管内皮功能n对内皮细胞结构的影响对内皮细胞结构的影响n改善红细胞膜流动性等。改善红细胞膜流动性等。n超微结构观察证实该药能明显减少单核细胞在内皮超微结构观察证实该药能明显减少单核细胞在内皮 细胞的粘附和向内皮下游走。细胞的粘附和向内皮下游走。其作用明显优于对照的西药安妥明及烟酸肌酯其作用明显优于对照的西药安妥明及烟酸肌酯 以及洁脂等。以及洁脂等。表表4 对高脂大鼠红细胞膜流

7、动性的影响对高脂大鼠红细胞膜流动性的影响 微粘度（泊）微粘度（泊）对对 照照 组组 3.130.28*高高 脂脂 组组 3.540.39 祛痰化瘀组祛痰化瘀组 2.980.23*鱼鱼 油油 组组 2.820.49*与高脂组相比与高脂组相比 *p0.01 -图图1 主动脉内皮细胞主动脉内皮细胞0.05%硝酸银染色硝酸银染色 *指示指示EC核核 A：高脂组，示银线变粗：高脂组，示银线变粗x20 B：祛痰化瘀方药组：祛痰化瘀方药组x20 C：高脂组，示成块的银染颗粒：高脂组，示成块的银染颗粒x40 D：正常对照组：正常对照组x20 图图2 主动脉苏木素染色主动脉苏木素染色 箭头（箭头（）所示粘附的单

8、核细胞）所示粘附的单核细胞x40 A,C：高脂组：高脂组 B：祛痰化瘀方药组：祛痰化瘀方药组 D：正常对照组：正常对照组 图图3高脂组内皮单核细胞粘附的扫描电镜照片高脂组内皮单核细胞粘附的扫描电镜照片 A：成簇状粘附的单核细胞：成簇状粘附的单核细胞n 图图4 单核细胞粘附的扫描电镜照片单核细胞粘附的扫描电镜照片 B：开始向内皮细胞下游走的单核细胞：开始向内皮细胞下游走的单核细胞 采用原位杂交和组织化学技术发现该药能有效减采用原位杂交和组织化学技术发现该药能有效减弱原癌基因弱原癌基因C-sis、C-myc mRNA的表达，增强抑癌的表达，增强抑癌基因基因P53 mRNA的表达，从而达到的表达，从

9、而达到 抑制细抑制细 胞增殖、胞增殖、阻止阻止As形成和发展的作用。形成和发展的作用。对相关基因表达的调控对相关基因表达的调控 具有阻止具有阻止As早期主动脉壁泡沫细胞的早期主动脉壁泡沫细胞的NOS活性增活性增强，阻止强，阻止As进展期主动脉、冠脉血管壁的进展期主动脉、冠脉血管壁的NOS活性及活性及NOS mRNA 表达的下降，下调表达的下降，下调As 动脉动脉 血管壁血管壁ET mRNA的高表达，减少脂质坏死中心形成等一系列作的高表达，减少脂质坏死中心形成等一系列作用，从而达到维持血管舒缩因子的平衡，缓解用，从而达到维持血管舒缩因子的平衡，缓解As进展进展的目的。的目的。表表5 对兔主动脉血

10、管壁一氧化氮合酶活性的影响对兔主动脉血管壁一氧化氮合酶活性的影响 Distribution in aorta Control group HC group Gimfibrozil group Zhitai group endothelium arch 3.111.05 2.581.31 2.890.93 2.501.18 thoracic 4.000.00*1.911.14 2.641.21 3.001.04*abdominal 3.111.05*1.731.27 1.330.52 1.700.69 intimal plaque arch 0 0.710.44 0.800.46 0.640.1

11、7 thoracic 0 0.400.24 1.470.51*1.380.63*abdominal 0 0.580.33 0.900.51 1.600.81*HC:hypercholesterol group;the same below*P0.05，*P0.01，compared with B group；表表6 对兔主动脉血管壁一氧化氮合酶对兔主动脉血管壁一氧化氮合酶mRNA表达的影响表达的影响 Distribution in aorta Control group HC group Gimfibrozil group Zhitai group 内膜层内膜层 主动脉弓部主动脉弓部 0 1.

12、670.91 2.331.03 2.500.76*胸主动脉胸主动脉 0 2.080.95 3.001.55 3.140.90*腹主动脉腹主动脉 0 1.180.40 3.000.82*3.670.58*中膜层中膜层 主动脉弓部主动脉弓部 2.331.24*1.120.32 1.000.00 2.251.09*胸主动脉胸主动脉 2.570.90*1.000.00 1.660.82*1.380.48*腹主动脉腹主动脉 1.201.09 1.000.00 1.130.33 1.330.47 compared with HC group,*P0.05，*P0.01；-表表7 对兔主动脉血管壁内皮素对兔

13、主动脉血管壁内皮素mRNA表达的影响表达的影响 Group Endothelium Intimal Medial Cotrol 3.860.38 0 1.000.00 HC 1.290.49*3.330.82*2.560.53*Gimfibrozil 1.330.52*2.500.53*2.000.76*Zhitai 1.330.52*2.430.53*1.710.76*compared with control group*P0.05，*P0.01；-n抗低密度脂蛋白的氧化抗低密度脂蛋白的氧化n抑制细胞的粘附功能抑制细胞的粘附功能n抑制内皮细胞凋亡抑制内皮细胞凋亡n抑制平滑肌细胞增殖抑制平滑

14、肌细胞增殖n对细胞信号通路的影响对细胞信号通路的影响细胞及分子生物学细胞及分子生物学细胞及分子生物学细胞及分子生物学层面的进一步研究层面的进一步研究 表表8 各组低密度脂蛋白的硫代巴比妥酸反应物值各组低密度脂蛋白的硫代巴比妥酸反应物值 组组 别别 TBARS(umol/g)正正 常常 组组 2.650.43 对对 照照 组组 2.600.44 氧化修饰组氧化修饰组 41.291.95 中药抗氧化组中药抗氧化组 14.840.48*注：与氧化修饰组比较，注：与氧化修饰组比较，*P0.01 图图5 各组低密度脂蛋白的电泳图各组低密度脂蛋白的电泳图 对照组对照组 中药组中药组 氧化氧化LDL组组 天

15、然天然LDL组组n抗低密度脂蛋白的氧化抗低密度脂蛋白的氧化n抑制细胞的粘附功能抑制细胞的粘附功能n抑制内皮细胞凋亡抑制内皮细胞凋亡n抑制平滑肌细胞增殖抑制平滑肌细胞增殖n对细胞信号通路的影响对细胞信号通路的影响细胞及分子生物学细胞及分子生物学细胞及分子生物学细胞及分子生物学层面的进一步研究层面的进一步研究 图图6 不同浓度含药血清对不同浓度含药血清对mox-LDL(20ug/ml)对对VSMC表达表达MCP1的影响的影响0.640.660.680.70.720.740.760.780.80.820.84n-LDL mox-LDL 5%LSTZ 10%LSTZ 20%LSTZ 10uVEOD*注

16、：与注：与mox-LDL组对照，组对照，P0.05，P0.01。图图7 不同浓度的沥水调脂胶囊血清对不同浓度的沥水调脂胶囊血清对mox-LDL (40ug/ml)诱导的诱导的EC表达表达P-选择素的影响选择素的影响0.70.750.80.850.90.95 n-LDL mox-LDL 5%LSTZ 10%LSTZ 20%LSTZ 10uVEOD*注：与注：与mox-LDL组对照，组对照，P0.05，P0.01n抗低密度脂蛋白的氧化抗低密度脂蛋白的氧化n抑制细胞的粘附功能抑制细胞的粘附功能n抑制内皮细胞凋亡抑制内皮细胞凋亡n抑制平滑肌细胞增殖抑制平滑肌细胞增殖n对细胞信号通路的影响对细胞信号通路

17、的影响细胞及分子生物学细胞及分子生物学细胞及分子生物学细胞及分子生物学层面的进一步研究层面的进一步研究 表表9 对对EC凋亡率及细胞周期的影响凋亡率及细胞周期的影响（xs）Groups Apoptosis rate（%）G0-G1 G2-M S Control 1.090.64 59.050.07 11.103.39 29.853.32 OX-LDL 23.173.99 73.531.45 12.770.74 13.731.07 N-LDL 3.820.45*64.138.60*17.733.71 18.175.06 Serum of rat 20.001.35 71.770.55 13.57

18、0.32 14.70.61 VitE 9.040.38*38.653.41*19.733.57 42.956.02*LSTZ（10%）16.130.64*46.385.47*16.303.84 37.352.45*LSTZ（15%）16.170.97*50.048.11*12.402.95 37.605.19*LSTZ（20%）18.430.91*52.705.94*12.674.06 34.875.97*注：与注：与ox-LDL组比较组比较 *P0.05，*P0.01 -表表10 对凋亡相关基因表达的影响（对凋亡相关基因表达的影响（xs）Groups bcl-2 bax P53 caspas

19、e-3 Control 5.370.16 2.490.19 3.280.07 3.710.29 N-LDL 5.050.24 2.660.09 3.510.33 3.880.35 OX-LDL 1.300.03 4.470.34 4.390.38 4.550.30 Serum of rat 2.310.85 4.590.22 4.280.13 4.470.09 LSTZ（10%）3.070.09*4.570.28 4.160.10*4.260.15*LSTZ（15%）2.950.43*4.450.33 4.090.07*4.220.10*LSTZ（20%）2.630.47*4.450.32 4

20、.240.13 4.410.15*VitE 3.630.15*3.890.32*3.860.10*4.130.13*注：与注：与ox-LDL组比较组比较 *P0.05，*P0.01 -n抗低密度脂蛋白的氧化抗低密度脂蛋白的氧化n抑制细胞的粘附功能抑制细胞的粘附功能n抑制内皮细胞凋亡抑制内皮细胞凋亡n抑制平滑肌细胞增殖抑制平滑肌细胞增殖n对细胞信号通路的影响对细胞信号通路的影响细胞及分子生物学细胞及分子生物学细胞及分子生物学细胞及分子生物学层面的进一步研究层面的进一步研究00.20.40.60.811.2LDLControl5%S10%S20%S20uM V3H-thymidine incorp

21、oration(%)*图图8 对对mox-LDL（5ug/ml）诱导的）诱导的VSMC DNA合成率的影响合成率的影响 compared with control,*P0.05，*P0.01 图图9 对对mox-LDL（10ug/ml）诱导的）诱导的VSMC DNA合成率的影响合成率的影响compared with control,*P0.05 00.20.40.60.811.21.4LDLcontrol5%S10%S20%S3H-thymidine incorporation(%)*Control LSTZ00.20.40.60.811.2ControlLSTZRelative intens

22、ity*图图10 对对PCNA表达的影响表达的影响compared with control,*P0.05n抗低密度脂蛋白的氧化抗低密度脂蛋白的氧化n抑制细胞的粘附功能抑制细胞的粘附功能n抑制内皮细胞凋亡抑制内皮细胞凋亡n抑制平滑肌细胞增殖抑制平滑肌细胞增殖n对细胞信号通路的影响对细胞信号通路的影响细胞及分子生物学细胞及分子生物学细胞及分子生物学细胞及分子生物学层面的进一步研究层面的进一步研究 表表11 内皮、平滑肌细胞内皮、平滑肌细胞Ca2+i浓度浓度注：与注：与ox-LDL组对照，组对照，P0.05，P0.01。-分分 组组 荧光强度荧光强度(EC)荧光强度荧光强度(VSMC)空白组空白组

23、 6.821.03*4.691.55*n-LDL组组 7.841.90*7.472.36 ox-LDL组组 16.001.99 9.600.08 VitE组组 10.702.60*7.050.87*5%含药血清组含药血清组 7.440.67*6.681.82*10%含药血清组含药血清组 10.192.18*7.850.99*20%含药血清组含药血清组 9.361.57*5.390.46*表表12 对对ox-LDL诱导的诱导的VSMC膜膜PKC表达的影响表达的影响 注：与注：与ox-LDL组比较，组比较，*P0.05，*P0.01。分分 组组 PKC(pmol/g/min)空空 白白 组组 0.

24、02140.0033*ox-LDL组组 0.22780.0487 VitE 组组 0.04880.0088*20%含药血清组含药血清组 0.11750.0368*图图11 对对VSMC内内c-fos mRNA表达的影响表达的影响 c-fosGAPDH0 00.10.10.20.20.30.30.40.40.50.50.5h0.5h1.0h1.0h2.0h2.0hRatio of c-fos/GAPDHRatio of c-fos/GAPDHintensitiesintensitiesControlControlLSTZLSTZVit EVit E*compared with control,*

25、P0.05c-jun GAPDH00.20.40.60.811.20.5h1.0h2.0hRatio of c-jun/GAPDH intensitiesControlLSTZVit E*图图12 对对VSMC内内c-jun mRNA表达的影响表达的影响compared with control,*P0.05c-myc GAPDH 00.10.20.30.40.50.5h1.0h2.0hRatio of c-myc/GAPDHintensitiesControlLSTZVit E*图图13 对对VSMC内内c-myc mRNA表达的影响表达的影响compared with control,*P0.0500.20.40.60.811.20.5h1.0hRelative intensityControlLSTZ*图图14 对对JNK1磷酸化的影响磷酸化的影响compared with control,*P0.05ERK 100.511.520.5h1.0hRelative intensityControlLSTZ图图15 对对ERK1、2磷酸化的影响磷酸化的影响ERK 200.511.520.5h1.0hRelative intensityControlLSTZ 谢谢 谢谢！