肿瘤基因治疗的基本策略和常用方法终极版课件.pptx

1、组员：组员：盛佳一，陈鑫盛佳一，陈鑫 刘倩，柳淼刘倩，柳淼 王弼思，冯祥王弼思，冯祥 张晋华，熊润诚张晋华，熊润诚目录1.肿瘤（肿瘤（Tumor）机体机体在各种致癌因素作用下，局部组织的某在各种致癌因素作用下，局部组织的某一个细胞在基因水平上失去对其正常生长的调控，一个细胞在基因水平上失去对其正常生长的调控，导致其克隆性异常增生而形成异常病变。学界一导致其克隆性异常增生而形成异常病变。学界一般将肿瘤分为良性和恶性般将肿瘤分为良性和恶性两种。两种。基基 因因 治治 疗疗 示示 例例2.基因治疗（基因治疗（Gene Therapy）指指将将外源正常外源正常基因基因 导导入靶细胞，以纠正或入靶细胞，

2、以纠正或补偿因基因缺陷和异常引起的疾病，以达到治疗补偿因基因缺陷和异常引起的疾病，以达到治疗目的。也就是将目的。也就是将外源基因通过外源基因通过基因转移技术基因转移技术 将将其插入病人其插入病人的适当的的适当的受体细胞受体细胞 中，使中，使外源基因外源基因制造的产物制造的产物 能治疗能治疗某种疾病。从广义某种疾病。从广义上说，基因治疗还上说，基因治疗还可包括从可包括从DNA水平水平采取的治疗采取的治疗某些某些疾疾病的措施和新技术病的措施和新技术。3.肿瘤肿瘤基因治疗基因治疗的经典概念基因治疗基因治疗的经典概念 指通过指通过外源基因外源基因 导导人人体以纠正人人体以纠正内在的基因内在的基因缺陷缺

3、陷 的的疗法。肿瘤基因治疗不再局限于疗法。肿瘤基因治疗不再局限于“纠正基纠正基因缺陷因缺陷”，系，系指将外源的正常基因导人人体，达到指将外源的正常基因导人人体，达到直接或间接抑制或杀伤肿瘤细胞的目的。基因是生直接或间接抑制或杀伤肿瘤细胞的目的。基因是生命之本，是生物得以保持其连续性和稳定性的物质命之本，是生物得以保持其连续性和稳定性的物质基础。随着对恶性肿瘤发生发展分子机制研究的不基础。随着对恶性肿瘤发生发展分子机制研究的不断深人，出于对肿瘤是一种基因病的认识，加之恶断深人，出于对肿瘤是一种基因病的认识，加之恶性肿瘤的发病率和病死率较高，这使得恶性肿瘤的性肿瘤的发病率和病死率较高，这使得恶性肿

4、瘤的基因治疗成为近年来基因治疗研究的主要内容和热基因治疗成为近年来基因治疗研究的主要内容和热点。点。4.与肿瘤基因治疗有关的其它概念与肿瘤基因治疗有关的其它概念a.原癌基因（前癌基因）原癌基因（前癌基因）细胞癌基因存在于细胞基因组内，激活前的细胞癌基因存在于细胞基因组内，激活前的细胞癌基因称为细胞癌基因称为原癌基因原癌基因(前癌基因前癌基因)，一旦原癌，一旦原癌基因激活成癌基因便会引起细胞癌变，癌基因激基因激活成癌基因便会引起细胞癌变，癌基因激活后，通过其表达产物改变细胞生长和分化规律，活后，通过其表达产物改变细胞生长和分化规律，诱发细胞癌变。诱发细胞癌变。原癌基因原癌基因被激活的途径被激活的

5、途径很多，如很多，如启动子插入启动子插入，基因重排基因重排 和和扩增扩增基因点突变基因点突变 和和DNA分子中去分子中去甲基化甲基化 等。等。b.抑癌基因抑癌基因 正常正常细胞中存在抑制肿瘤发生的基因，称为细胞中存在抑制肿瘤发生的基因，称为抑癌基因抑癌基因。正常。正常细胞中有一类对细胞增殖起负性细胞中有一类对细胞增殖起负性调节作用的基因调节作用的基因，即抑癌基因，对，即抑癌基因，对正常细胞的生正常细胞的生长无影响，但抑制了细胞的癌变，所以当这一类长无影响，但抑制了细胞的癌变，所以当这一类的抑癌基因发生的抑癌基因发生丢失丢失，失活失活 或或变异变异 时时，就会促，就会促进进细胞癌变。细胞癌变。c

6、.基因毒基因毒 基因癌基因癌变变发生发生发展的第一步是活化发展的第一步是活化致癌物致癌物，改变改变细胞内的细胞内的DNA，第二步为第二步为导致导致原癌基因的移原癌基因的移位及位及扩增扩增，第三步是，第三步是这些这些特殊基因的特殊基因的翻译翻译，使使带带有这些异常基因细胞的某些特性得以专一有这些异常基因细胞的某些特性得以专一表达表达，一一个特殊的个特殊的化学化学物质物质对对这样这样一系列一系列细胞有诱变及细胞有诱变及DNA修复作用修复作用者者，称为称为基因毒基因毒。目目前前人类已知的人类已知的致癌物均为致癌物均为基因毒基因毒。1.免疫性基因治疗2.病因性基因治疗3.溶瘤腺病毒基因治疗4.自杀基因

7、治疗1.免疫性基因治疗免疫性基因治疗1）治疗对象及病症）治疗对象及病症 一般为一般为34岁儿童和老年人。在岁儿童和老年人。在肿瘤发生发肿瘤发生发展过程中，免疫系统发育未完善（展过程中，免疫系统发育未完善（3-4岁）和免岁）和免疫机能衰退（老年人的细胞免疫和体液免疫功疫机能衰退（老年人的细胞免疫和体液免疫功能均衰退）而出现两个肿瘤发生的年龄高峰期能均衰退）而出现两个肿瘤发生的年龄高峰期。胸腺发育不良（胸腺发育不良（Digeoges）综合症综合症 或或咽囊咽囊综合症综合症 是是因因胸腺胸腺发育不良发育不良 而而导致细胞免疫系统导致细胞免疫系统停留在未分化停留在未分化阶段。这阶段。这类患儿兼有细胞免

8、疫缺类患儿兼有细胞免疫缺陷和体液免疫缺陷的陷和体液免疫缺陷的共济失调，恶性肿瘤共济失调，恶性肿瘤的发的发生率高达生率高达10%。由此说明细胞免疫和体液免疫。由此说明细胞免疫和体液免疫功能的正常或活性增强在抗恶性肿瘤的发生中功能的正常或活性增强在抗恶性肿瘤的发生中是不可缺少的。是不可缺少的。研究研究发现当患者发现当患者免疫球蛋白免疫球蛋白 很低，很低，抗体抗体 产生产生受到严重影响受到严重影响时，临床时，临床上病人除了反复发上病人除了反复发生化脓性感染生化脓性感染外，其外，其患者发生恶性肿瘤率为患者发生恶性肿瘤率为8-10%，常见，常见类型为淋巴网状系统肿瘤（类型为淋巴网状系统肿瘤（56%）和胃

9、肠道上皮癌（和胃肠道上皮癌（26%）。Wiskott-Aldrich综合症（综合症（严重混合型严重混合型免疫缺免疫缺陷综合症陷综合症）以以血小板减少出血血小板减少出血，反复感染为，反复感染为临临床特征床特征，早期细胞免早期细胞免疫完善，随之淋巴细疫完善，随之淋巴细胞减少，体外淋转反胞减少，体外淋转反应缺乏，病儿很少活应缺乏，病儿很少活过青春期，约过青春期，约8-10%发生淋巴网状系统肿发生淋巴网状系统肿瘤。瘤。2 2）免疫性）免疫性基因治疗的方法基因治疗的方法 研究研究发现在肿瘤发生发展过程中存在着机体发现在肿瘤发生发展过程中存在着机体免疫系统对肿瘤细胞的免疫系统对肿瘤细胞的免疫耐受状态免疫耐

10、受状态，而这种状，而这种状态可能源于肿瘤细胞本身的免疫性不强（如态可能源于肿瘤细胞本身的免疫性不强（如MHC表达不足），也可源于抗原递表达不足），也可源于抗原递全全细胞细胞（APC）不能提供足够的共刺激信号（如）不能提供足够的共刺激信号（如B7）或）或者机体免疫因子分泌不足，在免疫性基因治疗中者机体免疫因子分泌不足，在免疫性基因治疗中通过以下通过以下三种方法三种方法纠正机体免疫的耐受状态纠正机体免疫的耐受状态。a.将某些将某些细胞因子细胞因子（如如 IL-2、TNF-a等）的基等）的基因转染到因转染到机体免疫细胞机体免疫细胞（如如 TIL、LAK细胞及细胞细胞及细胞毒淋巴细胞毒淋巴细胞）中，大

11、幅度提高机体免疫系统对肿）中，大幅度提高机体免疫系统对肿瘤细胞的识别和反应能力。瘤细胞的识别和反应能力。使用使用细胞因子细胞因子 的的基因治疗在一定程度上克服基因治疗在一定程度上克服了细胞因子注射疗法需反复多次了细胞因子注射疗法需反复多次应用，副作用应用，副作用严严重等重等缺点，疗效缺点，疗效有较大幅度提高。可以这样有较大幅度提高。可以这样认为，认为，肿瘤肿瘤免疫细胞因子基因治疗的免疫细胞因子基因治疗的开展，为开展，为恶性肿瘤恶性肿瘤患者带来生的患者带来生的希望；其希望；其疗效的疗效的稳定，治疗稳定，治疗的简单、的简单、安全，已安全，已成为肿瘤免疫基因治疗研究的最常用方成为肿瘤免疫基因治疗研究

12、的最常用方法而法而独树一帜，前景独树一帜，前景是令业内人士振奋的是令业内人士振奋的。b.肿瘤细胞存在肿瘤细胞存在功能性功能性MHCI类抗原和共刺激类抗原和共刺激信号表达信号表达不足不足，将，将一些一些与免疫识别有关的基因与免疫识别有关的基因（如（如HLA、B7 等等）转染到体外培养的肿瘤）转染到体外培养的肿瘤细胞，细胞，经经照射后再植入肿瘤患者照射后再植入肿瘤患者体内体内 ;或者或者表达表达HLA-B7的病毒载体或质粒的病毒载体或质粒DNA与与脂质复合脂质复合物物 直接注射到瘤体内，以大幅度增强肿瘤细胞对机直接注射到瘤体内，以大幅度增强肿瘤细胞对机体免疫系统的免疫原性，诱导宿主的免疫反应而提高

13、体免疫系统的免疫原性，诱导宿主的免疫反应而提高宿主的免疫监视功能和对肿瘤细胞的攻击能力，对达宿主的免疫监视功能和对肿瘤细胞的攻击能力，对达到治愈率的提高具有积极作用到治愈率的提高具有积极作用。c.制备制备肿瘤肿瘤 KNA疫苗疫苗 采用采用编码特异抗原的编码特异抗原的基因基因 直接直接注入人体，注入人体，通过其在机体内的表达从而激发机体对编码抗原通过其在机体内的表达从而激发机体对编码抗原的免疫反应。应用的免疫反应。应用癌胚抗原（癌胚抗原（CEA）制备的）制备的DNA疫苗疫苗 在在实验中显示出一定实验中显示出一定效果，研究效果，研究的前景的前景可观，可观，毋庸置疑，进入毋庸置疑，进入临床药理实验只

14、是时间问题临床药理实验只是时间问题而已。而已。返回返回2.病因病因性基因治疗性基因治疗 肿瘤肿瘤病因性基因治疗主要病因性基因治疗主要针对针对癌基因癌基因 和和抑癌基抑癌基因因，其，其治疗策略是治疗策略是抑制、阻断癌基因的表达或抑制、阻断癌基因的表达或替代，替代，恢复恢复抑癌基因的抑癌基因的功能功能，从而从而达到治疗肿瘤的目的。达到治疗肿瘤的目的。a.针对癌基因治疗针对癌基因治疗 采用采用反义寡核苷酸、核酸、三链结构寡核苷酸反义寡核苷酸、核酸、三链结构寡核苷酸（Triplex-forming oligonucleotides，TFO）抑制肿）抑制肿瘤细胞的基因转录，抑制癌基因的表达将有可能使肿瘤

15、细胞的基因转录，抑制癌基因的表达将有可能使肿瘤的基因表达调控回复到正常并使细胞重新分化或者瘤的基因表达调控回复到正常并使细胞重新分化或者诱发其凋亡（诱发其凋亡（Apoptosis）。由于转条是遗传信息放）。由于转条是遗传信息放大的过程，因此对癌基因的表达抑制来说更为有效，大的过程，因此对癌基因的表达抑制来说更为有效，其治疗前景是极为乐观的其治疗前景是极为乐观的。b.针对抑癌基因治疗针对抑癌基因治疗 替代替代或恢复由于缺失或突变而丢失的或恢复由于缺失或突变而丢失的抑癌基抑癌基因（因（Tumor suppressor gene）的正常功能是肿的正常功能是肿瘤病因性治疗的手段而被世人所公认。利用抑癌

16、瘤病因性治疗的手段而被世人所公认。利用抑癌基因治疗肿瘤，在体外的实验和实验治疗学中取基因治疗肿瘤，在体外的实验和实验治疗学中取得较好的疗效，但在体内由于肿瘤体积较大，内得较好的疗效，但在体内由于肿瘤体积较大，内环境又十分复杂，基因转移率限制等因素的干扰，环境又十分复杂，基因转移率限制等因素的干扰，抑癌基因治疗的确切疗效不尽人意值得进一步研抑癌基因治疗的确切疗效不尽人意值得进一步研究。究。返回返回 3.溶瘤腺病毒基因治疗溶瘤腺病毒基因治疗溶瘤腺病毒用于基因治疗主要基于其特点溶瘤腺病毒用于基因治疗主要基于其特点:a.溶溶瘤腺病毒的特点瘤腺病毒的特点：具有具有复制性复制性，因此所需病毒颗粒较小，因此

17、所需病毒颗粒较小；能能扩展至邻迈肿瘤细胞，扩展至邻迈肿瘤细胞，作用范围广泛作用范围广泛；溶溶瘤腺病毒可瘤腺病毒可产生溶产生溶瘤瘤 和和抗肿瘤免疫反应抗肿瘤免疫反应；溶溶瘤腺病毒由于能够复制故存在着不安全因素瘤腺病毒由于能够复制故存在着不安全因素（转移、扩散、活化（转移、扩散、活化），对），对肿瘤患者造成损害而肿瘤患者造成损害而失去可控性应引起注意和警惕。失去可控性应引起注意和警惕。b.溶瘤腺病毒的主要分类：溶瘤腺病毒的主要分类：利用利用肿瘤特异表达的调控序例的肿瘤特异表达的调控序例的表达表达，黑色素瘤黑色素瘤表表达酪氨酸达酪氨酸酶酶，肝细胞肝细胞癌表达甲胎蛋白（癌表达甲胎蛋白（AFP），结直）

18、，结直肠癌表达肠癌表达癌胚抗原癌胚抗原（CEF）从而控制病毒复制从而控制病毒复制。利用利用肿瘤细胞生物学特性肿瘤细胞生物学特性，如腺病毒复制时抵抗宿，如腺病毒复制时抵抗宿主细胞凋亡可能相关的主细胞凋亡可能相关的EIB55K蛋白发生变异或缺失时，蛋白发生变异或缺失时，病毒复制的宿主细胞就会发生凋亡，从而使复制不能病毒复制的宿主细胞就会发生凋亡，从而使复制不能完成。代表为完成。代表为E1B55K剔除的剔除的d11520（onyx-015）腺病毒，它能够在抑癌基因腺病毒，它能够在抑癌基因P53缺陷的肿瘤细胞中复缺陷的肿瘤细胞中复制，从而达到裂鲜肿瘤细胞，同时又不损伤正常细胞制，从而达到裂鲜肿瘤细胞，

19、同时又不损伤正常细胞的目的其特异的选择性十分明显。值得期待的的目的其特异的选择性十分明显。值得期待的是，是，D11520和和TH101病毒已进入病毒已进入III期期临床试验，这对于临床试验，这对于癌癌症的预防的作用将产生深远的影响。症的预防的作用将产生深远的影响。返回返回4.自杀基因治疗自杀基因治疗 一些一些来自病毒或细菌的基因具有一些特殊的来自病毒或细菌的基因具有一些特殊的功能，其表达产物可将原先对哺乳动物细胞无毒功能，其表达产物可将原先对哺乳动物细胞无毒的或毒性极低的的或毒性极低的前药（前药（Prodrug）转换成毒性产转换成毒性产物，导致这些细胞的物，导致这些细胞的凋亡凋亡，这这类基因即

20、称为类基因即称为“自自杀基因杀基因”（Suicide gene）。）。由于由于自杀基因表自杀基因表达的产物多是能够将前药代谢为毒性产物的酶，达的产物多是能够将前药代谢为毒性产物的酶，故又称为故又称为“前药转换酶基因前药转换酶基因”或或“药物敏感基药物敏感基因因”。根据细胞自杀机制，将自杀基因作为治疗。根据细胞自杀机制，将自杀基因作为治疗性目的基因应用于肿瘤治疗的研究称为肿瘤的自性目的基因应用于肿瘤治疗的研究称为肿瘤的自杀基因方式。在临床实践中设计肿瘤细胞特异性杀基因方式。在临床实践中设计肿瘤细胞特异性自杀机制的基因治疗方案对肿瘤治疗具有重大的自杀机制的基因治疗方案对肿瘤治疗具有重大的实际应用价

21、值。实际应用价值。a.自杀基因疗法中酶和前药自杀基因疗法中酶和前药b.自杀基因的特异性控制自杀基因的特异性控制 要要高效及特异性表达肿瘤自杀基因对肿瘤细高效及特异性表达肿瘤自杀基因对肿瘤细胞的作用，自杀基因胞的作用，自杀基因必须必须局限局限于于肿瘤细胞以选择肿瘤细胞以选择性杀伤肿瘤细胞。性杀伤肿瘤细胞。一是利用免疫脂质体一是利用免疫脂质体，受体介，受体介导法进行定向基因转移或直接瘤内注射。导法进行定向基因转移或直接瘤内注射。二是利二是利用肿瘤细胞生物学特性用肿瘤细胞生物学特性，通过逆转录病毒介导，通过逆转录病毒介导HSV-TK基因（基因（I型单纯疱疹病毒胸腺激酶）选择型单纯疱疹病毒胸腺激酶）选

22、择性治疗脑肿瘤。三是利用肿瘤特异表达的调控序性治疗脑肿瘤。三是利用肿瘤特异表达的调控序例，如酪氨酸酶、甲胳蛋白（例，如酪氨酸酶、甲胳蛋白（AFP）和癌胚抗原）和癌胚抗原（CEA），在自杀基因的上游安插特异的转条调），在自杀基因的上游安插特异的转条调节序例，可以实现自杀基因的特异表达，从而克节序例，可以实现自杀基因的特异表达，从而克服传统化学治疗药物作选择性问题和较为严重的服传统化学治疗药物作选择性问题和较为严重的细胞毒问题，使肿瘤治疗有较大幅度的进展。细胞毒问题，使肿瘤治疗有较大幅度的进展。c.旁观者效应（旁观者效应（Bystander effect）用用外源性自杀基因转染肿瘤细胞后，未能转染

23、的外源性自杀基因转染肿瘤细胞后，未能转染的肿瘤细胞可因邻近的少数肿瘤细胞携带有自杀肿瘤细胞可因邻近的少数肿瘤细胞携带有自杀基因基因而而被前体被前体药物药物杀伤杀伤。研究研究发现发现，旁观者，旁观者效应效应产生产生与自杀基与自杀基因的因的种类种类、肿瘤细、肿瘤细胞的胞的类型类型及数量有及数量有关。关。TK/GCV系统系统的旁观者效应的旁观者效应 是比是比较明显较明显和和突出的突出的。返回返回a.基因修饰肿瘤细胞基因修饰肿瘤细胞“疫苗疫苗”疗法疗法 将将某些某些细胞因子细胞因子基因基因 如如IL-2、IL-4、TNF-、INF-、GM-CSF等转染肿瘤细胞，可使肿瘤细等转染肿瘤细胞，可使肿瘤细胞表

24、达活性细胞因子。转染细胞因子基因的肿瘤胞表达活性细胞因子。转染细胞因子基因的肿瘤细胞基体内致瘤性丧失，耐动物预接肿这种转基细胞基体内致瘤性丧失，耐动物预接肿这种转基因肿瘤细胞后，该动物对再接种的同种肿瘤有抵因肿瘤细胞后，该动物对再接种的同种肿瘤有抵抗作用。能分泌细胞因子的转基因肿瘤细胞具有抗作用。能分泌细胞因子的转基因肿瘤细胞具有肿瘤疫苗作用，成为新型的肿瘤疫苗作用，成为新型的肿瘤肿瘤“疫苗疫苗”。这种。这种肿瘤疫苗的作用机制是由于细胞因子表达后，一肿瘤疫苗的作用机制是由于细胞因子表达后，一方面促进肿瘤表达特异抗原并诱发宿主抗肿瘤细方面促进肿瘤表达特异抗原并诱发宿主抗肿瘤细胞毒性淋巴细胞胞毒性

25、淋巴细胞(CTL)反应反应;另一方面分泌的细胞另一方面分泌的细胞因子增强因子增强CTL和其他抗癌效应细胞的作用。和其他抗癌效应细胞的作用。b.基因修饰基因修饰TIL的过继免疫疗法的过继免疫疗法 将将细胞因子导入细胞因子导入TIL细胞细胞 中中，活化后的，活化后的TIL具具有显著抗自身肿瘤的作用，回输体仙后有聚集于有显著抗自身肿瘤的作用，回输体仙后有聚集于肿瘤部位的倾向，携带的抗癌免疫增强性细胞因肿瘤部位的倾向，携带的抗癌免疫增强性细胞因子基因在肿瘤局部表达量增加，同时还避免全身子基因在肿瘤局部表达量增加，同时还避免全身大剂量投用大剂量投用IL-2、TNF-等细胞因子所引起的严等细胞因子所引起的

26、严重毒副反应。目前已将重毒副反应。目前已将TNF-基因导入基因导入TIL，并在，并在癌症患者中进行临床试验癌症患者中进行临床试验。c.免疫增强免疫增强基因疗法基因疗法 将将MHC1类抗原类抗原基因基因 经经体内导入肿瘤细胞内，体内导入肿瘤细胞内，增加其免疫原性，有效地激活机体抗癌免疫反应，增加其免疫原性，有效地激活机体抗癌免疫反应，降低肿瘤细胞的致瘤性。降低肿瘤细胞的致瘤性。d.原位修饰肿瘤免疫原性的基因疗法原位修饰肿瘤免疫原性的基因疗法 直接直接在体内原位修饰肿瘤免疫原性，诱导肿在体内原位修饰肿瘤免疫原性，诱导肿瘤特异性细胞毒反应，同时肿瘤组织的瘤特异性细胞毒反应，同时肿瘤组织的CTL可产可

27、产生一种生一种“旁观者效应旁观者效应”(bystander effect),即即CTL不仅可以杀伤转导基因阳性肿瘤细胞，还可不仅可以杀伤转导基因阳性肿瘤细胞，还可以杀伤转导基因阴性肿瘤细胞，使受基因治疗的以杀伤转导基因阴性肿瘤细胞，使受基因治疗的瘤灶消退时，其他未治疗的瘤灶也会消退。瘤灶消退时，其他未治疗的瘤灶也会消退。e.癌基因拮抗疗法癌基因拮抗疗法 肿瘤肿瘤的发生与癌基因的激活和抑癌基因的失的发生与癌基因的激活和抑癌基因的失活有关，可以通地阻断癌基因的表达或恢复抑癌活有关，可以通地阻断癌基因的表达或恢复抑癌基因的功能来抑制肿瘤的发展或恢复其正常表型。基因的功能来抑制肿瘤的发展或恢复其正常表

28、型。返回返回 目前目前，在基因导入载体方面出现了两大主流：，在基因导入载体方面出现了两大主流：一类是一类是非非病毒载体系统病毒载体系统，另一类是，另一类是病毒载体系统病毒载体系统。a.非病毒载体系统非病毒载体系统 非病毒载体主要非病毒载体主要包括包括改性的天然高分子和合改性的天然高分子和合成成高分子高分子 两两大类。由于非病毒系统导入基因的效大类。由于非病毒系统导入基因的效率相对较差，故在基因治疗临床试验中的使用率率相对较差，故在基因治疗临床试验中的使用率不到不到20%，但非病毒载体的生物安全性较好，特，但非病毒载体的生物安全性较好，特别是靶向性的脂质体、靶向性的多聚物，以及脂别是靶向性的脂质

29、体、靶向性的多聚物，以及脂质体质体/多聚物多聚物/DNA 复合物等新产品的出现，结复合物等新产品的出现，结合电脉冲、超声等新技术，明显提高了导入效率合电脉冲、超声等新技术，明显提高了导入效率和靶向性，是今后非病毒载体发展的重要方向。和靶向性，是今后非病毒载体发展的重要方向。b.病毒载体病毒载体系统系统 病毒载体病毒载体在基因治疗领域的应用最为在基因治疗领域的应用最为广泛，广泛，大约大约70%的治疗方案采用了病毒载体，包括的治疗方案采用了病毒载体，包括各种各种逆转录病毒、腺病毒、腺相关病毒、疱疹病毒、逆转录病毒、腺病毒、腺相关病毒、疱疹病毒、痘病毒痘病毒等。这些病毒载体有各自的特点，同时也等。这

30、些病毒载体有各自的特点，同时也存在各自的局限性。此外，还必须深入研究逆转存在各自的局限性。此外，还必须深入研究逆转录病毒诱发癌症的机理，构建更为安全的载体。录病毒诱发癌症的机理，构建更为安全的载体。基于同源重组和基因定点纠错原理，在基于同源重组和基因定点纠错原理，在DNA 水水平的原位修复平的原位修复(靶向性靶向性)是遗传性疾病基因治疗的是遗传性疾病基因治疗的理想措施理想措施。与与基因治疗载体系统相比，治疗基因表达调基因治疗载体系统相比，治疗基因表达调控的研究和进展相对滞后，主要受制于载体的包控的研究和进展相对滞后，主要受制于载体的包装容量。随着人类基因组计划的进展与完成装容量。随着人类基因组计划的进展与完成新新的基因座控制区、隔离子、内含子、特异的启动的基因座控制区、隔离子、内含子、特异的启动子、增强子等的发现与子、增强子等的发现与分离，必定分离，必定带动基因治疗带动基因治疗向前发展。向前发展。T H E E N D THANKS