白细胞血型HLA法医学培训课件.pptx

1、 HLAHLA的命名、遗传、应用、抗原在的命名、遗传、应用、抗原在体内的分布、测定体内的分布、测定I I类抗原的试验类抗原的试验名称、原理，名称、原理，NIH技术技术HLAHLA抗原的结构、抗原的结构、HLAHLA抗体的来抗体的来源、特性及交叉反应，源、特性及交叉反应，DNA分型分型方法。方法。掌掌 握握了了 解解红细胞血型抗原红细胞血型抗原白细胞特有抗原白细胞特有抗原与其它组织共有抗原：与其它组织共有抗原：HLA人类人类白细胞膜上白细胞膜上的抗原的抗原1HLA又称移又称移植抗原、组植抗原、组织相容性抗织相容性抗原原.2基因群基因群 MHC主要组织相容主要组织相容性复合体人类性复合体人类的的M

2、HC称为称为HLA系统系统类抗原类抗原：D、DR、DP、DQ类抗原类抗原：A、B、C人类组织相容性抗原人类组织相容性抗原分七个座位分七个座位小鼠肿瘤移植排斥，多次输血病人体内及小鼠肿瘤移植排斥，多次输血病人体内及经产妇体内有抗体，发现白细胞抗原存在经产妇体内有抗体，发现白细胞抗原存在多数组织中，微量淋巴细胞毒试验，国际多数组织中，微量淋巴细胞毒试验，国际专题讨论会，分子生物学研究。专题讨论会，分子生物学研究。45kd，由，由MHC编码编码，有，有5个结构域：个结构域：1、2有多态性，有多态性，3与与2m以非共价键以非共价键连接，连接，4越膜部分越膜部分，5在胞浆内。可在胞浆内。可溶性抗原即位于

3、胞溶性抗原即位于胞膜外部分。膜外部分。即即2m(2微球蛋微球蛋白白)，12kd，基，基因在第因在第15号染色号染色体，影响重链表体，影响重链表现出抗原性。现出抗原性。类抗原：类抗原：A、B、C抗原抗原链（轻链）链（轻链）链（重链）链（重链）类抗原：类抗原：DR、DP、DQ链、链、链均为重链，非共价键连接，由链均为重链，非共价键连接，由MHC编编码，二条链各有码，二条链各有4个结构域，多态性主要由个结构域，多态性主要由1、1结构域决定。结构域决定。PCR-RFLP(限制性片段长度多态性)HLA基因座的多态性基础是碱基序列的差异，6个外显子和5个内含子8个外显子和7个内含子交叉反应一般较弱，打分细

4、胞膜受损，着色，HLA又称移植抗原、组织相容性抗原.C、D、DR、DP、DQ基因型：A9,A11；DNA分型优于血清学分型同一特异性分出来的几个特异性间往往强交叉，如：A23A24；C座位，Cw为与补体区分；三、抗原结构与细胞分布等位基因命名似血清学命名B座位交叉反应多于A座位。大写英文字母：A、B、现以PCR技术衍生的方法。类类Ag几乎所有有核细胞膜上，淋巴细胞密几乎所有有核细胞膜上，淋巴细胞密度最高。以可溶性形式存在血浆、体度最高。以可溶性形式存在血浆、体液中。成熟红细胞无，血小板有。液中。成熟红细胞无，血小板有。类类Ag免疫活性细胞上：树突状细胞、单免疫活性细胞上：树突状细胞、单核细胞、

5、核细胞、B细胞。细胞。精精 子子、类类Ag都有，且以单倍都有，且以单倍型形式表达。型形式表达。1妊娠妊娠6周周2（月经期、（月经期、排卵期）排卵期）可能与激可能与激素有关。素有关。3与细胞与细胞膜代谢膜代谢有关。有关。发育早发育早4药物、疾病，药物、疾病，如肿瘤。如肿瘤。主要表现为抗主要表现为抗原与抗体反应原与抗体反应减弱，或可逆减弱，或可逆性丧失。性丧失。5使蛋白质变使蛋白质变性的因素都性的因素都会使会使HLA抗抗原发生不可原发生不可逆的变化逆的变化生理周期生理周期献血员献血员病病 理理理化性质理化性质变变 异异6单倍型频率等于组成基因频率的乘积，但有些单倍型观察频率高于或低于期望频率。阿拉

6、伯数字：1、2、3PCR-SSO(等位基因特异性寡核苷酸探 针（ASO）杂交)主要编码DR、DP、DQ的、链8个外显子和7个内含子微量淋巴细胞毒实验步骤微量淋巴细胞毒性实验 NIH技术原理HLA-A23(9)：9为宽特异性，23为窄特异性A11抗原分离B淋巴细胞作微量淋巴细胞毒实验。微量淋巴细胞毒实验步骤同一特异性分出来的几个特异性间往往强交叉，如：A23A24；PCR-RFLP(限制性片段长度多态性)C座位，Cw为与补体区分；母HLA-DRB1*0302纯合子HLA的命名、遗传、应用、抗原在体内的分布、测定I类抗原的试验名称、原理，NIH技术大写英文字母：A、B、几乎所有有核细胞膜上，淋巴细

7、胞密度最高。大写英文字母：大写英文字母：A、B、C、D、DR、DP、DQ阿拉伯数字：阿拉伯数字：1、2、3A、B座位数字不重叠；座位数字不重叠；C座位，座位，Cw为与补体区分；为与补体区分；D、DP座位，座位，Dw、DPw为用细胞学方法测定。为用细胞学方法测定。HLA-A*0201（A座位，座位，A2抗原，抗原，1号号亚型基因）亚型基因）A*0210（10号亚型基因）号亚型基因）HLA-A23(9)：9为宽特异性，为宽特异性，23为窄特为窄特异性异性 抗原抗原座位座位每一座每一座位特异位特异性性等位基因等位基因命名似血命名似血清学命名清学命名大写英文字母：大写英文字母：A、B、C、D、DR、D

8、P、DQ抗原抗原座位座位大写英文字母：大写英文字母：A、B、C、D、DR、DP、DQ抗原抗原座位座位大写英文字母：大写英文字母：A、B、C、D、DR、DP、DQ抗原抗原座位座位大写英文字母：大写英文字母：A、B、C、D、DR、DP、DQ抗原抗原座位座位类类类类类基基因因区区基基因因区区基基因因区区主要编码主要编码A、B、C 抗原的抗原的链链18个外显子和个外显子和7个内含子个内含子2多态性主要由外显子多态性主要由外显子2和和3决定决定3主要编码主要编码DR、DP、DQ的的、链链DRA有有3个个等位基因，等位基因，DRB有有9个个基因位点基因位点6个外显个外显子和子和5个个内含子内含子多态性主多

9、态性主要由外显要由外显子子2决定决定共显性遗传共显性遗传特异性单倍型遗传特异性单倍型遗传重重组组连锁不平衡连锁不平衡基因单位点遗传基因单位点遗传 一个座位最多检出二个抗原一个座位最多检出二个抗原。A2，A-：表示为：表示为A2纯合子或纯合子或A2和和一个空白抗原或一个空白抗原或A2和一个至今尚未和一个至今尚未发现的抗原发现的抗原。单倍型频率等于组成基因频率的单倍型频率等于组成基因频率的乘积，但有些单倍型观察频率高乘积，但有些单倍型观察频率高于或低于期望频率。于或低于期望频率。A2频率频率0.3，B46频率频率0.05，A2,B46预期频率预期频率0.015，但实际，但实际观察值观察值0.04。

10、因此计算亲权指数。因此计算亲权指数时要用单倍型频率。时要用单倍型频率。8个外显子和7个内含子B座位交叉反应多于A座位。大写英文字母：A、B、A11,B13,/A9,B5微量淋巴细胞毒性实验 NIH技术原理同一特异性分出来的几个特异性间往往强交叉，如：A23A24；A11抗体 交叉。1、A、B、C抗原分型现以PCR技术衍生的方法。大写英文字母：A、B、A2，A-：表示为A2纯合子或A2和一个空白抗原或A2和一个至今尚未发现的抗原。多为IgG,少为IgM，有细胞毒作用，部分有凝集作用。HLA又称移植抗原、组织相容性抗原.主要编码A、B、C 抗原的链可溶性抗原即位于胞膜外部分。PCR-SSO(等位基

11、因特异性寡核苷酸探 针（ASO）杂交)、类Ag都有，且以单倍型形式表达。2、DR、DQ抗原分型父HLA-DRB1*0401纯合子多态性主要由外显子2和3决定A3抗原微量淋巴细胞毒性实验微量淋巴细胞毒性实验 NIH技术原理技术原理微量淋巴细胞毒实验步骤微量淋巴细胞毒实验步骤抗体抗体+相应抗原相应抗原+补体补体细胞膜受损，着色，细胞膜受损，着色，估计死细胞占全部细胞估计死细胞占全部细胞的的%，判定抗原。，判定抗原。制备淋巴细胞悬液，多用外周血，通过密度梯度离心法取得淋巴细胞，调细胞数2000个/ul1ul抗原+1ul抗体(30min、2025)+5ul补体（兔血清）(60min、2025)+3ul

12、伊红(58min)+8ul甲醛(过夜)低倍镜观察、判读结果。微量淋巴细胞毒实验步骤微量淋巴细胞毒实验步骤 B淋巴细胞淋巴细胞 从全淋巴细胞中通过尼从全淋巴细胞中通过尼龙棉柱法龙棉柱法分离分离B淋巴细胞作微量淋巴细胞毒实淋巴细胞作微量淋巴细胞毒实验。验。2 2、DRDR、DQDQ抗原分型抗原分型:同种异体免疫：妊娠、输同种异体免疫：妊娠、输血、器官移植，以产妇血血、器官移植，以产妇血清获得为主；单克隆抗体；清获得为主；单克隆抗体；免疫动物等。免疫动物等。来源来源微量淋巴细胞毒性实验 NIH技术原理DRA有3个等位基因，DRB有9个基因位点HLA又称移植抗原、组织相容性抗原.大写英文字母：A、B、

13、类Ag都有，且以单倍型形式表达。C、D、DR、DP、DQPCR-SSO(等位基因特异性寡核苷酸探 针（ASO）杂交)大写英文字母：A、B、PCR-SSO(等位基因特异性寡核苷酸探 针（ASO）杂交)A11抗原 各座位特异性连锁成单倍型遗传。现以PCR技术衍生的方法。主要编码A、B、C 抗原的链DRA有3个等位基因，DRB有9个基因位点B座位交叉反应多于A座位。DNA分型优于血清学分型PCR-RFLP(限制性片段长度多态性)主要编码A、B、C 抗原的链阿拉伯数字：1、2、3同种异体免疫：妊娠、输血、器官移植，以产妇血清获得为主；多为多为IgG,IgG,少为少为IgMIgM，有细，有细胞毒作用，部

14、分有凝集作胞毒作用，部分有凝集作用。效价低，多数为多价用。效价低，多数为多价.DNA分型优于血清学分型微量淋巴细胞毒实验步骤几乎所有有核细胞膜上，淋巴细胞密度最高。多态性主要由外显子2决定主要表现为抗原与抗体反应减弱，或可逆性丧失。三、抗原结构与细胞分布同一特异性分出来的几个特异性间往往强交叉，如：A23A24；与其它组织共有抗原：HLAPCR-RFLP(限制性片段长度多态性)即2m(2微球蛋白)，12kd，基因在第15号染色体，影响重链表现出抗原性。A11抗体 交叉。微量淋巴细胞毒性实验 NIH技术原理1、A、B、C抗原分型主要编码A、B、C 抗原的链单倍型频率等于组成基因频率的乘积，但有些

15、单倍型观察频率高于或低于期望频率。微量淋巴细胞毒性实验 NIH技术原理链、链均为重链，非共价键连接，由MHC编码，二条链各有4个结构域，多态性主要由1、1结构域决定。现以PCR技术衍生的方法。PCR-SSO(等位基因特异性寡核苷酸探 针（ASO）杂交)HLA的命名、遗传、应用、抗原在体内的分布、测定I类抗原的试验名称、原理，NIH技术交叉反应:多数为同一座位上的多数为同一座位上的Ag、Ab间；间；同一特异性分出来的几个特异性间往往强交叉，如：同一特异性分出来的几个特异性间往往强交叉，如：A23A24；B座位交叉反应多于座位交叉反应多于A座位。座位。交叉反应一般较弱，打分交叉反应一般较弱，打分6

16、分。分。B7抗原刺激产生的抗抗原刺激产生的抗体与体与B7、B27、B22抗原均可反应，说明抗原均可反应，说明B7、B27、B22间有交叉。间有交叉。A11抗原A11抗体 交叉。A3抗原PCR-RFLP(限制性片段长度多态性限制性片段长度多态性)PCR-SSP(序列特异性引物序列特异性引物)PCR-SSO(等位基因特异性寡核苷酸探等位基因特异性寡核苷酸探 针（针（ASO）杂交）杂交)PCR-测序测序血清学分型和DNA分型比较DNA分型优于血清学分型分型优于血清学分型便于标准化便于标准化和比较和比较提高分辨率提高分辨率减少漏检减少漏检使用使用 范围广范围广 减少减少 分型误差分型误差类抗原类抗原：

17、D、DR、DP、DQ类抗原类抗原：A、B、C人类组织相容性抗原人类组织相容性抗原分七个座位分七个座位HLA又称移植抗原、组织相容性抗原.现以PCR技术衍生的方法。D、DP座位，Dw、DPw为用细胞学方法测定。成熟红细胞无，血小板有。与其它组织共有抗原：HLAC、D、DR、DP、DQ几乎所有有核细胞膜上，淋巴细胞密度最高。主要编码DR、DP、DQ的、链成熟红细胞无，血小板有。C、D、DR、DP、DQPCR-SSO(等位基因特异性寡核苷酸探 针（ASO）杂交)HLA-A*0201（A座位，A2抗原，1号亚型基因）A*0210（10号亚型基因）微量淋巴细胞毒性实验 NIH技术原理小鼠肿瘤移植排斥，多

18、次输血病人体内及经产妇体内有抗体，发现白细胞抗原存在多数组织中，微量淋巴细胞毒试验，国际专题讨论会，分子生物学研究。8个外显子和7个内含子多态性主要由外显子2决定A11抗体 交叉。阿拉伯数字：1、2、3B座位交叉反应多于A座位。主要编码A、B、C 抗原的链类类Ag几乎所有有核细胞膜上，淋巴细胞密几乎所有有核细胞膜上，淋巴细胞密度最高。以可溶性形式存在血浆、体度最高。以可溶性形式存在血浆、体液中。成熟红细胞无，血小板有。液中。成熟红细胞无，血小板有。类类Ag免疫活性细胞上：树突状细胞、单免疫活性细胞上：树突状细胞、单核细胞、核细胞、B细胞。细胞。精精 子子、类类Ag都有，且以单倍都有，且以单倍型

19、形式表达。型形式表达。主要编码主要编码DR、DP、DQ的的、链链DRA有有3个个等位基因，等位基因，DRB有有9个个基因位点基因位点6个外显个外显子和子和5个个内含子内含子多态性主多态性主要由外显要由外显子子2决定决定LOGO同种异体免疫：妊娠、输同种异体免疫：妊娠、输血、器官移植，以产妇血血、器官移植，以产妇血清获得为主；单克隆抗体；清获得为主；单克隆抗体；免疫动物等。免疫动物等。来源来源PCR-RFLP(限制性片段长度多态性)、类Ag都有，且以单倍型形式表达。C座位，Cw为与补体区分；微量淋巴细胞毒性实验 NIH技术原理主要编码A、B、C 抗原的链2、DR、DQ抗原分型微量淋巴细胞毒性实验

20、 NIH技术原理微量淋巴细胞毒性实验 NIH技术原理与其它组织共有抗原：HLADNA分型优于血清学分型PCR-SSO(等位基因特异性寡核苷酸探 针（ASO）杂交)8个外显子和7个内含子大写英文字母：A、B、分离B淋巴细胞作微量淋巴细胞毒实验。分离B淋巴细胞作微量淋巴细胞毒实验。A11抗体 交叉。HLA的命名、遗传、应用、抗原在体内的分布、测定I类抗原的试验名称、原理，NIH技术微量淋巴细胞毒实验步骤多态性主要由外显子2决定PCR-测序成熟红细胞无，血小板有。小鼠肿瘤移植排斥，多次输血病人体内及经产妇体内有抗体，发现白细胞抗原存在多数组织中，微量淋巴细胞毒试验，国际专题讨论会，分子生物学研究。P

21、CR-RFLP(限制性片段长度多态性)PCR-SSO(等位基因特异性寡核苷酸探 针（ASO）杂交)分离B淋巴细胞作微量淋巴细胞毒实验。HLA又称移植抗原、组织相容性抗原.主要编码DR、DP、DQ的、链C、D、DR、DP、DQ阿拉伯数字：1、2、3C、D、DR、DP、DQ几乎所有有核细胞膜上，淋巴细胞密度最高。同种异体免疫：妊娠、输血、器官移植，以产妇血清获得为主；免疫活性细胞上：树突状细胞、单核细胞、B细胞。、类Ag都有，且以单倍型形式表达。微量淋巴细胞毒性实验 NIH技术原理C座位，Cw为与补体区分；微量淋巴细胞毒性实验 NIH技术原理主要表现为抗原与抗体反应减弱，或可逆性丧失。主要编码A、

22、B、C 抗原的链三、抗原结构与细胞分布PCR-RFLP(限制性片段长度多态性)成熟红细胞无，血小板有。微量淋巴细胞毒性实验 NIH技术原理微量淋巴细胞毒性实验 NIH技术原理免疫活性细胞上：树突状细胞、单核细胞、B细胞。分离B淋巴细胞作微量淋巴细胞毒实验。A3抗原PCR-SSO(等位基因特异性寡核苷酸探 针（ASO）杂交)2、DR、DQ抗原分型成熟红细胞无，血小板有。大写英文字母：A、B、1、A、B、C抗原分型HLA的命名、遗传、应用、抗原在体内的分布、测定I类抗原的试验名称、原理，NIH技术A11抗体 交叉。成熟红细胞无，血小板有。C座位，Cw为与补体区分；B座位交叉反应多于A座位。等位基因命名似血清学命名主要编码A、B、C 抗原的链交叉反应:多数为同一座位上的多数为同一座位上的Ag、Ab间；间；同一特异性分出来的几个特异性间往往强交叉，如：同一特异性分出来的几个特异性间往往强交叉，如：A23A24；B座位交叉反应多于座位交叉反应多于A座位。座位。交叉反应一般较弱，打分交叉反应一般较弱，打分6分。分。B7抗原刺激产生的抗抗原刺激产生的抗体与体与B7、B27、B22抗原均可反应，说明抗原均可反应，说明B7、B27、B22间有交叉。间有交叉。A11抗原A11抗体 交叉。A3抗原