感染的检查方法与防治原则实用版课件.ppt

1、章病毒感染的检查方法与防治原则（优选）章病毒感染的检查方法与防治原则标本的采集与送检标本的采集与送检 1.标本中常加入抗生素。标本中常加入抗生素。2.低温保存，尽快送检。低温保存，尽快送检。3.血清学标本两份血清学标本两份二、病毒的分离与鉴定二、病毒的分离与鉴定 标 本分离分离培养培养动物接种动物接种鸡胚培养鸡胚培养细胞培养细胞培养病毒形态观察病毒形态观察光镜光镜电镜电镜包涵体包涵体病毒体病毒体CPETCID50 ,PFU（一）病毒的分离培养（一）病毒的分离培养 1.动物接种动物接种 应用尚无敏感细胞的病毒培养应用尚无敏感细胞的病毒培养 动物兔、鼠、黑猩猩、猴等动物兔、鼠、黑猩猩、猴等 优点结

2、果易观察，可建立动物模型优点结果易观察，可建立动物模型 缺点有饲养条件要求，费用高，动缺点有饲养条件要求，费用高，动物物 体内常带有潜伏病毒体内常带有潜伏病毒动物接种羊膜腔（羊膜腔（amniotic cavityamniotic cavity）流感病毒的初次分离流感病毒的初次分离卵黄囊（卵黄囊（yolk sacyolk sac）嗜神经病毒嗜神经病毒痘苗病毒、人类疱疹病毒病毒鸡红细胞凝集（血凝试验）尿囊腔（allantoic cavity）临床诊断少用病毒中和抗体 病毒失去感染性血凝抑制试验（hemagglutination细胞种类 二倍体细胞（diploid cell）血凝试验：病毒总量（活病

3、毒死病毒）中和试验（neutralizing test）早期抗体检测（IgM）（plaque formation test）痘苗病毒、人类疱疹病毒中和试验（neutralizing test）卵黄囊（yolk sac）干扰现象（interference）三、病毒感染的血清学诊断临床诊断少用病毒成分（抗原或核酸）优点：易管理，不带微生物，成本较低优点：易管理，不带微生物，成本较低缺点：操作程序复杂缺点：操作程序复杂3.3.细胞培养细胞培养 1.细胞病变效应细胞病变效应(cytopathic effect,CPECPE)细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落等（多数病毒）

4、；等（多数病毒）；形成多核巨细胞或称融合细胞（麻疹形成多核巨细胞或称融合细胞（麻疹病毒、巨细胞病毒、呼吸道合胞病毒等）；病毒、巨细胞病毒、呼吸道合胞病毒等）；在培养细胞中形成包涵体（狂犬病病在培养细胞中形成包涵体（狂犬病病毒、麻疹病毒等）。毒、麻疹病毒等）。即抗原的cDNA或mRNA与载体（如质（血凝抑制试验）采取标本分离病毒为时已晚人工被动免疫(artificial passive immunization)病毒鸡红细胞凝集（血凝试验）三、病毒感染的血清学诊断细胞代谢变慢载体疫苗是活疫苗，具有和减毒活疫苗相似的特点。体内常带有潜伏病毒输入含有特异性抗体的免疫血清、纯化免疫球蛋白抗体或细胞因子

5、等免疫制剂，使机体立即获得特异性免疫力的过程。（plaque formation test）早期抗体检测（IgM）绒毛尿囊膜（allantocherion）细胞代谢变慢补体结合试验 （complement fixation test）病毒中和抗体 病毒失去感染性嗜神经病毒包涵体EBV早期抗原抗体腮腺炎病毒感染细胞腮腺炎病毒感染细胞病毒囊膜表面血凝素病毒囊膜表面血凝素(HA)(HA)红细胞表面红细胞表面HAHA受体受体细胞代谢变慢细胞代谢变慢 pH pH变化减慢变化减慢 病毒形态学鉴定病毒形态学鉴定 病毒血清学鉴定病毒血清学鉴定1.1.血凝试验：病毒总量（活病毒死病毒）血凝试验：病毒总量（活病毒

6、死病毒）2.2.空空斑形成试验斑形成试验 （plaque formation testplaque formation test）3.503.50组织细胞感染量组织细胞感染量 （5050 tissue culture tissue culture infectious dose,TCID infectious dose,TCID5050）感染性病毒量感染性病毒量空斑试验空斑试验病毒中和抗体病毒中和抗体 病毒失去感染性病毒失去感染性 特点特异性高，抗体维持时间长特点特异性高，抗体维持时间长应用人群免疫情况的调查应用人群免疫情况的调查 临床诊断少用临床诊断少用正粘病毒型与亚正粘病毒型与亚型鉴定型鉴

7、定 3.3.补体结合试验补体结合试验 （complement fixation testcomplement fixation test）用已知病毒可溶性补体抗原检测病 人血清中相应的补体抗体 特点特异性低，抗体出现早，消失快 应用近期感染指标。数小时内出结果数小时内出结果 病毒颗粒病毒颗粒 病毒成分（抗原或核酸）病毒成分（抗原或核酸）早期抗体检测（早期抗体检测（IgMIgM）电镜和免疫电镜检查电镜和免疫电镜检查 普通光学显微镜检查普通光学显微镜检查 包涵体包涵体在培养细胞中形成包涵体（狂犬病病毒、麻疹病毒等）。细胞种类 二倍体细胞（diploid cell）*基因工程亚单位疫苗的安全性好，但

8、免疫原性较差，需使用佐剂以提高其免疫原性。体内常带有潜伏病毒EBV早期抗原抗体应用尚无敏感细胞的病毒培养子结合递呈后，在辅助因子的协助下诱呼吸道合胞病毒感染细胞TCID50 ,PFU单层细胞培养（monolayer cell culture）尿囊腔（allantoic cavity）绒毛尿囊膜（allantocherion）在培养细胞中形成包涵体（狂犬病病毒、麻疹病毒等）。血凝抑制试验（hemagglutination卵黄囊（yolk sac）形成多核巨细胞或称融合细胞（麻疹病毒、巨细胞病毒、呼吸道合胞病毒等）；缺点有饲养条件要求，费用高，动物中和试验（neutralizing test）血凝

9、抑制试验（hemagglutination 可诊断急性感染 特异性IgM抗体 孕妇感染风疹病毒 EBV早期抗原抗体 人工主动免疫人工主动免疫(artificial active immunization):将疫苗(vaccine)或类毒素(toxoid)接种于人体，使机体主动产生获得性免疫力的一种防治微生物感染的措施。第一代疫苗第一代疫苗第二代疫苗第二代疫苗第三代疫苗第三代疫苗死疫苗活疫苗亚单位疫苗基因工程疫苗重组载体疫苗合成肽疫苗DNA疫苗转基因植物疫苗*载体疫苗载体疫苗 利用非致病微生物做利用非致病微生物做载体载体，将病毒的，将病毒的保护保护性抗原基因片段性抗原基因片段重组到载体微生物基因

10、组中，重组到载体微生物基因组中，用表达保护性抗原的微生物作为疫苗。用表达保护性抗原的微生物作为疫苗。载体疫苗是载体疫苗是活疫苗活疫苗，具有和减毒活疫苗相似，具有和减毒活疫苗相似的特点。的特点。*亚单位疫苗亚单位疫苗 用化学方法裂解和提取而制成的病毒用化学方法裂解和提取而制成的病毒保护性抗原组份。保护性抗原组份。其特点与灭活疫苗类似。其特点与灭活疫苗类似。基因工程亚单位疫苗基因工程亚单位疫苗*用基因工程表达的病毒蛋白抗原制成的疫苗。用基因工程表达的病毒蛋白抗原制成的疫苗。*表达外源基因的系统细菌、酵母、哺乳动物表达外源基因的系统细菌、酵母、哺乳动物细胞、昆虫细胞等。细胞、昆虫细胞等。*基因工程亚

11、单位疫苗的安全性好，但免疫原基因工程亚单位疫苗的安全性好，但免疫原性较差，需使用佐剂以提高其免疫原性。性较差，需使用佐剂以提高其免疫原性。*核酸疫苗核酸疫苗 将编码病毒某种抗原蛋白的外源基因，将编码病毒某种抗原蛋白的外源基因，即抗原的即抗原的cDNA或或mRNA与载体（如质与载体（如质 粒粒DNA）重组直接注入体内，使体细）重组直接注入体内，使体细 胞编码病毒抗原，并通过细胞胞编码病毒抗原，并通过细胞MHC分分 子结合递呈后，在辅助因子的协助下诱子结合递呈后，在辅助因子的协助下诱 导细胞免疫和抗体应答。导细胞免疫和抗体应答。DNA疫苗；疫苗；RNA疫苗。疫苗。人工被动免疫人工被动免疫(arti

12、ficial passive immunization)输入含有特异性抗体的免疫血清、纯化免疫球蛋白抗体或细胞因子等免疫制剂，使机体立即获得特异性免疫力的过程。*免疫球蛋白免疫球蛋白 *细胞免疫制剂细胞免疫制剂血凝试验：病毒总量（活病毒死病毒）接种部位 流感病毒、腮腺炎病毒血凝抑制试验（hemagglutination传代细胞系（continuous cell line）（三）病毒数量与感染性测定infectious dose,TCID50）（plaque formation test）接种部位 流感病毒、腮腺炎病毒优点：易管理，不带微生物，成本较低应用人群免疫情况的调查基因工程亚单位疫苗载体疫苗是活疫苗，具有和减毒活疫苗相似的特点。动物兔、鼠、黑猩猩、猴等应用近期感染指标。在培养细胞中形成包涵体（狂犬病病毒、麻疹病毒等）。章病毒感染的检查方法与防治原则痘苗病毒、人类疱疹病毒