病原微生物病毒感染的检查方法与防治原则课件.pptx

1、第一节第一节 病毒感染的检查方法病毒感染的检查方法病毒感染的检查病毒感染的检查 一般原则：特异、敏感、快速、简便一般原则：特异、敏感、快速、简便 方法方法1 1根据流行病学和临床特点初步判定可能感染根据流行病学和临床特点初步判定可能感染的病毒。的病毒。2 2根据可疑病毒的生物学性状，机体免疫应答根据可疑病毒的生物学性状，机体免疫应答和临床过程以及病人当前所处的时机，确定实和临床过程以及病人当前所处的时机，确定实验诊断方法。验诊断方法。病毒感染的检查病毒感染的检查检测内容检测内容查病毒查病毒查特异性查特异性抗体抗体 病毒颗粒病毒颗粒 病毒抗原病毒抗原 病毒核酸病毒核酸 病毒酶类：如逆转录酶病毒酶

2、类：如逆转录酶 电镜直接观察电镜直接观察 光镜检查包含体光镜检查包含体 分离培养分离培养一、标本的采集与送检一、标本的采集与送检原则基本与细菌相似原则基本与细菌相似，但，但应注意：应注意：1.1.标本用标本用“双抗双抗”或两性霉素或两性霉素B B处理处理 2.2.低温保存低温保存，尽快送检尽快送检 3.3.血清学诊断采双份血清血清学诊断采双份血清二、病毒的分离与鉴定二、病毒的分离与鉴定 1.1.细胞培养细胞培养 微生物及其代谢产物抗原变异病毒基因的鉴定微生物及其代谢产物干扰素和干扰素诱生剂动物：兔、鼠、黑猩猩、猴等（三）病毒感染的血清学诊断核酸杂交技术血清丙种球蛋白基因产物 （如乙肝疫苗）免疫

3、细胞羊膜腔（amniotic cavity）可激发HI，安全、方便；(1)细胞病变效应（cytopathic effect,CPE）第三节 病毒感染的治疗除去病原体的核酸，提取其表面抗原制备的疫苗。(3)凝胶免疫扩散试验细胞种类 二倍体细胞优点：易管理，不带微生物，成本较低优点：易管理，不带微生物，成本较低病毒鸡红细胞凝集（血凝试验）对一般病毒检测意义不大病毒性感染的快速诊断方法有哪些？二、人工被动免疫常用生物制品为证实所分离的病毒的临床意义治疗性疫苗动物：兔、鼠、黑猩猩、猴等进行血清流行病学调查等IFN-、EBV早期抗原抗体形成多核巨细胞或称融合细胞（麻疹病毒、巨细胞病毒、呼吸道合胞病毒等）

4、；病毒鸡红细胞凝集（血凝试验）除去病原体的核酸，提取其表面抗原制备的疫苗。1根据流行病学和临床特点初步判定可能感染的病毒。卵黄囊（yolk sac）病毒中和抗体 病毒失去感染性EBV早期抗原抗体接种部位 流感病毒、腮腺炎病毒微生物及其代谢产物3.3.动物接种动物接种2 2.病毒形态学鉴定病毒形态学鉴定3 3.病毒血清学鉴定病毒血清学鉴定卵黄囊（yolk sac）(3)凝胶免疫扩散试验如流感病毒和乙肝病毒的多肽疫苗。接种部位 流感病毒、腮腺炎病毒生物制品 动物免疫血清可诊断急性感染如食用西红柿，获得乙肝疫苗的接种。嗜神经病毒痘苗病毒、人类疱疹病毒可诊断急性感染将编码某一病原体保护性抗原的基因转入

5、植物并在植物中表达，人们食用植物时，就完成了预防接种。四、病毒感染的快速诊断缺点是免疫原性弱、只激发B细胞引起HI，因为抗病毒依赖CMI）。采用孵化914天的鸡胚除去病原体的核酸，提取其表面抗原制备的疫苗。葡萄球菌的自身疫苗治疗葡萄球菌的感染、乙肝疫苗治疗乙肝带毒者。羊膜腔（amniotic cavity）优点：易管理，不带微生物，成本较低采用孵化914天的鸡胚在培养细胞中形成包涵体（狂犬病病毒、麻疹病毒等）。特点：特异性低，抗体出现早，消失快电镜和免疫电镜检查电镜和免疫电镜检查 普通光学显微镜检查普通光学显微镜检查 包涵体包涵体3.血凝抑制试验血凝抑制试验 流感疫苗接种后效果观察及流感流行病

6、学调查流感疫苗接种后效果观察及流感流行病学调查早期抗体检测（IgM）特点：特异性高，抗体维持时间长可激发HI，安全、方便；二、人工被动免疫常用生物制品对一般病毒检测意义不大可激发HI，安全、方便；细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落等（多数病毒）；分离培养病毒的方法有那些?除去病原体的核酸，提取其表面抗原制备的疫苗。除去病原体的核酸，提取其表面抗原制备的疫苗。除去病原体的核酸，提取其表面抗原制备的疫苗。形成多核巨细胞或称融合细胞（麻疹病毒、巨细胞病毒、呼吸道合胞病毒等）；基因芯片技术二、人工被动免疫常用生物制品基因整合 基因产物 疫苗中草药血凝试验：病毒总量（活病毒死病毒）四、病毒感染的快速诊断病

7、毒鸡红细胞凝集（血凝试验）嗜神经病毒(2)免疫标记法（FIA、EIA、RIA）细胞因子 IL-2、IL-6、IL-12葡萄球菌的自身疫苗治疗葡萄球菌的感染、乙肝疫苗治疗乙肝带毒者。临床诊断少用尿囊腔（allantoic cavity）流感病毒的初次分离细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落等（多数病毒）；特点：特异性低，抗体出现早，消失快基因产物 （如乙肝疫苗）除去病原体的核酸，提取其表面抗原制备的疫苗。多由减毒病原菌制成；基因芯片技术如流感病毒和乙肝病毒的多肽疫苗。偶可发生回复突变，毒力回升，接种后发病。二、人工被动免疫常用生物制品蛋白质抗原基因 减毒的病毒或细菌第一节 病毒感染的检查方法悬浮细胞

8、培养1根据流行病学和临床特点初步判定可能感染的病毒。目前尚无分离此病毒的方法或难以分离的病毒疫苗疫苗:死疫苗死疫苗(killed vaccine)如白百破、伤寒、流脑、乙如白百破、伤寒、流脑、乙脑、流感、钩端螺旋体等。脑、流感、钩端螺旋体等。可激发可激发HI，安全、方便；但抗安全、方便；但抗原性改变，效果差，需多次注射；反应重）。原性改变，效果差，需多次注射；反应重）。活疫苗（活疫苗（living vaccine）如如BCG、鼠疫、炭疽、脊鼠疫、炭疽、脊髓灰质炎和麻疹疫苗等。髓灰质炎和麻疹疫苗等。可激发可激发HI、CMI；多由减毒病原菌制成；偶可发生回复突变，毒力回多由减毒病原菌制成；偶可发生

9、回复突变，毒力回升，接种后发病。联合疫苗在试用中。升，接种后发病。联合疫苗在试用中。基因工程疫苗：基因工程疫苗：目的基因目的基因 原核或真核细胞原核或真核细胞 基因产物基因产物 （如乙肝疫苗）（如乙肝疫苗）导入导入 人工培养人工培养重组载体疫苗：重组载体疫苗：蛋白质抗原基因蛋白质抗原基因 减毒的病毒或细菌减毒的病毒或细菌 基因整合基因整合 基因产物基因产物 疫苗疫苗合成疫苗：合成疫苗：根据病原体抗原的氨基酸序列，合成的多肽可作为根据病原体抗原的氨基酸序列，合成的多肽可作为疫苗。疫苗。如如流感病毒和乙肝病毒的多肽疫苗。流感病毒和乙肝病毒的多肽疫苗。缺点缺点是免疫原性弱、只激发是免疫原性弱、只激发

10、B细胞引起细胞引起HI，因为抗病因为抗病毒依赖毒依赖CMI）。）。转入转入 培养培养 表达表达亚单位疫苗：亚单位疫苗：除去病原体的核酸，提取其表面抗原制备的疫除去病原体的核酸，提取其表面抗原制备的疫苗。苗。如如脑膜炎球菌和流感杆菌脑膜炎球菌和流感杆菌表面的特异性多糖表面的特异性多糖+吸附剂制成疫苗（不含类脂、无毒）吸附剂制成疫苗（不含类脂、无毒）、流感疫苗、流感疫苗、乙肝疫苗等，乙肝疫苗等，这种疫苗这种疫苗防止防止减毒活疫苗回复突变和减毒活疫苗回复突变和肿瘤病毒潜在的致癌作用。肿瘤病毒潜在的致癌作用。DNA疫苗：疫苗：即即基因疫苗或核酸疫苗基因疫苗或核酸疫苗（第三代疫苗），这种（第三代疫苗），

11、这种核酸核酸既是载体又能在真核细胞中表达抗原，诱导产既是载体又能在真核细胞中表达抗原，诱导产生细胞毒杀伤功能的生细胞毒杀伤功能的T细胞细胞，有效预防病毒、胞内寄，有效预防病毒、胞内寄生菌及寄生虫引起的传染。生菌及寄生虫引起的传染。转基因植物疫苗：转基因植物疫苗：将编码某一病原体将编码某一病原体保护性抗原的基因转入植物保护性抗原的基因转入植物并在植物中表达，并在植物中表达，人们食用植物时，就完成了预防接人们食用植物时，就完成了预防接种。如食用种。如食用西红柿西红柿，获得乙肝疫苗的接种，获得乙肝疫苗的接种。治疗疫苗：治疗疫苗：葡萄球菌的自身疫苗葡萄球菌的自身疫苗治疗葡萄球菌的感染、治疗葡萄球菌的感

12、染、乙乙肝疫苗肝疫苗治疗乙肝带毒者。可能的机制是前者是脱敏作治疗乙肝带毒者。可能的机制是前者是脱敏作用，后者是打破免疫耐受。用，后者是打破免疫耐受。类毒素：类毒素：细菌细菌外毒素外毒素+0.3%0.4%甲醛甲醛 类毒素类毒素(毒毒性消失性消失,保留抗原性保留抗原性).如白百破疫苗如白百破疫苗.绒毛尿囊膜（allantocherion）病毒特异性抗体鸡红细胞不凝集如脑膜炎球菌和流感杆菌表面的特异性多糖+吸附剂制成疫苗（不含类脂、无毒）、流感疫苗、乙肝疫苗等，这种疫苗防止减毒活疫苗回复突变和肿瘤病毒潜在的致癌作用。核酶（ribozyme）对一般病毒检测意义不大采取标本分离病毒为时已晚绒毛尿囊膜（a

13、llantocherion）EAV核心抗原抗体(1)血凝抑制试验正粘病毒型与亚型鉴定多由减毒病原菌制成；绒毛尿囊膜（allantocherion）临床诊断少用嗜神经病毒卵黄囊（yolk sac）目前尚无分离此病毒的方法或难以分离的病毒形成多核巨细胞或称融合细胞（麻疹病毒、巨细胞病毒、呼吸道合胞病毒等）；优点：结果易观察，可建立动物模型痘苗病毒、人类疱疹病毒接种部位 流感病毒、腮腺炎病毒目前尚无分离此病毒的方法或难以分离的病毒 第三节第三节 病毒感染的治疗病毒感染的治疗 核苷类药物核苷类药物 非核苷类反转录酶抑制剂非核苷类反转录酶抑制剂 蛋白酶抑制剂蛋白酶抑制剂 其他抗病毒药物其他抗病毒药物 干

14、扰素和干扰素诱生剂干扰素和干扰素诱生剂 中草药中草药 基因治疗剂基因治疗剂 治疗性疫苗治疗性疫苗 干扰干扰RNA 思考题思考题1.分离培养病毒的方法有那些分离培养病毒的方法有那些?2.病毒性感染的快速诊断方法有哪些？病毒性感染的快速诊断方法有哪些？3.预防病毒性感染有哪些人工自动免疫制预防病毒性感染有哪些人工自动免疫制剂？剂？4.诊断病毒的核酸技术有哪些？诊断病毒的核酸技术有哪些？Bye3 3.病毒血清学鉴定病毒血清学鉴定缺点：有饲养条件要求，费用高，动物接种部位 流感病毒、腮腺炎病毒早期抗体检测（IgM）四、病毒感染的快速诊断(1)血凝抑制试验正粘病毒型与亚型鉴定除去病原体的核酸，提取其表面

15、抗原制备的疫苗。第一节 病毒感染的检查方法悬浮细胞培养除去病原体的核酸，提取其表面抗原制备的疫苗。细胞因子 IL-2、IL-6、IL-12EAV衣壳抗原抗体(1)血凝抑制试验正粘病毒型与亚型鉴定二、人工被动免疫常用生物制品（三）病毒数量与感染性测定绒毛尿囊膜（allantocherion）一般原则：特异、敏感、快速、简便(1)细胞病变效应（cytopathic effect,CPE）为证实所分离的病毒的临床意义应用：近期感染指标。绒毛尿囊膜（allantocherion）优点：结果易观察，可建立动物模型1根据流行病学和临床特点初步判定可能感染的病毒。鉴定病毒种、型、亚型(1)血凝抑制试验正粘病

16、毒型与亚型鉴定卵黄囊（yolk sac）第一节 病毒感染的检查方法采取标本分离病毒为时已晚将编码某一病原体保护性抗原的基因转入植物并在植物中表达，人们食用植物时，就完成了预防接种。第一节 病毒感染的检查方法痘苗病毒、人类疱疹病毒病毒鸡红细胞凝集（血凝试验）蛋白酶抑制剂 其他抗病毒药物细胞因子 IL-2、IL-6、IL-12采用孵化914天的鸡胚EBV早期抗原抗体微生物及其代谢产物（三）病毒数量与感染性测定优点：结果易观察，可建立动物模型应用：近期感染指标。可激发HI，安全、方便；EAV衣壳抗原抗体葡萄球菌的自身疫苗治疗葡萄球菌的感染、乙肝疫苗治疗乙肝带毒者。卵黄囊（yolk sac）接种部位

17、流感病毒、腮腺炎病毒血凝试验：病毒总量（活病毒死病毒）第一节 病毒感染的检查方法可诊断急性感染动物：兔、鼠、黑猩猩、猴等目前尚无分离此病毒的方法或难以分离的病毒除去病原体的核酸，提取其表面抗原制备的疫苗。悬浮细胞培养EAV核心抗原抗体细胞种类 二倍体细胞动物：兔、鼠、黑猩猩、猴等干扰素和干扰素诱生剂尿囊腔（allantoic cavity）根据病原体抗原的氨基酸序列，合成的多肽可作为疫苗。细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落等（多数病毒）；亚单位疫苗：亚单位疫苗：除去病原体的核酸，提取其表面抗原制备的疫除去病原体的核酸，提取其表面抗原制备的疫苗。苗。如如脑膜炎球菌和流感杆菌脑膜炎球菌和流感杆菌表面的特异性多糖表面的特异性多糖+吸附剂制成疫苗（不含类脂、无毒）吸附剂制成疫苗（不含类脂、无毒）、流感疫苗、流感疫苗、乙肝疫苗等，乙肝疫苗等，这种疫苗这种疫苗防止防止减毒活疫苗回复突变和减毒活疫苗回复突变和肿瘤病毒潜在的致癌作用。肿瘤病毒潜在的致癌作用。DNA疫苗：疫苗：即即基因疫苗或核酸疫苗基因疫苗或核酸疫苗（第三代疫苗），这种（第三代疫苗），这种核酸核酸既是载体又能在真核细胞中表达抗原，诱导产既是载体又能在真核细胞中表达抗原，诱导产生细胞毒杀伤功能的生细胞毒杀伤功能的T细胞细胞，有效预防病毒、胞内寄，有效预防病毒、胞内寄生菌及寄生虫引起的传染。生菌及寄生虫引起的传染。