皮肤科免疫荧光技术优秀案例课件.ppt

1、皮肤科免疫荧光技术优选皮肤科免疫荧光技术免疫荧光技术概述免疫荧光技术概述n原理原理n 将不影响抗原抗体活性的荧光色素将不影响抗原抗体活性的荧光色素标记在抗体（或抗原）上，与其相应的标记在抗体（或抗原）上，与其相应的抗原（或抗体）结合后，在荧光显微镜抗原（或抗体）结合后，在荧光显微镜下呈现一种特异性荧光反应。下呈现一种特异性荧光反应。n分类分类n直接法将荧光素标记的抗体与标本中的直接法将荧光素标记的抗体与标本中的抗原直接结合进而荧光反应。抗原直接结合进而荧光反应。n间接法将荧光素标记的抗抗体与相应的间接法将荧光素标记的抗抗体与相应的特异性抗体抗原复合物反应，形成抗原特异性抗体抗原复合物反应，形成

2、抗原抗体抗抗体复合物体系，进检测的一种抗体抗抗体复合物体系，进检测的一种特异性荧光反应。特异性荧光反应。免疫荧光原理示意图免疫荧光原理示意图临床常用荧光素染料临床常用荧光素染料异硫氰酸荧光素（FITC）吸=490495nm、发=520530nm、黄绿色荧光 四乙基罗丹明（RIB200）吸=570nm、发=595600nm、呈橘红色荧光四甲基异硫氰酸罗丹明（TRITC）吸=550nm、发=620nm、呈橙红色荧光皮肤直接免疫荧光检测皮肤直接免疫荧光检测n适应症适应症n非感染性大疱性皮肤病非感染性大疱性皮肤病n天疱疮、类天疱疮、疱疹样皮炎、线状天疱疮、类天疱疮、疱疹样皮炎、线状IgA大疱性皮病、获

3、得性大疱性表皮松大疱性皮病、获得性大疱性表皮松解等解等n结绨组织病如红斑狼疮等结绨组织病如红斑狼疮等n各种血管炎各种血管炎n皮肤肿瘤皮肤肿瘤n某些感染性皮肤病某些感染性皮肤病皮肤间接免疫荧光检测皮肤间接免疫荧光检测适应症适应症血清中各种抗微生物抗体测定血清中各种抗微生物抗体测定如梅毒螺旋体、支原体、衣原体、立克次如梅毒螺旋体、支原体、衣原体、立克次体、疱疹病毒等体、疱疹病毒等血清中各种自身抗体的测定血清中各种自身抗体的测定系统性疾病如红斑狼疮、皮肌炎、硬皮病系统性疾病如红斑狼疮、皮肌炎、硬皮病等等大疱性皮肤病如天疱疮抗体等大疱性皮肤病如天疱疮抗体等糖尿病如抗胰岛细胞抗体等糖尿病如抗胰岛细胞抗体

4、等操作方法及流程操作方法及流程放入生理盐水放入生理盐水送检送检手术取材手术取材外观正常未受外观正常未受累皮肤累皮肤直径直径1-2mm带疱带疱皮损皮损（米粒大小水疱）（米粒大小水疱）直接荧光直接荧光患者标本采集患者标本采集四甲基异硫氰酸罗丹明（TRITC）吸=570nm、发=595600nm、呈橘红色荧光四甲基异硫氰酸罗丹明（TRITC）吸=570nm、发=595600nm、呈橘红色荧光间接法将荧光素标记的抗抗体与相应的特异性抗体抗原复合物反应，形成抗原抗体抗抗体复合物体系，进检测的一种特异性荧光反应。直接荧光患者标本采集吸=490495nm、发=520530nm、黄绿色荧光异硫氰酸荧光素（FI

5、TC）镜下可见荧光抗体IgG于表皮棘细胞间呈网状沉积，荧光阳性。直接法将荧光素标记的抗体与标本中的抗原直接结合进而荧光反应。结绨组织病如红斑狼疮等四甲基异硫氰酸罗丹明（TRITC）四甲基异硫氰酸罗丹明（TRITC）免疫荧光镜下天观（天疱疮患者标本）免疫荧光镜下天观（类天疱疮患者标本）血清中各种抗微生物抗体测定直接法将荧光素标记的抗体与标本中的抗原直接结合进而荧光反应。天疱疮、类天疱疮、疱疹样皮炎、线状IgA大疱性皮病、获得性大疱性表皮松解等操作方法及流程操作方法及流程n冰冻切片、染色、镜检冰冻切片、染色、镜检组织修材，成组织修材，成适合冰冻包埋适合冰冻包埋块的大小块的大小冰冻切片冰冻切片抗原与

6、荧光抗抗原与荧光抗体结合体结合荧光显微镜下荧光显微镜下镜检及成像，镜检及成像，打印报告打印报告操作方法及流程操作方法及流程n间接免疫荧光染色步骤间接免疫荧光染色步骤操作方法及流程操作方法及流程实验室操作图片实验室操作图片直接荧光组织修材直接荧光组织修材冰冻切片冰冻切片实验室操作图片实验室操作图片荧光染色荧光染色水浴箱孵育水浴箱孵育实验室操作图片实验室操作图片荧光显微镜镜检荧光显微镜镜检免疫荧光镜下天观免疫荧光镜下天观（天疱疮患者标本）（天疱疮患者标本）IgG抗体抗体镜下描述：镜下可见荧光抗体IgG于表皮棘细胞间呈网状沉积，荧光阳性。血清中各种抗微生物抗体测定镜下可见荧光抗体IgG于表皮棘细胞间

7、呈网状沉积，荧光阳性。荧光显微镜下镜检及成像，打印报告直接法将荧光素标记的抗体与标本中的抗原直接结合进而荧光反应。直接法将荧光素标记的抗体与标本中的抗原直接结合进而荧光反应。直接法将荧光素标记的抗体与标本中的抗原直接结合进而荧光反应。镜下可见荧光抗体IgG于表皮棘细胞间呈网状沉积，荧光阳性。间接法将荧光素标记的抗抗体与相应的特异性抗体抗原复合物反应，形成抗原抗体抗抗体复合物体系，进检测的一种特异性荧光反应。吸=570nm、发=595600nm、呈橘红色荧光优选皮肤科免疫荧光技术血清中各种自身抗体的测定四乙基罗丹明（RIB200）免疫荧光镜下天观（天疱疮患者标本）免疫荧光镜下天观（天疱疮患者标本

8、）如梅毒螺旋体、支原体、衣原体、立克次体、疱疹病毒等血清中各种抗微生物抗体测定天疱疮、类天疱疮、疱疹样皮炎、线状IgA大疱性皮病、获得性大疱性表皮松解等免疫荧光镜下天观（天疱疮患者标本）四甲基异硫氰酸罗丹明（TRITC）血清中各种抗微生物抗体测定血清中各种自身抗体的测定镜下可见荧光抗体IgG于表皮棘细胞间呈网状沉积，荧光阳性。糖尿病如抗胰岛细胞抗体等组织修材，成适合冰冻包埋块的大小镜下可见荧光抗体IgG于表皮棘细胞间呈网状沉积，荧光阳性。间接法将荧光素标记的抗抗体与相应的特异性抗体抗原复合物反应，形成抗原抗体抗抗体复合物体系，进检测的一种特异性荧光反应。直接荧光患者标本采集吸=570nm、发=

9、595600nm、呈橘红色荧光优选皮肤科免疫荧光技术吸=570nm、发=595600nm、呈橘红色荧光血清中各种抗微生物抗体测定血清中各种抗微生物抗体测定血清中各种自身抗体的测定天疱疮、类天疱疮、疱疹样皮炎、线状IgA大疱性皮病、获得性大疱性表皮松解等组织修材，成适合冰冻包埋块的大小如梅毒螺旋体、支原体、衣原体、立克次体、疱疹病毒等免疫荧光镜下天观（天疱疮患者标本）间接法将荧光素标记的抗抗体与相应的特异性抗体抗原复合物反应，形成抗原抗体抗抗体复合物体系，进检测的一种特异性荧光反应。四甲基异硫氰酸罗丹明（TRITC）血清中各种抗微生物抗体测定如梅毒螺旋体、支原体、衣原体、立克次体、疱疹病毒等吸=

10、550nm、发=620nm、呈橙红色荧光优选皮肤科免疫荧光技术结绨组织病如红斑狼疮等免疫荧光镜下天观（天疱疮患者标本）免疫荧光镜下天观（类天疱疮患者标本）免疫荧光镜下天观（天疱疮患者标本）吸=570nm、发=595600nm、呈橘红色荧光优选皮肤科免疫荧光技术血清中各种抗微生物抗体测定糖尿病如抗胰岛细胞抗体等血清中各种抗微生物抗体测定镜下可见荧光抗体IgG于表皮棘细胞间呈网状沉积，荧光阳性。血清中各种自身抗体的测定血清中各种抗微生物抗体测定如梅毒螺旋体、支原体、衣原体、立克次体、疱疹病毒等免疫荧光镜下天观（类天疱疮患者标本）直接法将荧光素标记的抗体与标本中的抗原直接结合进而荧光反应。镜下可见荧光抗体IgG于表皮棘细胞间呈网状沉积，荧光阳性。免疫荧光镜下天观免疫荧光镜下天观（类天疱疮患者标本）（类天疱疮患者标本）C3补体补体荧光镜下：镜下可见荧光标记的C3补体于表皮基底膜带呈线状沉积，荧光阳性。