1、实验六 厌氧性细菌、棒状杆菌、分枝杆菌等 Content?示教?破伤风梭菌及产气荚膜梭菌的形态、染色性及培养特性?Nagler反应、汹涌发酵?结核分枝杆菌：抗酸染色法，液体、固体培养?麻风分枝杆菌：抗酸染色?白喉棒状杆菌：Albert 染色法、吕氏血清斜面、亚碲酸盐平板?操作?产气荚膜梭菌致病性实验?病人痰液（结核分枝杆菌）抗酸染色法?口腔螺旋体的检查?肠道致病菌粪便标本的分离与鉴定（续）血清学反应 厌氧性细菌的分类 厌氧菌 厌氧芽孢梭菌 无芽孢厌氧菌 破伤风梭菌 产气荚膜梭菌 肉毒梭菌 艰难梭菌 G+G-双歧杆菌 消化链球菌 脆弱类杆菌 韦荣菌属?破伤风梭菌 革兰阳性，菌体细长，有周身鞭毛、
2、无荚膜。芽胞正圆，位于菌体顶端，使细菌呈鼓槌状。血平板上，有溶血。?产气荚膜梭菌 革兰阳性粗大杆菌，芽胞位于次极端，呈椭圆形，有明显的荚膜，无鞭毛。血琼脂平板：双层溶血环 内环完全溶血-毒素 外环不完全溶血-毒素 蛋黄琼脂平板：Nagler反应 牛奶培养基：“汹涌发酵”Nagler反应 产气荚膜梭菌产生产气荚膜梭菌产生卵磷脂酶分解卵黄卵磷脂酶分解卵黄中卵磷脂所致中卵磷脂所致 汹涌发酵 在牛奶中分解乳糖，在牛奶中分解乳糖，使其中酪蛋白凝固 细菌产生大量细菌产生大量H2和和CO2 将产气杆菌接种于紫牛接种于紫牛奶培养基中“V”or “L”letter-like in Gram stain 亚碲酸钾
3、血平板 白喉棒状杆菌生物学特性 Albert染色(异染颗粒)?革兰阳性，菌体一端有不规则的膨大呈棒状?Albert染色异染颗粒：用作鉴定?吕氏血清培养基(含有凝固血清)上生长迅速，异染颗粒明显?亚碲酸钾血平板，亚碲酸盐可抑制杂菌生长,白喉棒状杆菌生长形成黑色菌落 Elek平板试验结果 Elek Test 沉淀线沉淀线(阳性阳性)含白喉抗毒素滤纸片含白喉抗毒素滤纸片 白喉杆菌菌苔白喉杆菌菌苔 结核杆菌?形态与染色?细长略带弯曲?细胞壁脂质含量高，肽聚糖外大量分枝菌酸?齐尼抗酸染色阳性?培养特点?专性需氧?液体培养基：表面生长(菌膜)?固体培养基：粗糙型菌落(菜花状)?生长缓慢,营养要求高,常用罗
4、氏培养基 蛋黄,马铃薯,甘油，孔雀绿 麻风分枝杆菌?形态、染色与结核分枝杆菌相似?麻风分枝杆菌是一种典型胞内菌 (麻风细胞)?体外人工培养至今仍未成功 Albert 染色法?制片同革兰染色?甲液染5分钟水洗再以乙液（碘液）染1分钟 水洗印干油镜检 抗酸染色法(acid-fast stain)：以5 5石炭酸复红加温染色，再用3 3盐酸酒精脱色，然后用美蓝复染，则分枝杆菌呈红色(+)(+)，其他细菌和背景物质为蓝色(-)(-)。实验过程：取痰液 涂片（略厚）干燥固定 石炭酸复红染色810分钟水洗用3%的盐酸酒精脱色约12分钟 水洗后，用碱性美蓝复染1 1分钟水洗，印干 镜检 抗酸染色法 口腔螺旋体的检查?牙垢涂片：观察奋森螺旋体和梭杆菌。两者为共生菌，条件致病，可引起牙龈炎、口腔炎等。口腔螺旋体检查 牙垢墨汁1d 混匀 推片 室温干燥 油镜检 奋森螺旋体为疏螺旋体与梭杆菌共生?1号：上层红，下层黄，气体，硫化氢+，动力+?2号：上层红，下层黄，动力-The End Thanks
