呼吸道病毒教学课件.ppt

1、显微镜检查显微镜检查免疫电镜免疫电镜 特异性抗体特异性抗体+标本标本/细胞培养物，离心沉渣，电镜检查。细胞培养物，离心沉渣，电镜检查。免疫荧光镜检免疫荧光镜检 鼻咽拭子鼻咽拭子 涂片固定涂片固定+抗甲型、抗甲型、乙型流感乙型流感V抗体抗体，加荧光标记的，加荧光标记的抗抗体染色，荧光镜观察。抗抗体染色，荧光镜观察。流行性感冒病毒的形态流行性感冒病毒的形态 羊膜腔（初次分离）羊膜腔（初次分离）尿囊腔（传代）尿囊腔（传代）动物接种动物接种 少用。以雪貂最易感，也可用小鼠、地鼠、豚鼠。少用。以雪貂最易感，也可用小鼠、地鼠、豚鼠。鼻腔洗液鼻腔洗液咽喉拭子咽喉拭子 传代狗肾传代狗肾C（MDCK）人胚肾人胚

2、肾C或换肾或换肾C 710d 一般无细胞病变效应（一般无细胞病变效应（CPE）（1）病毒的分离）病毒的分离 细胞培养细胞培养 3324甲、乙型流感甲、乙型流感V 1011日龄鸡胚日龄鸡胚 丙型流感丙型流感V 98日龄鸡胚日龄鸡胚 孵育孵育23d（丙型（丙型5d）鸡胚培养鸡胚培养 接种接种收获收获标本标本 羊水或尿液羊水或尿液 血凝血凝T检查检查其他鉴定方法其他鉴定方法 补体结合反应（补体结合反应（CF）中和试验中和试验 测定病毒测定病毒RNA（2）鉴定）鉴定+血凝抑制试验血凝抑制试验（HI）-盲传一代盲传一代 -1015d培养培养-血凝试验血凝试验 直接检测临床标本或直接检测临床标本或 IF（

3、免疫荧光法）（免疫荧光法）细胞培养物中流感细胞培养物中流感V EIA（酶免疫测定）（酶免疫测定）动态连续免疫荧光法动态连续免疫荧光法 直接检测甲型流感直接检测甲型流感 临床常用试剂盒临床常用试剂盒 直接检测甲型直接检测甲型/乙型流感乙型流感 但不能识别二者但不能识别二者 直接检测甲型直接检测甲型/乙型流感乙型流感 且能识别二者且能识别二者 抗体检测抗体检测 取急性期（发生取急性期（发生13d）、恢复期（病后）、恢复期（病后3周）双份血检，周）双份血检，测抗流感测抗流感V的抗体水平。的抗体水平。常用方法：常用方法：HI和和EIA。从标本中提取病毒从标本中提取病毒RNA，点样于尼龙膜上点样于尼龙膜

4、上，干燥干燥 后后与与32P标标记的流感病记的流感病毒特异性毒特异性cDNA探针进行分子杂交，孵育探针进行分子杂交，孵育6h，经放射，经放射自显影检测点样膜是否结合有探针。自显影检测点样膜是否结合有探针。用用RT-PCR技术扩增标本中流感技术扩增标本中流感V RNA。二、禽流感病毒二、禽流感病毒 禽流感病毒禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)(avian influenza virus,AIV)是甲型流是甲型流感病毒的一种亚型，可引起禽流行性感冒（简称禽流感）。感病毒的一种亚型，可引起禽流行性感冒（简称禽流感）。近十几年，禽流感多次呈暴发性、大范围性流行近十几年，禽

5、流感多次呈暴发性、大范围性流行,涉及多涉及多个国家和地区。原本只感染鸡的禽流感病毒亦令人类患病。个国家和地区。原本只感染鸡的禽流感病毒亦令人类患病。目前发现最易感染人类的高致病性禽流感病毒亚型有目前发现最易感染人类的高致病性禽流感病毒亚型有H5N1H5N1、H9N2H9N2、H7N7H7N7、H7N2H7N2、H7N3 H7N3 等，其中感染等，其中感染H5N1H5N1亚型的患者亚型的患者病情严重，致死率高。病情严重，致死率高。三、甲型三、甲型H1N1流感病毒流感病毒 引起甲型引起甲型H1N1流感，在人群中传播。流感，在人群中传播。该病毒毒株包含猪流感、禽流感和人流感该病毒毒株包含猪流感、禽流

6、感和人流感三种流感病毒的三种流感病毒的基因片段基因片段。人群对甲型。人群对甲型H1N1流感病毒普遍易感，并可经人传染人流感病毒普遍易感，并可经人传染人，2009年开始，甲型年开始，甲型H1N1流感在全球范围流感在全球范围内大规模流行。内大规模流行。2010年年8月，世卫组织宣布月，世卫组织宣布甲型甲型H1N1流感大流行期已经结束。流感大流行期已经结束。孵育23d（丙型5d）液鼻腔通过飞沫或鼻腔分泌物传播+血凝抑制试验（HI）中和试验第三节 其他呼吸道病毒病毒通过飞沫或直接接触传播人是麻疹病毒的自然宿主典型的麻疹可以根据临床症状确诊，细胞培养方法：血凝抑制试验、ELISA和免疫荧光技术人群对甲型

7、H1N1流感病毒普遍易感，并可经人传染人，2009年开始，甲型H1N1流感在全球范围内大规模流行。测定病毒RNA标本：患者唾液、尿液或脑脊液从标本中提取病毒RNA，点样于尼龙膜上，干燥 后与32P标记的流感病毒特异性cDNA探针进行分子杂交，孵育6h，经放射自显影检测点样膜是否结合有探针。同型有1 2年免力取急性期（发生13d）、恢复期（病后3周）双份血检，测抗流感V的抗体水平。1型和2型是主要致病因子方法：血凝抑制试验、ELISA和免疫荧光技术根据对酸稳定及中和T 有病毒生长用免疫 HeLa、KB、FL病毒通过飞沫或直接接触传播冠状病毒、呼肠病毒副流感V是小儿急性下呼吸道感染的重要病原体。动

8、物接种 少用。麻疹病毒、腮腺炎病毒孵育23d（丙型5d）冠状病毒、呼肠病毒人胚肾C或换肾C1型和2型是主要致病因子3型常引起下呼吸道感染检 活检（感染后23d）胃肠粪便鼻病毒 冠状病毒 呼肠病毒入侵（CD46为病毒受体）动物接种 少用。其他鉴定方法 补体结合反应（CF）3如48h不能接种分离的标本，应置-70低温冻存。（1）病毒的分离其他鉴定方法 补体结合反应（CF）引起婴幼儿急性哮喘性支气管炎或肺炎副黏病毒科 副流感病毒、呼吸道合胞病毒、副流感副流感V是小儿急性下呼吸道感染的重要病原体。是小儿急性下呼吸道感染的重要病原体。只引起成人轻型上呼吸道症状。只引起成人轻型上呼吸道症状。主要通过与感染

9、者密切接触或由飞沫经呼吸道传主要通过与感染者密切接触或由飞沫经呼吸道传播播副流感病毒有副流感病毒有4个血清型，个血清型，1型和型和2型是主要致病因子型是主要致病因子 3型常引起下呼吸道感染型常引起下呼吸道感染 4型只引起轻型上呼吸道感染型只引起轻型上呼吸道感染 1型和型和3型也是医院感染的重要病原型也是医院感染的重要病原 1风疹风疹 儿童是主要易感者。潜伏期儿童是主要易感者。潜伏期1025d，前驱期症状有，前驱期症状有发热、咽痛、咳嗽等。耳后及枕下发热、咽痛、咳嗽等。耳后及枕下L结肿大，有明显压痛，结肿大，有明显压痛，继而在面部首先出现浅红色斑丘疹迅速遍及全身。症状较轻继而在面部首先出现浅红色

10、斑丘疹迅速遍及全身。症状较轻，无需治疗。，无需治疗。2先天性风疹综合征先天性风疹综合征（classical congenital rubella syndrome,CRS）。是孕妇在妊娠早期（妊娠）。是孕妇在妊娠早期（妊娠20周内）感染周内）感染风疹病毒，病毒经胎盘垂直传播感染胎儿，致使胎儿出生后风疹病毒，病毒经胎盘垂直传播感染胎儿，致使胎儿出生后患先天性心脏病、耳聋、失明、智力障碍，流产死胎。患先天性心脏病、耳聋、失明、智力障碍，流产死胎。临床上检测母亲或胎儿血液或胎儿血液中抗风疹病毒临床上检测母亲或胎儿血液或胎儿血液中抗风疹病毒IgM，抗体或检测胎儿绒毛膜中无风疹病毒，抗体或检测胎儿绒毛膜

11、中无风疹病毒Ag或取羊水进行或取羊水进行病毒分离培养，以确定感染和中止妊娠。病毒分离培养，以确定感染和中止妊娠。标本采集标本采集 咽拭子、鼻拭子、鼻黏膜咽拭子、鼻拭子、鼻黏膜 咽拭子和洗液咽拭子和洗液 鼻咽拭子、粪便鼻咽拭子、粪便检检 活检（感染后活检（感染后23d）胃肠胃肠粪便粪便 验验 直接检查直接检查 电镜、免疫电镜电镜、免疫电镜 电镜呈日冕状或电镜呈日冕状或 电镜查电镜查V颗粒颗粒 冠状冠状V颗粒颗粒方方 ELISA检测检测V的的Ag法法 分离分离 人二倍体细胞人二倍体细胞 人胚气管人胚气管 鸡胚尿囊膜、尿囊鸡胚尿囊膜、尿囊 根据对酸稳定及中和根据对酸稳定及中和T 有病毒生长用免疫有病

12、毒生长用免疫 HeLa、KB、FL 鉴定血清型鉴定血清型 电镜鉴定电镜鉴定 血凝抑制抗体中和血凝抑制抗体中和 试验鉴定型别试验鉴定型别 鼻病毒鼻病毒 冠状病毒冠状病毒 呼肠病毒呼肠病毒临床意义临床意义 普通感冒普通感冒 普通感冒普通感冒 感染呼吸道，胃肠炎感染呼吸道，胃肠炎 SARS-CoV引起引起SARS三、鼻病毒（三、鼻病毒（rhinovirus）、冠状病毒（）、冠状病毒（coronavirus）和呼肠病毒（）和呼肠病毒（reovirus）约5%儿童急性呼吸道疾病及约10%婴幼儿腹泻由腺病毒引起临床常用试剂盒 直接检测甲型/乙型流感临床意义 普通感冒 普通感冒 感染呼吸道，胃肠炎710d

13、一般无细胞病变效应（CPE）第二节 副黏病毒科（paramyxovirus）神经中枢系统：亚急性硬化性全脑炎(SSPE)酶联免疫、荧光免疫试验临床上检测母亲或胎儿血液或胎儿血液中抗风疹病毒IgM，抗体或检测胎儿绒毛膜中无风疹病毒Ag或取羊水进行病毒分离培养，以确定感染和中止妊娠。根据对酸稳定及中和T 有病毒生长用免疫 HeLa、KB、FL原本只感染鸡的禽流感病毒亦令人类患病。是孕妇在妊娠早期（妊娠20周内）感染风疹病毒，病毒经胎盘垂直传播感染胎儿，致使胎儿出生后患先天性心脏病、耳聋、失明、智力障碍，流产死胎。710d 一般无细胞病变效应（CPE）多种组织、器官受累，表现为细胞融合成多核巨细胞，

14、核内形成嗜酸性包涵体等液鼻腔酶联免疫、荧光免疫试验1风疹 儿童是主要易感者。体温略高、咳嗽、流涕、打喷嚏及泪眼，症流行性感冒病毒（influenza virus）简称流感病毒，是引起流行性感冒的病原微生物。入侵（CD46为病毒受体）测定病毒RNA流感病毒的荧光电镜照片通过飞沫或鼻腔分泌物传播消化道：腹泻、阑尾炎或盲肠炎从标本中提取病毒RNA，点样于尼龙膜上，干燥 后与32P标记的流感病毒特异性cDNA探针进行分子杂交，孵育6h，经放射自显影检测点样膜是否结合有探针。腮腺炎病毒可垂直传播导致胎儿先天性感染细胞培养物中流感V EIA（酶免疫测定）神经中枢系统：亚急性硬化性全脑炎(SSPE)轻型及其

15、他不典型麻疹需进行实验室检验。消化道：腹泻、阑尾炎或盲肠炎咽洗液、痰、血、尿以及双份血清。麻疹病毒是麻疹的病原体，只有一个血清型。一、流行性感冒病毒（influenza virus）入侵（CD46为病毒受体）法 分离 人二倍体细胞 人胚气管 鸡胚尿囊膜、尿囊流行性感冒病毒（influenza virus）简称流感病毒，是引起流行性感冒的病原微生物。正黏病毒科 流感病毒血清学诊断：病毒IgM或4倍上升的IgG入侵（CD46为病毒受体）人群对甲型H1N1流感病毒普遍易感，并可经人传染人，2009年开始，甲型H1N1流感在全球范围内大规模流行。临床意义 普通感冒 普通感冒 感染呼吸道，胃肠炎主要通过

16、与感染者密切接触或由飞沫经呼吸道传播乙型、丙型至今未发现亚型对人致病的副黏病毒主要有：病毒-呼吸道-毒素样物质进入血液该病毒毒株包含猪流感、禽流感和人流感三种流感病毒的基因片段。入侵（CD46为病毒受体）麻疹病毒、腮腺炎病毒体温略高、咳嗽、流涕、打喷嚏及泪眼，症多种组织、器官受累，表现为细胞融合成多核巨细胞，核内形成嗜酸性包涵体等2010年8月，世卫组织宣布甲型H1N1流感大流行期已经结束。消化道：腹泻、阑尾炎或盲肠炎从标本中提取病毒RNA，点样于尼龙膜上，干燥 后与32P标记的流感病毒特异性cDNA探针进行分子杂交，孵育6h，经放射自显影检测点样膜是否结合有探针。3如48h不能接种分离的标本

17、，应置-70低温冻存。入侵（CD46为病毒受体）病程12周，主要症状为腮腺肿大，但约30%感染无症状麻疹病毒是麻疹的病原体，只有一个血清型。动物接种 少用。尿囊腔（传代）4型只引起轻型上呼吸道感染鼻拭子标本：咽拭子、眼结膜分泌物血清学诊断：病毒IgM或4倍上升的IgG人群对甲型H1N1流感病毒普遍易感，并可经人传染人，2009年开始，甲型H1N1流感在全球范围内大规模流行。流行性感冒病毒（influenza virus）简称流感病毒，是引起流行性感冒的病原微生物。传染源-患者或病毒携带者接种原代人胚细胞后传代Hela细胞等上皮细胞，观察入侵（CD46为病毒受体）临床上检测母亲或胎儿血液或胎儿血液中抗风疹病毒IgM，抗体或检测胎儿绒毛膜中无风疹病毒Ag或取羊水进行病毒分离培养，以确定感染和中止妊娠。1风疹 儿童是主要易感者。临床意义 普通感冒 普通感冒 感染呼吸道，胃肠炎取急性期（发生13d）、恢复期（病后3周）双份血检，测抗流感V的抗体水平。典型的麻疹可以根据临床症状确诊，潜伏期1025d，前驱期症状有发热、咽痛、咳嗽等。直接检测临床标本或 IF（免疫荧光法）1型和3型也是医院感染的重要病原710d 一般无细胞病变效应（CPE）根据对酸稳定及中和T 有病毒生长用免疫 HeLa、KB、FL