急性毒性新药评价中心新药评价课件.ppt

1、精品医学ppt1新药临床前毒理学评价新药临床前毒理学评价 n临床前毒理学评价目的意义临床前毒理学评价目的意义n急性毒性试验急性毒性试验n长期毒性试验长期毒性试验n特殊毒性试验特殊毒性试验n其它毒性试验其它毒性试验n药品非临床研究质量管理规范（药品非临床研究质量管理规范（GLP）精品医学ppt2临床前毒理学评价目的意义临床前毒理学评价目的意义 n新药评价的核心内容之一新药评价的核心内容之一 n目的目的:确保临床用药安全确保临床用药安全n超过限量、改变应用范围或用药途径超过限量、改变应用范围或用药途径变变成毒物成毒物 n1985-1994,收审新药近四千种收审新药近四千种,已批准上市已批准上市 约

2、占约占50%,而另外而另外50%未被批准上市新药中未被批准上市新药中,有相当一部分就是因毒理学评价没有通过有相当一部分就是因毒理学评价没有通过精品医学ppt3毒毒无处不在无处不在 n1274宋慈指出万物皆毒宋慈指出万物皆毒 n美国美国“化学文摘化学文摘”登记化学品约有登记化学品约有一千万种一千万种,美国每年投放市场新化学美国每年投放市场新化学品约一千五百种左右品约一千五百种左右 n1992年联合国环境与发展大会将有年联合国环境与发展大会将有毒化学品列为二十一世纪全球七大毒化学品列为二十一世纪全球七大环境问题之一环境问题之一 精品医学ppt4药害事件药害事件 1935-1937 美国美国 二硝基

3、酚二硝基酚 减减 肥肥 白内障、骨髓抑白内障、骨髓抑制制,死亡死亡 177 人人 1937 美国美国 磺胺酏剂磺胺酏剂 消炎消炎尿毒症、肾衰，尿毒症、肾衰，死亡死亡107人人1954-56法国法国 有机锡有机锡抗感染抗感染207人视力障碍、其人视力障碍、其中中102人死亡人死亡1959-62欧日欧日 反应停反应停镇静镇静畸胎，畸胎，12000多人多人1966-72日本日本 氯碘喹啉氯碘喹啉肠道感染肠道感染万余人失明或下万余人失明或下肢瘫痪肢瘫痪1937-59美国美国 黄体酮黄体酮先兆流产先兆流产男性化男性化,600多人多人精品医学ppt5临床前毒理学评价成功例子临床前毒理学评价成功例子 n化学

4、物质致癌、致畸、己烯雌酚防流产化学物质致癌、致畸、己烯雌酚防流产而使子代女性出现阴道癌而使子代女性出现阴道癌致癌、致畸、致癌、致畸、生殖及三代生殖试验生殖及三代生殖试验n青霉素严重过敏反应青霉素严重过敏反应动物模型动物模型豚鼠豚鼠 精品医学ppt6临床前毒理学评价的局限性临床前毒理学评价的局限性 n新药本身新药本身新药不断地改变着化学结构和药理新药不断地改变着化学结构和药理毒理学特征毒理学特征,不同于已有的老药不同于已有的老药,因因而也往往超出人们原有的知识、经验而也往往超出人们原有的知识、经验和评价手段所达到的预测能力和评价手段所达到的预测能力 精品医学ppt7临床前毒理学评价的局限性临床前

5、毒理学评价的局限性n现有评价手段不能完全适应现有评价手段不能完全适应“新药新药”评价需评价需要要 n动物实验缺点动物实验缺点 n种属差异种属差异 数量有限数量有限 n品种单一品种单一 健康健康模型模型n剂量太大剂量太大精品医学ppt8临床前毒理学评价总的要求临床前毒理学评价总的要求n找出毒性剂量找出毒性剂量 Toxic dosagen确定安全剂量范围确定安全剂量范围 Safety margin n毒性反应毒性反应 Toxic reaction:性质、程度、性质、程度、量毒关系、产生时间，达峰时间量毒关系、产生时间，达峰时间,持续时持续时间及反复产生毒性反应时间、迟发性、蓄间及反复产生毒性反应时

6、间、迟发性、蓄积性、耐受性积性、耐受性 n寻找毒性反应靶器官寻找毒性反应靶器官 Target organ n毒性反应是否可逆毒性反应是否可逆 Reversibilityn确保临床用药安全确保临床用药安全精品医学ppt9急性毒性试验n目的意义目的意义n基本内容和要求基本内容和要求n急性毒性急性毒性LD50常常用计算方法用计算方法n有关问题有关问题精品医学ppt10急性毒性试验 n目的意义目的意义 n了解新药急性毒性强度了解新药急性毒性强度 n计算新药相对毒性参数计算新药相对毒性参数 n为临床毒副反应监护提供参考依据为临床毒副反应监护提供参考依据 n为长期毒性、蓄积性毒性和特殊毒性试为长期毒性、蓄

7、积性毒性和特殊毒性试验选择剂量提供依据验选择剂量提供依据 n其它方面其它方面 精品医学ppt11新药急性毒性的强度新药急性毒性的强度 表表.化学物质的急性毒性分级标准化学物质的急性毒性分级标准(WHO,1977)毒性分级毒性分级 ig大、小鼠大、小鼠LD50 吸入大、小鼠吸入大、小鼠LC50 涂皮兔涂皮兔LD50 人口服可能的人口服可能的 (mg/kg)(ppm)(mg/kg)致死量致死量(g)极极 毒毒 1 10 5000 10000 2180 1200 *吸入毒性吸入毒性LC50指中毒栏中的浓度指中毒栏中的浓度,一次中毒一次中毒2-4小时小时,观察观察24天天 精品医学ppt12新药急性毒

8、性的强度新药急性毒性的强度 表表.欧共体对化学物的毒性分级欧共体对化学物的毒性分级 动物及给药途径动物及给药途径 剧剧 毒毒 毒毒 有有 害害大鼠大鼠 LD50 ig(mg/kg)25 25-200 200-2000大鼠或兔经皮大鼠或兔经皮LD50(mg/kg)50 50-400 400-2000大鼠大鼠 LC50(mg/L/4hr)0.5 0.2-2 2-20 精品医学ppt13相对毒性参数相对毒性参数 n治疗指数治疗指数TI=LD50/ED50n安全系数安全系数SF=LD5/ED95n可靠或确实安全系数可靠或确实安全系数CSF=LD1/ED99n安全范围安全范围SM=(LD1/ED99-1

9、)X 100%nSED50/ED50,越大越安全越大越安全nLD5基本无害量基本无害量 ED95基本有效量基本有效量nLD1肯定无害量肯定无害量 ED99肯定有效量肯定有效量精品医学ppt14为临床毒副反应监护提供参考为临床毒副反应监护提供参考 n中毒症状中毒症状n起始时间起始时间n持续时间持续时间n恢复时间恢复时间n对抗试验为临床急对抗试验为临床急救提供依据救提供依据 精品医学ppt15急性毒性试验观察动物反应指标 中中 毒毒 部部 位位 毒毒 性性 症症 状状 表表 现现中枢神经系统中枢神经系统 呆滞呆滞:对刺激反应迟缓、减弱、消失；不安：对刺激反应对刺激反应迟缓、减弱、消失；不安：对刺激

10、反应 过敏过敏、兴奋；强直：行动姿势改变、叫声异常、震颤、兴奋；强直：行动姿势改变、叫声异常、震颤、共济失调共济失调 植物神经系统瞳孔缩小、放大植物神经系统瞳孔缩小、放大;分泌增多，如流涎、流泪分泌增多，如流涎、流泪 呼呼 吸吸 系系 统统 鼻孔流鼻涕、呼吸缓慢、困难、潮式呼吸、速率加快等鼻孔流鼻涕、呼吸缓慢、困难、潮式呼吸、速率加快等心血管心血管 系统系统 心动过速、缓慢、心律不齐、心跳过强、微弱心动过速、缓慢、心律不齐、心跳过强、微弱胃胃 肠肠 系系 统统 气胀、腹泻、便秘、粪便不成形、粪便黑色气胀、腹泻、便秘、粪便不成形、粪便黑色生生 殖殖 系系 统乳腺膨胀、会阴部污浊、阴囊下垂等统乳腺

11、膨胀、会阴部污浊、阴囊下垂等皮肤、皮肤、毛皮肤发红、松弛、皮疹、毛竖起毛皮肤发红、松弛、皮疹、毛竖起粘粘 膜口腔流粘液、充血、溃疡、出血性紫绀膜口腔流粘液、充血、溃疡、出血性紫绀眼眼 睛上睑下垂、眼球突出混浊睛上睑下垂、眼球突出混浊其其 他直肠温度升高、降低；消瘦；拒食等他直肠温度升高、降低；消瘦；拒食等 精品医学ppt16为长毒、蓄毒试验选择剂量提供依据 n长期毒性剂量设计长期毒性剂量设计nLD50法法(1/10,1/50,1/100)nMTD法法(1,1/3,1/10)n蓄积性毒性剂量设计蓄积性毒性剂量设计n1/10LD50,然后按等比级数然后按等比级数1.5倍逐渐递增倍逐渐递增精品医学p

12、pt17为特殊毒性试验选择剂量提供依据为特殊毒性试验选择剂量提供依据 n生殖毒性试验高剂量为母鼠生殖毒性试验高剂量为母鼠MTDn致突变试验致突变试验n啮齿类动物微核试验高剂量为啮齿类动物微核试验高剂量为1/2 LD50n果蝇伴性隐性致死试验的高、低剂量分别为果蝇伴性隐性致死试验的高、低剂量分别为1/2 LD50和和1/4 LD50n精原细胞染色体畸变试验高剂量应为精原细胞染色体畸变试验高剂量应为1/2 LD50 n动物短期致癌试验高剂量应是动物短期致癌试验高剂量应是MTDn主要药效学剂量限度、一般药理学和药动学剂主要药效学剂量限度、一般药理学和药动学剂量设计也要参考急性毒性的量设计也要参考急性

13、毒性的LD50 精品医学ppt18其它方面其它方面 n系列化合物的合格率分析系列化合物的合格率分析(除理化性质除理化性质为主外为主外)也参考也参考LD50n复方中药物的相互作用复方中药物的相互作用,有时也通过有时也通过拆方及合用的拆方及合用的LD50来判别相互作用的来判别相互作用的性质性质精品医学ppt19基本内容和要求基本内容和要求-动物动物n啮齿类啮齿类-小鼠或大鼠小鼠或大鼠 非啮齿类非啮齿类-犬或其它犬或其它n一类药至少必须用二种动物一类药至少必须用二种动物(啮齿类及非啮齿类啮齿类及非啮齿类各一种各一种,其中非啮齿类宜用其中非啮齿类宜用Beagle犬犬);其它类酌其它类酌 情用二种动物情

14、用二种动物n小鼠小鼠18-22g,同次体重相差不超过同次体重相差不超过4g;大鼠大鼠120-150g,同次体重不超过同次体重不超过20g;犬用成年犬犬用成年犬n各半各半 精品医学ppt20基本内容和要求基本内容和要求-给药途径给药途径n一类药及可溶于水的至少用两种给药一类药及可溶于水的至少用两种给药途径途径,其中一种必须是临床给药途径其中一种必须是临床给药途径n其它类至少有一种临床给药途径其它类至少有一种临床给药途径n实验动物上无法进行时实验动物上无法进行时,则作特殊说明则作特殊说明,可用别的给药途径可用别的给药途径精品医学ppt21基本内容和要求基本内容和要求-剂量和分组剂量和分组 n小动物

15、一般分小动物一般分4-6 个剂量组个剂量组,组距组距0.65-0.85,求求出出LD50n大动物可用大动物可用50%等量递升法等量递升法,一般用一般用6条犬条犬,求求出出ALD和和MTD 精品医学ppt22基本内容和要求基本内容和要求-给药容积给药容积 n不等浓度等容量给药不等浓度等容量给药n常规给药容量为常规给药容量为:n小鼠小鼠ig 0.2-0.4 ml/10g,ip、sc和和iv 0.1-0.2 ml/10gn大鼠大鼠ig 1-1.5 ml/100g,ip、sc和和iv为为0.5-1 ml/100g 精品医学ppt23基本内容和要求基本内容和要求-观察记录观察记录 n给药当天给药当天,尤

16、其是药后尤其是药后4h内应严密观察并记内应严密观察并记录录,然后每天上下午各一次然后每天上下午各一次,连续观察连续观察7-14天天n详细记录动物毒性反应情况和死亡情况详细记录动物毒性反应情况和死亡情况,中中毒症状毒症状,中毒发生时间、持续时间、恢复期中毒发生时间、持续时间、恢复期及动物最短死亡时间、最长死亡时间和平均及动物最短死亡时间、最长死亡时间和平均死亡时间死亡时间 n死亡动物应及时进行尸检死亡动物应及时进行尸检,记录病变情况记录病变情况;若若肉眼可见变化时则需进行病理检查肉眼可见变化时则需进行病理检查精品医学ppt24基本内容和要求基本内容和要求-结果处理结果处理 实验资料按下表列出实验

17、资料按下表列出,用用Bliss法计算法计算LD50。必要。必要时求出不同性别时求出不同性别LD50 表表.XXX急性毒性结果及急性毒性结果及LD50计算计算剂剂 量量 对数剂量对数剂量 动物数动物数 死亡动物数死亡动物数 死亡率死亡率 机率单位机率单位 LD50及可信限及可信限(mg/kg)(X)(只只)(只只)%(Y)(mg/kg)精品医学ppt25基本内容和要求基本内容和要求-MTDMTD测定测定 n最大允许浓度和最大允许容积仍未测出最大允许浓度和最大允许容积仍未测出LD50,可只求可只求MTD值。值。n方法：一次给方法：一次给20只动物只动物,连续观察连续观察7-14天天,未见任何动物死

18、亡未见任何动物死亡,则则MTDXX g/kg。若仅有个别死亡若仅有个别死亡,则宜写成则宜写成LD50XX g/kg。niv要求要求 pH 5-8，速度：大、小鼠，速度：大、小鼠 10-20s。nig时空腹时空腹,即禁食即禁食12-16h左右左右精品医学ppt26表表.急性毒性试验常用容量和最大容量急性毒性试验常用容量和最大容量(ml)(ml)给药途径给药途径 小小 鼠鼠 大大 鼠鼠 豚豚 鼠鼠 家家 兔兔 狗狗 ig 0.2-1.0 1-4 1-5 5-10 50-100 ip 0.2-1.0 1-3 2-5 5-10 5-15 im 0.1-0.2 0.2-0.5 0.2-0.5 0.5-1

19、 2-5 iv 0.2-0.5 1-2 1-5 3-10 35-50 sc 0.1-0.5 0.5-1 0.5-2 1-3 3-10 *小鼠指小鼠指20g,大鼠大鼠200g,豚鼠豚鼠200g,兔兔2.5kg,狗狗10kg,前者为前者为 常用量常用量,后者为最大容量后者为最大容量精品医学ppt27急性毒性急性毒性LDLD5050常用的统计方法常用的统计方法n白仑氏法白仑氏法(Behrens method)(累计法累计法)n密勒和滕特尔二氏法密勒和滕特尔二氏法(Miller and Taninters method),也叫目测法、概率法也叫目测法、概率法(对数机率单位绘图法对数机率单位绘图法,19

20、44年年)n寇氏法寇氏法(Karbers method),也叫克贝尔法也叫克贝尔法n点斜法点斜法(孙瑞元孜良寇氏法孙瑞元孜良寇氏法)n改良寇氏法改良寇氏法(顾汉颐改进寇氏法顾汉颐改进寇氏法)n维尔氏法维尔氏法(Weils method),机率单位法机率单位法nBliss 法法(Bliss method)nFinney法法(改进改进Bliss法法),概率单位加权回归法概率单位加权回归法精品医学ppt28有关问题-毒理学界对毒理学界对LDLD5050的看法的看法 nLD50只是急毒试验结果（信息）的一部分只是急毒试验结果（信息）的一部分n从安全性评价角度来讲，主要是毒性信息，从安全性评价角度来讲，

21、主要是毒性信息，而非精确的而非精确的LD50nLD50测定的不足：测定的不足：n动物消耗量大动物消耗量大n获得信息有限获得信息有限n测得数值不准测得数值不准精品医学ppt29急性毒性研究中应注意的问题急性毒性研究中应注意的问题（一）（一）n动物品系写清楚、动物品系写清楚、各半、体重和鼠龄要各半、体重和鼠龄要符合要求符合要求 n分组应随机分组应随机 n药物浓度、给药容量、药物浓度、给药容量、给药途径应交待清楚给药途径应交待清楚 n详细记录中毒情况详细记录中毒情况n注意溶媒对照注意溶媒对照精品医学ppt30急性毒性研究中应注意的问题急性毒性研究中应注意的问题（二）（二）n严格控制实验环境条件严格控制实验环境条件n剂量设计合理剂量设计合理 n试验周期：给药后至少观察一周试验周期：给药后至少观察一周,有的要观有的要观察察2周或更长周或更长 n关于限度试验关于限度试验(美国美国):10只大鼠口服只大鼠口服5 g/kg不不发生与药物有关的死亡，可视为无毒发生与药物有关的死亡，可视为无毒 n光化学治疗药和辐射增敏剂的急性毒性试验光化学治疗药和辐射增敏剂的急性毒性试验:在照光及不照光条件下分别测定在照光及不照光条件下分别测定LD50