药物敏感试验皮肤癣菌对灰黄霉素课件.ppt

1、第二十章 病原性真菌 第一节 浅部感染真菌 浅部感染真菌包括表面感染真菌、浅部感染真菌包括表面感染真菌、皮肤癣真菌和皮下组织感染真菌。皮肤癣真菌和皮下组织感染真菌。一、表面感染真菌一、表面感染真菌 主要寄居于人体皮肤和毛干的最表层，在主要寄居于人体皮肤和毛干的最表层，在我国主要是糠秕马拉色菌，为条件致病菌，我国主要是糠秕马拉色菌，为条件致病菌，是一种嗜脂性酵母样菌。它侵犯皮肤角质是一种嗜脂性酵母样菌。它侵犯皮肤角质层引起一种慢性、无症状的浅部真菌病，层引起一种慢性、无症状的浅部真菌病，即汗斑，无明显炎症反应。主要是色素异即汗斑，无明显炎症反应。主要是色素异常性改变，由淡变深，而老斑疹色素由深常

2、性改变，由淡变深，而老斑疹色素由深转浅，成为白斑。还可引起毛囊炎、脂溢转浅，成为白斑。还可引起毛囊炎、脂溢性皮炎等。性皮炎等。微生物检验微生物检验 1直接显微镜检查直接显微镜检查 可采用透明胶带粘贴可采用透明胶带粘贴取材法，将透明胶带直接贴于皮肤表面，取材法，将透明胶带直接贴于皮肤表面，数分钟后揭下，直接贴于载玻片上镜检数分钟后揭下，直接贴于载玻片上镜检或经棉蓝染色或革兰染色后镜检。可见或经棉蓝染色或革兰染色后镜检。可见孢子和菌丝。孢子为圆形或卵形，厚壁，孢子和菌丝。孢子为圆形或卵形，厚壁，芽颈较宽，常成簇分布；菌丝粗短，呈芽颈较宽，常成簇分布；菌丝粗短，呈腊肠样。腊肠样。2分离培养与鉴定分离

3、培养与鉴定 将鳞屑接种于含菜籽油将鳞屑接种于含菜籽油的培养基，的培养基，37孵育孵育3d后，在培养基上开后，在培养基上开始生长，始生长，20d左右菌落约左右菌落约lOmm乳酪色酵母乳酪色酵母型菌落，表面光滑。取菌落作涂片染色镜型菌落，表面光滑。取菌落作涂片染色镜检，观察真菌形态。检，观察真菌形态。二、皮肤癣真菌二、皮肤癣真菌n寄生于皮肤角蛋白组织的浅部真菌称为皮寄生于皮肤角蛋白组织的浅部真菌称为皮肤癣菌肤癣菌，又称皮肤丝状菌。约有又称皮肤丝状菌。约有4545种，一种，一部分仅感染动物，对人致病的约有部分仅感染动物，对人致病的约有2020余种。余种。n无性阶段属于半知菌门，而有性型则属于无性阶段

4、属于半知菌门，而有性型则属于子囊菌门。子囊菌门。n分为毛癣菌属、表皮癣菌属和小孢子癣菌分为毛癣菌属、表皮癣菌属和小孢子癣菌属等三个菌属。属等三个菌属。(一一)临床意义临床意义皮肤癣菌易侵犯人体皮肤、指甲、毛发的皮肤癣菌易侵犯人体皮肤、指甲、毛发的角蛋白组织并生长繁殖致病，是因为其能角蛋白组织并生长繁殖致病，是因为其能产生角质溶解酶。皮肤癣菌是接触传染，产生角质溶解酶。皮肤癣菌是接触传染，只要反复接触患者均有可能被感染。在同只要反复接触患者均有可能被感染。在同一病人有不同的临床表现，如毛癣菌属可一病人有不同的临床表现，如毛癣菌属可引起发癣、体癣、甲癣；而相同部位的病引起发癣、体癣、甲癣；而相同部

5、位的病可由不同皮肤癣菌引起，如甲癣可由不同皮肤癣菌引起，如甲癣(俗称灰指俗称灰指甲甲)可由毛癣菌属和表皮癣菌属引起可由毛癣菌属和表皮癣菌属引起 。1毛癣菌属毛癣菌属有有20种，其中有种，其中有13种对人致病。常见的有红种对人致病。常见的有红色毛癣菌、紫色毛癣菌、须毛癣菌、断发毛色毛癣菌、紫色毛癣菌、须毛癣菌、断发毛癣菌和许兰毛癣菌等。毛癣菌感染的皮屑、癣菌和许兰毛癣菌等。毛癣菌感染的皮屑、甲屑或病发甲屑或病发10KOH溶液消化后镜检，可见溶液消化后镜检，可见有菌丝，病发内、外可见菌丝或孢子。在沙有菌丝，病发内、外可见菌丝或孢子。在沙氏培养基上可白、红、橙或棕色，表面呈绒氏培养基上可白、红、橙或

6、棕色，表面呈绒毛状、粉末状或蜡状菌落。镜下可见梳状、毛状、粉末状或蜡状菌落。镜下可见梳状、球拍、螺旋或鹿角菌丝；葡萄状或梨状小分球拍、螺旋或鹿角菌丝；葡萄状或梨状小分生孢子，细长薄壁大分生孢子生孢子，细长薄壁大分生孢子。2.表皮癣菌属表皮癣菌属n对人致病的只有絮状表皮癣菌对人致病的只有絮状表皮癣菌,感染的皮感染的皮屑和甲屑经屑和甲屑经1010KOHKOH液消化后镜检，可见液消化后镜检，可见分枝断裂的有隔菌丝，少见孢子。分枝断裂的有隔菌丝，少见孢子。n在沙氏培养基上培养后，菌落初为白色鹅在沙氏培养基上培养后，菌落初为白色鹅毛状，以后转变为黄色粉末状。镜下可见毛状，以后转变为黄色粉末状。镜下可见球

7、拍状菌丝、卵圆形或巨大棒状薄壁大分球拍状菌丝、卵圆形或巨大棒状薄壁大分生孢子，无小分生孢子，在陈旧培养物中生孢子，无小分生孢子，在陈旧培养物中可见厚膜孢子。可见厚膜孢子。3小孢子癣菌属小孢子癣菌属有有15种，对人致病的有种，对人致病的有8种，常见的有铁锈色种，常见的有铁锈色小孢子菌、石膏样小孢子菌和狗小孢子菌等。小孢子菌、石膏样小孢子菌和狗小孢子菌等。小孢子菌感染的皮屑和毛发经小孢子菌感染的皮屑和毛发经10KOH处理处理后镜检，皮屑中有分枝断裂菌丝，在毛发中后镜检，皮屑中有分枝断裂菌丝，在毛发中呈现小孢子镶嵌的鞘包裹着发干。在沙氏培呈现小孢子镶嵌的鞘包裹着发干。在沙氏培养基中可见白色、棕黄色或

8、黄褐色、粉末或养基中可见白色、棕黄色或黄褐色、粉末或绒毛状菌落。镜下可见梳状、球拍状或结节绒毛状菌落。镜下可见梳状、球拍状或结节状菌丝，卵圆形小分生孢子、厚壁梭形状菌丝，卵圆形小分生孢子、厚壁梭形(纺锤纺锤形形)大分生孢子。大分生孢子。(三三)微生物检验微生物检验1标本采集标本采集 采集新发生的皮肤损害边缘采集新发生的皮肤损害边缘皮屑；指甲近尖端下面甲屑；拔取无光皮屑；指甲近尖端下面甲屑；拔取无光泽病发，黄癣采集黄癣痂。将标本盛于泽病发，黄癣采集黄癣痂。将标本盛于清洁纸袋，鳞屑要用黑纸包好。清洁纸袋，鳞屑要用黑纸包好。2直接显微镜检查直接显微镜检查 皮屑标本用皮屑标本用10KOH液制成湿片，指

9、甲用液制成湿片，指甲用25KOH或或25NaOH含含 5甘油处理。镜检可见透明、甘油处理。镜检可见透明、有隔，常有分支的菌丝及成链的关节孢有隔，常有分支的菌丝及成链的关节孢子，三个癣菌属难以鉴别。毛癣菌属感子，三个癣菌属难以鉴别。毛癣菌属感染病发有发外型和发内型孢子，而小孢染病发有发外型和发内型孢子，而小孢子菌属只有发外型孢子。子菌属只有发外型孢子。3分离培养与鉴定分离培养与鉴定 皮屑、甲屑和病发标本，先用皮屑、甲屑和病发标本，先用70乙醇或乙醇或在青、链霉素混合液内处理在青、链霉素混合液内处理 5min，再用再用生理盐水洗生理盐水洗3次，然后接种沙氏琼脂斜面，次，然后接种沙氏琼脂斜面，25培

10、养，每周观察菌落形态及颜色，直培养，每周观察菌落形态及颜色，直至第四周。挑取菌落镜检菌丝和孢子，也至第四周。挑取菌落镜检菌丝和孢子，也可作棉兰染色后镜检或作小培养后镜检。可作棉兰染色后镜检或作小培养后镜检。必要时作其他鉴定如毛发穿孔试验、脲酶必要时作其他鉴定如毛发穿孔试验、脲酶试验和特殊营养需要试验等来鉴定皮肤癣试验和特殊营养需要试验等来鉴定皮肤癣菌。菌。毛发穿孔试验毛发穿孔试验是将头发发剪成是将头发发剪成lcm长，置于已加入长，置于已加入25ml蒸馏水和蒸馏水和23滴滴10酵母浸膏液的平皿内，酵母浸膏液的平皿内，高压灭菌。将待检皮肤真菌接种于平皿内，高压灭菌。将待检皮肤真菌接种于平皿内，置置

11、25孵育四周，每周检查一次，每次取孵育四周，每周检查一次，每次取数根毛发置载玻片上，经乳酚棉蓝染色后，数根毛发置载玻片上，经乳酚棉蓝染色后，置低倍镜下观察。若毛发有裂口或陷凹者置低倍镜下观察。若毛发有裂口或陷凹者为阳性，否则为阴性。为阳性，否则为阴性。4 4药物敏感试验药物敏感试验皮肤癣菌对灰黄霉素、伊曲康唑等皮肤癣菌对灰黄霉素、伊曲康唑等药物敏感。药物敏感。三、皮下组织感染真菌三、皮下组织感染真菌主要有着色真菌和孢子丝菌。一般经外伤主要有着色真菌和孢子丝菌。一般经外伤感染后，在局部皮下组织繁殖，并缓慢向感染后，在局部皮下组织繁殖，并缓慢向周围组织扩散，还可经淋巴、血液向全身周围组织扩散，还可

12、经淋巴、血液向全身扩散。扩散。(一一)着色真菌着色真菌是自然界的腐生菌，经破损皮肤而感染，是自然界的腐生菌，经破损皮肤而感染，引起病损皮肤变黑，引起着色真菌病。主引起病损皮肤变黑，引起着色真菌病。主要真菌有卡氏枝孢霉、裴氏着色真菌、紧要真菌有卡氏枝孢霉、裴氏着色真菌、紧密着色真菌和疣状瓶霉。密着色真菌和疣状瓶霉。1临床意义临床意义常在患者外伤后感染，多发生四肢暴露部常在患者外伤后感染，多发生四肢暴露部位，开始为小丘疹，表面干燥或湿润，有位，开始为小丘疹，表面干燥或湿润，有鳞屑或鳞痂，逐渐形成斑块结节，呈疣状鳞屑或鳞痂，逐渐形成斑块结节，呈疣状增殖。皮损反复发生，且长期不愈，可致增殖。皮损反复发

13、生，且长期不愈，可致畸致残。免疫功能低下时可侵犯中枢神经畸致残。免疫功能低下时可侵犯中枢神经系统或经血流扩散。病理变化主要为角化系统或经血流扩散。病理变化主要为角化过度及角化不全。过度及角化不全。2微生物特性微生物特性 着色真菌菌丝短粗分隔，呈棕色，有三型着色真菌菌丝短粗分隔，呈棕色，有三型分生孢子：树枝型：菌丝末端有分生孢分生孢子：树枝型：菌丝末端有分生孢子柄，柄端分叉长出孢子；剑顶型：围子柄，柄端分叉长出孢子；剑顶型：围绕菌丝末端或菌丝横隔处长有一圈分生孢绕菌丝末端或菌丝横隔处长有一圈分生孢子；花瓶型：在菌丝分隔处长出花瓶状子；花瓶型：在菌丝分隔处长出花瓶状的分生孢子柄，在瓶口长出成丛的小

14、分生的分生孢子柄，在瓶口长出成丛的小分生孢子。在葡萄糖蛋白胨琼脂培养基上培养孢子。在葡萄糖蛋白胨琼脂培养基上培养1 1周，出现灰黑色菌落，随之菌落表面出周，出现灰黑色菌落，随之菌落表面出现绒毛状或天鹅绒状气生菌丝，菌落色素现绒毛状或天鹅绒状气生菌丝，菌落色素加深。加深。3.微生物检验微生物检验(1)直接显微镜检查直接显微镜检查 皮屑用皮屑用1020KOH溶液加热处理后镜溶液加热处理后镜检，可见单个或成群厚壁孢子，有横隔或中检，可见单个或成群厚壁孢子，有横隔或中间十字分隔。取乳头状增殖的病损挤压出的间十字分隔。取乳头状增殖的病损挤压出的分泌物镜检阳性率最高。脓汁、脑脊液或活分泌物镜检阳性率最高。

15、脓汁、脑脊液或活组织也可做镜检。镜检结果结合临床可确定组织也可做镜检。镜检结果结合临床可确定诊断。诊断。(2)分离培养与鉴定分离培养与鉴定1)1)将标本接种沙氏培养基，生长缓慢，菌落将标本接种沙氏培养基，生长缓慢，菌落从灰黑色至黑色，有气生菌丝。菌落涂片从灰黑色至黑色，有气生菌丝。菌落涂片镜检可见三种类型的分生孢子，有鉴定价镜检可见三种类型的分生孢子，有鉴定价值。值。2)2)明胶液化试验：致病性菌株均不液化明胶。明胶液化试验：致病性菌株均不液化明胶。3)3)其他生化反应：不能水解淀粉，不凝固牛其他生化反应：不能水解淀粉，不凝固牛奶，能同化硝酸盐，需维生素奶，能同化硝酸盐，需维生素B1B1。4

16、4药物敏感试验药物敏感试验对对5-5-FCFC、伊曲康唑、氟康唑敏感，伊曲康唑、氟康唑敏感，但易产生耐药性。但易产生耐药性。(二二)孢孢子子丝菌丝菌n孢子丝菌属于腐生性真菌，广泛分布于孢子丝菌属于腐生性真菌，广泛分布于土壤、尘埃、木材上。主要病原真菌是土壤、尘埃、木材上。主要病原真菌是申克孢子丝菌申克孢子丝菌。n孢子丝菌病是人兽共患性疾病，传染源是孢子丝菌病是人兽共患性疾病，传染源是人和动物，传播途径主要经破损皮肤接触人和动物，传播途径主要经破损皮肤接触感染。经微小创口侵入皮肤后，创口局部感染。经微小创口侵入皮肤后，创口局部出现炎症性小结，增大形成炎症性斑块或出现炎症性小结，增大形成炎症性斑块

17、或增生性糜烂。可沿淋巴管分布，引起亚急增生性糜烂。可沿淋巴管分布，引起亚急性和慢性肉芽肿，称为孢子丝菌性下疳。性和慢性肉芽肿，称为孢子丝菌性下疳。经呼吸道引起肺孢子丝菌病，并可沿血行经呼吸道引起肺孢子丝菌病，并可沿血行播散至其他器官如骨、眼等。播散至其他器官如骨、眼等。申克孢子丝菌是二相性真菌。在自然环申克孢子丝菌是二相性真菌。在自然环境中或沙氏培养基上境中或沙氏培养基上25252828培养时呈霉培养时呈霉菌型菌型(菌丝相菌丝相)，而在组织内或在营养丰富的，而在组织内或在营养丰富的培养基上培养时为酵母型培养基上培养时为酵母型(组织相组织相)。菌丝相。菌丝相可见菌丝两侧伸出细长分生孢子柄，末端长

18、可见菌丝两侧伸出细长分生孢子柄，末端长出成群梨状小分生孢子。组织相则可见卵圆出成群梨状小分生孢子。组织相则可见卵圆形小体，形似雪茄烟状，常位于中性粒细胞形小体，形似雪茄烟状，常位于中性粒细胞或单核细胞内。在沙氏培养基上形成黑褐皱或单核细胞内。在沙氏培养基上形成黑褐皱褶薄膜菌落，而在胱氨酸葡萄糖血琼脂培养褶薄膜菌落，而在胱氨酸葡萄糖血琼脂培养基上则形成灰黄色柔软的类酵母型菌落。基上则形成灰黄色柔软的类酵母型菌落。3微生物检验微生物检验(1)直接昆微镜检查：取患者脓、痰、血、直接昆微镜检查：取患者脓、痰、血、痂皮或病理组织块等作涂片或切片，革痂皮或病理组织块等作涂片或切片，革兰或兰或 PAS染色，

19、在巨噬细胞或中性粒细染色，在巨噬细胞或中性粒细胞内、外，可见胞内、外，可见G+或或PAS阳性阳性(紫红色紫红色)卵圆形的孢子。卵圆形的孢子。(2)分离培养与鉴定：将标本接种于沙氏培养分离培养与鉴定：将标本接种于沙氏培养基上基上25培养，培养，2-3d开始生长，初为白色开始生长，初为白色湿润的酵母型菌落，以后变为淡咖啡色至湿润的酵母型菌落，以后变为淡咖啡色至深褐色。涂片染色镜检，可见典型的菌丝深褐色。涂片染色镜检，可见典型的菌丝相的申克孢子丝菌。接种于胱氨酸葡萄糖相的申克孢子丝菌。接种于胱氨酸葡萄糖血琼脂培养基上，血琼脂培养基上，37培养培养2-3d，可形成可形成乳白色或淡褐色酵母型菌落。镜下可

20、见乳白色或淡褐色酵母型菌落。镜下可见G+卵圆形的孢子。卵圆形的孢子。(3)药物敏感试验：对碘化钾、伊曲康唑、特比药物敏感试验：对碘化钾、伊曲康唑、特比 萘芬等药物敏感。萘芬等药物敏感。(4)抗体检测：取患者血清做凝集试验，若抗体抗体检测：取患者血清做凝集试验，若抗体 效价大于效价大于l：320有诊断意义。有诊断意义。(5)动物接种：将标本接种小白鼠腹腔内，动物接种：将标本接种小白鼠腹腔内，2周内周内 引起腹腔炎，取脓汁作涂片染色镜枪，可见引起腹腔炎，取脓汁作涂片染色镜枪，可见 革兰阳性、卵圆形或梭形小体。革兰阳性、卵圆形或梭形小体。第二节 深部感染真菌 深部感染真菌是指能侵袭深部组织和内脏及深

21、部感染真菌是指能侵袭深部组织和内脏及全身的真菌，主要有假丝酵母菌、隐球菌、全身的真菌，主要有假丝酵母菌、隐球菌、曲霉、毛霉、组织胞浆菌和卡氏肺孢菌等，曲霉、毛霉、组织胞浆菌和卡氏肺孢菌等，其中以隐球菌感染较常见。其中以隐球菌感染较常见。组织胞浆菌为二相性真菌，假丝酵母菌、曲组织胞浆菌为二相性真菌，假丝酵母菌、曲霉、毛霉和卡氏肺孢菌等为条件致病性真菌，霉、毛霉和卡氏肺孢菌等为条件致病性真菌，只有在一定的条件下才引起机体致病。只有在一定的条件下才引起机体致病。一、假丝酵母菌一、假丝酵母菌俗称念珠菌，有俗称念珠菌，有8181个种，其中有个种，其中有1111种对人种对人有致病性：白假丝酵母菌、为最常见

22、的致有致病性：白假丝酵母菌、为最常见的致病菌。此外，热带假丝酵母菌、克柔假丝病菌。此外，热带假丝酵母菌、克柔假丝酵母菌和光滑假丝酵母菌也较多引起疾病。酵母菌和光滑假丝酵母菌也较多引起疾病。(一一)白假丝酵母菌白假丝酵母菌 通常存在于人的口腔、上呼吸道、肠道和通常存在于人的口腔、上呼吸道、肠道和阴道粘膜上，当机体发生菌群失调或抵抗阴道粘膜上，当机体发生菌群失调或抵抗力降低时，可引起念珠菌病。如婴儿的鹅力降低时，可引起念珠菌病。如婴儿的鹅口疮、假丝酵母菌性阴道炎、龟头炎、肠口疮、假丝酵母菌性阴道炎、龟头炎、肠炎、肺炎、膀胱炎、肾孟肾炎和中枢神经炎、肺炎、膀胱炎、肾孟肾炎和中枢神经系统白假丝酵母菌病

23、，如脑膜炎、脑膜脑系统白假丝酵母菌病，如脑膜炎、脑膜脑炎、脑脓肿等。此外，因心瓣膜手术而引炎、脑脓肿等。此外，因心瓣膜手术而引发心内膜炎、长期用静脉内导管而引起全发心内膜炎、长期用静脉内导管而引起全身性假丝酵母菌病，病死率极高。身性假丝酵母菌病，病死率极高。1微生物特性微生物特性 白假丝酵母菌呈圆形或卵圆形，直径白假丝酵母菌呈圆形或卵圆形，直径3-63-6m m。革兰阳性，着色不均匀。出芽方式繁殖，在革兰阳性，着色不均匀。出芽方式繁殖，在组织内可见芽生孢子、假菌丝，在玉米粉培组织内可见芽生孢子、假菌丝，在玉米粉培养基中可产生假菌丝和厚膜孢子。养基中可产生假菌丝和厚膜孢子。2 2微生物检验微生物

24、检验 1)直接显微镜检查：取脓汁、痰和局部炎症直接显微镜检查：取脓汁、痰和局部炎症性分泌物直接涂片，革兰染色后镜检，显性分泌物直接涂片，革兰染色后镜检，显微镜见到革兰阳性微镜见到革兰阳性(着色不均匀着色不均匀)、圆形或卵、圆形或卵圆形菌体或孢子及假菌丝，可确认为假丝圆形菌体或孢子及假菌丝，可确认为假丝酵母菌感染。酵母菌感染。2)抗原检测：取病人血清作抗原检测：取病人血清作ELISA、免疫印免疫印迹法等检测白假丝酵母菌抗原。迹法等检测白假丝酵母菌抗原。3)核酸检测：用核酸检测：用PCR法将白假丝酵母菌法将白假丝酵母菌DNA分子扩增后以分子探针检测，具有较好的分子扩增后以分子探针检测，具有较好的敏

25、性和特异性。敏性和特异性。4)分离培养分离培养将标本接种在沙氏培养基上，将标本接种在沙氏培养基上，2525或或3737培养培养1 1d d后，可出现奶油色类酵母型菌后，可出现奶油色类酵母型菌落。镜检可见假菌丝和芽生孢子。落。镜检可见假菌丝和芽生孢子。鉴定鉴定1)芽管形成试验：将假丝酵母菌接种于芽管形成试验：将假丝酵母菌接种于0.20.5m|血清中，血清中，37孵育孵育1.5h观察有无芽观察有无芽管形成。白假丝酵母菌可形成芽管，其他假管形成。白假丝酵母菌可形成芽管，其他假丝酵母菌不形成芽管。丝酵母菌不形成芽管。2)厚膜孢子形成试验：将假丝酵母菌接种于玉厚膜孢子形成试验：将假丝酵母菌接种于玉米粉培

26、养基米粉培养基25孵育孵育1-2d后，白假丝酵母菌后，白假丝酵母菌在菌丝顶端、侧缘或中间形成厚膜孢子。在菌丝顶端、侧缘或中间形成厚膜孢子。3)3)糖同化或发酵试验糖同化或发酵试验凡发酵某种糖一定能同化该糖，故只需做凡发酵某种糖一定能同化该糖，故只需做那些不发酵糖的同化试验。将假丝酵母菌那些不发酵糖的同化试验。将假丝酵母菌接种糖发酵管，接种糖发酵管，25孵育，一般观察孵育，一般观察23d，对不发酵或弱发酵管可延长至对不发酵或弱发酵管可延长至10d或或24周。周。观察有无酵母生长或液体培养基是否变混观察有无酵母生长或液体培养基是否变混浊。现在商品化的产色培养基可快速鉴定浊。现在商品化的产色培养基可

27、快速鉴定白假丝酵母菌和其他假丝酵母菌。白假丝酵母菌和其他假丝酵母菌。(3)药物敏感试验：对二性霉素药物敏感试验：对二性霉素B、5-FC等药等药 物敏感，但对物敏感，但对5-FC极易产生耐药性。极易产生耐药性。(4)抗体检测：早期诊断可用抗体检测：早期诊断可用ELlSA夹心法、夹心法、免疫酶斑点试验，方法简便。也可用乳胶免疫酶斑点试验，方法简便。也可用乳胶 凝集试验和对流免疫电泳试验等检测血清凝集试验和对流免疫电泳试验等检测血清 中抗白假丝酵母菌抗体。中抗白假丝酵母菌抗体。(5)动物试验：将假丝酵母菌悬液注射动物试验：将假丝酵母菌悬液注射1ml于家于家 兔耳静脉或注射兔耳静脉或注射0.2ml于小

28、白鼠尾静脉，假于小白鼠尾静脉，假 丝酵母菌对动物无致病性。丝酵母菌对动物无致病性。(二二)热带假丝酵母菌热带假丝酵母菌 广泛分布于自然界，在人体表和外界相广泛分布于自然界，在人体表和外界相通的腔道中也存在。热带假丝酵母菌可通的腔道中也存在。热带假丝酵母菌可引起皮肤、粘膜和内脏假丝酵母菌病。引起皮肤、粘膜和内脏假丝酵母菌病。它除可在粘膜细胞上增殖引起感染外，它除可在粘膜细胞上增殖引起感染外，其产生的毒素可引起过敏反应及产生的其产生的毒素可引起过敏反应及产生的水解酶类引起组织损伤。水解酶类引起组织损伤。微生物检验微生物检验(1)直接显微镜检查：将标本作涂片革兰直接显微镜检查：将标本作涂片革兰 染色

29、后镜检，观察染色后镜检，观察+假丝酵母菌。假丝酵母菌。(2)分离培养与鉴定：将标本接种在沙氏分离培养与鉴定：将标本接种在沙氏 培养基上形成色暗而干燥的菌落培养基上形成色暗而干燥的菌落,取取 菌落作菌落作TZC反应。反应。TZC反应反应即在葡萄糖蛋白胨琼脂内加入即在葡萄糖蛋白胨琼脂内加入0 00505g gL L氯化氯化三苯基四氮唑三苯基四氮唑(TZC)TZC)，热带假丝酵母菌在此培热带假丝酵母菌在此培养基上生长后使培养基变为深红色或紫色，养基上生长后使培养基变为深红色或紫色，而白假丝酵母菌不使培养基变色而白假丝酵母菌不使培养基变色(淡红淡红)，其，其他假丝酵母菌使培养基变为红色。再取菌落他假丝

30、酵母菌使培养基变为红色。再取菌落做糖发酵或同化试验、芽管形成较迟做糖发酵或同化试验、芽管形成较迟(血清中血清中6 6h h以上以上)，不形成厚膜孢子、动物试验阴性。，不形成厚膜孢子、动物试验阴性。二、隐球菌属二、隐球菌属 包括包括1717个种和个种和7 7个变种，广泛分布于自然个变种，广泛分布于自然界，人体体表、口腔和肠道中。外源性界，人体体表、口腔和肠道中。外源性感染感染,经呼吸道侵入，由肺经血行播散经呼吸道侵入，由肺经血行播散,可侵犯肺、脑及脑膜、皮肤、骨和关节。可侵犯肺、脑及脑膜、皮肤、骨和关节。好发于细胞免疫功能低下者，如好发于细胞免疫功能低下者，如AIDSAIDS、恶性肿瘤、糖尿病、

31、器官移植及大剂量恶性肿瘤、糖尿病、器官移植及大剂量使用糖皮质激素者。使用糖皮质激素者。现已发现现已发现新生隐球新生隐球菌、菌、浅白隐球菌和罗伦隐球菌有致病性。浅白隐球菌和罗伦隐球菌有致病性。()微生物特性微生物特性 在组织中呈圆形或卵圆形，直径一般在在组织中呈圆形或卵圆形，直径一般在4 46 6m m，外周有宽厚荚膜，荚膜较菌大外周有宽厚荚膜，荚膜较菌大1 13 3倍，倍，折光性强，一般染色法不易着色而难以发现折光性强，一般染色法不易着色而难以发现而得名。常采用墨汁负染色法，在黑色景下而得名。常采用墨汁负染色法，在黑色景下可镜检到透亮菌体和宽厚荚膜。非致病性隐可镜检到透亮菌体和宽厚荚膜。非致病

32、性隐球菌无荚膜。球菌无荚膜。（）生物学多态性（）生物学多态性n有有A A、B B、C C、D D等等4 4个血清型，归入两个变个血清型，归入两个变种组：新生隐球菌新生变种，有性阶种组：新生隐球菌新生变种，有性阶段为新生线黑粉菌，血清型为段为新生线黑粉菌，血清型为A A、D D；新生隐球菌格特变种，有性阶段为棒杆新生隐球菌格特变种，有性阶段为棒杆孢线黑粉菌，血清型为孢线黑粉菌，血清型为B B、C C。n用含刀豆氨酸、甘氨酸、溴麝香草酚蓝用含刀豆氨酸、甘氨酸、溴麝香草酚蓝培养基可区分两个种，培养基可区分两个种，B B、C C型可使培养型可使培养基由黄色变蓝色，而基由黄色变蓝色，而A A、D D型则

33、无此作用。型则无此作用。在沙氏培养基上形成白色粘稠菌落。在沙氏培养基上形成白色粘稠菌落。()微生物检验微生物检验(1)标本直接镜检：用病人脑脊液作墨汁负标本直接镜检：用病人脑脊液作墨汁负染色检查是诊断隐球菌脑膜炎最简便、染色检查是诊断隐球菌脑膜炎最简便、快速方法。常规细胞染色可发现隐球菌，快速方法。常规细胞染色可发现隐球菌，但易误诊和漏诊。如用但易误诊和漏诊。如用PAS染色后新生染色后新生隐球菌呈红色。隐球菌呈红色。(2)抗原检测抗原检测用乳胶凝集试验、用乳胶凝集试验、ELISAELISA、和单克隆抗体和单克隆抗体法等免疫学方法检测隐球菌荚膜多糖特异法等免疫学方法检测隐球菌荚膜多糖特异性抗原，

34、已成为临床上的常规诊断方法，性抗原，已成为临床上的常规诊断方法，其中以乳胶凝集试验最为常用，此法简便、其中以乳胶凝集试验最为常用，此法简便、快速。特别对直接镜检和分离鉴定阴性者快速。特别对直接镜检和分离鉴定阴性者更有诊断价值。更有诊断价值。ELISAELISA敏感性和特异敏感性和特异性都性都较高。单克隆抗体法除有较高敏感性和特较高。单克隆抗体法除有较高敏感性和特异性外，标本无须稀释和预先处理的优点。异性外，标本无须稀释和预先处理的优点。(3)核酸检测核酸检测n可用痰液、支气管吸出物等标本核酸检测可用痰液、支气管吸出物等标本核酸检测方法有方法有DNADNA探针法、探针法、PCRPCR探针法等，用

35、于检探针法等，用于检测的探针、引物主要选自保守区的重复序测的探针、引物主要选自保守区的重复序列。列。n可检出新生隐球菌，并可区别类型，是新可检出新生隐球菌，并可区别类型，是新生变种还是格特变种。非致病性隐球菌不生变种还是格特变种。非致病性隐球菌不被检出。被检出。n此方法不受药物治疗的影响，还能正确评此方法不受药物治疗的影响，还能正确评价临床疗效和预后等。价临床疗效和预后等。（）分离培养（）分离培养n 将标本接种在沙氏培养基上，病原性隐将标本接种在沙氏培养基上，病原性隐球菌在球菌在2525和和3737生长，而非病原性隐生长，而非病原性隐球菌在球菌在3737时不生长。培养时不生长。培养2 25 5

36、d d后观察后观察菌落形态特点，并取菌落作印度墨汁负菌落形态特点，并取菌落作印度墨汁负染色镜检。染色镜检。()鉴定鉴定1）酚氧化酶试验：接种）酚氧化酶试验：接种L-多巴枸橼酸铁和咖多巴枸橼酸铁和咖 啡酸培养基中，经啡酸培养基中，经25d培养，呈棕黑色培养，呈棕黑色 菌落。菌落。2）脲酶试验：能产生脲酶分解尿素琼脂培养）脲酶试验：能产生脲酶分解尿素琼脂培养 基中的尿素形成基中的尿素形成NH4和和CO2，使使pH升高，升高，培养基可由黄色变粉红色，而白假丝酵母培养基可由黄色变粉红色，而白假丝酵母 菌为阴性。菌为阴性。3）糖同化及发酵试验：能同化葡萄糖、）糖同化及发酵试验：能同化葡萄糖、半乳糖、蔗糖

37、和肌醇，但不能发酵糖半乳糖、蔗糖和肌醇，但不能发酵糖 类，不能同化硝酸盐。非致病性隐球类，不能同化硝酸盐。非致病性隐球 菌不能同化肌醇。菌不能同化肌醇。三、曲霉三、曲霉广泛分布于自然界，达广泛分布于自然界，达900余种，分为余种，分为18个群，对工个群，对工业和医药的用途很大。酿酒造酱。生产有机酸及酶业和医药的用途很大。酿酒造酱。生产有机酸及酶制剂，抗生素等。人体对曲霉有极强免疫力，只有制剂，抗生素等。人体对曲霉有极强免疫力，只有在免疫功能降低时才能致病，如使用免疫抑制剂、在免疫功能降低时才能致病，如使用免疫抑制剂、肾上腺皮质激素，放疗化疗，各种恶性肿瘤、糖尿肾上腺皮质激素，放疗化疗，各种恶性

38、肿瘤、糖尿病、病、AIDS等可诱发曲霉病。曲霉可侵犯许多部位，等可诱发曲霉病。曲霉可侵犯许多部位，呼吸系统曲霉病主要有三种：过敏型、曲霉球和肺呼吸系统曲霉病主要有三种：过敏型、曲霉球和肺炎。全身性曲霉病多发生败血症，危及生命。曲霉炎。全身性曲霉病多发生败血症，危及生命。曲霉产生黄曲霉毒素、杂色曲霉毒素与原发性肝癌有关。产生黄曲霉毒素、杂色曲霉毒素与原发性肝癌有关。微生物特性微生物特性 由分生孢子头和足细胞两部分组成特征由分生孢子头和足细胞两部分组成特征性结构。分子孢子头包括分生孢梗茎、性结构。分子孢子头包括分生孢梗茎、顶囊、瓶梗、梗基和分生孢子链。足细顶囊、瓶梗、梗基和分生孢子链。足细胞为特化

39、的厚壁膨大的菌丝细胞。向上胞为特化的厚壁膨大的菌丝细胞。向上形成孢梗茎。形成孢梗茎。微生物检验微生物检验(1)直接显微镜检查：取痰液等被检材料涂直接显微镜检查：取痰液等被检材料涂 于载玻片上，在镜下可见分枝的菌丝、于载玻片上，在镜下可见分枝的菌丝、较粗的分生孢子头，顶端膨大形成顶囊，较粗的分生孢子头，顶端膨大形成顶囊，顶囊上有小梗，小梗上有许多小分生孢顶囊上有小梗，小梗上有许多小分生孢 子。子。(2)抗原检测：用竞争性抗原检测：用竞争性ELISA测定病人血测定病人血 清中曲霉抗原。清中曲霉抗原。(3)分离培养与鉴定分离培养与鉴定 标本接种沙氏琼脂，标本接种沙氏琼脂，室温培养后菌落形成快，呈毛状

40、，一般室温培养后菌落形成快，呈毛状，一般 为黄绿色。将菌落涂片镜检可见特征性为黄绿色。将菌落涂片镜检可见特征性 的分子孢子头和足细胞。的分子孢子头和足细胞。(4)药物敏感试验药物敏感试验 对制霉菌素和两性霉素对制霉菌素和两性霉素B 敏感。敏感。(5)抗体检测抗体检测 检测病人血清中抗曲霉抗体。检测病人血清中抗曲霉抗体。常用免疫扩散检测，其敏感性和特异性常用免疫扩散检测，其敏感性和特异性 较高，也可用对流免疫电泳、较高，也可用对流免疫电泳、ELISA、生物素生物素亲和素联免疫吸附测定亲和素联免疫吸附测定(BALISA)、放射免疫测定放射免疫测定(R1A)及间接免疫荧光法等。及间接免疫荧光法等。菌

41、丝和培养滤液可作菌丝和培养滤液可作ELISA抗原。抗原。(6)皮肤试验皮肤试验 对过敏性支气管肺炎病人可对过敏性支气管肺炎病人可 用曲霉抗原提取液作皮试。用曲霉抗原提取液作皮试。型超敏反应在型超敏反应在 15-20min发生阳性反应。发生阳性反应。型超敏反应在型超敏反应在4-10h出现阳性反应。出现阳性反应。型超敏反应可出现于超敏反应型肺炎病人。型超敏反应可出现于超敏反应型肺炎病人。四、毛霉四、毛霉n引起毛霉病的病原菌，以根霉属最为常见，引起毛霉病的病原菌，以根霉属最为常见，尤其是少根根霉和米根霉两种最多见。尤其是少根根霉和米根霉两种最多见。n毛霉病是一种发病急，进展快、病死率极毛霉病是一种发

42、病急，进展快、病死率极高的系统性条件致病性真菌感染。尤其是高的系统性条件致病性真菌感染。尤其是慢性消耗性疾病如糖尿病、白血病、长期慢性消耗性疾病如糖尿病、白血病、长期应用化疗、皮质类固醇激素的患者。临床应用化疗、皮质类固醇激素的患者。临床上常见的是眼眶及中枢神经系统的毛霉病。上常见的是眼眶及中枢神经系统的毛霉病。起初多发于鼻粘膜或鼻窦，继则眼眶软组起初多发于鼻粘膜或鼻窦，继则眼眶软组织及脑，也可全身性播散，预后较为严重。织及脑，也可全身性播散，预后较为严重。常在病死后尸检才明确。常在病死后尸检才明确。微生物特性微生物特性n有无隔菌丝，在一些陈旧培养基中偶见有无隔菌丝，在一些陈旧培养基中偶见有隔

43、菌丝。有些霉菌有匍匐菌丝，在培有隔菌丝。有些霉菌有匍匐菌丝，在培养基表面横向生长，其产生的假根伸入养基表面横向生长，其产生的假根伸入培养基内，孢囊梗与假根对生，在孢囊培养基内，孢囊梗与假根对生，在孢囊梗顶端形成孢子囊，内生孢子囊孢子。梗顶端形成孢子囊，内生孢子囊孢子。微生物检验微生物检验（1）直接镜检直接镜检 取皮屑、脓液、血液、痰、鼻取皮屑、脓液、血液、痰、鼻 窦抽取物等标本，用窦抽取物等标本，用20%KOH制成湿片，制成湿片，直接镜检可见折光性强的粗大菌丝，直直接镜检可见折光性强的粗大菌丝，直 径径615m，无隔或少数分隔、壁薄、无隔或少数分隔、壁薄、偶见孢子囊及孢子囊梗。偶见孢子囊及孢子

44、囊梗。()分离培养分离培养将临床标本接种于不含放线菌酮的麦芽糖将临床标本接种于不含放线菌酮的麦芽糖培养基、马铃薯培养基及沙氏琼脂培养基，培养基、马铃薯培养基及沙氏琼脂培养基，2525或或3737培养，毛霉生长较快，初起菌落培养，毛霉生长较快，初起菌落表面呈棉花样、白色，渐变为灰褐色，顶端表面呈棉花样、白色，渐变为灰褐色，顶端有黑色小点。镜检菌丝无隔或极少分隔，孢有黑色小点。镜检菌丝无隔或极少分隔，孢囊梗直接由菌丝长出，常单生，分枝或极少囊梗直接由菌丝长出，常单生，分枝或极少不分枝。因毛霉常污染环境，故直接镜检较不分枝。因毛霉常污染环境，故直接镜检较培养更有意义。培养更有意义。鉴定鉴定 依据是菌

45、落形态、色泽。分枝状态：有无结依据是菌落形态、色泽。分枝状态：有无结合孢子及结合孢子的特点。孢子囊的形态，合孢子及结合孢子的特点。孢子囊的形态，有无囊轴、囊领和囊托。生长温度，有无厚有无囊轴、囊领和囊托。生长温度，有无厚壁孢子等壁孢子等 。1)少根根霉：生长快，在少根根霉：生长快，在3740能生能生长。菌落初为白色，后变为灰褐色。镜长。菌落初为白色，后变为灰褐色。镜检见匍匐菌丝和假根。孢囊梗单生或分检见匍匐菌丝和假根。孢囊梗单生或分枝，淡褐色或黄褐色，常从菌丝膨胀处枝，淡褐色或黄褐色，常从菌丝膨胀处生出。囊轴卵圆形或球形，无色或淡黄生出。囊轴卵圆形或球形，无色或淡黄色。孢囊孢子圆形，表面有棘刺

46、。偶有色。孢囊孢子圆形，表面有棘刺。偶有厚壁孢子。厚壁孢子。2)米根霉：菌落同少根根霉。镜检见孢囊米根霉：菌落同少根根霉。镜检见孢囊梗单生或分枝，孢子囊孢子淡褐色有条梗单生或分枝，孢子囊孢子淡褐色有条纹，形态不规则。假根发达。厚壁孢子纹，形态不规则。假根发达。厚壁孢子极多。在室温及极多。在室温及40均可生长。均可生长。3)总状毛霉：生长迅速，菌落呈毛状，高可总状毛霉：生长迅速，菌落呈毛状，高可达达1cm，灰色疏松。镜检见孢囊梗最初不灰色疏松。镜检见孢囊梗最初不分枝，以后不规则分枝。孢子囊球形，淡分枝，以后不规则分枝。孢子囊球形，淡黄色。成熟时孢囊壁消解，囊轴球形。孢黄色。成熟时孢囊壁消解，囊轴

47、球形。孢囊孢子卵形。囊孢子卵形。4)伞梨头霉：异名为伞状毛霉。菌落呈毛状、伞梨头霉：异名为伞状毛霉。菌落呈毛状、生长快，数日可长满斜面和琼脂平板。菌生长快，数日可长满斜面和琼脂平板。菌落粗糙，初为白色，后变为淡蓝灰色，背落粗糙，初为白色，后变为淡蓝灰色，背面深灰至黄绿色。孢囊梗长并呈伞形分枝，面深灰至黄绿色。孢囊梗长并呈伞形分枝，孢子囊灰色，囊轴圆形光滑，有囊托。孢孢子囊灰色，囊轴圆形光滑，有囊托。孢囊孢子近球形，表面光滑。无厚壁孢子。囊孢子近球形，表面光滑。无厚壁孢子。3药物敏感试验药物敏感试验 对两性霉素对两性霉素B敏感，静敏感，静 脉滴注疗效较好。脉滴注疗效较好。4抗体检测抗体检测 用琼

48、脂双扩散、用琼脂双扩散、ELISA法检法检 测病人体内特异性抗体。即用匀浆抗原测病人体内特异性抗体。即用匀浆抗原 检测毛霉抗体的敏感性和特异性都较高。检测毛霉抗体的敏感性和特异性都较高。也可用免疫荧光技术在组织切片中检测也可用免疫荧光技术在组织切片中检测 和鉴定毛霉。和鉴定毛霉。五、组织胞浆菌五、组织胞浆菌有荚膜组织胞浆菌和杜波组织胞浆菌两个种。有荚膜组织胞浆菌和杜波组织胞浆菌两个种。主要侵犯网状内皮系统，荚膜组织胞浆菌引起：主要侵犯网状内皮系统，荚膜组织胞浆菌引起：原发急性型组织胞浆菌病，仅皮肤试验阳性。原发急性型组织胞浆菌病，仅皮肤试验阳性。慢性空洞型，引起肺损害，常被误诊为肺结慢性空洞型

49、，引起肺损害，常被误诊为肺结 核。核。严重播散型，全身器官均可损伤，预后严重。严重播散型，全身器官均可损伤，预后严重。淋巴瘤、白血病、霍奇金病、淋巴瘤、白血病、霍奇金病、AIDS或用肾上或用肾上 腺皮质激素治疗者常可感染本菌。腺皮质激素治疗者常可感染本菌。微生物特性微生物特性组织胞浆菌是一种双相型真菌，在组织胞浆菌是一种双相型真菌，在25培养时培养时呈典型菌丝体，在呈典型菌丝体，在37培养时为酵母型，位于培养时为酵母型，位于细胞内或外。卵圆形，直径为细胞内或外。卵圆形，直径为24m、芽生芽生孢子，一端较尖，一端较圆，自细，有荚膜。孢子，一端较尖，一端较圆，自细，有荚膜。杜波组织胞浆菌圆形，直径

50、为杜波组织胞浆菌圆形，直径为1215m、薄薄壁的芽生孢子。壁的芽生孢子。微生物检验微生物检验(1)标本直接显微镜检查标本直接显微镜检查痰液标本涂片后先用甲醇固定痰液标本涂片后先用甲醇固定10 min，再用再用 姬姆萨染色镜检，如巨噬细胞发现卵圆形，姬姆萨染色镜检，如巨噬细胞发现卵圆形，直径直径24m的较小，一端有出芽，可疑为的较小，一端有出芽，可疑为 荚膜组织胞浆菌。荚膜组织胞浆菌。皮损、脓液标本，用皮损、脓液标本，用20KOH涂片后镜检，涂片后镜检，可见可见12-15m直径的厚壁酵母细胞，细胞内直径的厚壁酵母细胞，细胞内 可见脂肪小滴，可疑为杜波组织胞浆菌。可见脂肪小滴，可疑为杜波组织胞浆菌